EGF-EGFR表達(dá)差異：相近臨床分期舌鱗癌預(yù)后分歧的關(guān)鍵因素探究

EGF/EGFR表達(dá)差異：相近臨床分期舌鱗癌預(yù)后分歧的關(guān)鍵因素探究一、引言1.1研究背景與意義舌鱗癌作為口腔腫瘤中最為常見(jiàn)的惡性腫瘤，嚴(yán)重威脅著人類(lèi)的健康。相關(guān)數(shù)據(jù)顯示，舌鱗癌占全身惡性腫瘤的0.8%-2.0%，占頭頸部癌的5%-15.5%，在口腔癌中更是位居首位，約占口腔癌發(fā)病率的43.4%。其發(fā)病率不僅呈上升趨勢(shì)，且發(fā)病年齡逐漸年輕化。舌鱗癌具有浸潤(rùn)性強(qiáng)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率高的特點(diǎn)，患者的5年生存率一直徘徊在50%-60%。一旦發(fā)病，患者不僅要承受生理上的巨大痛苦，還面臨著語(yǔ)言、吞咽等重要生理功能受損的風(fēng)險(xiǎn)，極大地降低了生活質(zhì)量。在傳統(tǒng)認(rèn)知中，舌鱗癌原發(fā)灶的大小與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和術(shù)后復(fù)發(fā)密切相關(guān)，原發(fā)灶越小，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)的可能性越低，預(yù)后也就越好。隨著以手術(shù)為主的綜合序列治療的廣泛推廣和應(yīng)用，舌癌的治療水平有了顯著提高，患者的生存率和生活質(zhì)量也得到了逐步改善，部分患者甚至能夠達(dá)到治愈的效果。臨床實(shí)踐中卻發(fā)現(xiàn)，即便在同樣經(jīng)驗(yàn)豐富的口腔頜面外科醫(yī)生進(jìn)行規(guī)范化手術(shù)治療的情況下，一些原發(fā)灶較小的舌癌患者仍會(huì)出現(xiàn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移或近期復(fù)發(fā)，且預(yù)后較差。這表明在不同預(yù)后的舌癌組織中，可能存在某些因子的調(diào)控能力及表達(dá)存在差異。表皮生長(zhǎng)因子（EGF）和表皮生長(zhǎng)因子受體（EGFR）在細(xì)胞的生長(zhǎng)、增殖和分化等過(guò)程中發(fā)揮著關(guān)鍵作用。當(dāng)EGF與EGFR結(jié)合時(shí)，會(huì)激活一系列下游信號(hào)通路，調(diào)控細(xì)胞的生理活動(dòng)。在腫瘤細(xì)胞中，EGF/EGFR信號(hào)通路常常異常激活，導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞的增殖、侵襲和轉(zhuǎn)移能力增強(qiáng)。相關(guān)研究表明，EGFR在頭頸部鱗狀細(xì)胞癌中的表達(dá)率高達(dá)40%-90%，并與疾病的預(yù)后差、病情進(jìn)展、病理類(lèi)型等密切相關(guān)。探究EGF/EGFR在相近臨床分期不同預(yù)后舌鱗癌中的表達(dá)情況，對(duì)于揭示舌鱗癌預(yù)后差異的分子機(jī)制具有重要意義。通過(guò)深入了解其表達(dá)特征，有望為舌鱗癌的預(yù)后評(píng)估提供更為精準(zhǔn)的分子指標(biāo)，幫助醫(yī)生更準(zhǔn)確地判斷患者的病情發(fā)展和預(yù)后情況，從而制定更具針對(duì)性的治療方案。對(duì)EGF/EGFR的研究也可能為舌鱗癌的靶向治療提供新的靶點(diǎn)和思路，推動(dòng)個(gè)性化治療的發(fā)展，提高治療效果，改善患者的生存質(zhì)量。1.2國(guó)內(nèi)外研究現(xiàn)狀在舌鱗癌的研究領(lǐng)域，國(guó)內(nèi)外學(xué)者已取得了諸多成果。在流行病學(xué)方面，研究發(fā)現(xiàn)舌鱗癌的發(fā)病率與種族、年齡和性別等因素密切相關(guān)。據(jù)相關(guān)數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)，在全球范圍內(nèi)，舌鱗癌的發(fā)病率呈上升趨勢(shì)，且發(fā)病年齡逐漸年輕化。不同種族之間，舌鱗癌的發(fā)病率存在顯著差異，黑人與白人的舌癌發(fā)病率不同，且年齡因素在不同種族中的影響也有所不同。在發(fā)病機(jī)制的研究上，學(xué)者們發(fā)現(xiàn)多種基因和信號(hào)通路參與其中。細(xì)胞間黏附分子1（ICAM-1）被證實(shí)與癌細(xì)胞的增殖、血管新生活動(dòng)、淋巴管密集程度等密切相關(guān)，其表達(dá)與癌細(xì)胞增殖速度、腫瘤浸潤(rùn)深度等臨床病理呈正相關(guān)。半乳凝素-3（Gal-3）通過(guò)調(diào)節(jié)Wnt/β-catenin信號(hào)通路和蛋白激酶B（Akt）磷酸化，介導(dǎo)癌細(xì)胞的遷徙和入侵，促進(jìn)舌癌的發(fā)展。果蠅zeste基因增強(qiáng)子同源物2（EZH2）基因過(guò)表達(dá)能增加舌癌的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)，且其表達(dá)與舌癌的TMN分期有關(guān)。在治療方面，目前臨床上常用的治療模式是以手術(shù)治療為主，輔助放療、化療的綜合治療模式。手術(shù)治療時(shí)，對(duì)于原發(fā)灶的處理，多數(shù)學(xué)者認(rèn)為手術(shù)切緣在腫瘤三維邊界外1.0cm的正常組織上是安全切緣，但由于舌鱗癌的浸潤(rùn)性和侵襲性較強(qiáng)，現(xiàn)在更加提倡間室外科理念。對(duì)于早期舌鱗癌，可遵循間室原則行舌部分/半舌切除術(shù)。在輔助治療中，放療和化療能夠進(jìn)一步殺滅癌細(xì)胞，降低復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移的風(fēng)險(xiǎn)。近年來(lái)，靶向治療也逐漸成為研究熱點(diǎn)，主要是針對(duì)上皮生長(zhǎng)因子受體（EGFR）陽(yáng)性的患者。關(guān)于EGF和EGFR與舌鱗癌的關(guān)系，已有研究表明EGFR在頭頸部鱗狀細(xì)胞癌中的表達(dá)率高達(dá)40%-90%，并與疾病的預(yù)后差、病情進(jìn)展、病理類(lèi)型等密切相關(guān)。然而，當(dāng)前研究多集中在EGF/EGFR與舌鱗癌的整體相關(guān)性上，對(duì)于在相近臨床分期不同預(yù)后舌鱗癌中的表達(dá)情況研究較少。雖然有研究涉及到EGFR在頭頸部鱗癌中的表達(dá)與預(yù)后關(guān)系，但針對(duì)舌鱗癌在相近臨床分期下不同預(yù)后的對(duì)比研究尚顯不足，對(duì)于EGF在這方面的研究更是相對(duì)匱乏。本研究將聚焦于這一空白領(lǐng)域，深入探究EGF/EGFR在相近臨床分期不同預(yù)后舌鱗癌中的表達(dá)，有望為舌鱗癌的預(yù)后評(píng)估和治療提供新的視角和依據(jù)，彌補(bǔ)當(dāng)前研究的不足，具有重要的創(chuàng)新性和必要性。1.3研究目的與內(nèi)容本研究旨在深入分析表皮生長(zhǎng)因子（EGF）及其受體（EGFR）在相近臨床分期不同預(yù)后舌鱗癌組織中的表達(dá)情況，揭示其表達(dá)差異與舌鱗癌臨床因素之間的關(guān)聯(lián)，為舌鱗癌的預(yù)后評(píng)估提供更為精準(zhǔn)的分子生物學(xué)指標(biāo)。通過(guò)探究EGF/EGFR與舌鱗癌預(yù)后的關(guān)系，期望能從分子層面解釋舌鱗癌在相似臨床分期下出現(xiàn)不同預(yù)后的原因，為臨床醫(yī)生判斷患者病情發(fā)展和預(yù)后提供有力的理論支持，幫助醫(yī)生更準(zhǔn)確地制定個(gè)性化治療方案，提高治療效果。本研究將從以下幾個(gè)方面展開(kāi)：收集臨床資料完整、病理確診為舌鱗癌的患者標(biāo)本，依據(jù)臨床分期和預(yù)后情況進(jìn)行分組。采用免疫組化等實(shí)驗(yàn)技術(shù)，檢測(cè)兩組標(biāo)本中EGF和EGFR的表達(dá)水平，對(duì)比分析其在不同預(yù)后組中的表達(dá)差異。同時(shí)，收集患者的性別、年齡、臨床分期、腫瘤分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等臨床病理信息，統(tǒng)計(jì)分析EGF/EGFR的表達(dá)與這些臨床因素之間的相關(guān)性，明確其在舌鱗癌發(fā)生、發(fā)展及預(yù)后中的作用機(jī)制。探討EGF/EGFR表達(dá)差異與舌鱗癌靶向治療的關(guān)系，為臨床選擇合適的靶向治療藥物提供理論依據(jù)，推動(dòng)舌鱗癌靶向治療的精準(zhǔn)化發(fā)展。二、舌鱗癌相關(guān)理論概述2.1舌鱗癌的定義與分類(lèi)舌鱗癌，全稱(chēng)為舌鱗狀細(xì)胞癌（TongueSquamousCellCarcinoma，TSCC），是一種起源于口腔粘膜上皮的惡性腫瘤，在口腔癌中占據(jù)著最為常見(jiàn)的地位。其發(fā)病原因較為復(fù)雜，目前雖尚未完全明確，但多數(shù)研究認(rèn)為與多種因素密切相關(guān)。長(zhǎng)期吸煙、飲酒被公認(rèn)為是主要的風(fēng)險(xiǎn)因素之一，煙草中的尼古丁、焦油等致癌物質(zhì)以及酒精對(duì)口腔黏膜的刺激，會(huì)增加舌鱗癌的發(fā)病幾率。人乳頭瘤病毒（HPV）感染，特別是HPV-16型，也被證實(shí)與舌鱗癌的發(fā)生存在關(guān)聯(lián)。不良的口腔衛(wèi)生習(xí)慣，如長(zhǎng)期不刷牙、口腔內(nèi)細(xì)菌滋生等，以及慢性刺激，如牙齒殘根、銳利牙尖對(duì)舌部黏膜的長(zhǎng)期摩擦，都可能成為舌鱗癌發(fā)病的誘因。根據(jù)腫瘤發(fā)生的解剖位置，舌鱗癌可分為前緣型、側(cè)緣型和根部型。前緣型舌鱗癌多發(fā)生于舌尖部位，由于舌尖活動(dòng)頻繁，早期癥狀可能表現(xiàn)為舌尖的疼痛、異物感，隨著病情進(jìn)展，可出現(xiàn)潰瘍、腫塊等。側(cè)緣型舌鱗癌較為常見(jiàn)，常發(fā)生于舌側(cè)緣，患者可能在早期就出現(xiàn)舌部的疼痛，疼痛可向耳部放射，影響進(jìn)食和說(shuō)話。根部型舌鱗癌由于位置隱匿，早期癥狀不明顯，當(dāng)患者出現(xiàn)吞咽困難、咽部異物感等癥狀時(shí)，往往病情已發(fā)展至中晚期。從腫瘤組織學(xué)特點(diǎn)進(jìn)行分類(lèi)，舌鱗癌可按照癌細(xì)胞分化程度分為4級(jí)。Ⅰ級(jí)為分化成熟的鱗癌，具有明顯的細(xì)胞間橋和癌珠，癌珠是鱗癌的特征性結(jié)構(gòu)，由同心性排列的角癌細(xì)胞組成，此級(jí)舌鱗癌惡性程度相對(duì)較低，生長(zhǎng)較為緩慢。Ⅱ級(jí)以棘細(xì)胞為主要成分，伴有明顯的異形性，包括癌細(xì)胞體增大、核大小不等、染色深淺不一、核分裂多見(jiàn)等，癌珠較少且中央有角化不全，其惡性程度較Ⅰ級(jí)有所增加。Ⅲ級(jí)細(xì)胞分化較差，皮表層大部分細(xì)胞排列紊亂，細(xì)胞體積增大，核大異形明顯，核分裂多見(jiàn)，無(wú)癌珠，但有個(gè)別細(xì)胞呈角化不良，病變?cè)诒砥?nèi)呈輻射狀擴(kuò)展，浸潤(rùn)真皮較晚，惡性程度較高。Ⅳ級(jí)為未分化型，無(wú)棘細(xì)胞、無(wú)細(xì)胞間橋和癌珠，癌細(xì)胞細(xì)小呈梭形，核細(xì)長(zhǎng)染色深，并有壞死和假腺樣結(jié)構(gòu)，少數(shù)呈鱗狀細(xì)胞和角化細(xì)胞，惡性程度極高，預(yù)后較差。不同的分類(lèi)方式有助于醫(yī)生從不同角度了解舌鱗癌的特點(diǎn)，為臨床診斷、治療方案的制定以及預(yù)后評(píng)估提供重要依據(jù)。2.2舌鱗癌的發(fā)病率與危險(xiǎn)因素在全球范圍內(nèi)，舌鱗癌的發(fā)病率呈現(xiàn)出明顯的地區(qū)差異。據(jù)相關(guān)數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)，印度等南亞國(guó)家由于咀嚼檳榔等不良習(xí)慣較為普遍，舌鱗癌的發(fā)病率遠(yuǎn)高于其他地區(qū)，在這些地區(qū)，舌鱗癌占口腔癌的比例可高達(dá)40%-50%。在歐美國(guó)家，舌鱗癌的發(fā)病率相對(duì)較低，但也不容忽視，約占口腔癌的20%-30%。在中國(guó)，舌鱗癌的發(fā)病率同樣處于較高水平，占口腔癌的首位，年發(fā)病率為7.3/10萬(wàn)至18/10萬(wàn)。隨著時(shí)間的推移，舌鱗癌的發(fā)病率呈現(xiàn)出上升趨勢(shì)，且發(fā)病年齡逐漸年輕化，這給社會(huì)和家庭帶來(lái)了沉重的負(fù)擔(dān)。舌鱗癌的發(fā)病與多種危險(xiǎn)因素密切相關(guān)。吸煙是導(dǎo)致舌鱗癌發(fā)生的重要因素之一，煙草中含有尼古丁、焦油、苯并芘等多種致癌物質(zhì)，這些物質(zhì)在長(zhǎng)期吸煙過(guò)程中會(huì)不斷刺激口腔黏膜，破壞細(xì)胞的正常結(jié)構(gòu)和功能，增加基因突變的風(fēng)險(xiǎn)，從而誘發(fā)舌鱗癌。研究表明，長(zhǎng)期吸煙的人群患舌鱗癌的風(fēng)險(xiǎn)是不吸煙人群的3-5倍。飲酒也與舌鱗癌的發(fā)病密切相關(guān)，酒精不僅會(huì)直接損傷口腔黏膜，還會(huì)作為溶劑促進(jìn)其他致癌物質(zhì)的吸收，進(jìn)一步增加致癌風(fēng)險(xiǎn)。吸煙和飲酒具有協(xié)同作用，同時(shí)有吸煙和飲酒習(xí)慣的人患舌鱗癌的風(fēng)險(xiǎn)更高。人乳頭瘤病毒（HPV）感染也是舌鱗癌發(fā)病的重要危險(xiǎn)因素，尤其是HPV-16型。HPV感染后，病毒基因會(huì)整合到宿主細(xì)胞基因組中，導(dǎo)致細(xì)胞異常增殖和分化，進(jìn)而引發(fā)癌癥。在HPV相關(guān)的舌鱗癌中，患者通常具有獨(dú)特的臨床病理特征，如發(fā)病年齡相對(duì)較輕、對(duì)放化療更為敏感等。慢性刺激也是舌鱗癌發(fā)病的常見(jiàn)誘因，牙齒殘根、銳利牙尖、不良修復(fù)體等長(zhǎng)期摩擦舌部黏膜，會(huì)導(dǎo)致局部黏膜反復(fù)損傷和修復(fù)，在這個(gè)過(guò)程中，細(xì)胞容易發(fā)生異常增生和惡變，增加舌鱗癌的發(fā)病幾率。不良的口腔衛(wèi)生習(xí)慣同樣不容忽視，長(zhǎng)期不刷牙、口腔內(nèi)細(xì)菌滋生，會(huì)導(dǎo)致口腔內(nèi)環(huán)境惡化，產(chǎn)生大量有害物質(zhì)，這些物質(zhì)會(huì)刺激口腔黏膜，破壞口腔黏膜的防御機(jī)制，為舌鱗癌的發(fā)生創(chuàng)造條件。2.3舌鱗癌的臨床表現(xiàn)與診斷方法舌鱗癌在早期階段，癥狀往往較為隱匿，不易被患者察覺(jué)。部分患者可能僅出現(xiàn)舌部黏膜的局部增厚，這種增厚通常沒(méi)有明顯的疼痛或不適感，容易被忽視。也有患者會(huì)出現(xiàn)黏膜白斑，表現(xiàn)為舌部黏膜上白色的斑塊，邊界清晰，表面粗糙，質(zhì)地較硬。此時(shí)，由于癥狀不明顯，患者往往不會(huì)主動(dòng)就醫(yī)，導(dǎo)致病情延誤。隨著病情的進(jìn)展，舌鱗癌進(jìn)入中期，癥狀逐漸明顯?；颊呖赡軙?huì)出現(xiàn)舌部的潰瘍，潰瘍通常質(zhì)地較硬，邊界不規(guī)則，底部凹凸不平，且疼痛較為劇烈，尤其是在進(jìn)食、說(shuō)話時(shí)，疼痛會(huì)加劇，嚴(yán)重影響患者的生活質(zhì)量。舌部還可能出現(xiàn)腫塊，腫塊生長(zhǎng)迅速，可導(dǎo)致舌體變形，影響舌的正常運(yùn)動(dòng)，患者會(huì)感到舌部活動(dòng)受限，說(shuō)話、吞咽也會(huì)變得困難。當(dāng)舌鱗癌發(fā)展到晚期，病情進(jìn)一步惡化?；颊卟粌H會(huì)出現(xiàn)更為嚴(yán)重的疼痛，疼痛可放射至耳部、咽喉部，還會(huì)出現(xiàn)吞咽困難，甚至無(wú)法正常進(jìn)食，只能依靠鼻飼或靜脈營(yíng)養(yǎng)維持生命。由于腫瘤的消耗和患者進(jìn)食困難，患者會(huì)出現(xiàn)明顯的消瘦、貧血等全身癥狀。頸部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移也較為常見(jiàn)，可在頸部觸及腫大的淋巴結(jié)，質(zhì)地堅(jiān)硬，活動(dòng)度差，部分患者還可能出現(xiàn)遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，如肺部轉(zhuǎn)移、骨轉(zhuǎn)移等，導(dǎo)致相應(yīng)的癥狀，如咳嗽、咯血、骨痛等。在舌鱗癌的診斷方面，體格檢查是最基本的方法。醫(yī)生通過(guò)直接觀察患者舌部的病變情況，包括病變的位置、大小、形態(tài)、顏色等，以及觸診病變部位，了解病變的質(zhì)地、邊界、活動(dòng)度等，初步判斷病變的性質(zhì)。對(duì)于舌部的潰瘍，醫(yī)生會(huì)注意觀察潰瘍的深度、底部情況、有無(wú)出血等；對(duì)于腫塊，會(huì)評(píng)估其大小、硬度、與周?chē)M織的關(guān)系等。影像學(xué)檢查在舌鱗癌的診斷中也起著重要作用。X線檢查可幫助醫(yī)生了解舌部骨骼的情況，判斷腫瘤是否侵犯到舌骨、下頜骨等周?chē)趋澜M織。CT檢查能夠清晰地顯示舌部腫瘤的大小、位置、形態(tài)，以及腫瘤與周?chē)M織的關(guān)系，還能發(fā)現(xiàn)頸部淋巴結(jié)的轉(zhuǎn)移情況，對(duì)于判斷腫瘤的分期具有重要價(jià)值。MRI檢查則對(duì)軟組織的分辨能力較強(qiáng)，能夠更準(zhǔn)確地顯示腫瘤在舌部組織內(nèi)的浸潤(rùn)范圍，以及腫瘤與神經(jīng)、血管等結(jié)構(gòu)的關(guān)系，為手術(shù)方案的制定提供詳細(xì)的信息。病理活檢是舌鱗癌診斷的金標(biāo)準(zhǔn)。通過(guò)在病變部位取組織進(jìn)行病理切片檢查，觀察細(xì)胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu)等特征，能夠明確病變的性質(zhì)，確定是否為舌鱗癌，以及癌細(xì)胞的分化程度等信息。在進(jìn)行病理活檢時(shí)，醫(yī)生會(huì)選擇病變部位最具代表性的區(qū)域進(jìn)行取材，以確保診斷的準(zhǔn)確性。對(duì)于一些早期病變，可能需要多次活檢或采用不同的活檢方法，如切取活檢、穿刺活檢等，以提高診斷的陽(yáng)性率。2.4舌鱗癌的治療策略與預(yù)后影響因素舌鱗癌的治療是一個(gè)綜合性的過(guò)程，目前臨床上主要采用以手術(shù)治療為主，結(jié)合放療、化療、靶向治療等多種方法的綜合治療策略。手術(shù)治療是舌鱗癌治療的關(guān)鍵環(huán)節(jié)，對(duì)于早期舌鱗癌，如cT1-2N0M0的患者，遵循間室原則行舌部分/半舌切除術(shù)是常見(jiàn)的術(shù)式。舌中隔在解剖上起著屏障作用，不超過(guò)中線的舌鱗癌可沿舌中隔為內(nèi)側(cè)切緣行半舌切除，半舌切除的間室邊界定義為舌中隔、莖突舌骨肌、莖突舌骨肌韌帶及下頜舌骨肌。在手術(shù)過(guò)程中，醫(yī)生會(huì)根據(jù)病理檢測(cè)切緣組織的情況，精準(zhǔn)把握切除邊界，盡可能保留正常組織，以提高患者術(shù)后的生活質(zhì)量。對(duì)于晚期舌鱗癌患者，手術(shù)范圍可能會(huì)更大，除了切除原發(fā)灶，還可能需要進(jìn)行頸部淋巴結(jié)清掃術(shù)，以清除可能轉(zhuǎn)移的淋巴結(jié)。手術(shù)方式的選擇需要綜合考慮患者的病情、身體狀況等因素，以確保在徹底切除腫瘤的同時(shí)，最大程度地保留患者的生理功能。放療在舌鱗癌的治療中也占據(jù)著重要地位，可分為術(shù)前放療、術(shù)后放療和根治性放療。術(shù)前放療能夠縮小腫瘤體積，降低腫瘤分期，提高手術(shù)切除的成功率。術(shù)后放療則主要用于殺滅手術(shù)殘留的癌細(xì)胞，降低復(fù)發(fā)風(fēng)險(xiǎn)。對(duì)于一些無(wú)法手術(shù)的患者，根治性放療可作為主要的治療手段。放療的劑量和療程需要根據(jù)患者的具體情況進(jìn)行個(gè)性化調(diào)整，以達(dá)到最佳的治療效果，同時(shí)減少放療對(duì)正常組織的損傷。化療是通過(guò)使用化學(xué)藥物來(lái)殺滅癌細(xì)胞，常用的化療藥物包括順鉑、氟尿嘧啶等。化療可在手術(shù)前、手術(shù)后或與放療聯(lián)合使用。術(shù)前化療，也稱(chēng)為新輔助化療，能夠縮小腫瘤體積，降低腫瘤分期，提高手術(shù)切除率。術(shù)后化療，即輔助化療，可進(jìn)一步殺滅殘留的癌細(xì)胞，減少?gòu)?fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移的風(fēng)險(xiǎn)?；熍c放療聯(lián)合使用時(shí)，可增強(qiáng)對(duì)癌細(xì)胞的殺傷作用，但同時(shí)也會(huì)增加患者的不良反應(yīng)，如惡心、嘔吐、脫發(fā)、骨髓抑制等。在化療過(guò)程中，醫(yī)生需要密切關(guān)注患者的身體狀況，及時(shí)調(diào)整化療方案，以減輕患者的痛苦，保證治療的順利進(jìn)行。近年來(lái)，靶向治療作為一種新興的治療方法，為舌鱗癌患者帶來(lái)了新的希望。靶向治療主要是針對(duì)腫瘤細(xì)胞中的特定分子靶點(diǎn)，如表皮生長(zhǎng)因子受體（EGFR）等，使用特異性的藥物進(jìn)行治療。對(duì)于EGFR陽(yáng)性的舌鱗癌患者，靶向治療藥物能夠精準(zhǔn)地作用于癌細(xì)胞，抑制其生長(zhǎng)和增殖，同時(shí)對(duì)正常細(xì)胞的影響較小。與傳統(tǒng)的化療相比，靶向治療具有療效好、不良反應(yīng)小等優(yōu)點(diǎn)。但靶向治療藥物的價(jià)格相對(duì)較高，且并非所有患者都適用，需要進(jìn)行基因檢測(cè)，篩選出適合的患者。舌鱗癌的預(yù)后受到多種因素的影響。腫瘤分期是影響預(yù)后的重要因素之一，早期舌鱗癌患者的預(yù)后相對(duì)較好，而晚期患者由于腫瘤侵犯范圍廣、轉(zhuǎn)移可能性大，預(yù)后往往較差。研究表明，T分期越高，患者的5年生存率越低。淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移也是影響預(yù)后的關(guān)鍵因素，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者復(fù)發(fā)風(fēng)險(xiǎn)明顯增加，生存率降低。腫瘤的分化程度同樣對(duì)預(yù)后有重要影響，高分化的舌鱗癌惡性程度較低，預(yù)后相對(duì)較好；低分化的舌鱗癌惡性程度高，侵襲性強(qiáng)，預(yù)后較差。治療方式的選擇也直接關(guān)系到患者的預(yù)后，手術(shù)切除徹底、綜合治療方案合理的患者，預(yù)后往往更好?；颊叩纳眢w狀況、年齡等因素也會(huì)對(duì)預(yù)后產(chǎn)生一定的影響，年輕、身體狀況較好的患者對(duì)治療的耐受性更強(qiáng)，預(yù)后相對(duì)較好。三、EGF/EGFR與舌鱗癌的關(guān)聯(lián)理論3.1EGF/EGFR的結(jié)構(gòu)與功能表皮生長(zhǎng)因子（EGF）是一種由53個(gè)氨基酸組成的單鏈多肽，相對(duì)分子質(zhì)量約為6.2kDa。其分子結(jié)構(gòu)中包含3個(gè)鏈內(nèi)二硫鍵，這些二硫鍵對(duì)于維持EGF的空間構(gòu)象和生物活性起著關(guān)鍵作用。EGF的氨基酸序列高度保守，不同物種來(lái)源的EGF具有較高的同源性。它廣泛存在于多種體液中，如唾液、尿液、乳汁、羊水等，并通過(guò)旁分泌、自分泌和內(nèi)分泌等多種方式發(fā)揮作用。在生理狀態(tài)下，EGF能夠促進(jìn)細(xì)胞的增殖、分化和遷移，對(duì)組織的生長(zhǎng)、發(fā)育和修復(fù)具有重要意義。在胚胎發(fā)育過(guò)程中，EGF參與了多種器官的形成和發(fā)育，如皮膚、胃腸道、神經(jīng)系統(tǒng)等。在傷口愈合過(guò)程中，EGF能夠刺激成纖維細(xì)胞、上皮細(xì)胞等的增殖和遷移，加速傷口的愈合。表皮生長(zhǎng)因子受體（EGFR）是一種跨膜糖蛋白，屬于受體酪氨酸激酶家族。其相對(duì)分子質(zhì)量約為170kDa，由1186個(gè)氨基酸殘基組成，結(jié)構(gòu)上可分為胞外區(qū)、跨膜區(qū)和胞內(nèi)區(qū)三個(gè)部分。胞外區(qū)由621個(gè)氨基酸殘基構(gòu)成，包含4個(gè)富含半胱氨酸的結(jié)構(gòu)域，是配體結(jié)合的區(qū)域，能夠特異性地與EGF等配體結(jié)合?？缒^(qū)由23個(gè)氨基酸殘基組成，將EGFR固定在細(xì)胞膜上。胞內(nèi)區(qū)則由542個(gè)氨基酸殘基組成，含有酪氨酸激酶結(jié)構(gòu)域，當(dāng)EGFR與配體結(jié)合后，胞內(nèi)的酪氨酸激酶活性被激活，引發(fā)一系列的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)事件。當(dāng)EGF與EGFR的胞外區(qū)結(jié)合時(shí)，會(huì)誘導(dǎo)EGFR發(fā)生構(gòu)象變化，使其從單體形式轉(zhuǎn)變?yōu)槎垠w。二聚體的形成激活了EGFR胞內(nèi)區(qū)的酪氨酸激酶活性，導(dǎo)致EGFR自身的酪氨酸殘基發(fā)生磷酸化。這些磷酸化的酪氨酸殘基成為下游信號(hào)分子的結(jié)合位點(diǎn)，從而招募和激活一系列下游信號(hào)通路。其中，較為重要的信號(hào)通路包括Ras/MAPK通路、PI3K/Akt通路和PLCγ/PKC通路等。在Ras/MAPK通路中，EGFR激活后，通過(guò)鳥(niǎo)苷酸交換因子（GEF）的作用，使Ras蛋白結(jié)合的GDP轉(zhuǎn)換為GTP，從而激活Ras。激活的Ras進(jìn)一步激活Raf蛋白，Raf蛋白通過(guò)磷酸化激活MEK，MEK再激活ERK。激活的ERK進(jìn)入細(xì)胞核，調(diào)節(jié)相關(guān)基因的表達(dá)，促進(jìn)細(xì)胞的增殖和分化。在PI3K/Akt通路中，EGFR激活后，招募PI3K，PI3K催化磷脂酰肌醇-4,5-二磷酸（PIP2）生成磷脂酰肌醇-3,4,5-三磷酸（PIP3）。PIP3作為第二信使，招募并激活A(yù)kt蛋白，Akt通過(guò)磷酸化多種底物，調(diào)節(jié)細(xì)胞的存活、增殖和代謝等過(guò)程。在PLCγ/PKC通路中，EGFR激活后，招募磷脂酶Cγ（PLCγ），PLCγ水解磷脂酰肌醇-4,5-二磷酸（PIP2），產(chǎn)生二酰甘油（DAG）和肌醇三磷酸（IP3）。DAG激活蛋白激酶C（PKC），PKC通過(guò)磷酸化多種底物，調(diào)節(jié)細(xì)胞的增殖、分化和遷移等過(guò)程。IP3則與內(nèi)質(zhì)網(wǎng)上的受體結(jié)合，促使內(nèi)質(zhì)網(wǎng)釋放鈣離子，進(jìn)一步調(diào)節(jié)細(xì)胞的生理活動(dòng)。通過(guò)這些信號(hào)通路的激活，EGF/EGFR信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑對(duì)細(xì)胞的生長(zhǎng)、增殖、分化、遷移和存活等生理過(guò)程發(fā)揮著重要的調(diào)控作用。3.2EGF/EGFR在腫瘤發(fā)生發(fā)展中的作用機(jī)制在腫瘤的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中，EGF/EGFR信號(hào)通路的異常激活扮演著關(guān)鍵角色，其作用機(jī)制涉及多個(gè)方面，對(duì)腫瘤細(xì)胞的增殖、存活、侵襲、轉(zhuǎn)移和血管生成等過(guò)程產(chǎn)生重要影響。EGF/EGFR信號(hào)通路的異常激活能夠顯著促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的增殖。當(dāng)EGF與EGFR結(jié)合后，受體發(fā)生二聚化并激活自身的酪氨酸激酶活性，進(jìn)而激活下游的Ras/MAPK信號(hào)通路。在Ras/MAPK通路中，Ras蛋白被激活，隨后依次激活Raf、MEK和ERK。ERK進(jìn)入細(xì)胞核后，調(diào)節(jié)一系列與細(xì)胞增殖相關(guān)基因的表達(dá)，如c-Myc、CyclinD1等。c-Myc基因編碼的蛋白是一種轉(zhuǎn)錄因子，它能夠促進(jìn)細(xì)胞周期相關(guān)基因的轉(zhuǎn)錄，推動(dòng)細(xì)胞從G1期進(jìn)入S期，加速細(xì)胞增殖。CyclinD1是細(xì)胞周期蛋白，其表達(dá)增加可促進(jìn)細(xì)胞周期的進(jìn)展，使細(xì)胞更快地進(jìn)行分裂增殖。相關(guān)研究表明，在乳腺癌細(xì)胞中，EGFR的過(guò)表達(dá)會(huì)持續(xù)激活Ras/MAPK通路，導(dǎo)致c-Myc和CyclinD1的高表達(dá)，從而促進(jìn)癌細(xì)胞的增殖。在結(jié)直腸癌中，EGF/EGFR信號(hào)通路的異常激活同樣通過(guò)上調(diào)c-Myc和CyclinD1的表達(dá)，增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞的增殖能力。EGF/EGFR信號(hào)通路的激活還能抑制腫瘤細(xì)胞的凋亡，促進(jìn)其存活。該信號(hào)通路主要通過(guò)激活PI3K/Akt信號(hào)通路來(lái)實(shí)現(xiàn)這一作用。EGFR激活后，招募PI3K，PI3K催化PIP2生成PIP3。PIP3招募并激活A(yù)kt蛋白，Akt通過(guò)磷酸化多種底物來(lái)調(diào)節(jié)細(xì)胞的存活。Akt可以磷酸化并抑制Bad蛋白的活性，Bad蛋白是一種促凋亡蛋白，其活性被抑制后，無(wú)法與抗凋亡蛋白Bcl-2結(jié)合，從而使Bcl-2能夠發(fā)揮抗凋亡作用，促進(jìn)細(xì)胞存活。Akt還可以激活NF-κB信號(hào)通路，NF-κB是一種轉(zhuǎn)錄因子，它能夠調(diào)節(jié)一系列抗凋亡基因的表達(dá)，如Bcl-2、Bcl-xL等。在肺癌細(xì)胞中，EGFR的激活通過(guò)PI3K/Akt/NF-κB信號(hào)通路，上調(diào)Bcl-2和Bcl-xL的表達(dá)，抑制細(xì)胞凋亡，增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞的存活能力。在頭頸部鱗癌中，阻斷EGFR信號(hào)通路可以抑制PI3K/Akt的激活，使Bad蛋白去磷酸化，恢復(fù)其促凋亡活性，從而誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡。在腫瘤侵襲和轉(zhuǎn)移方面，EGF/EGFR信號(hào)通路也發(fā)揮著重要作用。該信號(hào)通路可以通過(guò)調(diào)節(jié)細(xì)胞骨架的重塑和細(xì)胞間黏附分子的表達(dá)，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移。EGFR激活后，通過(guò)激活Rho家族GTP酶，如RhoA、Rac1和Cdc42等，調(diào)節(jié)細(xì)胞骨架的動(dòng)態(tài)變化。RhoA可以促進(jìn)應(yīng)力纖維的形成，增強(qiáng)細(xì)胞的收縮力，使腫瘤細(xì)胞能夠突破周?chē)M織的屏障，向周?chē)M織浸潤(rùn)。Rac1和Cdc42則參與絲狀偽足和片狀偽足的形成，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的遷移。EGF/EGFR信號(hào)通路還可以下調(diào)細(xì)胞間黏附分子E-cadherin的表達(dá)，E-cadherin是一種重要的細(xì)胞間黏附分子，其表達(dá)降低會(huì)減弱細(xì)胞間的黏附力，使腫瘤細(xì)胞更容易脫離原發(fā)灶，發(fā)生轉(zhuǎn)移。在乳腺癌中，EGF刺激可以通過(guò)EGFR激活Rac1，促進(jìn)絲狀偽足的形成，增強(qiáng)癌細(xì)胞的遷移能力。在胃癌中，EGFR的過(guò)表達(dá)與E-cadherin的低表達(dá)密切相關(guān)，導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移能力增強(qiáng)。腫瘤的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移依賴(lài)于充足的血液供應(yīng)，EGF/EGFR信號(hào)通路在腫瘤血管生成中也起到了促進(jìn)作用。該信號(hào)通路主要通過(guò)上調(diào)血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（VEGF）等血管生成因子的表達(dá)來(lái)實(shí)現(xiàn)這一作用。EGFR激活后，通過(guò)Ras/MAPK和PI3K/Akt等信號(hào)通路，調(diào)節(jié)VEGF基因的轉(zhuǎn)錄。VEGF是一種強(qiáng)效的血管生成因子，它能夠促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞的增殖、遷移和管腔形成，從而促進(jìn)腫瘤血管的生成。在卵巢癌中，EGFR的高表達(dá)與VEGF的高表達(dá)呈正相關(guān)，EGF/EGFR信號(hào)通路的激活通過(guò)上調(diào)VEGF的表達(dá)，促進(jìn)腫瘤血管生成，為腫瘤的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移提供了有利條件。在肝癌中，阻斷EGFR信號(hào)通路可以降低VEGF的表達(dá)，抑制腫瘤血管生成，從而抑制腫瘤的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移。3.3EGF/EGFR在頭頸部腫瘤中的研究現(xiàn)狀在頭頸部腫瘤領(lǐng)域，EGF/EGFR的研究一直是熱點(diǎn)話題。大量研究表明，EGF/EGFR在頭頸部腫瘤組織中呈現(xiàn)出高表達(dá)的特征，且與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展、預(yù)后及臨床因素密切相關(guān)。EGF作為一種重要的細(xì)胞因子，通過(guò)與EGFR結(jié)合，激活下游信號(hào)通路，在頭頸部腫瘤的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中發(fā)揮著關(guān)鍵作用。研究發(fā)現(xiàn)，在頭頸部鱗狀細(xì)胞癌（SCCHN）患者的腫瘤組織中，EGF的表達(dá)水平明顯高于正常組織，且其表達(dá)與腫瘤的侵襲性和轉(zhuǎn)移能力呈正相關(guān)。EGF還可以通過(guò)促進(jìn)腫瘤血管生成，為腫瘤細(xì)胞提供充足的營(yíng)養(yǎng)和氧氣，從而促進(jìn)腫瘤的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移。EGFR在頭頸部腫瘤中的表達(dá)更為廣泛，其表達(dá)率在不同研究中雖略有差異，但總體較高。有研究報(bào)道，EGFR在頭頸部鱗癌中的表達(dá)率高達(dá)40%-90%。EGFR的高表達(dá)與腫瘤的預(yù)后密切相關(guān)，高表達(dá)EGFR的頭頸部腫瘤患者往往預(yù)后較差，生存率較低。這是因?yàn)镋GFR的激活可以促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的增殖、存活、侵襲和轉(zhuǎn)移，同時(shí)抑制細(xì)胞凋亡。在一項(xiàng)針對(duì)喉癌患者的研究中，發(fā)現(xiàn)EGFR陽(yáng)性表達(dá)的患者5年生存率明顯低于EGFR陰性表達(dá)的患者。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，EGF/EGFR的表達(dá)與頭頸部腫瘤的臨床因素也存在密切關(guān)聯(lián)。在腫瘤分期方面，隨著腫瘤分期的升高，EGF/EGFR的表達(dá)水平也逐漸升高。在T3、T4期的頭頸部腫瘤患者中，EGF/EGFR的表達(dá)明顯高于T1、T2期患者。這表明EGF/EGFR的高表達(dá)可能與腫瘤的進(jìn)展和轉(zhuǎn)移有關(guān)。在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移方面，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的頭頸部腫瘤患者，其EGF/EGFR的表達(dá)水平顯著高于無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者。這提示EGF/EGFR可能參與了頭頸部腫瘤的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移過(guò)程，其高表達(dá)可能是淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的一個(gè)重要危險(xiǎn)因素?；贓GF/EGFR在頭頸部腫瘤中的重要作用，針對(duì)其信號(hào)通路的靶向治療成為研究熱點(diǎn)。目前，臨床上常用的靶向藥物主要包括抗EGFR單克隆抗體和小分子酪氨酸激酶抑制劑。西妥昔單抗是最早獲批用于治療頭頸部鱗癌的抗EGFR單抗，它能夠特異性地結(jié)合EGFR的胞外結(jié)構(gòu)域，阻斷EGFR的活化，從而抑制腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)和增殖。多項(xiàng)臨床研究表明，西妥昔單抗聯(lián)合化療或放療，可以顯著提高頭頸部鱗癌患者的生存率和生活質(zhì)量。帕尼單抗也是一種靶向EGFR的胞外結(jié)構(gòu)域的單抗，與西妥昔單抗相比，它具有更高的親和力和更長(zhǎng)的半衰期，可以更長(zhǎng)時(shí)間地抑制EGFR活性。小分子酪氨酸激酶抑制劑如吉非替尼、厄洛替尼等，也在頭頸部鱗癌的治療中展現(xiàn)出一定的療效。這些藥物通過(guò)抑制EGFR的酪氨酸激酶活性，阻斷下游信號(hào)通路的傳導(dǎo)，從而發(fā)揮抗腫瘤作用。盡管EGF/EGFR靶向治療在頭頸部腫瘤的治療中取得了一定的進(jìn)展，但仍面臨一些挑戰(zhàn)，如耐藥性的產(chǎn)生等。部分患者在接受靶向治療一段時(shí)間后，會(huì)出現(xiàn)腫瘤復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移，這可能與EGFR信號(hào)通路的異常激活或其他信號(hào)通路的代償性激活有關(guān)。如何克服耐藥性，提高靶向治療的療效，是當(dāng)前研究的重點(diǎn)和難點(diǎn)。四、研究設(shè)計(jì)與方法4.1樣本選取本研究樣本來(lái)源于[醫(yī)院1]、[醫(yī)院2]、[醫(yī)院3]等多家醫(yī)院，收集了2005年1月至2010年12月期間經(jīng)手術(shù)切除并病理確診為舌鱗癌的患者標(biāo)本。納入標(biāo)準(zhǔn)為：手術(shù)切除并經(jīng)病理檢查證實(shí)為原發(fā)性舌鱗癌患者；患者術(shù)前未接受放療、化療、生物免疫治療等其他抗腫瘤治療；患者臨床病理資料及隨訪信息完整，包括性別、年齡、腫瘤原發(fā)部位、大小、病理分化程度、神經(jīng)血管淋巴管侵犯情況、頸部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況（術(shù)后病理診斷）、術(shù)后隨訪生存情況等。排除標(biāo)準(zhǔn)為：臨床病理資料及隨訪信息不完整者；術(shù)前已行放療、化療或生物免疫治療者；術(shù)前有感染性疾病、自身免疫性疾病及合并其他惡性腫瘤者。根據(jù)上述標(biāo)準(zhǔn)，共篩選出符合條件的舌鱗癌患者標(biāo)本[X]例。隨后，依據(jù)國(guó)際抗癌聯(lián)盟（UICC）2002年制定的TNM分期標(biāo)準(zhǔn)，將患者分為Ⅰ-Ⅱ期和Ⅲ-Ⅳ期兩組。在每組中，再根據(jù)患者的預(yù)后情況進(jìn)行分組。將術(shù)后隨訪5年內(nèi)無(wú)復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移，生存狀況良好的患者歸為預(yù)后良好組；將術(shù)后5年內(nèi)出現(xiàn)復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移或因疾病死亡的患者歸為預(yù)后不良組。最終，Ⅰ-Ⅱ期組中，預(yù)后良好組有[X1]例，預(yù)后不良組有[X2]例；Ⅲ-Ⅳ期組中，預(yù)后良好組有[X3]例，預(yù)后不良組有[X4]例。所有患者在手術(shù)前均簽署了知情同意書(shū)，本研究也獲得了各醫(yī)院倫理委員會(huì)的批準(zhǔn)。4.2實(shí)驗(yàn)方法本研究采用免疫組化SP法（鏈霉菌抗生物素蛋白-過(guò)氧化物酶連結(jié)法）來(lái)檢測(cè)舌鱗癌組織中EGF和EGFR的表達(dá)。該方法的原理基于抗原抗體特異性結(jié)合，利用鏈霉親和素對(duì)生物素分子極高的親和力（是一般抗原抗體親和力的一百萬(wàn)倍），以及過(guò)氧化物酶的催化作用，通過(guò)化學(xué)反應(yīng)使標(biāo)記抗體的顯色劑顯色，從而確定組織細(xì)胞內(nèi)抗原的存在、定位、定性及定量。鏈霉親和素是一種從鏈霉菌中提取的蛋白質(zhì)，分子量47000，等電點(diǎn)接近中性（IP=6.0-6.5），對(duì)組織和細(xì)胞的非特異吸附很低，基于鏈霉親和素的免疫組化方法背景很低。在SP法中，大量的酶與鏈霉親和素形成復(fù)合物，保證了其具有很高的敏感性，兼具高敏感性、低背景和操作簡(jiǎn)便的優(yōu)點(diǎn)。具體操作步驟如下：切片準(zhǔn)備：將選取的舌鱗癌組織標(biāo)本制成石蠟切片。先對(duì)組織進(jìn)行固定，用PBS沖洗后，放入4%多聚甲醛磷酸鹽緩沖液內(nèi)固定12h，以保持組織的形態(tài)和抗原性。隨后進(jìn)行脫水處理，倒去固定液，用蒸餾水沖洗3次，再用50%酒精沖洗2次，然后用酒精逐級(jí)脫水，依次在70%酒精中放置1天，80%酒精中過(guò)夜，95%酒精中放置3h，無(wú)水酒精（Ⅰ）、（Ⅱ）中各放置2h。接著進(jìn)行透明步驟，將組織置于1:1無(wú)水酒精二甲苯中45min，再分別在二甲苯（Ⅰ）、（Ⅱ）中各浸泡30min。之后進(jìn)行包埋，在恒溫箱內(nèi)，先浸入1:1二甲苯石蠟（58℃）中45min，再依次在石蠟（Ⅰ）、（Ⅱ）、（Ⅲ）中共放置2.5h，最后用石蠟（Ⅲ）包埋組織。包埋后的組織塊經(jīng)修整后，用切片機(jī)切成5-7μm的石蠟帶，將組織石蠟塊在50℃溫水中展片，用處理干凈（先經(jīng)1%HCl浸泡過(guò)夜、蒸餾水沖洗、95%酒精浸泡2h后擦干，再涂防脫劑多聚賴(lài)氨酸）的載玻片撈片，最后在68℃恒溫箱內(nèi)烤片2h。脫蠟與水化：脫蠟前將組織芯片在室溫中放置60min，或60℃恒溫箱中烘烤20min，增強(qiáng)切片與玻片的黏附性。然后用二甲苯（Ⅰ）、（Ⅱ）浸泡，共25min進(jìn)行脫蠟。脫蠟后進(jìn)行水化，依次在無(wú)水酒精（Ⅰ）、（Ⅱ）中各浸泡2min，再下行至95%、80%、70%酒精（Ⅰ）（Ⅱ）中各浸泡2min，使組織恢復(fù)水合狀態(tài)，便于后續(xù)試劑滲透。阻斷內(nèi)源性過(guò)氧化物酶：用3%H?O?去離子水（或80%甲醇）孵育10min，以滅活內(nèi)源性過(guò)氧化物酶活性，避免其對(duì)后續(xù)顯色反應(yīng)產(chǎn)生干擾，影響結(jié)果判斷?？乖迯?fù)：將切片置于0.01M枸櫞酸緩沖液（PH6.0）中，采用煮沸（95℃，15-20min）的方式進(jìn)行抗原修復(fù)，使被甲醛固定封閉的抗原重新暴露出來(lái)，以保證抗體能夠與抗原充分結(jié)合。修復(fù)后自然冷卻20min以上，再用冷水沖洗缸子，加快冷卻至室溫。封閉：滴加正常山羊血清封閉液，室溫孵育20min，封閉非特異性結(jié)合位點(diǎn)，減少非特異性染色，降低背景干擾。一抗孵育：滴加50μl稀釋好的一抗（EGF和EGFR一抗按試劑盒推薦比例稀釋?zhuān)?，室溫靜置1h，或者37℃1h，或者4℃過(guò)夜（若4℃過(guò)夜，需在37℃復(fù)溫45min），使一抗與組織中的抗原特異性結(jié)合。二抗孵育：PBS沖洗2-3次，每次5min，充分洗去未結(jié)合的一抗。然后滴加辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的Ⅱ抗40-50μl，室溫靜置1h，或37℃1h，使二抗與一抗特異性結(jié)合，形成抗原-一抗-二抗復(fù)合物。SP孵育：再次PBS沖洗2-3次，每次5min，洗去未結(jié)合的二抗。滴加SP（鏈霉親和素-過(guò)氧化物酶），室溫或37℃孵育30min-1h，使鏈霉親和素與二抗上的生物素結(jié)合，同時(shí)過(guò)氧化物酶標(biāo)記在鏈霉親和素上，形成穩(wěn)定的復(fù)合物。顯色：PBS沖洗2-3次，每次5min后進(jìn)行顯色。使用DAB顯色試劑盒，在1ml水中加1滴顯色劑A（DAB），搖勻，然后加1滴顯色劑B（H?O?），搖勻，再加1滴顯色劑C（磷酸緩沖液），混勻后加至切片。DAB在過(guò)氧化物酶的催化下，與底物發(fā)生反應(yīng)，生成棕黃色產(chǎn)物，從而顯示出抗原的位置。在顯微鏡下觀察，控制顯色時(shí)間為5-10min，當(dāng)胞漿呈棕色時(shí)判定為陽(yáng)性細(xì)胞，顯色過(guò)度會(huì)導(dǎo)致背景加深，影響結(jié)果觀察。復(fù)染與封片：顯色結(jié)束后，自來(lái)水沖洗10分鐘終止反應(yīng)。用蘇木精復(fù)染2min，使細(xì)胞核著色，便于觀察細(xì)胞形態(tài)。再用鹽酸酒精分化，使細(xì)胞核染色更加清晰。接著自來(lái)水沖洗10-15min，洗去多余的蘇木精和鹽酸酒精。最后進(jìn)行常規(guī)脫水、透明、封片，用中性樹(shù)膠滴在組織旁邊，再用蓋玻片蓋上，制成可供鏡檢的標(biāo)本。結(jié)果分析：每張切片選擇5個(gè)高倍鏡視野（400X），應(yīng)用圖像分析系統(tǒng)進(jìn)行定量灰度掃描后進(jìn)行分析。通過(guò)圖像分析軟件測(cè)量陽(yáng)性信號(hào)的灰度值或光密度值，以定量評(píng)估EGF和EGFR的表達(dá)水平。灰度值越低或光密度值越高，表明抗原表達(dá)越強(qiáng)。同時(shí)，結(jié)合陽(yáng)性細(xì)胞的分布情況和染色強(qiáng)度，對(duì)結(jié)果進(jìn)行綜合判斷。在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，有諸多需要注意的事項(xiàng)。切片質(zhì)量至關(guān)重要，在切片制作過(guò)程中，要確保組織的完整性和切片的均勻性，避免出現(xiàn)組織折疊、斷裂等情況，影響抗原的檢測(cè)。脫蠟要徹底，否則會(huì)影響后續(xù)試劑的滲透和反應(yīng)，導(dǎo)致假陰性結(jié)果?？乖迯?fù)的條件需嚴(yán)格控制，不同的抗原可能需要不同的修復(fù)方法和時(shí)間，溫度過(guò)高或時(shí)間過(guò)長(zhǎng)可能會(huì)破壞抗原結(jié)構(gòu)，溫度過(guò)低或時(shí)間過(guò)短則可能導(dǎo)致抗原修復(fù)不充分，影響檢測(cè)結(jié)果。在抗體孵育過(guò)程中，要注意抗體的濃度、孵育時(shí)間和溫度，避免非特異性結(jié)合和交叉反應(yīng)，孵育過(guò)程中要保持切片的濕潤(rùn)，防止抗體干涸。DAB顯色時(shí)，要現(xiàn)用現(xiàn)配，避免DAB溶液放置時(shí)間過(guò)長(zhǎng)而失效，顯色時(shí)間要根據(jù)顯微鏡下觀察的結(jié)果進(jìn)行控制，避免顯色過(guò)深或過(guò)淺。整個(gè)實(shí)驗(yàn)過(guò)程要保持環(huán)境的清潔，避免污染，使用的試劑要確保質(zhì)量可靠，避免因試劑問(wèn)題導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)結(jié)果出現(xiàn)偏差。4.3數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析本研究使用SPSS17.0軟件對(duì)免疫組化結(jié)果進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析。將免疫組化檢測(cè)得到的EGF和EGFR表達(dá)水平數(shù)據(jù)錄入SPSS軟件，采用非參數(shù)檢驗(yàn)中的Kruskal-Wallis秩和檢驗(yàn)對(duì)不同組間EGF和EGFR的表達(dá)水平進(jìn)行初步比較，判斷多組樣本間是否存在顯著差異。若Kruskal-Wallis檢驗(yàn)結(jié)果顯示P值小于0.05，則表明多組間存在差異，進(jìn)一步采用Mann-WhitneyU檢驗(yàn)進(jìn)行兩兩比較，分析具體哪些組之間存在顯著差異。在分析EGF和EGFR的表達(dá)與臨床因素（如性別、年齡、臨床分期、腫瘤分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等）的相關(guān)性時(shí)，對(duì)于分類(lèi)變量，采用卡方檢驗(yàn)（\chi^2test）進(jìn)行分析，判斷EGF和EGFR的表達(dá)在不同分類(lèi)水平下是否存在顯著差異。對(duì)于有序分類(lèi)變量，如腫瘤分化程度，采用Spearman秩相關(guān)分析，探討其與EGF和EGFR表達(dá)之間的相關(guān)性。以P＜0.05作為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的判斷標(biāo)準(zhǔn)。通過(guò)這些統(tǒng)計(jì)分析方法，深入探究EGF/EGFR在相近臨床分期不同預(yù)后舌鱗癌中的表達(dá)差異及其與臨床因素的關(guān)系，為研究結(jié)果的可靠性和有效性提供有力的統(tǒng)計(jì)學(xué)支持。五、實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析5.1EGF/EGFR在不同預(yù)后舌鱗癌組織中的表達(dá)情況通過(guò)免疫組化SP法對(duì)舌鱗癌組織標(biāo)本進(jìn)行檢測(cè)，得到了EGF和EGFR在不同預(yù)后舌鱗癌組織中的表達(dá)數(shù)據(jù)，具體結(jié)果如下：組別例數(shù)EGF表達(dá)（陽(yáng)性例數(shù)/陰性例數(shù)）EGFR表達(dá)（陽(yáng)性例數(shù)/陰性例數(shù)）EGF陽(yáng)性率（%）EGFR陽(yáng)性率（%）預(yù)后較差組167/914/243.7587.50預(yù)后較好組166/107/937.5043.75從表中數(shù)據(jù)可以看出，在預(yù)后較差組的16例舌鱗癌樣本中，EGF陽(yáng)性表達(dá)的有7例，陰性表達(dá)的有9例，陽(yáng)性率為43.75%；EGFR陽(yáng)性表達(dá)的有14例，陰性表達(dá)的有2例，陽(yáng)性率為87.50%。在預(yù)后較好組的16例樣本中，EGF陽(yáng)性表達(dá)的有6例，陰性表達(dá)的有10例，陽(yáng)性率為37.50%；EGFR陽(yáng)性表達(dá)的有7例，陰性表達(dá)的有9例，陽(yáng)性率為43.75%。在染色強(qiáng)度方面，EGFR在預(yù)后較差組中，棕黃色顆粒狀染色主要位于腫瘤細(xì)胞胞膜上或胞漿內(nèi)，呈現(xiàn)出較強(qiáng)的染色強(qiáng)度，其中強(qiáng)陽(yáng)性2例，中陽(yáng)性8例，弱陽(yáng)性4例，陰性2例。在預(yù)后較好組中，EGFR的染色強(qiáng)度相對(duì)較弱，強(qiáng)陽(yáng)性0例，中陽(yáng)性5例，弱陽(yáng)性2例，陰性9例。而EGF在兩組中的染色強(qiáng)度差異不明顯，在預(yù)后較差組中，棕黃色染色顆粒主要表達(dá)于舌癌細(xì)胞胞膜或胞漿，強(qiáng)陽(yáng)性0例，中陽(yáng)性4例，弱陽(yáng)性3例，陰性9例；在預(yù)后較好組中，強(qiáng)陽(yáng)性0例，中陽(yáng)性3例，弱陽(yáng)性3例，陰性10例。從定位上看，EGFR和EGF均主要表達(dá)于舌癌細(xì)胞的胞膜或胞漿。這些結(jié)果初步表明，EGFR在預(yù)后較差組舌鱗癌中的表達(dá)明顯高于預(yù)后較好組，而EGF在兩組中的表達(dá)差異不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。5.2EGF/EGFR表達(dá)與臨床因素的相關(guān)性分析本研究進(jìn)一步深入探究了EGF和EGFR的表達(dá)與舌鱗癌患者的性別、年齡、臨床分期、腫瘤分化程度及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等臨床因素之間的相關(guān)性，旨在全面揭示EGF/EGFR在舌鱗癌發(fā)生、發(fā)展過(guò)程中的作用機(jī)制，為臨床治療和預(yù)后評(píng)估提供更為詳實(shí)的理論依據(jù)。在性別因素方面，對(duì)32例舌鱗癌患者的研究數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，結(jié)果顯示，在男性患者中，EGF陽(yáng)性表達(dá)的有7例，陰性表達(dá)的有9例；EGFR陽(yáng)性表達(dá)的有12例，陰性表達(dá)的有4例。在女性患者中，EGF陽(yáng)性表達(dá)的有6例，陰性表達(dá)的有10例；EGFR陽(yáng)性表達(dá)的有9例，陰性表達(dá)的有7例。通過(guò)卡方檢驗(yàn)，計(jì)算得到\chi^2值，經(jīng)分析可知，EGF和EGFR的表達(dá)在男性和女性患者之間的差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p>0.05）。這表明性別因素與EGF/EGFR的表達(dá)并無(wú)顯著關(guān)聯(lián)，在舌鱗癌的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中，EGF/EGFR的表達(dá)不受性別的影響。在年齡因素的分析中，將患者分為小于60歲和大于等于60歲兩組。小于60歲的患者中，EGF陽(yáng)性表達(dá)的有8例，陰性表達(dá)的有8例；EGFR陽(yáng)性表達(dá)的有12例，陰性表達(dá)的有4例。大于等于60歲的患者中，EGF陽(yáng)性表達(dá)的有5例，陰性表達(dá)的有11例；EGFR陽(yáng)性表達(dá)的有9例，陰性表達(dá)的有7例。同樣采用卡方檢驗(yàn)進(jìn)行分析，結(jié)果表明EGF和EGFR的表達(dá)在不同年齡組之間的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p>0.05）。這說(shuō)明年齡并非影響EGF/EGFR表達(dá)的關(guān)鍵因素，無(wú)論患者年齡大小，EGF/EGFR的表達(dá)水平并未呈現(xiàn)出明顯的差異。臨床分期也是本研究重點(diǎn)關(guān)注的因素之一。在Ⅰ-Ⅱ期的患者中，EGF陽(yáng)性表達(dá)的有6例，陰性表達(dá)的有10例；EGFR陽(yáng)性表達(dá)的有9例，陰性表達(dá)的有7例。Ⅲ-Ⅳ期的患者中，EGF陽(yáng)性表達(dá)的有7例，陰性表達(dá)的有9例；EGFR陽(yáng)性表達(dá)的有12例，陰性表達(dá)的有4例。經(jīng)過(guò)卡方檢驗(yàn)，結(jié)果顯示EGF和EGFR的表達(dá)在不同臨床分期之間的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p>0.05）。這提示在舌鱗癌的不同發(fā)展階段，臨床分期與EGF/EGFR的表達(dá)之間不存在顯著的相關(guān)性，不能單純依據(jù)臨床分期來(lái)判斷EGF/EGFR的表達(dá)情況。腫瘤分化程度對(duì)舌鱗癌的生物學(xué)行為有著重要影響。在高分化的舌鱗癌患者中，EGF陽(yáng)性表達(dá)的有3例，陰性表達(dá)的有5例；EGFR陽(yáng)性表達(dá)的有5例，陰性表達(dá)的有3例。中分化患者中，EGF陽(yáng)性表達(dá)的有6例，陰性表達(dá)的有8例；EGFR陽(yáng)性表達(dá)的有9例，陰性表達(dá)的有5例。低分化患者中，EGF陽(yáng)性表達(dá)的有4例，陰性表達(dá)的有6例；EGFR陽(yáng)性表達(dá)的有7例，陰性表達(dá)的有3例。運(yùn)用Spearman秩相關(guān)分析，結(jié)果表明EGF和EGFR的表達(dá)與腫瘤分化程度之間無(wú)明顯相關(guān)性（p>0.05）。這表明腫瘤的分化程度并不能直接決定EGF/EGFR的表達(dá)水平，在評(píng)估舌鱗癌的惡性程度和預(yù)后時(shí)，不能僅依賴(lài)腫瘤分化程度與EGF/EGFR表達(dá)的關(guān)系。淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移是影響舌鱗癌預(yù)后的關(guān)鍵因素之一。在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者中，EGF陽(yáng)性表達(dá)的有8例，陰性表達(dá)的有5例；EGFR陽(yáng)性表達(dá)的有12例，陰性表達(dá)的有1例。無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者中，EGF陽(yáng)性表達(dá)的有5例，陰性表達(dá)的有14例；EGFR陽(yáng)性表達(dá)的有9例，陰性表達(dá)的有10例。通過(guò)卡方檢驗(yàn)分析，結(jié)果顯示EGF和EGFR的表達(dá)在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組之間存在顯著差異（p<0.05）。這充分說(shuō)明淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移與EGF/EGFR的表達(dá)密切相關(guān)，EGF/EGFR可能在舌鱗癌的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移過(guò)程中發(fā)揮著重要作用，高表達(dá)的EGF/EGFR可能促進(jìn)了舌鱗癌的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，進(jìn)而影響患者的預(yù)后。5.3結(jié)果討論本研究通過(guò)對(duì)32例舌鱗癌組織標(biāo)本的檢測(cè)分析，發(fā)現(xiàn)EGFR在預(yù)后較差組舌鱗癌中的表達(dá)明顯高于預(yù)后較好組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p=0.012\lt0.05）。這一結(jié)果與相關(guān)研究報(bào)道一致，如在頭頸部鱗狀細(xì)胞癌中，EGFR的高表達(dá)往往與疾病的預(yù)后差相關(guān)。EGFR作為一種跨膜糖蛋白受體，在腫瘤細(xì)胞的增殖、存活、侵襲和轉(zhuǎn)移等過(guò)程中發(fā)揮著關(guān)鍵作用。當(dāng)EGFR高表達(dá)時(shí)，其與配體結(jié)合后，可激活下游的Ras/MAPK、PI3K/Akt等信號(hào)通路。Ras/MAPK通路的激活能夠促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的增殖，使細(xì)胞周期進(jìn)程加快，從而導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞的快速生長(zhǎng)。PI3K/Akt通路的激活則可抑制腫瘤細(xì)胞的凋亡，增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞的存活能力。在本研究中，預(yù)后較差組舌鱗癌組織中EGFR的高表達(dá)，可能通過(guò)持續(xù)激活這些信號(hào)通路，促進(jìn)了腫瘤細(xì)胞的增殖、存活和轉(zhuǎn)移，進(jìn)而導(dǎo)致患者預(yù)后不良。而EGF在預(yù)后較差組和預(yù)后較好組舌鱗癌中的表達(dá)差異不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p=0.691\gt0.05）。這可能是由于EGF雖然能與EGFR結(jié)合并激活下游信號(hào)通路，但在舌鱗癌的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中，其表達(dá)可能受到多種因素的調(diào)控，且其發(fā)揮作用不僅僅取決于自身的表達(dá)水平，還與EGFR的表達(dá)及兩者之間的相互作用有關(guān)。在一些腫瘤中，雖然EGF表達(dá)水平變化不明顯，但EGFR的表達(dá)改變可能導(dǎo)致EGF/EGFR信號(hào)通路的活性發(fā)生變化?？赡艽嬖谄渌?xì)胞因子或信號(hào)通路與EGF/EGFR信號(hào)通路相互作用，共同調(diào)節(jié)舌鱗癌的生物學(xué)行為，使得EGF的表達(dá)在不同預(yù)后組中未表現(xiàn)出明顯差異。在分析EGF/EGFR表達(dá)與臨床因素的相關(guān)性時(shí)，發(fā)現(xiàn)兩者的表達(dá)與性別、年齡、臨床分期及腫瘤分化程度等臨床因素均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（p\gt0.05）。這表明在本研究中，這些臨床因素對(duì)EGF/EGFR的表達(dá)影響較小。而在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組中，EGF/EGFR出現(xiàn)差異表達(dá)，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p\lt0.05）。這說(shuō)明EGF/EGFR的表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移是舌鱗癌預(yù)后不良的重要因素之一，EGF/EGFR可能通過(guò)促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移能力，參與了舌鱗癌的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移過(guò)程。高表達(dá)的EGFR可能激活下游的信號(hào)通路，調(diào)節(jié)細(xì)胞骨架的重塑和細(xì)胞間黏附分子的表達(dá)，使腫瘤細(xì)胞更容易突破基底膜，進(jìn)入淋巴管，從而發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。六、EGF/EGFR表達(dá)對(duì)舌鱗癌預(yù)后及治療的影響6.1EGF/EGFR表達(dá)差異對(duì)舌鱗癌預(yù)后評(píng)估的價(jià)值本研究中，EGFR在預(yù)后較差組舌鱗癌中的高表達(dá)表明，其有望成為評(píng)估舌鱗癌預(yù)后的重要分子指標(biāo)。高表達(dá)的EGFR與腫瘤細(xì)胞的增殖、存活、侵襲和轉(zhuǎn)移能力增強(qiáng)密切相關(guān)。當(dāng)EGFR表達(dá)升高時(shí)，其激活下游信號(hào)通路的能力增強(qiáng)，導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞的增殖速度加快，細(xì)胞周期進(jìn)程異常，從而促進(jìn)腫瘤的生長(zhǎng)。在一項(xiàng)針對(duì)乳腺癌的研究中發(fā)現(xiàn)，EGFR高表達(dá)的腫瘤細(xì)胞，其增殖相關(guān)基因的表達(dá)也顯著上調(diào)，腫瘤細(xì)胞的增殖活性明顯增強(qiáng)。在舌鱗癌中，EGFR的高表達(dá)可能通過(guò)類(lèi)似機(jī)制，使腫瘤細(xì)胞更具侵襲性，容易突破周?chē)M織的屏障，向遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移。EGFR的高表達(dá)還可能抑制腫瘤細(xì)胞的凋亡，增強(qiáng)其存活能力，使得腫瘤細(xì)胞在體內(nèi)更難被清除，進(jìn)而影響患者的預(yù)后。在臨床實(shí)踐中，對(duì)于EGFR高表達(dá)的舌鱗癌患者，醫(yī)生可以更準(zhǔn)確地判斷其預(yù)后較差，從而采取更積極的治療策略。對(duì)于這類(lèi)患者，在手術(shù)切除腫瘤后，可以適當(dāng)增加化療或放療的強(qiáng)度和療程，以進(jìn)一步殺滅可能殘留的癌細(xì)胞，降低復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移的風(fēng)險(xiǎn)。也可以提前為患者制定更全面的隨訪計(jì)劃，密切監(jiān)測(cè)病情變化，及時(shí)發(fā)現(xiàn)并處理可能出現(xiàn)的復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移。然而，將EGF/EGFR作為舌鱗癌預(yù)后評(píng)估指標(biāo)也存在一定的局限性。雖然本研究發(fā)現(xiàn)EGFR在不同預(yù)后組中的表達(dá)存在差異，但這種差異并非絕對(duì)。在實(shí)際臨床中，可能存在部分EGFR高表達(dá)的患者預(yù)后相對(duì)較好，或者EGFR低表達(dá)的患者預(yù)后較差的情況。這可能是由于腫瘤的發(fā)生發(fā)展是一個(gè)復(fù)雜的過(guò)程，受到多種因素的共同影響，EGF/EGFR只是其中的一部分?？赡艽嬖谄渌蚧蛐盘?hào)通路的異常，對(duì)腫瘤的預(yù)后產(chǎn)生更為關(guān)鍵的影響。在某些情況下，即使EGFR表達(dá)水平較低，但如果其他促進(jìn)腫瘤轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)的因素被激活，患者的預(yù)后仍然可能較差。EGF/EGFR的表達(dá)檢測(cè)方法也可能存在一定的誤差，不同的檢測(cè)技術(shù)和試劑可能導(dǎo)致檢測(cè)結(jié)果的差異，從而影響其作為預(yù)后評(píng)估指標(biāo)的準(zhǔn)確性。6.2EGF/EGFR在舌鱗癌靶向治療中的作用隨著對(duì)舌鱗癌發(fā)病機(jī)制研究的深入，針對(duì)EGF/EGFR信號(hào)通路的靶向治療已成為研究熱點(diǎn)，為舌鱗癌的治療帶來(lái)了新的希望。目前，臨床上針對(duì)EGFR的靶向藥物主要分為兩類(lèi)，即抗EGFR單克隆抗體和小分子酪氨酸激酶抑制劑?？笶GFR單克隆抗體以其高特異性和親和力，成為靶向治療的重要藥物。西妥昔單抗是最早獲批用于治療頭頸部鱗癌的抗EGFR單抗。其作用機(jī)制是特異性地結(jié)合EGFR的胞外結(jié)構(gòu)域，阻斷EGFR與配體的結(jié)合，從而抑制EGFR的活化，阻斷下游信號(hào)通路的傳導(dǎo)。在一項(xiàng)針對(duì)晚期頭頸部鱗癌患者的臨床研究中，西妥昔單抗聯(lián)合放療與單純放療相比，顯著提高了患者的生存率，中位生存期從29.3個(gè)月延長(zhǎng)至49個(gè)月。帕尼單抗同樣是一種靶向EGFR胞外結(jié)構(gòu)域的單抗，與西妥昔單抗相比，它具有更高的親和力和更長(zhǎng)的半衰期。在一些臨床前研究中，帕尼單抗表現(xiàn)出更強(qiáng)的抑制腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)和增殖的能力。尼妥珠單抗是我國(guó)自主研發(fā)的抗EGFR單抗，它能競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合EGFR，阻斷由EGFR介導(dǎo)的下游信號(hào)傳導(dǎo)通路，從而抑制腫瘤細(xì)胞的增殖、誘導(dǎo)分化、促進(jìn)細(xì)胞凋亡。在舌鱗癌的治療中，尼妥珠單抗聯(lián)合化療或放療也取得了一定的療效。小分子酪氨酸激酶抑制劑則通過(guò)抑制EGFR的酪氨酸激酶活性，阻斷下游信號(hào)通路的傳導(dǎo)，從而發(fā)揮抗腫瘤作用。吉非替尼是第一代小分子酪氨酸激酶抑制劑，它能夠可逆性地結(jié)合EGFR的ATP結(jié)合位點(diǎn)，抑制EGFR的酪氨酸激酶活性。在非小細(xì)胞肺癌的治療中，吉非替尼對(duì)EGFR突變陽(yáng)性的患者具有顯著的療效。在舌鱗癌的治療中，吉非替尼也顯示出一定的抗腫瘤活性，但由于舌鱗癌中EGFR突變率相對(duì)較低，其療效不如在肺癌中顯著。厄洛替尼也是第一代小分子酪氨酸激酶抑制劑，它與EGFR的結(jié)合親和力比吉非替尼更高。在一些臨床研究中，厄洛替尼單藥或聯(lián)合化療在頭頸部鱗癌的治療中顯示出一定的療效。阿法替尼是第二代不可逆的小分子酪氨酸激酶抑制劑，它不僅能夠抑制EGFR的活性，還能抑制HER2等其他HER家族成員的活性。阿法替尼在頭頸部鱗癌的治療中，展現(xiàn)出了比第一代抑制劑更好的療效和更低的耐藥性。本研究中，EGFR在預(yù)后較差組舌鱗癌中的高表達(dá)，提示這部分患者可能更適合接受EGFR靶向治療。高表達(dá)的EGFR意味著腫瘤細(xì)胞對(duì)EGF/EGFR信號(hào)通路的依賴(lài)程度更高，使用靶向藥物能夠更有效地抑制腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)和增殖。對(duì)于EGFR高表達(dá)的舌鱗癌患者，在手術(shù)切除腫瘤后，聯(lián)合使用西妥昔單抗或阿法替尼等靶向藥物，可能會(huì)進(jìn)一步降低復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移的風(fēng)險(xiǎn)，提高患者的生存率。目前的研究也表明，不同患者對(duì)靶向藥物的敏感性存在差異，這可能與患者的基因背景、腫瘤微環(huán)境等因素有關(guān)。在臨床實(shí)踐中，需要進(jìn)一步開(kāi)展相關(guān)研究，篩選出能夠預(yù)測(cè)靶向治療療效的生物標(biāo)志物，以便更精準(zhǔn)地選擇適合靶向治療的患者，提高治療效果。6.3基于EGF/EGFR表達(dá)的個(gè)性化治療策略探討基于本研究中EGF/EGFR的表達(dá)情況，為舌鱗癌患者制定個(gè)性化治療策略具有重要的臨床意義。對(duì)于EGFR高表達(dá)的舌鱗癌患者，除了傳統(tǒng)的手術(shù)治療外，應(yīng)優(yōu)先考慮結(jié)合靶向治療。手術(shù)治療仍是舌鱗癌的主要治療手段，對(duì)于早期舌鱗癌患者，可根據(jù)腫瘤的位置和大小，選擇合適的手術(shù)方式，如舌部分切除術(shù)或半舌切除術(shù)。在手術(shù)過(guò)程中，要確保切除邊界的安全，避免腫瘤殘留。對(duì)于中晚期患者，可能需要進(jìn)行更廣泛的切除，并結(jié)合頸部淋巴結(jié)清掃術(shù)。在手術(shù)前后，可根據(jù)患者EGFR的表達(dá)情況，合理使用靶向藥物。對(duì)于EGFR高表達(dá)的患者，在手術(shù)前使用西妥昔單抗等靶向藥物進(jìn)行新輔助治療，可能會(huì)縮小腫瘤體積，降低腫瘤分期，提高手術(shù)切除的成功率。在手術(shù)后，繼續(xù)使用靶向藥物進(jìn)行輔助治療，能夠進(jìn)一步殺滅殘留的癌細(xì)胞，降低復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移的風(fēng)險(xiǎn)。放療和化療也是舌鱗癌綜合治療的重要組成部分。對(duì)于EGFR高表達(dá)的患者，放療和化療的敏感性可能會(huì)有所不同。在放療過(guò)程中，EGFR高表達(dá)可能會(huì)影響腫瘤細(xì)胞對(duì)放療的敏感性，因此可以考慮在放療的同時(shí)聯(lián)合使用靶向藥物，增強(qiáng)放療的效果。在化療方面，對(duì)于EGFR高表達(dá)的患者，可以選擇對(duì)EGFR信號(hào)通路有協(xié)同抑制作用的化療藥物，提高化療的療效。在制定個(gè)性化治療策略時(shí)，還需要考慮患者的身體狀況、年齡、基礎(chǔ)疾病等因素。對(duì)于身體狀況較差、年齡較大的患者，在選擇治療方案時(shí)要更加謹(jǐn)慎，避免過(guò)度治療給患者帶來(lái)過(guò)大的負(fù)擔(dān)。對(duì)于有基礎(chǔ)疾病的患者，如心臟病、糖尿病等，要充分評(píng)估治療方案對(duì)基礎(chǔ)疾病的影響，確保治療的安全性。然而，在實(shí)施基于EGF/EGFR表達(dá)的個(gè)性化治療策略過(guò)程中，也面臨著一些挑戰(zhàn)。目前，靶向藥物的價(jià)格相對(duì)較高，這給患者帶來(lái)了較大的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)，限制了靶向治療的廣泛應(yīng)用。部分患者可能會(huì)出現(xiàn)耐藥現(xiàn)象，導(dǎo)致靶向治療的效果不佳。不同患者對(duì)靶向藥物的敏感性存在差異，如何準(zhǔn)確篩選出適合靶向治療的患者，提高治療的精準(zhǔn)性，也是需要解決的問(wèn)題。為了解決這些挑戰(zhàn)，一方面需要政府和相關(guān)部門(mén)加大對(duì)靶向藥物的研發(fā)投入和政策支持，降低藥物價(jià)格，提高藥物的可及性。需要進(jìn)一步深入研究耐藥機(jī)制，開(kāi)發(fā)新的治療方法，克服耐藥問(wèn)題。還需要開(kāi)展更多的臨床研究，尋找能夠預(yù)測(cè)靶向治療療效的生物標(biāo)志物，提高治療的精準(zhǔn)性。七、結(jié)論與展望7.1研究主要結(jié)論本研究通過(guò)對(duì)32例舌鱗癌組織標(biāo)本的檢測(cè)分析，深入探究了EGF/EGFR在相近臨床分期不同預(yù)后舌鱗癌中的表達(dá)情況及其與臨床因素的相關(guān)性，取得了以下主要結(jié)論：EGF/EGFR在不同預(yù)后舌鱗癌中的表達(dá)差異：EGFR在預(yù)后較差組舌鱗癌中的表達(dá)明顯高于預(yù)后較好組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p=0.012\lt0.05），且棕黃色顆粒狀染色主要位于腫瘤細(xì)胞胞膜上或胞漿內(nèi)，在預(yù)后較差組中染色強(qiáng)度更強(qiáng)。而EGF在預(yù)后較差組和預(yù)后較好組舌鱗癌中的表達(dá)差異不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p=0.691\gt0.05），棕黃色染色顆粒主要表達(dá)于舌癌細(xì)胞胞膜或胞漿，兩組染色強(qiáng)度差異不明顯。這表明EGFR的表達(dá)可能與舌鱗癌的預(yù)后密切相關(guān)，而EGF在不同預(yù)后組中的表達(dá)相對(duì)穩(wěn)定。EGF/EGFR表達(dá)與臨床因素的關(guān)系：EGF/EGFR的表達(dá)與性別、年齡、臨床分期及腫瘤分化程度等臨床因素均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（p\gt0.05）。在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組中，EGF/EGFR出現(xiàn)差異表達(dá)，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p\lt0.05）。這說(shuō)明在本研究中，性別、年齡、臨床分期及腫瘤分化程度對(duì)EGF/EGFR的表達(dá)影響較小，而淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移與EGF/EGFR的表達(dá)密切相關(guān)，高表達(dá)的EGF/EGFR可能促進(jìn)了舌鱗癌的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。EGF/EGFR表達(dá)對(duì)舌鱗癌預(yù)后評(píng)估的價(jià)值：EGFR在預(yù)后較差組舌鱗癌中的高表達(dá)，表明其有望成為評(píng)估舌鱗癌預(yù)后的重要分子指標(biāo)。高表達(dá)的EGFR與腫瘤細(xì)胞的增殖、存活、侵襲和轉(zhuǎn)移能力增強(qiáng)密切相關(guān)，可能通過(guò)激活下游信號(hào)通路，促進(jìn)腫瘤的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移，進(jìn)而影響患者