酶活性的影響因素

1、酶反應(yīng)條件的選擇,www.SucaiF,主要內(nèi)容,www.SucaiF,知識背景,酶的化學(xué)本質(zhì)是蛋白質(zhì)，與一般催化劑一樣，只能催化熱力學(xué)允許的化學(xué)反應(yīng)，但又具有不同于一般催化劑催化反應(yīng)的特點和反應(yīng)機(jī)制 酶具有不穩(wěn)定性，酶促反應(yīng)的速率受酶濃度、底物濃度、pH、溫度、抑制劑及激活劑有關(guān)。,www.SucaiF,實驗原理,一、溫度,實驗原理： 一、尿素在酸、堿、酶作用下（酸、堿需加熱）能水解成氨和二氧化碳 新鮮大豆中含有較高活性的尿素酶，可以水解尿素生成NH3 CO(NH2)2 + H2O -2NH3 + CO2 尿素養(yǎng)在尿素酶作用下，在中性或酸性環(huán)境下生成碳酸胺，在NaOH環(huán)境下生成Na2CO3和

2、NH3、NH3與納氏試劑作用，生成棕黃色碘化雙汞胺,www.SucaiF,尿素酶 CO(NH2)2 + H2O - ( NH4 )2CO3 - NH3 NH3 + 納氏試劑(HgI2.2KI) - NH2.Hg2I3 (棕黃色),www.SucaiF,NaOH,二、pH,淀粉水解產(chǎn)物與碘液反應(yīng)生成不同的顏色反應(yīng) 淀粉+碘生成藍(lán)色 糊精+碘根據(jù)水解程度，由紫色到橙色，水解越徹底，顏色越淺，直到生成無色糊精（碘不顯色） 麥芽糖、葡萄糖遇碘不顯色,www.SucaiF,三、激活劑和抑制劑,尿素酶為巰基酶，重金屬離子可與其巰基結(jié)合而使尿素酶的活性喪失。 氯化鈉為唾液淀粉酶的激活劑，硫酸銅為其抑制劑。唾

3、液淀粉酶可催化淀粉生成各種不同大小的糊精及麥芽糖。不同大小的糊精遇碘呈現(xiàn)不同顏色，可用顏色淀粉水解程度，從而研究激活劑和抑制劑的影響。,www.SucaiF,實驗材料,器材： 控溫水浴鍋（每個實驗室3個） 制冰機(jī) 電磁灶 不銹鋼鍋 白瓷板 試管、滴管、移液管（1-2ml） 燒杯,www.SucaiF,試劑： 蒸餾水 1%淀粉液 1%蔗糖液 0.1%尿素液、大豆尿素酶溶液 0.1%CuSO4、0.1%HgCl2、0.1%NaCl 1M NaOH、0.5M H2SO4 納氏試劑 碘液 各種pH緩沖液：5.0；6.8；8.0,www.SucaiF,1、唾液淀粉酶應(yīng)用液的制備,（1）每人取一個干凈的飲

4、水杯，裝上蒸餾水。 （2）先用蒸餾水漱口，將口腔內(nèi)的食物殘渣清理干凈。 （3）口含約20mL蒸餾水，做咀嚼動作1-2min，以分泌較多的唾液。然后將口腔中的唾液吐入一個干凈的小燒杯中。,www.SucaiF,2溫度對酶活性的影響,（1）取3支試管，按表4-2進(jìn)行實驗。 （2）按上述表格進(jìn)行試驗，實驗完成后，比較各試管中黃紅色的深淺。 取尿素液 與尿素酶液,www.SucaiF,3pH對酶活性的影響,www.SucaiF,（1）取3支試管，按表4-3編號后進(jìn)行實驗。 取淀粉與唾液淀粉酶,搖勻后，將各管置37水浴中處理。 （2）每隔1min從pH6.8的試管中取1滴反應(yīng)液滴于白瓷板上，隨后滴加稀碘液1滴，觀察顏色變化。 （3）待顏色呈棕色時，向各管中加稀碘液3滴。觀察各管顏色，比較各管中淀粉水解的程度。,www.SucaiF,4、唾液淀粉酶的激活劑和抑制劑,www.SucaiF,（1）取3支試管，按下表編號后進(jìn)行實驗。,（2）將各管搖勻后，一起放入37水浴保溫。 （3）每隔1min從第2支試管中取出1滴反應(yīng)液滴于白瓷板上，滴加稀碘液1滴，觀察其顏色變化。 （3）待顏色呈棕色時，向各管中加稀碘液1-3滴。觀察各