血庫操作規(guī)程.ppt

1、血庫操作規(guī)程,東阿 2015-3-26,目錄,ABO血型鑒定（玻片法、試管法）標準操作規(guī)程5 RhD血型鑒定（玻片法、試管法）標準操作規(guī)程9 ABO血型正反定型及RhD血型（微柱凝膠卡式法）標準操作規(guī)程11 交叉配血試驗（鹽水法）標準操作規(guī)程15 凝聚胺交叉配血試驗標準操作規(guī)程17 交叉配血試驗（微柱凝膠卡式法）標準操作規(guī)程19 新生兒溶血?。℉DN）血型血清學檢查標準操作規(guī)程22 不規(guī)則抗體篩選標準操作規(guī)程26 孕婦血清中紅細胞血型抗體效價測定標準操作規(guī)程29 醫(yī)用低速離心機（X5型）標準操作規(guī)程31 低速離心機（160C型）標準操作規(guī)程33 HHW型電熱恒溫水浴箱標準操作規(guī)程35 HYC-

2、360型醫(yī)用冷藏箱標準操作規(guī)程36 200型血液冷藏箱標準操作規(guī)程38 低溫保存箱標準操作規(guī)程40,FYQ型免疫微柱孵育器標準操作規(guī)程42 TD-3A血型血清學用離心機標準操作規(guī)程43 WGH-I數(shù)碼恒溫解凍箱標準操作規(guī)程44 HXC-608型醫(yī)用血液冷藏箱標準操作規(guī)程45 PH-A恒溫擺動保存箱標準操作規(guī)程47 LX-18X血小板運輸箱標準操作規(guī)程48 GZR-II型高頻熱合器標準操作規(guī)程50 XS生物顯微鏡標準操作規(guī)程51 室內(nèi)質(zhì)控標準操作規(guī)程52 血庫室間質(zhì)評標準操作規(guī)程60 血庫配制自備試劑的標準操作規(guī)程63 血標本接收及處理標準操作程序65 血液入庫操作規(guī)程66 血液儲存操作規(guī)程67

3、 血液出庫操作規(guī)程69 病毒滅活冰凍血漿、冷沉淀凝血因子復溶操作規(guī)程70 血液報廢操作規(guī)程71 實驗室醫(yī)療廢棄物處理操作規(guī)程72,ABO血型鑒定（玻片法、試管法）標準操作規(guī)程,3、原理：根據(jù)紅細胞上有或無A抗原或/和B抗原，將血型分為A型、B型、AB型及O型4種?？衫眉t細胞凝集試驗，通過正、反定型準確鑒定ABO血型。所謂正定型，是用已知抗-A和抗-B分型血清來測定紅細胞上有無相應的A抗原或/和B抗原；所謂反定型，是用已知A細胞和B細胞來測定血清中有無相應的抗-A或/和抗-B。 4、試劑 4.1血清抗A、抗B； 4.2 5%A、B及0型試劑紅細胞鹽水懸液； 4.3受檢者血清或血漿； 4.4受檢

4、者5%紅細胞鹽水懸液;,5、樣本采集及處理 用一次性EDTA-K2真空采血管抽取靜脈血1ml，將標示有患者姓名、性別、年齡、住院號、病室/門急診、床號等信息的標簽貼在標本管上，由醫(yī)護人員或?qū)ｉT人員將患者標本送交血庫。 6、操作步驟 6. 1玻片法 （正定型） 6.1.1分型血清 l 滴于鑒定卡內(nèi)，再各加受檢者 5紅細胞懸液 1 滴，混和。 6.1.2 將鑒定卡不斷輕輕轉(zhuǎn)動，使血清與細胞充分混勻，連續(xù)約 15 min，以肉眼觀察有無凝集(或溶血)反應。 6.2 試管法 （正定型） 6.2.1取潔凈小試管2支，分別標明抗A，抗B，用滴管分別加抗A、抗B分型血清各1滴于試管底部，再以滴管分別加入受檢

5、者5%紅細胞鹽水懸液1滴，混合。 6.2.2反定型：另取潔凈小試管3支，分別標明A，B和O細胞。用滴管分別加入受檢者血清1滴于試管底部，再分別以滴管加入A，B和O型5%試劑紅細胞懸液1滴，混合。立即以1000r/min離心1min。 6.2.3將試管輕輕搖動，使沉于管底的紅細胞浮起，先以肉眼觀察有無凝集（或溶血）現(xiàn)象。如肉眼不見凝集，應將反應物倒于玻片上，再以低倍鏡檢查。 7、結(jié)果判斷：凝集為陽性（+），不凝集為陰性（-）,8、干擾： 8.1分型血清質(zhì)量性能符合要求，用畢后應放冰箱保存，以免細菌污染。 8.2試劑紅細胞以3個健康者同型新鮮紅細胞混和，用生理鹽水洗滌1次，以除去存在于紅細胞中的抗

6、體及可溶性抗原。 8.3試管、滴管和玻片必須清潔干燥，防止溶血。 8.4操作方法應按規(guī)定，一般應先加血清，然后再加紅細胞懸液，以便容易核實是否漏加血清。 8.5按理IgM抗-A和抗-B與相應紅細胞的反應溫度以4為最強，但為了防止冷凝集現(xiàn)象的干擾，一般仍在室溫（2024）內(nèi)進行試驗，37可使反應減弱。 8.6離心時間不宜過長或過短，速度不宜過快或過慢，以防止假陽性或假 陰性結(jié)果。 8.7觀察時應注意紅細胞呈特異性凝集、繼發(fā)性凝固以及緡錢狀排列的區(qū)別。 8.8判斷結(jié)果后應仔細核對、記錄，避免筆誤。,9、凝強度判斷:觀察結(jié)果應仔細，首先注意有無凝集，再按下述情況說明凝集強度： 9.1 4：紅細胞凝聚

7、成一大塊，血清透明清晰。 9.2 3：紅細胞凝集成數(shù)小塊，血清尚清晰。 9.32：紅細胞凝集分散成多個小塊，可見游離紅細胞。 9.41：肉眼可見大顆粒，周圍有較多紅細胞。 9.5 ：鏡下可見數(shù)個紅細胞凝集在一起，周圍有很多紅細胞。 9.6混合凝集視場（MF,mixed field）：鏡下可見數(shù)個紅細胞凝集，大多數(shù)紅細胞分散分布為MF。陰性（）：鏡下未見凝集，紅細胞均勻分布。,ABO血型正反定型及RhD血型（微柱凝膠卡式法）標準操作規(guī)程,4.2原理：本試驗采用排阻層析原理，即在微柱凝膠介質(zhì)中，紅細胞抗原與相應抗體結(jié)合，形成紅細胞免疫復合物，在一定離心條件下，該復合物不能通過凝膠間隙而浮于膠表面或

8、懸于膠中；如無相應抗體結(jié)合，則不能形成紅細胞免疫復合物，在一定離心條件下，分散的紅細胞可以通過凝膠間隙沉于微柱腔底部。 ABO血型基礎 血型抗原與抗血清反應與A1，B細胞反應 抗-A抗-B抗-A,BA1B AA+0+0+/+ BB0+/+0 ABAB+00 OH000+/+/+,4.2.1Rh血型 Rh血型系統(tǒng)包括的主要血型抗原：C,c,E,e,D Cde=R1 Cde=R2 CcDdee=R1r與抗-D陽性反應的紅細胞為Rh陽性。 5、樣本采集和處理： 5.1受血者血樣為EDTA-K2抗凝血。抽取受血者靜脈血12ml于專用管（紫色頭管）內(nèi)，離心分離出血漿。 5.2將細胞配成0.8%的懸液備用

9、。 6、 試劑： 6.10.9%的生理鹽水； 6.2長春博迅公司的血型定型試劑卡； 6.3長春博迅公司的0.8%的A、B型試劑紅細胞懸液；,8、操作程序： 8.1工作準備： 8.1.1將0.8%A、B型試劑紅細胞懸液室溫平衡。準備樣本，標記卡。 8.1.2 0.8%樣本紅細胞制備：將8l壓積紅細胞加到1ml生理鹽水中充分混勻。 8.1.3 將50lA1、B標準反定細胞加入血型卡的第5-6管中，將待檢者血漿或血清50l加到血型卡的第5-6管中。將0.8%樣本紅細胞分別加入到血型卡的第1-4管中，各50l。 8.1.4將血型卡放入血型血清學專用離心機離心5分鐘后，判斷結(jié)果，并作好記錄。,9、結(jié)果判

10、斷： 100%的紅細胞沉在微管的底部 +/-100%的紅細胞沉在微管的下端1/3之內(nèi) 1+80%的紅細胞沉在微管的下端2/3之內(nèi) 2+80%的紅細胞沉在微管的上端2/3之內(nèi) 3+80%的紅細胞沉在微管的上端1/3之內(nèi) 4+凝集的細胞全部處于微管的頂部 d.p.雙群 Hemo.溶血。,醫(yī)療機構臨床用血管理辦法,4+ 3+ 2+ 1+ +/- - 溶血 雙群,12、注意事項： 12.1每日實驗前，先取出標準細胞和微柱凝膠卡，放置一段時間到室溫，以防冷凝集。 12.2實驗前將卡離心5分鐘。必須標注血型卡。 12.3血型卡封口已損壞時，管中干涸，或有氣泡時，卡不可使用。 12.4紅細胞濃度要在0.8%

11、左右，不可太濃或太稀。 12.5纖維蛋白可吸附部分紅細胞，應將血樣充分離心。 12.6反定管先加樣，以便標準細胞與血清或血漿反應。先加細胞后加血漿。 12.7正反定型對照，確定結(jié)果及A亞型。正定型結(jié)果若為弱陽性，應懷疑為ABO亞型，可重做完全測試，正反結(jié)果不符時，請設計實驗分析。,12.8質(zhì)控（ctl）為陽性時，請先用生理鹽水洗細胞，再做血型。 12.9嚴格按標準程序操作可檢出弱抗原，血型亞型。 12.10某些藥物，疾病可導致弱陽性及正反定型不符。 12.11細菌及異常血清蛋白可影響結(jié)果。 12.12禁用嚴重溶血標本，它會強烈干擾結(jié)果的判讀。嚴禁使用非抗凝血標本配制紅細胞懸液，以免出現(xiàn)假陽性結(jié)

12、果。 12.13被酶處理過的紅細胞會產(chǎn)生非特異性凝集，禁用被污染的標本和材料。 12.14卡配套的專用離心機，以確保結(jié)果的準確。,交叉配血試驗（鹽水法）標準操作規(guī)程,4.2原理：天然類血型抗體與對應紅細胞抗原相遇，在室溫下的鹽水介質(zhì)中出現(xiàn)凝集反應。通過離心，觀察受血者血清與供血者紅細胞以及受血者紅細胞與供血者清之間有無凝集現(xiàn)象，判斷供血、受血者之間有無ABO血型不合的情況。 5、樣本采集及處理 血樣本為血漿（EDTA-K2抗凝）。抽取受血者靜脈血34ml，3000轉(zhuǎn)/分離心2分鐘，分離出血漿，并將紅細胞配成2%鹽水懸液。將供血者血樣以同樣方法分離血清（血漿），并配制2%紅細胞懸液。配血所用受血

13、者血樣必需是輸血前3天內(nèi)的。,6、操作步驟： 6.1 取潔凈小試管2支，1支標明受血者血清（PS）+供血者細胞（DC）；另1支標明供血清（DS）+受血者細胞（PC）。 6.2 按標記主側(cè)管放受血者血清1滴，加供血者紅細胞懸液1滴。次側(cè)管放供血者血清1滴，加受血者紅細胞懸液1滴，混勻，以1000r/min離心1min，輕輕側(cè)動試管，觀察結(jié)果。 6.3觀察結(jié)果：先觀察試管上層液有無溶血，再斜持試管輕輕側(cè)動或輕輕彈動，觀察管底反應物有無凝集（必要時用顯微鏡觀察）。冬季室溫較低，應將試管保溫，以防冷凝集素引起的凝集反應。 7、結(jié)果判斷： ABO同型配血，主側(cè)和次側(cè)均無溶血、無凝集表示無輸血禁忌，可以輸

14、血。異型配血時，主測無凝集，次測凝集，無溶血， 可以輸給少量。輸異型血時， 如次測不凝集，不可以輸血，應重新復查血型或追查其原因。,凝聚胺交叉配血試驗標準操作規(guī)程,4.2原理：針對不規(guī)則抗體的檢出及鑒定多采用紅細胞的凝聚反應試驗，而凝聚反應試驗的成效則與分布紅細胞表面之電荷以及抗體的親和性息息相關。凝聚胺法是利用低離子介質(zhì)（LIM）來降低介質(zhì)的離子強度，進而減少紅細胞之間距，以促進紅細胞和血清（血漿）中的抗體發(fā)生特異性結(jié)合；接著加入凝聚胺（polybrene）此種多價陽離子聚合物來中和紅細胞上的陰性電荷，使細胞間發(fā)生非特異性凝聚；最后加入重懸液，使之中和由凝聚胺所引起之非特異凝聚，倘若沒有凝聚

15、發(fā)生，則判定為陰性；若有凝集，則得知存在特殊性之抗原抗體反應，則判定為陽性。 6、試劑：臺灣 貝索的試劑盒： 1)低離子溶液（LIM） 2)聚凝胺溶液（POLYBRENE） 3)懸浮液（RESUSPENDING）,7、操作步驟 7.1 取試管兩支,分別標明主次側(cè)管,主側(cè)管加入受血者血清兩滴,再加入25%獻血者紅細胞懸液1滴,次側(cè)管反之。 7.2每支試管中加入0.7mlLIM液,混勻;再各加入2滴POLYBRENE液,混勻。 7.3 3400轉(zhuǎn)離心10秒，棄上清液，不要瀝干，讓管底殘留約0.1ml液體。 7.4輕搖試管，目測紅細胞有無凝集，若無凝集則必須重作。 7.5加2滴resuspenein

16、g液，輕搖試管混合并同時觀察結(jié)果。,8、結(jié)果判斷 立即目測并鏡檢觀察凝集狀態(tài)。如果30秒內(nèi)凝集散開，代表是由polybrene引起的非特異性聚集，配血結(jié)果相合。若凝集不散開，則為紅細胞抗原抗體結(jié)合的特異性凝集，配血結(jié)果不相合。若反應可疑，可進一步用顯微鏡觀察。,10、注意事項 10.1可以用含EDTA之血漿代替血清使用。 10.2 若病人血清含肝素多，如洗腎患者，則應加入雙倍量的Polybrene液和肝素。 10.3試劑使用前，應恢復室溫再做。 10.4在冬天氣溫極低的情況下，操作交叉配血試驗，由于某些病人血清可能含有冷凝集素等因素而導致假陽性結(jié)果出現(xiàn)。若有懷疑，建議在最后滴加RESUSPEN

17、DING液時將試管立即置于370C水浴中,輕輕轉(zhuǎn)動試管混合,并在30秒內(nèi)觀察結(jié)果。,0.8%-1%樣本紅細胞制備：加20l樣本壓積紅細胞懸浮于2ml0.9%的生理鹽水中。 紅細胞懸液的配制 懸液濃度（%）壓積紅細胞（滴）鹽水（滴） 2 1 2 ml（40） 5 1 0.8 ml（16） 10 1 0.4 ml（8） 20 1 0.2 ml（4）,不規(guī)則抗體篩選標準操作規(guī)程,6.3微柱凝膠抗人球蛋白法篩選紅細胞不規(guī)則抗體 6.3.1試劑：生理鹽水，、號不規(guī)則抗體篩選細胞（0.5-0.8%的濃度），博迅的不規(guī)則抗體篩查卡。 6.3.2儀器：離心機，微柱凝膠卡專用孵育器及離心機。 6.3.3操作程序：微柱凝膠抗人球蛋白法篩選紅細胞不規(guī)則抗體的具體方法如微術凝膠配血法，具體操作如下： 1）將準備好的檢測卡做好標記； 2）將0.5-0.8%、篩檢紅細胞各50l分別加入對應的微管中; 3）將待檢者血清