保健食品毒理學以及功能學檢驗及評價標準.ppt

1、保健食品毒理學和功能學檢驗及評價標準,廣州藍韻醫(yī)藥研究有限公司 專注于中藥新藥臨床前研究，保健食品研究，項目申報注冊 ,內 容,中國保健食品簡介 保健食品毒理學安全性檢驗及評價 保健食品功能性檢驗及評價 檢驗實驗室的質量控制 各項試驗中存在的問題,第一部分,中國保健食品簡介,保健食品定義,保健食品（Functional Food）系指具有調節(jié)人體生理功能、適宜特定人群食用、不以治療為目的的一類食品。,特 點,具有特定的保健功能； 無毒副作用，食用安全； 有別于食品和藥品； 增強體質、預防疾病為主； 適用于特定人群。,特 定 功 能,由國家管理部門指定 允許申報的功能目前有27種 27種以外的功

2、能，生產企業(yè)在獲得足夠的技術資料后（包括評價方案，試驗數(shù)據(jù)及結果）向有關管理部門提出受理申請，接受評審。,特 定 人 群,正常成人以外，包括嬰幼兒、孕婦、乳母、青少年、中老年、特殊工種的工作者以及常見病病人 對于營養(yǎng)保健有特殊的需要 膳食結構的不同 營養(yǎng)素需求的不同,保健食品的發(fā)展歷程,第一代保健食品：在保健食品的管理方法頒布以前市場上已有的保健食品。 第二代保健食品：經動物和人體實驗證實具有某種生理調節(jié)功能的食品。 第三代保健食品：不僅需要經人體及動物實驗證實具有某種功能，而且需要研究提供該功能因子、含量及其作用機理。,發(fā) 展 趨 勢,根據(jù)新的疾病譜和健康問題，開發(fā)新的保健功能 根據(jù)新的養(yǎng)生

3、保健概念，開發(fā)新的保健功能 根據(jù)現(xiàn)代營養(yǎng)科學理論，開發(fā)新的膳食有效成分 根據(jù)中醫(yī)藥理論，開發(fā)中藥類有效成分 根據(jù)生命科學理論，開發(fā)新的人體所需營養(yǎng)素,保健食品開發(fā)中的注意點,中草藥 新資源 野生動植物及其產品 核酸類 真菌類 益生菌類 酶制劑、氨基酸螯合物、金屬硫蛋白以及直接以微生物發(fā)酵的,中草藥類,中草藥作為原料應注意： 1.不能采用有明顯毒副作用的中藥材、 獲國家藥政管理部門批準的中成藥、 受國家中藥保護的中藥成方 2.用量應控制在臨床用量的50%以下,新資源類,新資源作為原料時必須具備的有關資料： 名稱及國內外研究利用情況； 名稱、配方及生產工藝； 產品成分（包括營養(yǎng)物質、有生物效應物質

4、及有毒有害物質等）的分析報告； 安全性毒理學評價報告或有關文獻資料； 個別地區(qū)有食用習慣的應提供有關食用歷史的證明資料； 質量標準。,野生動植物及其產品類,以野生動植物及其產品為原料的有關限制： 受保護的野生動物。 禁止使用自然的、人工馴養(yǎng)繁殖或人工栽培的國家一級和自然的二級保護野生動植物及其產品。 人工馴養(yǎng)繁殖或人工栽培的國家二級保護野生動植物及其產品，國家保護的有益的或者有重要經濟、科學研究價值的陸生野生動物及其產品應提供省級以上農業(yè)（漁業(yè)）、林業(yè)行政主管部門的批準文件。,以野生動植物及其產品為原料的有關限制： 中華人民共和國林業(yè)植物新品種保護名錄中植物及其產品，如果該種植物已獲“品種權”

5、，應提供該種植物品種權所有人許可使用的證明；如該種植物尚未取得品種權，應提供國務院林業(yè)主管部門出具的該種品種尚未取得品種權的證明。 進口保健食品中使用瀕危野生動植物種國際貿易公約名錄中動植物及其產品的，應提供國務院農業(yè)（漁業(yè)）、林業(yè)行政主管部門批準文件、進出口許可證及海關的證明文件。,野生動植物及其產品類,核酸類,核酸類保健食品申報時需提供的特殊資料： 具體成份名稱、來源、含量； 與所申報功能直接相關的科學文獻依據(jù)； 企業(yè)標準中標出核酸各成份的含量、純度和相應的定性、定量檢測方法以及質量標準； 詳細生產工藝（包括加工助劑名稱、用量）； 核酸原料純度的檢測報告。,核酸類,核酸類保健食品申報時的注

6、意事項： 不得以單一的DNA或RNA作為原料申報。 單一原料純度應大于80。 功能申報范圍暫限定為免疫調節(jié)功能。如申報其他功能，需向衛(wèi)生部提交申請并納入審批范圍后，方可申報。 核酸成份的每日推薦食用量為0.6g-1.2g。 不得以“核酸”命名。 說明書及標簽中的“不適宜人群”除按保健食品相關規(guī)定標注外，應明確標注出“痛風患者”。,真菌類,真菌類保健食品的部分規(guī)定 ： 生產企業(yè)應建立有關的檔案資料。 生產企業(yè)應具備相應的生產條件。 對生產菌種及工藝變更的相應規(guī)定。 冠名規(guī)定。 發(fā)酵過程中，除培養(yǎng)基外，不得加入具有功效成分的動植物及其它物質。 不能使用經過基因修飾的菌種。,益生菌類,益生菌類保健食

7、品的部分規(guī)定： 生產用菌種應滿足一定的條件。 生產企業(yè)應具備的一定條件。 菌種及生產工藝不得變更，否則產品必須重新申報。 不提倡以液態(tài)形式生產活菌產品。 在保存期內活菌數(shù)目不得少于 106cfu/mL(g) 。,益生菌類,益生菌類保健食品的部分規(guī)定： 如需在特殊條件下保存，應在標簽和說明書中標示 所用菌種在其發(fā)酵過程中，除培養(yǎng)基外，不得加入具有功效成分的動植物及其物質 不能使用經過基因修飾的菌種,其他類別,對酶制劑、氨基酸螯合物、金屬硫蛋白以及直接以微生物發(fā)酵為原料限制的部分規(guī)定： 未列入食品添加劑使用衛(wèi)生標準或衛(wèi)生部公告名單中的食品添加劑新品種的酶制劑不得用于保健食品的生產。 不再審批以金屬

8、硫蛋白為原料生產的保健食品。,其他類別,使用微生物發(fā)酵直接生產保健食品的，需提供的特殊資料： 菌種來源及菌種檢定報告 菌種的毒力試驗報告及安全性評價報告 國內外該菌種使用于食品生產的文獻資料 發(fā)酵終產物的質量標準（包括純度、雜質成分及含量）,其他類別,使用氨基酸螯合物生產保健食品的，需提供的特殊資料： 提供明確的化學結構式、理化性質，配體與金屬離子之比、游離元素和總元素之比。 提供定性、定量的檢測方法及驗證報告。 急性毒性試驗加做停食16小時后空腹一次灌胃試驗和30天喂養(yǎng)試驗的組織病理報告。 國內外使用于食品生產的文獻資料。,安全，無毒、副作用,功能，保健功效,理化、微生物特性： 有害成分物質

9、和污染物 毒理學特性： 劑量反應（效應）關系,保健食品質量控制,生物活性物質 功效成分,通過檢驗和評價，加以控制,第二部分,保健食品毒理學安全性 檢驗及評價,毒性及功能檢驗評價依據(jù),1996年3月衛(wèi)生部保健食品的管理方法 保健食品的標準、功能評價、審批程序和監(jiān)督管理辦法 1996年7月GB15193食品安全性毒理學評價程序和方法 衛(wèi)生部保健食品功能學評價程序和檢驗方法 僅包含了12項功能檢驗及評價方法 2001年7月 衛(wèi)生部保健食品功能學評價程序和檢驗方法 可受理和評價的功能調整到31項 2003年2月衛(wèi)生部保健食品檢驗與評價技術規(guī)范 將功能學、毒理學、功效成分及衛(wèi)生指標檢驗評價方法三者合一,

10、審評的基本要求,1. 配方 原（輔）料、用量、理化性質 2. 劑量 食用方法及用量 3. 工藝 規(guī)格化產品 符合配方、工藝、質量標準 4. 批號 注意批號是否一致,益生菌、奶制品等保質期短的除外,1. 毒理學評價的四個階段 第一階段：急性毒性試驗 經口急性毒性試驗：LD50，聯(lián)合急性毒性，一次最大耐受量試驗 第二階段：遺傳毒性試驗，30天喂養(yǎng)試驗，傳統(tǒng)致畸試驗 遺傳毒性試驗：原核細胞和真核細胞，體內試驗和體外試驗相結合 Ames或基因突變試驗；微核試驗或染色體畸變試驗；精子畸變試驗等 第三階段：亞慢性毒性試驗 90天喂養(yǎng)試驗、繁殖試驗、代謝試驗 第四階段：慢性毒性試驗（包括致癌試驗）,選擇毒理

11、學試驗的基本原則,2.一般無需進行毒性試驗的原料或成分 屬于普通食品和衛(wèi)生部規(guī)定的藥食同源的物質： 采用傳統(tǒng)的工藝及食用方式 水提取物，常規(guī)服用量，無不安全性報道 來源、工藝和質量符合國家要求的營養(yǎng)強化劑 或營養(yǎng)素補充劑,選擇毒理學試驗的基本原則,3. 需進行一階段和三項致突變毒性試驗的原料或成分 屬于普通食品和衛(wèi)生部規(guī)定的藥食同源的物質且用水提以外的其它常用工藝生產的： （1）服用量與常規(guī)用量相同 急性毒性、三項致突變試驗 （2）服用量大于常規(guī)用量 還需加做30天喂養(yǎng)試驗，必要時進行傳統(tǒng)致畸試驗和第三階段毒性試驗,選擇毒理學試驗的基本原則,4.需進行一、二階段毒性試驗的原料或成分 文獻顯示無

12、危害，人群長期食用； 具有國際性毒理學評價結果的已知的化學物質，產 品質量規(guī)格與國外產品一致； 國外廣泛食用且能提供安全性評價資料； 衛(wèi)生部規(guī)定允許使用的動植物及其提取物或微生物。,選擇毒理學試驗的基本原則,5.需進行一至三階段毒性試驗的情況： 一、二階段試驗結果與國外產品不一致的 國外少數(shù)國家或地區(qū)食用的原料或成分 水提取物，大于常規(guī)服用量 用水提以外的其它常用工藝生產的，大于常規(guī)用量,選擇毒理學試驗的基本原則,6.需進行一至四階段毒性試驗的原料和成分 國內外均無食用先例 7.敏感指標及敏感試驗的保健食品 不同食用人群和（或）不同功能的保健食品,選擇毒理學試驗的基本原則,8.保健食品新原料

13、保健食品新原料（以下簡稱新原料）是指不在國家食品藥品監(jiān)督管理局公布的可用于保健食品、衛(wèi)生部公布或批準可以食用以及生產普通食品的范圍內，擬用于保健食品的原料。 國家食品藥品監(jiān)督管理局和國家有關部門規(guī)定的不可用于保健食品以及禁止使用的物品，不得作為新原料。,選擇毒理學試驗的基本原則,在已批準的保健食品中使用過，或衛(wèi)生部已批準為新資源食品的原料，符合以下情況的仍按新原料進行管理： 未列入國家食品藥品監(jiān)督管理局公布的可用于保健食品的物品名單； 尚未列入衛(wèi)生部公布或批準的食品新資源或新資源食品名單內； 衛(wèi)生部已批準為食品新資源或新資源食品，但保健食品注冊申請人與食品新資源或新資源食品生產批件中載明的申報

14、單位不一致。,選擇毒理學試驗的基本原則,新原料安全性毒理學試驗項目的選擇 無食用史 需做四階段試驗 局部地區(qū)有食用史 需做三階段試驗 其中 ，100倍攝入量300倍 需做第四階段試驗 有食用史 需做二階段試驗 經評價后 下一階段試驗 廣泛食用的原料 二階段試驗 （食用史包括地區(qū)、年代、人群、食用量、頻率等情況）,選擇毒理學試驗的基本原則,新原料安全性毒理學試驗項目的選擇 已知化學物: -1 可只做二階段實驗的包括 已有權威機構進行系統(tǒng)的毒理學安全性評價 有資料證明所用原料與其一致 -2 如試驗結果與權威機構進行的評價不一致，需進入下階段的試驗 有新原料的保健食品: 根據(jù)試驗結果綜合分析。,選擇

15、毒理學試驗的基本原則,對受試保健食品的要求,單一已知化學成分，應提供物理和化學性質 多種原料的配方產品，應提供配方 配方產品，必要時還應提供各組分，功效成分的 物理和化學性質及其檢測報告 提供原料來源、生產工藝、人的可能攝入量。使 用說明書等有關資料 受試物應符合既定配方和生產工藝的規(guī)格化產品,樣品的預處理原則,1.介質的選擇 應選擇適合于受試動物的溶劑、乳化劑、助懸劑，要求無毒、與受試物不發(fā)生反應、穩(wěn)定性好。 常用的介質有：蒸餾水、食用植物油、淀粉、明膠及羧甲基纖維素等。 2.液體類 受試物濃縮倍數(shù)應符合試驗要求。 濃縮方法不應破壞其有效成份，常用的有6070減壓或常壓蒸發(fā)、冷凍干燥。 按工

16、藝要求。,樣品的預處理原則,3.袋泡茶類 處理方法與產品推薦飲用方法相同 推薦用：80-90 常壓用水浸泡30min 水量為受試物的10倍，提取2次，2次提取液合并濃縮至所需濃度 標明該濃縮液與受試物的比例,樣品的預處理原則,4.含乙醇類 （1）不需濃縮的受試物 乙醇濃度15 乙醇濃度應調至15 （2）需濃縮的受試物 乙醇濃度15 濃縮后調至15乙醇濃度 在進行乙醇濃度調整時必須用原酒基,樣品的預處理原則,5.膨脹系數(shù)較高的受試物 選擇可溶性介質 給受試物的方法：灌胃 其最高濃度最大灌胃量時達不到人體推薦量的100倍，按實際達到的倍數(shù) 標明受試物的膨脹系數(shù),樣品的預處理原則,6.益生菌等微生物

17、類保健食品 在進行 Ames試驗或體外細胞試驗時需將受試物滅活。 需濃縮的應采用低溫干燥法或由企業(yè)提供所需濃度的受試物（附方法、技術參數(shù)）。 7.以食品為載體的受試物 （1）有營養(yǎng)價值：按設計量進行飼料的營養(yǎng)成份調整，提供詳細的說明。 （2）大豆蛋白、乳清蛋白 如質量、工藝等符合食品標準和安全要求，允許去除。 如僅以該原料生產的，可申請免做毒理學試驗。,毒理學試驗方法介紹,急性經口毒性試驗 鼠傷寒沙門氏菌（Ames）試驗 骨髓細胞微核試驗 哺乳動物骨髓細胞染色體畸變試驗 小鼠精子畸形試驗 小鼠睪丸染色體畸變試驗 30天喂養(yǎng)試驗,急性經口毒性試驗,目的：測定LD50，毒性分級。了解毒性強度、性質

18、和可能的靶器官，為進一步的毒性試驗提供劑量和觀察指標的選擇依據(jù)。 原理： 急性毒性：經口一次性、24h內多次給予，短時間內的毒性反應。致死劑量通常用半數(shù)致死劑量LD50表示。 急性聯(lián)合毒性：兩種或兩種以上的受試物，可能發(fā)生拮抗、相加或協(xié)同的聯(lián)合方式，可以根據(jù)一定的公式計算和判定標準來確定這三種不同的作用。,急性經口毒性試驗,時間周期：一般為3周 3-5天，大、小鼠適應期 7-14天，染毒及實驗觀察期 發(fā)生動物死亡時，應進行大體解剖 觀察和評價指標： 毒性反應癥狀：各器官系統(tǒng)的反常表現(xiàn)（中樞、自主神經、呼吸、心血管、胃腸、生殖泌尿系統(tǒng)、皮毛、粘膜等）及體重變化 死亡情況：死亡的時間、數(shù)量、性別、

19、表現(xiàn)等。 大體尸檢結果：如果發(fā)生死亡動物,急性毒性（LD50）劑量分級表,急性經口毒性試驗,試驗結果的判定： 1. LD50人可能攝入量的100倍，放棄；反之繼續(xù)下一步試驗。 2. LD5010g/kgbw或按最大耐受量染毒而未出現(xiàn)動物死亡的，可繼續(xù)下一步試驗。,鼠傷寒沙門氏菌（Ames）試驗,目的：檢測受試物的誘變性，預測其遺傳危害和潛在致癌作用的可能性。 時間周期：一般為2周 第一周，鼠傷寒沙門氏菌種、試劑、培養(yǎng)基準備 第二周，染毒，培養(yǎng)48h，讀平板，菌落計數(shù) 劑量設計：決定受試物最高劑量的因素是對細菌的毒性及其溶解度。最低劑量為0.2ug/皿；最高劑量為5mg/皿，或最大溶解劑量，最大

20、飽和劑量以及最小毒性劑量?？稍O五個劑量組，組間距不超過5倍。同時設：陽性對照組，溶劑對照組和未處理對照組。,鼠傷寒沙門氏菌（Ames）試驗,觀察及評價指標： 各受試物組及三個對照組的四種菌株（TA97a，TA98，TA100和TA102）分別在加和不加S9情況下的菌落計數(shù)。 結果評價（摻入法）： 受試物組回變菌落數(shù)增加一倍以上（即回變菌落數(shù)2未處理對照組數(shù)），并有劑量反應關系或有可重復的陽性反應，即可判試驗陽性。,骨髓細胞微核試驗,目的：檢測整體動物體內骨髓嗜多染紅細胞微核發(fā)生率，以評價受試物致突變的可能性。 原理：微核是在細胞有絲分裂后期染色體有規(guī)律地進入子細胞形成細胞核時，仍然留在細胞質中

21、的色單體或染色體的無著絲點斷片 。末期之后，單獨形成一個或幾個規(guī)則的次核，被包含在細胞胞質內，因比主核小，故稱為微核。,骨髓細胞微核試驗,時間周期：一般為2周 3-5天適應期 小鼠經口染毒，30h給受試物法 取胸骨或股骨，收集骨髓，涂片，染色，鏡檢 劑量設計：至少設置3個劑量，最高劑量組為動物出現(xiàn)嚴重中毒表現(xiàn)和/或個別動物出現(xiàn)死亡的劑量。低劑量組應不出現(xiàn)毒性反應。一般取LD50的1/2、1/4、1/8作為三個劑量。當受試物的LD5010g/kg.bw時，最高劑量通常采用10g/kg.bw。同時設陽性對照組和溶劑對照組。,骨髓細胞微核試驗,觀察及評價指標： 每只動物計數(shù)1000個嗜多染紅細胞 ，

22、記錄含有微核的細胞數(shù)，并計算微核千分率。觀察嗜多染紅細胞與成熟紅細胞的比例。 結果評價： 受試物組與對照組微核率相比，增高呈劑量反應關系并有統(tǒng)計學意義，試驗結果為陽性。,哺乳動物骨髓細胞染色體畸變試驗,目的：檢測受試物對整體動物骨髓細胞染色體畸變的致突變性，以評價其致突變的可能性。 原理：當受試物作用于細胞周期G1期和S期時，可誘發(fā)染色體型畸變，而作用于G2期時則誘發(fā)染色體單體型畸變。給動物腹腔注射秋水仙素，抑制細胞分裂時紡錘體的形成，增加中期分裂相細胞的比例，并使染色體絲縮短、分散，輪廓清晰。在顯微鏡下便可觀察染色體數(shù)目和形態(tài)。,哺乳動物骨髓細胞染色體畸變試驗,時間周期：一般為3周 3-5天

23、適應期 小鼠或大鼠經口染毒2-4次，每次間隔24h，在末次染毒18-24h進行取材（取材前2-4h，腹腔注射秋水仙素）。 取股骨，收集骨髓，制片，染色，鏡檢 劑量設計：同骨髓細胞微核試驗,哺乳動物骨髓細胞染色體畸變試驗,觀察及評價指標： 每只動物分析100個中期相細胞 ，每個劑量組不少于1000個。記錄染色體數(shù)目及結構的改變。 結果評價： 受試物組與對照組染色體畸變率相比，增高呈劑量反應關系并有統(tǒng)計學意義，試驗結果為陽性。,小鼠精子畸形試驗,目的：檢測整體動物體內精子畸形發(fā)生率，以評價受試物對體內生殖細胞的致突變作用。 原理：小鼠精子畸形受基因控制，具有高度遺傳性，許多常染色體及X、Y性染色體

24、基因決定精子形態(tài)。精子的畸形主要是指形態(tài)的異常，已知精子的畸形是決定精子形成的基因發(fā)生突變的結果。因此形態(tài)的改變提示有關基因及其蛋白產物的改變。,小鼠精子畸形試驗,時間周期：一般為7周 3-5天適應期 小鼠經口連續(xù)染毒5天，于首次給樣后的35天處死動物 取兩側附睪，收集精子，滴片，染色，鏡檢 劑量設計：同骨髓細胞微核試驗,小鼠精子畸形試驗,觀察及評價指標： 每只動物檢查1000個精子 ，記錄精子畸形數(shù)目及類型。 結果評價： 受試物組與對照組精子畸變率相比，增高呈劑量反應關系并有統(tǒng)計學意義，試驗結果為陽性。,小鼠睪丸染色體畸變試驗,目的：檢測整體動物睪丸染色體畸變發(fā)生率，以評價受試物對整體哺乳動

25、物睪丸生殖細胞的致突變性。 原理：不同周期的雄性生殖細胞對化學物質的敏感性不同，多數(shù)情況下化學誘變劑誘發(fā)染色體畸變必須經過DNA復制期，故在前細線期處理。第1214d采樣，以觀察作用于前細線期引起的精母細胞染色體畸變效應。,小鼠睪丸染色體畸變試驗,時間周期：一般為7周 3-5天適應期 小鼠經口連續(xù)染毒5天，與首次給樣后的12-14天處死動物取材，（取材前6h，腹腔注 射秋水仙素）。取兩側睪丸，收集生殖細胞，滴片，染色，鏡檢 劑量設計：同骨髓細胞微核試驗,小鼠睪丸染色體畸變試驗,觀察及評價指標： 每只動物分析100個中期相細胞 ，記錄染色體數(shù)目及結構的改變（包括斷片、易位、畸變細胞率、常染色體單

26、價體、性染色體單價體等）。 結果評價： 受試物組與對照組的斷片、易位、畸變細胞率、常染色體單價體、性染色體單價體等差異有統(tǒng)計學意義，試驗結果為陽性。,遺傳毒性試驗組合,試驗結果的判定： 如三項致突變試驗（Ames試驗，微核或骨髓細胞染色體畸變試驗，精子畸形或睪丸染色體畸變試驗）中，體外或體內有一項或以上陽性，一般應放棄該受試物用于保健食品。 如三項試驗均為陰性，則可繼續(xù)進行下一步的毒性試驗。,30天喂養(yǎng)試驗,目的：急性毒性試驗的基礎上，此試驗可進一步了解毒性作用，特別是觀察對生長發(fā)育的影響，并可初步估計最大觀察到的無作用劑量，估計亞慢性攝入的危害性。 原理： 以不同劑量受試物每日經口給予各組實

27、驗動物，連續(xù)30天。染毒期間每日密切觀察動物的毒性反應，染毒結束后進行大體解剖、血生化及病理檢查，以此觀察重復喂食不同劑量的受試物對動物引起的有害作用。,30天喂養(yǎng)試驗,時間周期：在獲得了急性毒性數(shù)據(jù)后，一般為2月 3-5天，大鼠適應期 30天，染毒及實驗觀察期 再進行大體解剖、血液、生化、器官病理檢查。,30天喂養(yǎng)試驗,劑量設計：至少設三個劑量組和一個對照組。高劑量應能引起動物明顯毒效應但不造成動物死亡。低劑量應不出現(xiàn)任何毒作用，同時在這二劑量之間設幾個中間劑量組。 對于能獲得LD50的受試物：最高劑量為1025的LD50，最低劑量組至少為人可能攝入量的3倍。 對于不能獲得LD50的受試物：

28、最高劑量為人可能攝入量的100倍，或按最大灌胃劑量或在飼料中的最大摻入量。,30天喂養(yǎng)試驗,觀察及評價指標： 一般情況觀察：每日的表現(xiàn)、行為、中毒和死亡情況。每周1次體重及2次食物攝入量，計算食物利用率。 血液學指標：喂養(yǎng)結束后測定血紅蛋白、紅和白細胞總數(shù)及分類，必要時測定血小板或網(wǎng)織紅細胞數(shù)等指標。 生化學指標：喂養(yǎng)結束后測定谷丙轉氨酶、谷草轉氨酶、尿素氮、肌肝、血糖、白蛋白、總蛋白、膽固醇和甘油三酯。 病理檢查：大體解剖、臟器稱重、組織病理學檢查。,30天喂養(yǎng)試驗,試驗結果的判定： 對于只要求進行一、二階段試驗者，最大未觀察到有害作用劑量人可能攝入量的100倍，綜合其它試驗結果可初步做出安

29、全性評價。 最小觀察到有害作用劑量人可能攝入量的100倍，或觀察到毒性反應的最小劑量組其受試物在飼料中比例10，放棄。 在中低劑量組中個別指標與對照組相比有差異，應綜合分析，決定取舍或進行下一步毒理試驗。,其它試驗結果判斷,傳統(tǒng)致畸試驗： 需大于或等于人攝入量的100倍。在50倍至100倍之間需進行安全性評價，小于50倍需放棄。 90天喂養(yǎng)試驗、繁殖試驗： 1.僅在國外少數(shù)國家或國內局部地區(qū)有食用歷史的原料或成分，需大于或等于人攝入量的100倍。 2.國內外均無食用歷史的原料或成分時，需大于或等于人攝入量的300倍。在100倍至300倍之間需進行慢性毒性試驗，小于100倍需放棄。,其它試驗結果

30、判斷,慢性毒性試驗： 以LD50或30天喂養(yǎng)試驗的最大未觀察到有害作用劑量設計受試物各劑量組，未見有毒性作用。 致癌試驗陽性判定依據(jù)： 腫瘤只發(fā)生在實驗組動物，對照組中無腫瘤發(fā)生。 實驗組和對照組均發(fā)生腫瘤，但實驗組發(fā)生率高。 實驗組和對照組腫瘤發(fā)生率無明顯差異，但實驗組發(fā)生時間較早。 符合以上三項中的情況之一，并經統(tǒng)計學處理有統(tǒng)計學意義，可認為致癌試驗陽性。,應綜合考慮的問題,1.試驗指標的統(tǒng)計學意義和生物學意義：有無劑量反應關系、腫瘤發(fā)生率增高但尚未有統(tǒng)計差異等。 2.生理作用與毒性作用：如生化、血液指標。 3.時間毒性效應關系：在同一劑量水平下毒性效應隨時間的變化情況。 4.特殊人群和敏

31、感人群：兒童、孕婦、乳母等，應特別注意胚胎毒性和生殖發(fā)育毒性。,應綜合考慮的問題,5.人的可能攝入量較大的保健食品：受試物量過大時，可能影響營養(yǎng)素的攝入及其生物利用率。 6.含乙醇的保健食品：注意區(qū)別乙醇本身的作用。 7.動物年齡對試驗結果的影響：幼年動物和老年動物可能更為敏感。 8.安全系數(shù)：應綜合受試物特點考慮其安全系數(shù)。 9.人體資料：盡可能收集人體資料。,應綜合考慮的問題,10.保健食品安全性的重新評價：很早的毒性評價可能因為當時科學水平和技術條件的限制，現(xiàn)已不適用需重新評價。 11.若受試物摻入飼料的最大加入量（10）或液體受試物經濃縮后仍達不到最大觀察到有害作用劑量為人的可能攝入量

32、的規(guī)定倍數(shù)時，如何綜合其它的毒性試驗結果進行安全性評價。,安全性評價的科學性和藝術性,安全：是指一種化學物在規(guī)定的使用方式和用量條 件下對人體健康不致產生任何損害，即不引起急性、慢性中毒，亦不會對接觸者及其后代產生潛在危害。 安全性評價的科學性： 1. 應用實驗毒理學和人群流行病學方法 2. 真實收集和記錄化學物的特性及其暴露者的反應 3. 發(fā)現(xiàn)化學物與生物體之間作用的客觀現(xiàn)象和本質,安全性評價的科學性和藝術性,安全性評價的藝術性： 1.動物實驗結果外推到人必須考慮動物與人的種屬差異； 2.安全性標準與社會經濟基礎、技術能力的相符性； 3.安全性標準與社會和公眾利益之間的平衡性。 結論：在對化

33、學物質進行科學地安全性評價之后，應結合試驗的局限性，社會經濟狀況，人們的生活習慣等因素，對評價結果作出一個合理的分析，為衛(wèi)生標準的制定提供具有實際指導意義的依據(jù)。,第三部分,保健食品功能性檢驗及評價,2003年版保健食品檢驗與評價技術規(guī)范,功能評價新要求及內容變更,主要內容,功能名稱變更情況 基本要求（一般程序） 動物功能學試驗基本要求 人體功能學試驗基本要求 各功能學試驗主要指標評審要求,新功能名稱變更,功能名稱不變（5項） 1.促進排鉛（需人體） 2.改善睡眠 3.促進泌乳（需人體） 4.減肥（需人體） 5.改善營養(yǎng)性貧血（需人體）,新功能名稱變更,功能名稱調整（14項） 現(xiàn)名 原名 1.

34、增強免疫力 免疫調節(jié) 2.輔助降血脂（需人體） 調節(jié)血脂 3.抗氧化（需人體） 延緩衰老 4.輔助降血糖 （需人體） 調節(jié)血糖 5.輔助改善記憶（需人體） 改善記憶 6.緩解視疲勞（僅人體） 改善視力,新功能名稱變更,功能名稱調整（14項） 7.清咽（需人體） 清咽潤喉. 8.輔助降血壓（需人體） 調節(jié)血壓 9.緩解體力疲勞 抗疲勞 10.提高缺氧耐受力 耐缺氧 11.對輻射危害有輔助保護功能 抗輻射 12.改善生長發(fā)育（需人體） 生長發(fā)育 13.增加骨密度 改善骨質疏松 14.對化學性肝損傷有輔助保護功能 對化學性肝損傷有輔助保護作用,新功能名稱變更,1項功能分為多項功能名稱（2項分為8項）

35、 1.祛痤瘡 （僅人體） 原為美容（祛痤瘡/祛黃褐斑） 2.祛黃褐斑（僅人體） /改善皮膚水份和油份） 3.改善皮膚水份（僅人體） 4.改善皮膚油份（僅人體） 5.調節(jié)腸道菌群（需人體） 原為改善胃腸道功能 6.促進消化（需人體） 調節(jié)腸道菌群/促進消化 7.通便功能（需人體） /潤腸通便/對胃粘膜有輔 8.對胃粘膜有輔助保護功能（需人體） 助保護作用,抗突變,取消功能（1項）,保健食品功能評價的基本要求,1.對受試樣品的要求 提供樣品物理、化學性質的有關資料 必須是規(guī)格化的定型產品 提供衛(wèi)生學和毒理學檢驗報告，樣品必須同一批次 提供功效成分和特征成分或營養(yǎng)成分的名稱及含量 2.對受試樣品樣品

36、量及載體的要求 動物功能實驗樣品量為人體推薦劑量的500倍 人體功能實驗樣品量為人體推薦劑量的2000倍 以乙醇和糖為載體的樣品必須提供乙醇和糖的含量,1.受試物 所提供的受試物為組成成分、比例及純度與實際產品相同的樣品；必須在保質期內。 2.受試物的預處理（具體方法同安全性毒理學評價） 處理方法需在試驗報告中詳細描述 必須說明受試物濃縮或稀釋倍數(shù)、濃度，據(jù)此計算出的給予劑量,動物功能學試驗基本要求,3.實驗動物、受試物給予方式及時間 （1）實驗動物： 性別 單一性別 年齡 依試驗要求進行選擇 數(shù)量 大鼠每組8-12只 小鼠每組10-15只 其余要求同安全性毒理學評價要求,動物功能學試驗基本要

37、求,（2）受試物給予方式： 必須經口給予，首選灌胃；若選擇飲水或摻入飼料，最高劑量不超過10；提供每日每劑量組平均飲水量、食物攝入量及周食物利用率 （3）給樣時間： 根據(jù)具體功能主要指標而定，7天-120天，一般為30天。,動物功能學試驗基本要求,4.劑量設計原則 （1）根據(jù)產品說明書注明的食用方法及用量，確定功能學試驗劑量設計是否合理。 （2）進行動物實驗時至少設三個劑量組，一個陰性對照組，必要時設陽性對照組或空白對照組。 以大鼠為實驗動物必須有相當于人體推薦量（折算為每公斤體重）的5倍劑量組。 以小鼠為實驗動物必須有相當于人體推薦量（折算為每公斤體重）的10倍劑量組。 最高劑量組不超過30

38、倍，還必須在毒理學評價確定的安全劑量范圍內。 當載體或輔料本身可能具有與受試物相同的功能時，應設載體對照。,動物功能學試驗基本要求,人體功能學試驗基本要求,1.觀察對象的選擇 （1）合理選擇受試者 按照保健食品檢驗與評價技術規(guī)范（2003年）規(guī)定的試驗對象納入與排除標準，并同時考慮試食設計要求、受試樣品的性質等因素。 （2）人數(shù) 試食組和對照組的有效例數(shù)不少于50人，且試驗的脫離率一般不得超過20%。試驗報告中必須注明脫離率，否則應予以補充說明。 （3）均衡性 試驗組間年齡、性別、社會狀況構成、身體狀況以及試驗開始時各項功能主要指標均衡可比。,人體功能學試驗基本要求,2.倫理學審查要點 （1）

39、保證受試對象的食用安全。 必須在衛(wèi)生學試驗、動物毒理學安全性試驗及興奮劑檢測（僅限改善生長發(fā)育、減肥功能)完成之后確定產品是安全的，符合有關衛(wèi)生標準要求的情況下再進行。 原則上還應在動物功能學試驗證明其有效的前提下進行。 注意： 報告中應注明試驗開始日期和報告日期。開始時間應晚于其它試驗報告時間。 如果試驗在不同單位進行的，必須提供同批號的受試樣品。 人體試驗必須得到檢查單位倫理學審查委員會的批準方能進行，送審資料必須有審查委員的簽字。,人體功能學試驗基本要求,（2）受試者在試驗開始前應進行常規(guī)體檢 主觀感覺 生理指標，癥狀和體征。 常規(guī)的血液學指標 生化指標 功效性指標，即與保健作用有關的指

40、標，如抗氧化、減肥等方面的指標。 兒童一般不要求測心電圖、胸透、腹部B超及肝、腎功能項 改善生長發(fā)育、緩解視疲勞、輔助改善記憶功能不要求便常規(guī)，其他人體試驗便常規(guī)為必做項目。,人體功能學試驗基本要求,（3）報告中需提供必要的體檢常規(guī)項目資料及詳細的數(shù)據(jù)。 （4）對于選擇的受試人群需要長期服藥的試驗，受試者必須在服藥的基礎上進行試食試驗。 （5）如需與醫(yī)院共同完成的試驗，必須選擇三級甲等醫(yī)院，報告中應同時加蓋兩單位公章，同時需提供三級甲等醫(yī)院的等級證明。 （6）改善生長發(fā)育和減肥功能的產品在人體功能試驗進行前需提供興奮劑檢測報告。,各功能試驗審評要點,（一）只要求動物實驗的項目有： 1. 增強免

41、疫力功能檢驗方法 主要指標：細胞免疫功能 體液免疫功能 單核巨噬細胞功能 NK細胞活性測定 判定：四項指標中任兩項結果陽性。 注意事項：不認可增強單項免疫力功能。,各功能試驗審評要點,2. 改善睡眠功能檢驗方法 主要指標：戊巴比妥納睡眠時間實驗 巴比妥鈉睡眠潛伏期實驗 戊巴比妥鈉（或巴比妥鈉）閾下劑量催眠實驗 判定：3項實驗中任2項陽性，且直接睡眠作用。 注意事項：對動物進行直接睡眠實驗時，也要同樣注意進 行30天灌胃。,各功能試驗審評要點,3. 緩解體力疲勞檢驗方法 主要指標：血乳酸 血清尿素 肝糖原/肌糖原 動物負重游泳實驗 判定：負重游泳實驗結果陽性，血乳酸曲線下面積、血清尿素、肝糖/肌

42、糖原3項生化指標中任2項指標陽性。 注意事項： （1）對同批受試樣品進行違禁藥物的檢測。 （2）在負重游泳實驗時，酒類樣品測試當天可以不灌胃。,各功能試驗審評要點,4. 提高缺氧耐受力功能檢驗方法 主要指標：常壓耐缺氧實驗 亞硝酸鈉中毒存活實驗 急性腦缺血性缺氧實驗 判定：三項試驗中任二項實驗結果陽性。 注意事項：每批實驗動物的體重盡量保持一致。,各功能試驗審評要點,5. 對輻射危害有輔助保護功能檢驗方法 主要指標：外周血白細胞計數(shù) 骨髓細胞DNA含量或骨髓有核細胞數(shù) 小鼠骨髓細胞微核實驗 血/組織中SOD活性實驗 血清溶血素含量實驗 判定：以上5項實驗中任3選項進行實驗，3項實驗中任何2項實

43、驗結果陽性。 注意事項：選用小鼠，受試樣品于照射前給予1430天，照射后仍然給予受試物，必要時可延至45天。,各功能試驗審評要點,6. 增加骨密度功能檢驗方法 根據(jù)受試樣品作用的原理不同，分為方案一（補鈣為主的受試物）和方案二（不含鈣或不以補鈣為主的受試物）兩種。 主要指標：體重 骨鈣含量 骨密度 判定：（方案一）骨鈣含量/骨密度顯著高于低鈣對照組且不低于相應劑量的碳酸鈣對照組，鈣的吸收率不低于碳酸鈣對照組。,各功能試驗審評要點,（方案二）不含鈣的產品：骨鈣含量/骨密度較模型對照組明顯增加，其它指標（體重除外）不顯著低于卵巢切除溶劑組。 不以補鈣為主（可少量含鈣）的產品：骨鈣含量/骨密度較模型

44、對照組明顯增加，差異有統(tǒng)計學意義，且不低于相應劑量的碳酸鈣對照組，其它指標（體重除外）不顯著低于卵巢切除溶劑組。 注意事項： （1）使用未批準用于食品的鈣的化合物，除必做主要指標外，還必須進行鈣吸收率的測定；使用屬營養(yǎng)強化劑范圍內的鈣源及來自普通食品的鈣源可以不進行鈣的吸收率實驗。 （2）必須使用單光子骨礦密度儀或雙能X線骨密度儀或其它相關儀器測量股骨中點及股骨遠心端的單位面積骨礦含量。,各功能試驗審評要點,7.對化學性肝損傷有輔助保護作用檢驗方法 根據(jù)樣品的用途進行選擇，方案一（四氯化碳肝損傷模型）和方案二（酒精肝損傷模型） 方案一 主要指標：谷丙轉氨酶+谷草轉氨酶+肝組織病理學檢查 判定：

45、模型成立的前提下，ALT或AST任一項指標陽性，病理結 果陽性。 方案二 主要指標：丙二醛+還原型谷胱甘肽+甘油三酯+肝組織病理學檢查 判定：滿足以下任一條件，可判定該受試物具有對酒精性肝損傷有輔助性保護作用肝臟MDA、GSH、TG三項指標結果陽性； 肝臟MDA、GSH、TG三指標中任2項指標陽性，且肝臟病理結果陽性。 注意事項：報告中需提供列表詳細描述肝臟病理情況。,各功能試驗審評要點,（二）只要求人體實驗的項目有： 1. 緩解視疲勞功能試驗 受試對象：為兒童、青少年或成人，長期用眼，視力易疲勞者。排除患有眼部疾病者、短期內服用與受試物功能有關的物品者或長期服用其它有關治療視力的藥物或使用其

46、它治療方法者。 要求：考慮年齡、性別等因素，進行均衡性檢驗。,各功能試驗審評要點,2. 祛痤瘡功能試驗 受試對象：選擇臨床痤瘡IIII度的自愿健康受試者，排除因病理性原因及妊娠及哺乳期婦女。 要求： 盡可能考慮年齡、性別、病程等因素，進行均衡性檢驗 受試者在試驗期間停止使用其它口服及外用有關養(yǎng)顏祛痤瘡的用品。,各功能試驗審評要點,3. 祛黃褐斑功能試驗 受試對象：選擇無明顯自覺癥狀，無明顯內分泌疾病，并排除其它疾病引起的色素沉著健康受試者。 要求： 盡可能考慮戶外活動、年齡、性別等因素，進行均衡性檢驗。 受試者在試驗期間停止使用其它口服及外用有關養(yǎng)顏祛斑的用品。 自身前后對照，不產生新的黃褐斑

47、。,各功能試驗審評要點,4. 改善皮膚水份功能試驗 受試對象：受試者的年齡為3050歲，皮膚水分12。 要求： 盡可能考慮年齡等因素，進行均衡性檢驗。 在試驗期間不得服用其它保持皮膚水分的物品及影響結果判定的化妝品。 測定前額眉間皮膚的水份。,各功能試驗審評要點,5. 改善皮膚油份功能試驗 受試對象：受試者的年齡為3050歲，皮膚油份10或皮膚油份27。 要求： 考慮年齡等因素，進行均衡性檢驗。 受試者在試驗期間不得服用其它保持保持油份的物品及影響結果判定的化妝品。 測定前額眉間皮膚的油份。,各功能試驗審評要點,（三）動物實驗和人體實驗都要求的項目有： 1.輔助降血脂功能檢驗方法 動物實驗 主

48、要指標：血清總膽固醇、甘油三酯、高密度脂蛋白膽固醇 判定：任兩項指標成立，輔助降血脂功能成立。 注意事項： （1）保留降低甘油三酯和血清總膽固醇單項功能。 （2）實驗開始前，所選動物的血清總膽固醇一定要均衡，喂飼高脂飼料后，總膽固醇與甘油三酯一定都要陽性。 人體試驗 受試對象：單純血脂異常的人群，最好為非住院的高血脂癥患者。 要求： （1）在試驗分組時，盡可能考慮如年齡、性別、飲食等因素，進行均衡性檢驗 （2）受試期間受試者保持平日的生活和飲食習慣，空腹取血測定各項主要指標。,各功能試驗審評要點,2. 輔助降血糖功能檢驗方法 動物實驗 主要指標：空腹血糖、糖耐量 判定：在模型成立的前提下，兩項

49、指標中一項陽性，且對正常動物空腹血糖無影響。 注意事項：在糖耐量實驗中，不僅要計算血糖值，更要對血糖曲線下面積進行計算。 人體試驗 受試對象：選擇經飲食控制或口服降糖藥治療后病情較穩(wěn)定，不需要更換藥物品種及劑量，僅服用維持量的成年型糖尿病病人。 要求： （1）在試驗分組時，盡可能考慮如病程、服藥種類等因素，進行均衡性檢驗。 （2）試食間堅持飲食控制。,各功能試驗審評要點,3.抗氧化功能檢驗方法 動物實驗 主要指標：過氧化脂質含量（MDA等） 抗氧化酶活性（SOD、GSH-Px） 判定：過氧化脂質含量中任一指標和抗氧化酶活性中任一指標同為陽性。 注意事項：選用12月齡以上老齡大鼠或812月齡老齡

50、小鼠，也可用成年小鼠造模。 人體試驗 受試對象：選則年齡在4565歲身體健康者 要求：（1）盡可能考慮如年齡、性別、飲食等因素。 （2）與動物試驗不同，過氧化質含量、超氧化物歧化酶、谷胱甘肽過氧化物酶三項試驗中任一項試驗結果陽性，可判定受試物具有抗氧化功能。,各功能試驗審評要點,4.輔助改善記憶功能檢驗方法 動物實驗 主要實驗：跳臺實驗 避暗實驗 穿梭箱實驗 水迷宮實驗 判定：4項動物實驗中任2項陽性,重復實驗結果一致（所重復的同一項實驗兩次結果均為陽性）。 注意事項： （1）用于改善兒童記憶的產品須用斷乳鼠；用于改善老年人記憶的產品必須采用成年鼠。 （2）實驗動物不可以重復使用，重復實驗時必

51、須采用另外一批動物。,各功能試驗審評要點,4.輔助改善記憶功能檢驗方法 人體試驗 試驗設計：對照、雙盲、隨機 受試對象：從比較集中、各方面影響因素大致相同的群體中挑選受試者，比如學校、部隊。文化程度基本一致，且未接受過類似測試。 要求： （1）分組時考慮如年齡、性別、文化水平、工作性質等因素，進行均衡性檢驗。 （2）屬同一年齡組，如不在同一年齡組，則應對量表分進行校正。 （3）施測順序是先聽覺測試后視覺測試。,各功能試驗審評要點,5.促進排鉛功能檢驗方法 動物實驗：預防性高鉛動物模型和治療性高鉛動物模型選其一 主要指標：血鉛 骨鉛 肝組織鉛 判定：骨鉛或肝組織鉛有一項陽性。 注意事項：設陽性對

52、照時，推薦使用二丁基巰二酸或Na2CaEDTA。 人體試驗 受試對象：選擇血鉛含量較高的自愿受試者，兒童血鉛100g/L以上，成人血鉛200g/L以上。 要求：盡可能考慮如鉛接觸史、年齡、性別等因素，進行均衡檢驗。,各功能試驗審評要點,6.清咽功能檢驗方法 動物實驗：大鼠棉球植入實驗或大鼠足趾腫脹實驗任選其一 主要指標：肉芽腫凈量（棉球植入實驗） 致炎劑刺激前后足跖厚度差異（足趾腫脹實驗） 判定：肉芽腫凈量或致炎劑刺激前后足跖厚度差異陽性。 注意事項：動物攝食量的降低和體重的減輕，亦可降低肉芽重量，故應以mg（肉芽腫）/100g（體重）表示。 人體試驗 受試對象：慢性咽炎人群，咽炎的急性發(fā)作期

53、及病變轉移至咽部的人應排除。 要求：盡可能考慮如病程、年齡、性別等因素，進行均衡性檢驗。,各功能試驗審評要點,7.輔助降血壓功能檢驗方法 動物實驗 主要指標：血壓、心率 判定：實驗動物血壓明顯低于模型對照組，差異具有顯著性，且對實驗組動物心率和正常動物血壓及心率無影響。 注意事項： 首選自發(fā)高血壓大鼠，雌雄可以兼用。 其次為腎血管型高血壓大鼠。 人體試驗 受試對象：觀察受試者為原發(fā)性高血壓患者，繼發(fā)性高血壓患者應排除。 要求： （1）受試者在試食觀察期間不該變原有抗高血壓藥物治療方案。 （2）可能考慮如病程、病情、服用藥類、年齡、性別等因素，進行均衡性檢驗 。,各功能試驗審評要點,8.促進泌乳

54、功能檢驗方法 動物實驗：選超負荷哺乳或乳缺模型任一種 主要指標：母鼠體重 仔鼠體重 判定：鼠體重顯著增加，差異具有顯著性。 注意事項： （1）選用3日內產仔的第二胎母鼠及其仔鼠，每窩仔鼠數(shù)目應相同。 （2）推薦使用飲水或加入飼料的方式給予受試樣品。 （3）實驗結束期限為仔鼠斷乳（出生21天左右）。 人體試驗 受試對象：乳母年齡35歲，乳量不足，嬰兒吃不飽，母子身體均健康的志愿受試者。因病理性原因導致缺乳的受試者應該排除。 要求：盡可能考慮如乳母年齡、嬰兒出生天數(shù)、飲食情況、家庭經濟狀況等因素，進行均衡性檢驗。,各功能試驗審評要點,9.減肥功能檢驗方法 動物實驗 主要指標：體重、攝食量、體內脂肪

55、重量、脂/體比 判定：（體重和體內脂肪重量）或（體重和脂/體比）陽性，攝食量不顯著低于模型對照組。 注意事項： （1）選用雄性大鼠。 （2）該實驗經常存在著毒理學與功能學食物利用率不一致的現(xiàn)象。毒理學上動物食物利用率在把握上可以適當放寬。動物起始體重也可以適當放寬。 （3）必須對同批受試樣品進行違禁藥物的檢測，引起腹瀉或抑制食欲的受試樣品不能作為減肥功能食品。 （4）不替代主食的減肥功能食品，動物試驗和人體實驗必做。 替代主食的減肥功能食品，可以不做動物實驗，僅進行人體試食試驗。,各功能試驗審評要點,9.減肥功能檢驗方法 人體試驗 試驗設計：不替代主食的減肥功能試驗采用自身對照及組間對照。 替

56、代主食的減肥功能試驗只設單一試食組。 受試對象：單純性肥胖人群，排除病理性肥胖的人群。 要求：有違禁藥物檢測報告、規(guī)范的膳食、運動調查及評價方法。 在報告中提供完整的膳食分析（于試驗開始前、結束前進行三天的詢問法膳食調查）。 報告中應有對運動狀況的描述。運動耐力測試方法為功率自行車試驗，不認可其它試驗方法。 生化主要指標增做血尿酸、尿酮體主要指標， 體內脂肪總量和脂肪占體重百分率，用水下稱重法或電阻抗法。皮下脂肪厚度用B超測定法或皮卡鉗法。 同時報告中還要求有對其它不良發(fā)應觀察描述。,各功能試驗審評要點,10.改善生長發(fā)育功能檢驗方法 動物實驗 主要指標：體重、身長、食物利用率 判定： （1）

57、體重、身長增加明顯高于對照組，差異具有顯著性， （2）食物利用率不顯著低于對照組。 注意事項： （1）選用斷乳大鼠。 （2）如果食物利用率顯著低于對照組，則該樣品含有不利于動物生長發(fā)育的成分，則不具備改善生長發(fā)育功能。,各功能試驗審評要點,10.改善生長發(fā)育功能檢驗方法 人體試驗 受試對象：選擇無器質性疾病，身高或體重低于同年齡組平均水平1個標準差范圍內6-10歲兒童。 要求： （1）提供興奮劑檢測報告 （2）分組時考慮胸圍、上臂圍、體內脂肪含量以及年齡運動和家庭經濟水平等，進行組間均衡性檢驗。 （3）受試物給予時間：不少于3個月，必要時延長至6個月。,各功能試驗審評要點,11.改善營養(yǎng)性貧血

58、功能檢驗方法 動物實驗 主要指標：體重 血紅蛋白 紅細胞內游離原卟啉 判定：血紅蛋白和紅細胞內游離原卟啉2項主要指標陽性 注意事項： （1）本項實驗的關鍵在于貧血模型的建立。 （2） 低鐵飼料含量最好控制在9mg/kg以下。 （3）動物飲用水應為去離子水或雙蒸水。,各功能試驗審評要點,11.改善營養(yǎng)性貧血功能檢驗方法 人體試驗 試驗設計：采用自身和組間兩種對照設計。 受試對象：為小細胞低色素貧血，且有明確的缺鐵原因和臨床表現(xiàn)的成人和兒童。排除因病理性原因導致貧血及嚴重貧血患者。 要求： （1）分組時考慮年齡、性別、經濟狀況等因素，進行均衡性檢驗。 （2）于試驗開始前、結束前進行三天的詢問法膳食調查，觀察飲 食因素對試驗結果的影響。 （3）報告中應體現(xiàn)篩除其類型貧血方法。,各功能試驗審評要點,12. 調節(jié)腸道菌群功能檢測方法 動物實驗 主要指標： 雙歧桿菌、乳桿菌、腸球菌、腸桿菌、產氣莢膜梭菌 判定：符合以下任一項，可判定動物實驗結果陽性 （1）雙歧桿菌和/或乳桿菌明顯增加，產氣莢膜梭菌減少或無明顯變化，腸球菌、腸桿菌無明顯變化。 （2）雙歧桿菌和/或乳桿菌明顯增加，產氣莢膜梭菌減少或無明顯變化，腸球菌和/或腸桿菌明顯增加，但增加的幅度低于雙歧桿菌、乳桿菌增加的幅度