生物藥物分析課件.ppt

1、生物藥物分析,楊光忠,第一章 生物藥物分析學(xué)概述,第一節(jié) 藥物分析的性質(zhì)和任務(wù),一、藥物分析的性質(zhì),1、 藥物是用來預(yù)防、治療和診斷疾病的物質(zhì)。,藥物：化學(xué)藥物和生物藥物,化學(xué)藥物：無機(jī)藥物、合成有機(jī)藥物、天然藥物,藥物分析是藥學(xué)中的一門分支學(xué)科，它是藥學(xué)和 分析科學(xué)的交叉學(xué)科。,是一門研究和發(fā)展藥品質(zhì)量控制的方法學(xué)科.,藥品質(zhì)量控制的重要性 藥物與人的生命相關(guān),藥不僅能治病,也能致命.,藥物分析學(xué) 運(yùn)用化學(xué)、物理化學(xué)或生物化學(xué)的方法和技術(shù)來研究化學(xué)結(jié)構(gòu)明確的合成藥物或天然藥物及其制劑的質(zhì)量控制方法,也研究有代表性的中藥材及中成藥制劑和生化藥物及制劑的質(zhì)量控制方法.,2、藥物分析的內(nèi)容, 藥物

2、的檢驗(yàn),藥物的穩(wěn)定性,生物利用度,藥物臨床監(jiān)測(cè),生物藥物的檢定,3、藥物分析的目的：確保藥物的質(zhì)量，保證病 人用藥的安全有效。,1.藥品的常規(guī)檢驗(yàn)以“藥品質(zhì)量全面監(jiān)控”為中心,開展藥品質(zhì)量檢驗(yàn)., 成品藥檢驗(yàn)（原料、制劑） 生產(chǎn)過程中質(zhì)量控制（中間體）優(yōu)化工藝 貯藏過程中的質(zhì)量控制（穩(wěn)定性考察）,第一章,一、藥物分析學(xué)科的性質(zhì)和任務(wù), 新藥開發(fā)及新劑型藥物質(zhì)量及穩(wěn)定性研究 天然產(chǎn)物活性成分的化學(xué)結(jié)構(gòu)確證. 現(xiàn)代生物技術(shù)所研制的生化藥物和基因工 程藥物質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究.,第一章,2.為新藥研究開發(fā)提供科學(xué)的質(zhì)量控制方法,一、藥物分析學(xué)科的性質(zhì)和任務(wù),藥物質(zhì)量優(yōu)劣、使用時(shí)劑量、方式是否合理,使用后是否

3、安全有效,還應(yīng)以臨床實(shí)際療效來決定. 開展臨床研究,研究藥物進(jìn)入體內(nèi)的吸收、分布、代謝、排泄等過程,研究藥物作用機(jī)制,將為臨床合理用藥提供科學(xué)指導(dǎo),以提高藥物療效,降低其毒副作用.,第一章,一、藥物分析學(xué)科的性質(zhì)和任務(wù),追蹤國際分析新技術(shù)的發(fā)展前沿,改進(jìn)或自主開發(fā)質(zhì)量控制平臺(tái)和分析技術(shù),以使我國藥品質(zhì)量研究與世界同步. 進(jìn)而達(dá)到藥品標(biāo)準(zhǔn)的國際化.,第一章,一、藥物分析學(xué)科的性質(zhì)和任務(wù),第二節(jié)、 藥品的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn),為了確保人們用藥的安全和有效,在藥品的研究、生產(chǎn)、供應(yīng)以及臨床使用過程中均應(yīng)進(jìn)行嚴(yán)格的質(zhì)量監(jiān)督和檢驗(yàn),這就需要有法定的監(jiān)督和檢驗(yàn)的依據(jù)藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn).,第一章,（二）藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的定義,藥

4、品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)是國家對(duì)藥品質(zhì)量、規(guī)格及檢驗(yàn)方法所做的技術(shù)規(guī)定.,第一章,二、 藥品的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn),1 組織生產(chǎn)提高質(zhì)量的手段 2 科學(xué)管理和技術(shù)監(jiān)督的組成部分 3 聯(lián)系科研、生產(chǎn)、供應(yīng)、使用和檢驗(yàn)的技術(shù)紐帶.,（三）藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)體系,第一章,（療效確切、廣泛應(yīng)用、質(zhì)量可控）,國外,美國藥典,英國藥典,英國副藥典,歐洲藥典,美國國家處方集,日本藥局方,國際藥典,四、藥典與分析方法,五、藥物分析與生物藥物分析的關(guān)系, 生物藥物分析是藥物分析的一個(gè)分支。,小分子之間的反應(yīng)研究較多,特點(diǎn),A 比較快的反應(yīng),B 比較簡單的體系,C 化學(xué)鍵的斷裂，組合或重排, 化學(xué)研究對(duì)象,D 在反應(yīng)體系中做布朗運(yùn)動(dòng)無序碰撞而反

5、應(yīng),大分子與大分子或著大分子與小分子之間反應(yīng),生物藥物與化學(xué)藥物的區(qū)別,a) 在結(jié)構(gòu)上,大分子藥物,化學(xué)結(jié)構(gòu)不明確,分子量不是定值,b) 在檢查項(xiàng)目上,熱源檢查,過敏實(shí)驗(yàn),異常毒性實(shí)驗(yàn),c) 在分析方法上,化學(xué)方法：重量法，滴定法，比色法，HPLC,生物測(cè)定法：電泳法，酶法，免疫法， 生物檢定法,第三節(jié) 生物藥物的概述,一、生物藥物及其分類,1、生物藥物是利用生物體，生物組織或組成生 物體的各種成分，綜合利用多門學(xué)科的原理和 方法，特別是利用現(xiàn)代生物技術(shù)，進(jìn)行加工， 制造而形成的一類用于預(yù)防，治療，診斷的藥物。,廣義的生物藥物包括：,從動(dòng)植物和微生物中直接制取的各種天然生 理活性物質(zhì)。,人工合

6、成或半合成的天然類似物,2、生物藥物的研制發(fā)展過程,3、生物藥物分類,按其來源和生產(chǎn)方法大致分為三類,a) 生化藥物,b) 生物技術(shù)藥物,c) 生物制品,按生物藥物的化學(xué)本質(zhì)和化學(xué)特性來分類,（1）氨基酸及其衍生物藥物,（2）有機(jī)酸，醇酮類,（4）酶及其,（3）維生素,a) 消化酶類,b)消炎酶類,c) 心腦血管疾病治療酶類,d) 抗腫瘤類,e) 氧化還原酶類,(5) 脂類藥物,（6）多肽和蛋白質(zhì)類,（7）核酸類及其降解物和衍生物,（8）糖類,（9）生物技術(shù)藥物類,（10）生物制品類, 按生物藥物的用途分類,（1）治療藥物,（2）預(yù)防藥物,（3）診斷藥物,（4）用作其他生物醫(yī)藥用品,二、生物藥

7、物的性質(zhì),（1）在化學(xué)構(gòu)成上，生物藥物十分接近于人體內(nèi) 的正常生理性質(zhì)，進(jìn)入人體后也更容易為機(jī)體所 吸收利用和參與人體的正常代謝與調(diào)節(jié)。,（2）在藥理上，生物藥物具有更高的生化機(jī)制 合理性和特異診療有效性。,（3）在醫(yī)療上，生物藥物具有藥理活性高，針 對(duì)性強(qiáng)，毒性低，副作用小，療效可靠及營養(yǎng) 價(jià)值高等特點(diǎn)。,（4）生物藥物的有效成分在生物材料中濃度很低， 雜質(zhì)的含量相對(duì)比較高。,（5）生物藥物常常是一些生物大分子，它們不僅 相對(duì)分子質(zhì)量大，組成結(jié)構(gòu)復(fù)雜，而且具有嚴(yán)格的 空間構(gòu)象，以維持其特定的生理功能。,（6）生物藥物對(duì)熱，酸，堿，重金屬及PH變化 都比較敏感，各種理化因素的變化易對(duì)生物活性

8、產(chǎn)生影響。,三、生物藥物的特點(diǎn)：,（1）相對(duì)分子量的測(cè)定,（2）生物活性的檢查,（3）安全性的檢查,（4）效價(jià)測(cè)定,（5）生化法確證結(jié)構(gòu),第四節(jié) 生物藥物的科學(xué)管理,一、生物藥物質(zhì)量的重要性與特殊性,二、生物藥物的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn),1、國家藥典,凡例 正文 附錄,藥典由國家藥典委員會(huì)編纂,國家藥品監(jiān)督管理局批準(zhǔn)并頒布實(shí)施.,藥典是一個(gè)國家關(guān)于藥品標(biāo)準(zhǔn)的法典,是國家管理藥品生產(chǎn)與質(zhì)量的依據(jù).,第一章,中華人民共和國藥典 Chinese Pharmacopoeia ChP,第一章,1953年 收載品種 531種 1963年 1310種 1977年 1925種 2000年 2691種,第一章,2 藥典主要內(nèi)

9、容,（1）凡例,（2）正文,（3）附錄,（4）索引,第一章,（1）凡例,是制定和執(zhí)行藥典必須了解和遵循的法則. 解釋和說明中國藥典概念,正確進(jìn)行質(zhì)量檢驗(yàn)提供指導(dǎo)原則.將正文、附錄及質(zhì)量檢定有關(guān)的共性問題加以規(guī)定,避免全書中重復(fù)說明.其內(nèi)容同樣具有法定約束力.,第一章,(一) 凡 例,1.名稱及編排,中文藥名:中國藥品通用名稱,英文藥名:國際非專利藥品(INN)命名原則,有機(jī)藥物化學(xué)名:有機(jī)化學(xué)命名原則,(一) 凡 例,2.檢驗(yàn)方法和限度,按規(guī)定檢驗(yàn)方法進(jìn)行檢驗(yàn).,標(biāo)準(zhǔn)中規(guī)定的各種限度數(shù)值的規(guī)定,最后一位為有效數(shù)字,計(jì)算時(shí)可多保留一位,(一) 凡 例,3.標(biāo)準(zhǔn)品 對(duì)照品,(1) 標(biāo)準(zhǔn)品 指用于生

10、物檢定、抗生素或生化藥品中含 量或效價(jià)測(cè)定的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì),按效價(jià)單位（或 g）計(jì),以國際標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行標(biāo)定.,(2)對(duì)照品 指在用于檢測(cè)時(shí),除另有規(guī)定外,均按干燥品 （或無水物）進(jìn)行計(jì)算后使用的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì). 用于藥物含量測(cè)定、純度檢查和鑒別試驗(yàn).,試驗(yàn)中的供試品與試液等“稱重”或“量取”的量均以阿拉伯?dāng)?shù)碼表示,其精確度可根據(jù)數(shù)據(jù)值的有效數(shù)位來確定.,(1)“稱取”或“量取”的精密度,(一) 凡 例,(一) 凡 例,規(guī)定“精密稱定”時(shí),系指稱取重量應(yīng)準(zhǔn)確 至所取重量的千分之一.,規(guī)定“稱定”時(shí),系指稱取重量應(yīng)準(zhǔn)確至所 取重量的百分之一.,規(guī)定精密量取時(shí),系指量取體積的準(zhǔn)確度 應(yīng)符合國家標(biāo)準(zhǔn)中對(duì)該體積移液管

11、的精 密度要求.,(一) 凡 例,取用量為“約”若干時(shí),系指取用量不得超 過規(guī)定量的10.,(一) 凡 例,5、溫度 溫度以攝氏度（）表示： 水浴溫度 98100 熱水 7080 微溫或溫水 4050 室溫 1030 冷水 210 冰浴 0 放冷 系指放冷至室溫,(一) 凡 例,（2） 正文,收載藥品及其制劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn). 主要內(nèi)容：名稱、性狀、物理常數(shù)、鑒別、檢查和含量測(cè)定等.,第一章,（3 ）附錄,第一章,（4） 索引,2000年版中國藥典采用“漢語拼音索引和“英文名稱索引這兩個(gè)索引與藥典正文前的品名目次” 相配合可快速查詢有關(guān)藥物品種.,第一章,藥典質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn),中國藥典質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)所涉及的分析方

12、法根據(jù)生產(chǎn)工藝、檢驗(yàn)條件和水平及綜合國力等多因素來選擇、建立. 方法學(xué)上要求具有普遍適用性.,第一章,國外藥典概況,1、美國藥典 USP (The Pharmacopoeia of the United States of Amenrican) 最新版本為第25版（2002） 收載品種37777種,與美國國家處方集 NF (The National Formulary) 第20版合并出版USP(25)-NF(20),第一章,2、英國藥典：BP （British Pharmacopoeia） 收載 2663種.,現(xiàn)行版為2000年版 BP（2000）,第一章,3、日本藥局方： JP （Japan

13、ese Pharmacopoeia）,現(xiàn)行版為第 十四改正本,第一章,第一部:凡例、制劑總則、一般試驗(yàn)法和各醫(yī)藥品,第二部:通則、生藥總則、制劑總則、一般試驗(yàn)法和各醫(yī)藥品,4、歐洲藥典： Ph.Eup（European Pharmacopoeia）,由歐洲藥典委員會(huì)編制、出版，為27個(gè)成員國及歐共體所認(rèn)可. 最新版為第四版,第一章,現(xiàn)行版為第三版 分三卷： 第一卷（1997）一般分析方法 第二卷（1981）質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)規(guī)格 第三卷（1998）質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)規(guī)格,第一章,2、部版藥品標(biāo)準(zhǔn)和副藥典,3、地方藥品標(biāo)準(zhǔn),4、生物制品標(biāo)準(zhǔn)化,主要包括兩方面的工作： 生物制品規(guī)程的制定和修訂 國家標(biāo)準(zhǔn)品的審定, 生

14、物制品規(guī)程,a)中國生物制品規(guī)程是我國生物制品的國家 標(biāo)準(zhǔn)和技術(shù)法規(guī)。包括生產(chǎn)規(guī)程和檢定規(guī)程。,b)中國生物制品規(guī)程2000版 經(jīng)第三屆中國生物制品標(biāo)準(zhǔn)化委員會(huì)審議通過， 并經(jīng)國家藥品監(jiān)督管理局批準(zhǔn)頒布。為建國以來 的第六版規(guī)程。分為正式規(guī)程和暫行規(guī)程。,5、國家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì),標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的種類和定義,a)國家標(biāo)準(zhǔn)品：指用國際標(biāo)準(zhǔn)品標(biāo)定的，或我國自 行研制的（尚無國際標(biāo)準(zhǔn)品者）用于衡量某一制 品效價(jià)或毒性的特定物質(zhì)，其生物活性以國際單位 或以單位表示。,b) 國家參考品：指用國際參考品標(biāo)定的，或我國 自行研制的（尚無國際參考品者）用于微生物 （或其產(chǎn)物）鑒定或疾病診斷的生物診斷試劑， 生物材料或特異性

15、抗血清以及用于某些不用國際 單位表示的制品定量檢定用特定物質(zhì)。,標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的制備：由國家藥品檢定機(jī)構(gòu)負(fù)責(zé)， 國際標(biāo)準(zhǔn)品，國際參考品由國家藥品檢定機(jī)構(gòu) 向WHO索取，并保管和使用。,標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的標(biāo)定,三、生物藥物質(zhì)量控制與管理,第一章,（二）藥品質(zhì)量管理規(guī)范內(nèi)容,藥品臨床試驗(yàn)管理規(guī)范 GCP,藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范 GMP,藥品經(jīng)營質(zhì)量管理規(guī)范 GSP,第一章,藥品非臨床研究管理規(guī)范GLP,科研單位研制安全有效藥物必須按照GLP規(guī)定開展工作.嚴(yán)格控制藥物研制的質(zhì)量,確保實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確可靠.,第一章,1 在新藥研究中保護(hù)受試者和病人的安全和權(quán)利.,2 新藥臨床研究人員保證藥品臨床試驗(yàn)資料的科學(xué)性、可靠性

16、、重視性.,第一章,生產(chǎn)企業(yè)生產(chǎn)出全面符合藥品標(biāo)準(zhǔn)的藥物,必須按GMP規(guī)定組織生產(chǎn)、嚴(yán)格把關(guān).,第一章,藥品供應(yīng)部門為了保證藥品運(yùn)輸、貯存、銷售過程中藥品的質(zhì)量和效力，必須按照GSP進(jìn)行.,第一章,第一章,檢驗(yàn)報(bào)告,工 作 程 序,第五節(jié)、生物藥物的分析檢驗(yàn),1 取 樣,根據(jù)藥物性質(zhì)、不同劑型,采用不同的取樣方法及不同的取樣量.,1 取 樣,先進(jìn)行外觀檢查包括：品名、 劑型、批號(hào)、保質(zhì)期及包裝情況等.,取樣程序,1 取 樣,當(dāng)n 3時(shí)，每件取樣； 當(dāng)n 300 時(shí),按 + 1 當(dāng)n 300時(shí),按 /2 + 1,1 取 樣,片劑、膠囊劑（非均勻制劑） 每批至少1020 片 注射劑（均勻制劑） 一

17、般35支（測(cè)定次）,2 鑒 別,依據(jù)生物藥物的化學(xué)結(jié)構(gòu)和理化性質(zhì)，采用化學(xué)法、物理法及生物學(xué)方法進(jìn)行某些特殊反應(yīng)，或測(cè)試某些物理常數(shù)或光譜特征及,判斷藥物及其制劑的真?zhèn)?,2 鑒 別,專屬性強(qiáng) 再現(xiàn)性好 靈敏度高 簡便快速,鑒別方法要求,化學(xué)反應(yīng)法,色譜鑒別法,光譜鑒別法,3 鑒 別,化學(xué)鑒別法,1 紫外光譜鑒別法,測(cè)定最大吸收波長,或同時(shí)測(cè)定最小吸收波長.,乙胺嘧啶 供試品在0.1mol/L鹽酸介質(zhì) 中的紫外吸收在272nm處為峰,216nm處 為谷.,光譜鑒別法,光譜鑒別法, 規(guī)定吸收波長和吸收度比值法,兩性霉素在362nm、381nm、405nm波長處有最大吸收.規(guī)定362nm與381n

18、m處吸收度比值不大于0.6、 381nm與405nm波長比值不大于0.9.,光譜鑒別法,己稀雌酚注射液用供試品溶液250450nm波長吸收光譜與對(duì)照品是否一致鑒別., 與對(duì)照品比較,對(duì)比吸收光譜 的一致性, 經(jīng)化學(xué)處理后,測(cè)定其反應(yīng)產(chǎn)物的吸收光譜特性., 規(guī)定一定濃度供試品在最大吸收 波長處的吸收度.,光譜鑒別法,光譜鑒別法,中國藥典采用標(biāo)準(zhǔn)圖譜對(duì)照法 BP 采用標(biāo)準(zhǔn)圖譜對(duì)照法、對(duì)照品法 USP 采用對(duì)照品法 JP 規(guī)定條件下測(cè)定一定波長處特征吸收峰.,色譜譜鑒別法,適用于復(fù)雜環(huán)境下藥物有效成分及雜質(zhì)鑒別,具有分離、分析同時(shí)進(jìn)行的特點(diǎn).,3 色譜法（ HPLC GC TLC),色譜譜鑒別法,（

19、1）高效液相色譜法(HPLC) 供試品和對(duì)照品色譜峰保留時(shí)間一致.,（2）氣相色譜法 (GC) 同HPLC要求,色譜譜鑒別法,（3）薄層掃描法(TLC),對(duì)照品比較法 供試品斑點(diǎn)與對(duì)照品的Rf值及斑點(diǎn)的顏色應(yīng)一致., 化學(xué)法和儀器法相結(jié)合,每種藥 品一般選用24種方法進(jìn)行鑒 別試驗(yàn),相互取長補(bǔ)短.,色譜譜鑒別法, 方法要有一定的專屬性、靈敏 性、且便于推廣., 盡可能采用藥典中收載的方法.,酶法,電泳法,生物法,2 鑒 別,3雜 質(zhì) 檢 查,藥物在不影響療效及人體健康的原則下,可以允許生產(chǎn)過程和貯藏期間引入的微量雜質(zhì)的存在. 檢查是判斷藥品純度是否符合限量規(guī)定的要求.,4安全性 檢 查,生物藥

20、物應(yīng)保證符合無毒、無菌、無熱源、無致敏源和降壓物質(zhì)等一般安全性要求。,4安全性 檢 查,（1）異常毒性試驗(yàn)：用一定劑量的藥物按指定的操作方法和給藥途徑給予規(guī)定體重的某種試驗(yàn)動(dòng)物，觀察其毒性反應(yīng)。反應(yīng)的判斷以試驗(yàn)動(dòng)物的死亡與否為終點(diǎn)。,4安全性 檢 查,（2）無菌檢查：是檢查藥品及敷料是否染有活菌的一種方法，是藥典中比較重要的檢查項(xiàng)目之一。,4安全性 檢 查,（3）熱源檢查：本法是將一定劑量的供試品，靜脈注入家兔體內(nèi)（家兔法），以其體溫升高的程度，判定該供試品中所含熱源是否符合規(guī)定，是一種限度試驗(yàn)法,4安全性 檢 查,（4）過敏試驗(yàn)：是檢查異性蛋白的實(shí)驗(yàn)。藥物中若夾雜有異性蛋白，在臨床使用時(shí)易引

21、起病人的多種過敏反應(yīng)。,4安全性 檢 查,（5）降壓物質(zhì)檢查：降壓物質(zhì)是指某些藥物中可能含有的能導(dǎo)致血壓降低的物質(zhì)。中國藥典采用貓（或狗）血壓法檢查藥物中所含的降壓物質(zhì)。,5含量測(cè)定,鑒別用來判定藥物的真?zhèn)?,檢查和含量測(cè)定可判定藥物的優(yōu)劣.,藥物在通過鑒別無誤、雜質(zhì)、安全檢查合格的基礎(chǔ)上,進(jìn)行含量測(cè)定.,5含 量 測(cè) 定,測(cè)定藥品的含量是評(píng)定藥品質(zhì)量,保證藥品療效的重要手段.采用化學(xué)分析方法或物理分析方法。,含量測(cè)定,5含 量 測(cè) 定, 用百分含量表示，適合于結(jié)構(gòu)明確的小分子藥物或經(jīng)水解后變成小分子藥物。 用生物效價(jià)或酶活力單位來表示。適合于多肽、蛋白質(zhì)和酶類藥物。,生物藥物的含量表示方法,

22、6記錄及檢驗(yàn)報(bào)告,記錄完整、無缺頁損腳；內(nèi)容必須真實(shí)、簡明、具體； 宜用鋼筆或特種圓珠筆書寫；字跡清晰、色調(diào)一致,不得涂抹（寫錯(cuò)時(shí),劃上單線或雙線，再在旁邊改正重寫,并簽名或蓋章）,(1)原始記錄,6 原始記錄,(2) 檢驗(yàn)報(bào)告內(nèi)容,a 供試品的名稱、批號(hào)、規(guī)格、數(shù)量、 來源；取樣方法、取樣日期；外觀 性狀、包裝情況. b 檢驗(yàn)?zāi)康?、?xiàng)目、方法與依據(jù)； 檢驗(yàn)數(shù)據(jù). c 結(jié)論及處理意見； d 檢驗(yàn)者簽名蓋章、復(fù)核者簽名蓋章.,理化檢定,安全檢定,效力檢定,生物制品的質(zhì)量檢定,二、生物制品的質(zhì)量檢定,（一）生物制品的理化檢定,生物制品中的有效成分和無效有害成分，需要 通過物理的或化學(xué)的方法才能檢查

23、出來，是保 證制品安全有效的一個(gè)重要方面。,1 物理性狀檢查,（1）外觀檢查：制品外觀異常往往會(huì)涉及制品 的安全和效力，因此必須認(rèn)真進(jìn)行檢查。,（2）真空度及溶解時(shí)間 凍干制品進(jìn)行真空封口，可進(jìn)一步保持制品的生 物活性和穩(wěn)定性。因此真空封口的凍干制品應(yīng)進(jìn) 行真空度及溶解時(shí)間檢查，通?？捎酶哳l火化真 空測(cè)定器檢查其真空度，凡有真空度瓶內(nèi)應(yīng)出現(xiàn) 藍(lán)紫色輝光。,2、蛋白質(zhì)含量的測(cè)定,（1）半微量凱氏定氮法,（2）酚試劑法（Lowry法),（3） 紫外吸收法,3、防腐劑含量測(cè)定,生物制品在制造的過程中，為了脫毒、滅活、和 防止雜菌污染，常加入適量的苯酚、甲醛、氯仿、 汞制劑等作為防腐劑或滅活劑。規(guī)程中

24、對(duì)各種防腐 劑的含量都要求控制在限度內(nèi)。,4、純度的檢查,精制抗毒素、類毒素、血液制品以及基因工程產(chǎn) 品在制造過程中經(jīng)過精制提純后，求檢查其純度 是否到達(dá)規(guī)程要求。檢查純度的方法有區(qū)帶電泳、 免疫電泳、凝膠層析和其它層析技術(shù)。,5、其它測(cè)定項(xiàng)目,（1）水分含量測(cè)定,（2）氫氧化鋁與磷酸鋁含量測(cè)定,（3）磷含量測(cè)定,烘干失重法、五氧化二磷真空干燥失重法 和費(fèi)休氏水分測(cè)定法,絡(luò)合物滴定法測(cè)定,（二）、生物制品的安全檢定,1、一般安全性檢查,包括安全試驗(yàn)、無菌試驗(yàn)和熱源質(zhì)試驗(yàn),2、殺菌、滅活和脫毒情況的檢查,3、外源性污染檢查,4、過敏性物質(zhì)檢查,（三）生物制品的效力檢定,生物制品是具有生物活性的制

25、劑，它的效力一般 采用生物學(xué)方法測(cè)定。生物測(cè)定是利用生物體來 測(cè)定待檢品的生物活性或效價(jià)的一種方法，它以 生物體對(duì)待檢品的生物活性的反應(yīng)為基礎(chǔ)，以生 物統(tǒng)計(jì)為工具，運(yùn)用特定的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)，通過比較 待檢品和相應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)品或?qū)φ掌吩谝欢l件下所產(chǎn) 生特定生物反應(yīng)的劑量間的差異，來測(cè)得待檢品 的效價(jià)。,1、動(dòng)物保護(hù)力試驗(yàn)（或免疫力實(shí)驗(yàn)）,動(dòng)物保護(hù)力試驗(yàn)是將疫苗或類毒素免疫動(dòng)物后，再用同 種的活菌、活毒或毒素攻擊，從而判定制品的保護(hù)水平。 動(dòng)物保護(hù)力試驗(yàn)可分為以下三類：,（1）定量免疫定量攻擊法,（2）變量免疫定量攻擊法50%有效免疫劑量 ED50的測(cè)定法,（3）定量免疫變量攻擊法保護(hù)指數(shù)（免疫 指數(shù)）測(cè)定

26、法,2、活疫苗的效力測(cè)定,（1）活菌數(shù)測(cè)定,（2）活病毒滴度測(cè)定,3、抗毒素和類毒素的單位測(cè)定,（1）抗毒素單位（U）測(cè)定 能與一個(gè)L+量（致死限量）的毒素作用后，注射 小鼠仍能使該小鼠在96小時(shí)左右死忙的最小抗毒 素量。稱為一個(gè)抗毒素單位。目前國際上都采用 國際單位（U）數(shù)表示抗毒素的效價(jià)。,根據(jù)類毒素與相應(yīng)抗毒素在適當(dāng)?shù)暮勘壤耙欢?溫度條件下經(jīng)一定反應(yīng)時(shí)間，可在試管中發(fā)生抗原 抗體結(jié)合，產(chǎn)生肉眼可見的絮狀凝集反應(yīng)。利用已 知效價(jià)單位的絮狀反應(yīng)抗毒素國家標(biāo)準(zhǔn)品（簡稱： 標(biāo)絮抗）測(cè)定待檢類毒素的絮狀單位（Lf）值。 本方法適用于白喉、破傷風(fēng)類毒素的測(cè)定。,（2）絮狀單位（Lf）測(cè)定：能和一

27、個(gè)單位抗毒素 首先發(fā)生絮狀沉淀反應(yīng)的類毒素量稱為一個(gè)絮狀 單位。,4、血清學(xué)試驗(yàn),血清學(xué)試驗(yàn)主要用來測(cè)定抗體水平或抗原活性。 預(yù)防制品接種機(jī)體后，可產(chǎn)生相應(yīng)抗體，并保 持較長時(shí)間，接種后抗體形成的水平，也是反 映制品質(zhì)量的一個(gè)重要方面?；诳乖涂贵w 的相互作用，常用血清學(xué)方法檢查抗原活性， 并多在體外進(jìn)行試驗(yàn)，包括沉淀試驗(yàn)、凝集試驗(yàn)， 間接血凝抑制試驗(yàn)、反向血凝試驗(yàn)、補(bǔ)體試驗(yàn)和 中和試驗(yàn)。,三、生物藥物常用的定量分析法,1、酶法, 酶活力測(cè)定法：是以酶為分析隊(duì)象，目的在 于測(cè)定樣品中某種酶的含量或活性。, 酶分析法：是以酶為分析工具或分析試劑， 測(cè)定樣品中酶以外的其它物質(zhì)的含量，分析對(duì) 象可

28、以是酶通過對(duì)酶反應(yīng)速率的測(cè)定或生成物 等濃度的測(cè)定而檢測(cè)相應(yīng)物質(zhì)的含量。,2、電泳法,電泳法是在電解質(zhì)溶液中，帶電粒子或離子在電 場(chǎng)作用下以不同的速率向其所帶電荷相反方向遷 移，基于溶質(zhì)在電場(chǎng)中的遷移的速率不同而達(dá)到 分離的。,優(yōu)點(diǎn)：,靈敏度高,重現(xiàn)性好,檢測(cè)范圍廣,操作簡單并兼?zhèn)浞蛛x、鑒定、分析等優(yōu)點(diǎn)。,常用的電泳法：自由界面電泳、區(qū)帶電泳和 高效毛細(xì)管電泳。,3、理化測(cè)定法,重量分析法、滴定分析法、分光光度法、 高效液相色譜法,生物檢定法是利用藥物對(duì)生物體（整體動(dòng)物、 離體組織、微生物等）的作用以測(cè)定其效價(jià)或 生物活性的一種方法。它以藥物的藥理作用為 基礎(chǔ)，生物統(tǒng)計(jì)為工具，運(yùn)用特定的實(shí)驗(yàn)設(shè)

29、計(jì)， 通過供試品和相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)品或?qū)φ掌吩谝欢l 件下比較產(chǎn)生特定生物反應(yīng)劑量比例，來測(cè)的 供試品效價(jià)。,4、生物檢定法,生物檢定法的應(yīng)用范圍包括如下幾項(xiàng)：,（1）藥物的效價(jià)測(cè)定,（2）微量生理活性物質(zhì)的測(cè)定,（3）某些有害雜質(zhì)的限度檢查,第六節(jié) 藥物代謝與藥物動(dòng)力學(xué)的分析方法,一、藥物代謝與藥物動(dòng)力學(xué)的研究,1、藥物的代謝轉(zhuǎn)化：指藥物進(jìn)入人體后，在人 體內(nèi)進(jìn)行一些反應(yīng)，發(fā)生結(jié)構(gòu)變化，使脂溶性的藥物獲的極性基團(tuán)，增加水溶性，而利于從腎及膽道排泄的過程。,2、藥物在體內(nèi)的整個(gè)過程通常用ADME表示。 A(absorption)表示吸收，為藥物被生物體吸收 D(distribution)為分布，為藥物在生物體內(nèi)的 分布 M(metabolism