第21章免疫檢測的質量控制.ppt

1、,臨床免疫檢驗的 質量控制,第一節(jié) 概述,為保證病人臨床診療或臨床實驗研究的有效性，臨床實驗室采取一系列有效的措施證明其測定數據能夠達到所確定的質量標準，這就是質量保證的內容。,質量保證(Quality Assurance,QA) 為一產品或服務滿足特定質量要求提供充分可信性所必要的有計劃的和系統(tǒng)的措施。 室內質量控制（Internal Quality Control,IQC) 由實驗室工作人員，采取一定的方法和步驟，連續(xù)評價本實驗室工作的可靠性程度。,一、與質量保證相關的定義,室間質量評價 （External Quality Assessment, EQA） 為客觀比較一實驗室的測定結果與靶

2、值的差異，由外單位機構客觀地評價實驗室的結果，發(fā)現(xiàn)誤差并校正結果,準確度 (accuracy) :待測物的測定值與其真值的一致性程度。 偏倚 (bias) 待測物的測定值與一可接受參考值之間的差異。,精密度(precision) 在一定條件下所獲得的獨立的測定結果之間的一致性程度。,準確度好的實驗，其精密度不一定好； 準確度差的實驗，其精密度則不一定差；反之亦然。,測定的精密度與準確度之間的關系,重復性條件(repeatability conditions) 是指在短的間隔時間內，在同一實驗室對相同的測定項目使用同一方法和同一儀器設備，由相同的操作者獲得獨立的測定結果的條件。,批 (Run)

3、在相同條件下所獲得的一組測定。 均值（Mean） 標準差（Standard deviation, SD) 變異系數（Coefficient of variation, CV）,正態(tài)分布(Gaussian distribution) 當一質控物用同一方法在不同的時間重復多次測定，得到一個兩頭低，中間高，中為所有測定值的均值，左右對稱的“鐘形”曲線，又稱高斯分布。,正態(tài)分布的基本統(tǒng)計學含義可用均數、標準差（s）和概率來說明。,診斷敏感性（sensitivity of diagnosis） 指將實際患病者正確地判斷為陽性（真陽性）的百分率。 診斷特異性（specificity of diagnosi

4、s） 指將實際無病者正確地判斷為陰性（真陰性）的百分率。,二、實驗方法診斷效率評價,診斷效率（efficiency of diagnosis） 指能準確區(qū)分患者和非患者的能力。,陽性預測值（positive predictive value, PPV） 是指特定試驗方法測定得到的陽性結果中真陽性的比率。 陰性預示值(negative predictive value, NPV) 是指特定試驗方法測定得到的陰性結果中真陰性的比率。,第二節(jié) 免疫檢驗的質量控制原則,標本類型及采集容器 標本采集時間及患者準備 內源性干擾因素 外源性干擾因素,一、標本的正確收集及處理,最常用的標本：血液，包括血清、血

5、漿和全血。唾液或尿液 。 建議采用真空采血管及蝶形針具，以免直接接觸血液。采集容器最好為一次性無菌密閉容器。,標本類型及采集容器,標本采集時間及患者準備,激素和治療藥物 感染性病原體抗原、抗體 腫瘤標志物 特定蛋白,內源性干擾因素,類風濕因子 補體 異嗜性抗體 治療性抗體 自身抗體,溶菌酶 磷脂 藥物小分子 總蛋白濃度等,外源性干擾因素,溶血 細菌污染 標本貯存時間過長 凝固不全 反復凍融,試劑準備 標本收集 測定方法和儀器操作 “標準操作程序”(SOP),二、標準化操作及流程,人員的合理使用和培訓 操作人員的業(yè)務培訓（包括檢測原理、基本操作、日常保養(yǎng)及維護等),標準品和質控品的分類 標準品和

6、質控品的基本條件,三、標準品和質控品的應用,標準品和質控品的分類,標準品即含量確定的處于一定基質中的特性明確的物質。 標準品分級: 一級標準品為國際標準品 二級標準品為國家標準品 三級標準品為商品校準品,質控品的選擇,國際臨床化學學會（IFCC）對質控品的定義為：專門用于質量控制目的的標本或溶液；不能用作校準。 質控品可以是液體的、冰凍的、凍干 質控品性能： 穩(wěn)定性，瓶間差，定值和非定值， 分析物水平，預處理的要求等,基質效應,制備質控品所用的基礎材料一般為來自人或動物的血清或其他體液。經過處理，又添加了其他外加的材料，如防腐劑等。 在對某一分析物進行檢測時，處于該分析物周圍的其他成分的組合，

7、是該分析物的基質。由于這些組合成分的存在，對分析物在檢測時的影響稱為基質效應。 理想狀態(tài)下，控制品應和檢驗的患者標本具有相同的基質狀態(tài)； 這樣，質控品將和病人標本具有相同的表現(xiàn)。,穩(wěn)定性是質控品的重要指標,在廠商說明的有效期內，說明書上關于質控品性能的各個指標，如：凍干品的復溶性能、有何渾濁的表現(xiàn)、各被檢分析物實際檢測值是否在規(guī)定的范圍內等是否和說明書相符，都是產品穩(wěn)定性的反映，很重要。 好的質控品可以在規(guī)定的保存條件下，至少穩(wěn)定12年。 實驗室最好購買夠用1年的1個批號的質控品,瓶間差,只有將瓶間差異控制到最小，才能使檢測結果間的變異真正反映日常檢驗操作的不精密度。 凍干的質控品復溶的操作一

8、定要嚴加控制，注意復溶操作的標準化，否則實驗室自身造成新的瓶間差。 液體質控品，消除了復溶過程引入的誤差；但是較昂貴，且總含有防腐劑類的添加物，對某些檢測方法引入了基質效應的誤差。,定值和不定值質控品,廠商在定值質控品上提供的預期范圍很寬，包含了質控品的緩慢變化使實際檢測值有偏離初始均值的傾向。 千萬不能將預期制范圍認為是質控的允許范圍。 不論定值還是不定值的質控品，使用時，必須用自己的檢測系統(tǒng)確定自己的均值和標準差，用于日常工作的過程控制中。,分析物水平（濃度）,臨床最關心各項目（分析物）的醫(yī)學決定水平濃度的檢驗結果的質量； 實驗室更關心檢測系統(tǒng)（方法）性能的在臨界限值處的質量表現(xiàn)。 在選擇

9、質控品時，應該有幾個濃度的、濃度分布較寬的、最好是醫(yī)學決定水平的、有可報告范圍的上下限值的質控品。 依據實驗室和臨床的要求作出選擇。,質控品使用前的預準備,檢驗人員在使用前必須認真閱讀質控品的使用說明書，明確要求后再開始使用。,質控品的正確使用與保存,（1）嚴格按說明書操作； （2）凍干質控品的復溶要確保所用溶劑的質量； （3）凍干質控品復溶時所加溶劑的量要準確，并盡量保持每次加入量的一致性； （4）凍干質控品復溶時應輕輕搖勻，使內容物完全溶解，切忌劇烈振搖； （5）質控品應嚴格按使用說明書規(guī)定的方法保存，不使用超過保質期的質控品； （6）質控品要在與患者標本同樣測定條件下進行測定。,臨床免疫

10、檢驗實驗室應有充分合理的空間、良好的照明、空調及濕度維持設備 實驗室儀器設備應保養(yǎng)良好，實驗用品要達到相應的要求。,四、實驗室的環(huán)境、設施和設備,第三節(jié) 質量保證、室內質控 和室間質評之間的關系,IQC僅覆蓋標本收集、實驗室測定過程和結果報告及其解釋分析步驟；而EQA還包括一個較大范圍的實驗室活動，諸如在標本接收中樣本處理的可靠性，以及測定結果的報告和解釋。QA覆蓋了更寬范圍的活動，最為重要的是標本收集、結果報告和解釋階段。QA還應評價實驗報告的發(fā)出周期（及時性）、完整性和簡潔性。實驗室工作的質量保證在確?；颊咧委熧|量上有重要意義。,第四節(jié) 常用免疫檢驗的質量控制,免疫檢驗質量控制中常用統(tǒng)計學

11、方法的選擇 定性免疫檢驗 定量免疫檢驗,統(tǒng)計學質量控制:使用室內質控物與臨床常規(guī)標本同時檢測，然后根據室內質控物的測定結果，采用統(tǒng)計學的原理方法判斷所進行的臨床常規(guī)標本測定是否在控的一種質量控制措施。,一、免疫檢驗質量控制中常用統(tǒng)計學方法的選擇,統(tǒng)計學質控的特點,檢驗誤差有兩類：一是系統(tǒng)誤差，一是隨機誤差。 系統(tǒng)誤差通常表現(xiàn)為質控物測定均值的漂移，是由操作者所使用的儀器設備、試劑、標準品或校準物出現(xiàn)問題而造成的，這種誤差可以通過前述的措施方法加以控制，是可以排除的。 隨機誤差則表現(xiàn)為測定SD的增大，主要是由實驗操作人員的操作等隨機因素所致，其出現(xiàn)難以完全避免和控制。,統(tǒng)計學質控的功能就是發(fā)現(xiàn)誤

12、差的產生及分析誤差產生的原因，采取措施予以避免。 開展統(tǒng)計質量控制前，應將可以控制的誤差產生因素盡可能地加以控制，這不但是做好室內質控的前提，也是保證常規(guī)檢驗工作質量的先決條件。,基線測定,最佳條件下的變異（Optimal conditions variance, OCV）和常規(guī)條件下的變異（Routine conditions variance, RCV）； 當RCV與OCV接近，或小于2 OCV時，則RCV是可以接受的。以上為批間變異。 批內變異的測定； 室內質控物的測定準確度的評價。,臨床免疫檢測質控圖的選擇、繪制及質控結果判斷,Levey-Jennings質控圖方法,也稱Shewhar

13、t質控圖，是由美國的Shewhart 于1924年首先提出，并用于工業(yè)產品的質量控制。 二十世紀五十年代初，Levey-Jennings將其引入臨床檢驗的質量控制 。經Henry和Segalove的改良，即為目前常用的Levey-Jennings質控圖。,(1)統(tǒng)計學含義:穩(wěn)定條件下，在20個IQC結果中不應有多于1個結果超過2SD（95.5%可信限）限度；在1000個測定結果中超過3SD（99.7%可信限）的結果不多于3個。如以3s為失控限，假失控的概率為0.3%。,(2)對待質控品應如對待病人標本一樣同等對待，不能進行特殊處理，在每批病人標本測定的同時測定質控品，將所得結果標在質控圖上，質

14、控品在控時，方能報告該批病人標本的測定結果，質控品失控時，說明測定過程存在問題，不能報告病人標本結果，應解決存在的問題，并重新測定在控后方能報告；,（3）當使用一個以上濃度的質控品想在同一張質控圖描點時，則質控圖上均值和s可不標具體數據，而僅以和s表示； （4）若以均值2s為失控限，假失控的概率太高，通常不能接受；以均值3s為失控限，假失控的概率低，但誤差檢出能力不強。,質控圖的記錄,質控結果 日期 試劑 質控物批號和含量 測定者姓名等。,通常質控規(guī)則以符號AL來表示，其中A為質控測定中超出質量控制限的測定值的個數，L為控制限，通常用均值或均值13SD來表示。 當質控測定值超出控制限L時，即該

15、批測定判為失控。 常用的13S質控規(guī)則，其中1為原式中的A，3s為原式中的L，表示均值3s，其確切的含義為：在質控測定值中，如果有一個測定值超出均值3s范圍，即可將該批測定判為失控。,質控規(guī)則的表達方式,符 號 定 義 12S 一個質控測定值超出2s控制限。 13S 一個質控測定值超出3s控制限。 22S 兩個連續(xù)的質控測定值同時超出+2s或2s控制限。 R4S 同一批測定中，兩個不同濃度質控物的測定值之間的 差值超出4s控制限。 41S 四個連續(xù)的質控測定值同時超出+1s或1s控制限。 7T 七個連續(xù)的質控測定值呈現(xiàn)一個向上或向下的趨勢變 化。 10X 十個連續(xù)的質控測定值同時處于均值（X）

16、的同一側。,常用質控規(guī)則的符號及定義,Levey-Jennings質控圖結合Westgard多規(guī)則質控方法,Westgard多規(guī)則質控方法即是將前述的多個質控規(guī)則同時應用進行質控判斷的方法。 最初常用的有六個質控規(guī)則，即12S、13S、22S、R4S、41S和10X，其中12S規(guī)則作為告警規(guī)則。 13S和R4S規(guī)則反映的是隨機誤差。22S、41S和10X反映的是系統(tǒng)誤差，系統(tǒng)誤差超出一定的程度，也可從13S和R4S規(guī)則反映出來。,在Levey-Jennings質控圖方法的基礎上產生，具有Levey-Jennings 質控圖方法的優(yōu)點，可通過相似的質控圖來進行分析。 假失控和假告警概率低。 誤差檢出能力增強 。,累積和 (CUSUM) 質控方法,累積和 (CUSUM) 質控方法于1977年由Westgard等提出,對系統(tǒng)誤差有較好的測出能力。,“即刻法”質控方法,“即刻法” 的實質是一種統(tǒng)計學方法,即Grubs異常值取舍法。 只要有3個以上的數據即可決定是否有異常值的存在。,已知的弱陽性質控:每次測定都應至少帶一個已知的弱陽性對照，從而有助于判斷臨床標本的檢測結果是否有效。 陰性質控: