實(shí)驗(yàn)四類風(fēng)濕因子檢測PPT參考課件

1、實(shí)驗(yàn)四,類風(fēng)濕因子的檢測,1,類風(fēng)濕因子的檢測,類風(fēng)濕因子（RF）是一種抗人或動物IgG分子Fc片段抗原決定簇的抗體，是以變性IgG為靶抗原的自身抗體。RF最初由Rose等（1984年）在類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎（RA）患者血清中發(fā)現(xiàn)。RA患者體內(nèi)有產(chǎn)生RF的B細(xì)胞克隆，在變性IgG或EB病毒的直接作用下可大量合成RF。RF主要為19S的IgM，也有7S的IgG和IgA，它與天然IgG結(jié)合的能力較差，最易與人和動物的變性IgG或免疫復(fù)合物中的IgG結(jié)合。,2,RF與體內(nèi)變性的IgG結(jié)合形成免疫復(fù)合物后可活化補(bǔ)體，或被吞噬細(xì)胞吞噬。由吞噬細(xì)胞釋放的溶酶體酶、活化肽、膠原酶、前列腺素E2等物質(zhì)，在細(xì)胞因子和

2、炎性粘附分子的參與下，致組織炎性損傷，可使患者發(fā)生骨關(guān)節(jié)炎及血管炎。,3,類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎,類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎( RA)： 其病因及發(fā)病機(jī)制仍不完全明了, 推測可能為外源性感染作用于遺傳易感個(gè)體, 導(dǎo)致機(jī)體免疫系統(tǒng)紊亂, 進(jìn)而引起關(guān)節(jié)滑膜、軟骨組織慢性炎癥和破壞的自身免疫性疾病。,4,RF在RA患者中的陽性檢出率很高，可達(dá)79.6%，是RA患者血清中常見的自身抗體。高滴度RF陽性支持對早期RA的診斷，在RA患者，RF的滴度與患者的臨床表現(xiàn)呈正相關(guān)，即隨癥狀加重而效價(jià)升高。但RF不是僅在RA患者中出現(xiàn)，在SLE、進(jìn)行性全身性硬化癥等自身免疫性疾病患者和部分老年人中RF的陽性率可達(dá)28.9%50%。因而R

3、F對RA患者并不具有嚴(yán)格特異性，RF陽性不能作為診斷RA的惟一標(biāo)準(zhǔn)。盡管在多種疾病中可有RF陽性，但滴均較低（40IU/ml），隨著RF滴度增加，RF對RA的診斷特異性增高。,5,類風(fēng)濕因子的病理作用（一）,類風(fēng)濕性血管炎，在外周血液循環(huán)中，類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎特異性RF與自身IgG分子結(jié)合形成穩(wěn)定的免疫復(fù)合物，部分被單核-吞噬細(xì)胞系統(tǒng)清除，部分沉積于血管壁，激活補(bǔ)體導(dǎo)致血管炎。,6,類風(fēng)濕因子的病理作用（二）,關(guān)節(jié)型損傷由于類風(fēng)濕關(guān)節(jié)滑液中缺少正常的IgG分子，IgG-RF自身結(jié)合形成多聚體復(fù)合物，IgG-RF多聚體沉積于關(guān)節(jié)表面激活補(bǔ)體引起關(guān)節(jié)性損傷。,7,常見的RF有IgM型、IgG型、IgA

4、型和IgE型，其中IgM和IgA類風(fēng)濕因子易于檢測，而IgG類風(fēng)濕因子難于測出。IgA類風(fēng)濕因子及IgM類風(fēng)濕因子對類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎診斷有較好的參考價(jià)值。 IgM型RF：在RA患者血清中IgM型RF效價(jià)80IU/ml并伴有嚴(yán)重關(guān)節(jié)功能障礙時(shí)，通常提示患者預(yù)后不良。,8,IgG型RF：在RA患者血清或滑膜液中IgG型RF的出現(xiàn)與患者的滑膜炎、血管炎和關(guān)節(jié)的癥狀密切相關(guān)，此類RF常伴隨高滴度的IgM型RF在同一RA患者血清或滑膜液中出現(xiàn)。在正常人及非RA患者中很難檢測出IgG型RFIgG型RF在關(guān)節(jié)軟骨表面的沉積可激活補(bǔ)體引起關(guān)節(jié)的炎性損傷，因此滑膜液中檢測出IgG型RF比血清中檢出IgM型RF更具病

5、理意義。 RF檢測方法一般有膠乳凝集試驗(yàn)、雙抗原夾心ELISA法、速率散射比濁法 。 一般醫(yī)院主要采用膠乳凝集法和酶聯(lián)免疫吸附法測定類風(fēng)濕因子。,9,類風(fēng)濕因子的檢測,類風(fēng)濕因子的主要類型： IgM型 特點(diǎn)：高凝集、易于沉淀 測定方法為： 1、乳膠凝集法 2、酶聯(lián)免疫吸附法 3 、乳膠免疫比濁法,10,膠乳凝集試驗(yàn)檢測RF,概念：顆粒性抗原與相應(yīng)抗體，或表面包被抗原（抗體）的顆粒狀物質(zhì)與相應(yīng)的抗體（抗原）在電解質(zhì)存在的條件下相互結(jié)合，出現(xiàn)肉眼可見的凝集團(tuán)現(xiàn)象。,11,正向間接凝集試驗(yàn)測RF,12,原理（膠乳凝集試驗(yàn)）,類風(fēng)濕因子（RF）是一組抗變性IgG的自身抗體，它能與人或動物的變性IgG結(jié)

6、合，而不與正常人IgG發(fā)生凝集反應(yīng)。 將處理過的人IgG與膠乳顆粒共價(jià)交聯(lián)，使其吸附于膠乳顆粒載體上，稱為致敏膠乳顆粒。當(dāng)待檢血清中有RF時(shí)，則與致敏膠乳顆粒上的變性IgG發(fā)生反應(yīng)，出現(xiàn)凝集現(xiàn)象。,13,（正向）間接凝集反應(yīng)原理示意圖,（變性IgG）,14,主要的試劑和器材,類風(fēng)濕膠乳診斷試劑 RF陰性對照 RF陽性對照 反應(yīng)板 攪拌棒,15,操作步驟,（1）在3塊載玻片上分別加一滴RF陽性血清、RF陰性血清及待檢血清。 （2）加20ul IgG致敏的膠乳于各血清樣品中，輕微晃動載玻片混勻。 （3）1 min 后觀察凝集反應(yīng)發(fā)生情況,16,結(jié)果觀察和判斷,在室內(nèi)的光線下觀察，有清晰的凝集顆粒出

7、現(xiàn)，且液體澄清者為RF陽性。 若需做半定量測定，可將血清作倍比稀釋，重復(fù)上述測定，以出現(xiàn)凝集的血清最高稀釋度為RF的效價(jià)（滴度）。,17,注意事項(xiàng),（1）器材要潔凈、血清要新鮮、以確保結(jié)果可靠 （2）注意陰性、陽性對照的設(shè)立 （3）注意血清及致敏膠乳加樣量的比例,18,直接凝集試驗(yàn)（玻片法）-測ABO血型,19,原理,天然的顆粒性抗原（如細(xì)胞、細(xì)菌等）與相應(yīng)抗體在適宜條件下反應(yīng)，出現(xiàn)肉眼可見的凝集物，稱為直接凝集反應(yīng)。 玻片法屬于定性試驗(yàn)。,20,21,主要的試劑和器材,抗A血型定型試劑 抗B血型定型試劑 攪拌棒 玻片,22,步驟,取玻片1塊，左上角和右上角分別標(biāo)上“A”和“B” 用采血針采指尖血（左手無名指尺側(cè)），將血滴在玻片的兩端。 在兩血滴上分別滴上抗A標(biāo)準(zhǔn)血清和抗B標(biāo)準(zhǔn)血清，用攪拌棒攪勻。 手持玻片，前后旋轉(zhuǎn)搖動，促使血清與紅細(xì)胞充分混合，用肉眼觀察有無凝集。,23,結(jié)果觀察和判斷,有凝集時(shí)紅細(xì)胞相互聚集成團(tuán)，出現(xiàn)大小不等的顆粒。,24,注意事項(xiàng),玻片應(yīng)潔凈、干燥、中性，以防止和減少非特異性凝集。 室溫低于10時(shí)，易出現(xiàn)冷凝集而造成的結(jié)果。,25,臨床意義,在美國風(fēng)濕病協(xié)會所規(guī)定的類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎診斷標(biāo)準(zhǔn)中，本試驗(yàn)是診斷標(biāo)準(zhǔn)之一。本試驗(yàn)對類風(fēng)濕性疾病的陽性率約8090。 類風(fēng)濕因子并非類風(fēng)濕病所特有，部分正常人及肝炎病人也可呈陽性反應(yīng)，75歲以上的老年人陽性率較高。據(jù)報(bào)導(dǎo)