歐洲藥典 透明質(zhì)酸

1、透明質(zhì)酸鈉玻璃酸鈉定義 透明質(zhì)酸的鈉鹽，由D-葡糖醛酸和N-乙?；?D-葡糖胺雙糖單位組成的葡萄糖胺聚糖。它是從雞冠中提取的或由鏈球菌發(fā)酵獲得，蘭斯場(chǎng)小組A和C.含量：95.0105.0（干燥品）。特性粘度：標(biāo)簽上所述的數(shù)值為90% 120%。生產(chǎn) 在適用情況下，透明質(zhì)酸鈉的動(dòng)物來(lái)源必須滿足該動(dòng)物適于人類食用對(duì)健康的要求。 當(dāng)通過(guò)革蘭氏陽(yáng)性菌發(fā)酵生產(chǎn)時(shí)，過(guò)程中必須證明可減少或消除熱源或細(xì)胞壁上的炎癥。特征外觀：白色或類白色，吸濕性粉末或纖維狀聚合物。溶解性：微溶或可溶于水，幾乎不溶于丙酮和無(wú)水乙醇。鑒定A.紅外吸收分光光度法（2.2.24）。對(duì)比：歐洲藥典。透明質(zhì)酸鈉的參考光譜。B.使鈉反應(yīng)（

2、2.3.1）。試驗(yàn)溶液S. 稱量0.10g待檢查干燥物，添加30.0毫升9g/ L的氯化鈉溶液輕輕振蕩直至溶解（約12小時(shí)）。溶解性 溶液S是清晰透明的（2.2.1）和其在600nm的吸光度不大于0.01（2.2.25）。pH值（2.2.3）：5.0-8.5。 溶解物質(zhì)在無(wú)二氧化碳水R中檢驗(yàn)，以期獲得每毫升含有5毫克的干燥物的溶液。特性粘度: 透明質(zhì)酸鈉是非常吸濕性的, 稱重期間必須防潮。 緩沖液（0.15M氯化鈉于0.01M pH7.0的磷酸緩沖液中）。溶解0.78克的磷酸二氫鈉R和4.50克氯化鈉R于R水中且用相同溶劑稀釋至500.0毫升（溶液A）。溶解1.79克氯化鈉R于R水中且用相同溶

3、劑稀釋至500.0毫升（溶液B）?；旌先芤篈和B，直至pH為7.0為止。通過(guò)燒結(jié)玻璃濾波器（4）進(jìn)行過(guò)濾（2.1.2）。試品溶液（a）：稱取0.200克（m0p）（注：此值僅作參考，試品溶液（A）的粘度初步測(cè)量后，應(yīng)進(jìn)行調(diào)整）該物質(zhì)進(jìn)行檢查，用50.0克緩沖液（m0S）在4稀釋。將溶液在4震動(dòng)24小時(shí)混合。稱取5.00g溶液（m1P），在25左右用100.0克緩沖液（m1S）稀釋。震動(dòng)20分鐘，混合該溶液。通過(guò)燒結(jié)玻璃濾波器（100），（2.1.2）過(guò)濾溶液，并棄去前10毫升。試品溶液（b） 稱量30.0克試品溶液（a）（m2P），用10.0g（m 2S）緩沖溶在25稀釋。振蕩20分鐘，混合該

4、溶液。通過(guò)燒結(jié)玻璃濾波器（100），（2.1.2）過(guò)濾溶液，并棄去前10毫升。試品溶液（c）。稱重20.0g試品溶液（a）（m3P），并用20.0g的緩沖溶液（m3S）在25稀釋。振蕩20分鐘，混合該溶液。通過(guò)燒結(jié)玻璃濾波器（100），（2.1.2）過(guò)濾溶液，并棄去前10毫升。試品溶液（d）。稱重10.0g試品溶液（a）（m3P），并用30.0g的緩沖溶液（m3S）在25稀釋。振蕩20分鐘，混合該溶液。通過(guò)燒結(jié)玻璃濾波器（100），（2.1.2）過(guò)濾溶液，并棄去前10毫升。在25.000.03確定緩沖溶液（T0）和為4種試驗(yàn)溶液（T1，T2，T3和T4）的溢流時(shí)間（2.2.9）。使用適當(dāng)?shù)膽腋?/p>

5、水平粘度計(jì)（規(guī)格：粘度計(jì)常數(shù)為約0.005mm2 / s2，運(yùn)動(dòng)粘度為1-5mm2/s，管的內(nèi)直徑為R0.53毫米，球泡體積為C 5-6毫升，管內(nèi)徑N2.8-3.2毫米。）與漏斗形下部毛細(xì)管末端。使用相同的粘度計(jì)對(duì)于所有測(cè)量;溢流時(shí)間均測(cè)定三次。測(cè)試結(jié)果與平均值相差不超過(guò)0.35%，并且如果溢流時(shí)間t1不小于t0的1.6倍且不大于1.8倍才是有效的，如果不是這種情況，調(diào)整m0p的值，并重復(fù)該過(guò)程。相對(duì)粘度的計(jì)算由于透明質(zhì)酸鈉溶液和溶劑的密度幾乎相等，相對(duì)粘度Ri（即R1，R 2，R3和R4），可以通過(guò)各溶液的溢流時(shí)間（為T1，T2，T3和T4）與溶劑t0的溢流時(shí)間的比例計(jì)算，但考慮到毛細(xì)管的動(dòng)

6、能校正系數(shù)（B =30800s3），使用下面的表達(dá)式：濃度的計(jì)算計(jì)算試品溶液（a）的透明質(zhì)酸鈉濃度C1（表示為千克/米3）在使用下式：X =測(cè)定的透明質(zhì)酸鈉百分比的含量;H =百分比干燥失重;25=1005千克/立方米（試驗(yàn)溶液在25下的密度）。計(jì)算試驗(yàn)溶液（b）的透明質(zhì)酸鈉的濃度C2（表示為千克/米3）使用下面的表達(dá)式：使用下面的表達(dá)式計(jì)算透明質(zhì)酸鈉的測(cè)試溶液（c）濃度C3（表示為千克/米3）：使用下面的表達(dá)式計(jì)算透明質(zhì)酸鈉的測(cè)試溶液（c）濃度C4（表示為千克/米3）：特性粘度的計(jì)算通過(guò)使用馬丁方程線性最小二乘回歸分析計(jì)算特性粘度：攔截的特性粘度的十進(jìn)制對(duì)數(shù)是表示為m3 /千克。硫酸糖胺聚糖

7、：最大1，如果產(chǎn)物從雞冠中提取的。在高溫下處理高氯酸時(shí)，必須考慮適當(dāng)?shù)陌踩A(yù)防措施。測(cè)試溶液。加入一定物質(zhì)的量待檢查相當(dāng)于50.0毫克的干燥物至長(zhǎng)150毫米內(nèi)徑16毫米的試管，溶解于1.0毫升的分析純高氯酸里?；鶞?zhǔn)溶液。溶解0.149克分析純無(wú)水硫酸鈉于純水，且用相同的溶劑稀釋至100.0毫升。用純水稀釋10.0毫升該溶液至100.0毫升。在90-95加熱器中，蒸發(fā)1.0毫升于長(zhǎng)150毫米內(nèi)徑16毫米的試管中。溶解在1.0毫升高氯酸分析純中的殘余物。每個(gè)試管放一塊玻璃棉。將試管置于一個(gè)加熱器中或保持在180的硅油浴中，并加熱至澄清得到無(wú)色溶液（約12小時(shí)）。取出試管并冷卻到室溫。添加到每個(gè)試管

8、3.0毫升33.3 g / L的氯化鋇R溶液，蓋上蓋子后劇烈震蕩。試管靜置30分鐘。再次搖動(dòng)每個(gè)試管，并在660nm測(cè)定吸光度（2.2.25），以純水為空白對(duì)照。試驗(yàn)溶液的吸光度不大于參考溶液的吸光度。核酸：溶液S在260nm處的吸光度（2.2.25）最大是0.5。蛋白質(zhì)：最大0.3;最大0.1，如果打算用于腸胃外制劑中的用途。試驗(yàn)溶液（a）。用純水溶解待檢測(cè)物，以獲得每毫升干燥物質(zhì)相對(duì)含量為10mg的溶液。試驗(yàn)溶液（b）。等體積混合的試驗(yàn)溶液（a）和純水.基準(zhǔn)白蛋R 用純水制備0.5毫克/毫升的牛血清白蛋白儲(chǔ)液。制備5倍稀釋物的原液，含有5微克/毫升至50微克/毫升的牛血清白蛋白。添加2.5

9、毫升新鮮制備的酒石酸銅溶液R3至含有2.5毫升純水或2.5毫升的試驗(yàn)溶液（a）或（b）或2.5毫升的對(duì)照溶液的（空白）試管中。每次加入后拌勻。約10分鐘后，添加0.50毫升phosphomolybdotungstic試劑R與純水的等體積混合物到每個(gè)試管。每次加入后拌勻。30分鐘后，測(cè)量每個(gè)溶液在750納米處對(duì)空白的吸光度（2.2.25）。從5個(gè)參考溶液獲得的校正曲線確定蛋白在測(cè)試溶液中的含量。氯化物（2.4.4）：最大0.5。溶解67毫克在100毫升純水中。鐵：最高為80ppm。原子吸收光譜法（2.2.23，方法）。測(cè)試溶液。通過(guò)水浴上加熱溶解待檢查干燥物質(zhì)0.25g于1毫升硝酸R中，冷卻并用

10、純水稀釋至10.0毫升。標(biāo)準(zhǔn)溶液。以相同的方式制備2種基準(zhǔn)溶液作為試驗(yàn)溶液，分別加入1.0毫升和2.0毫升的鐵標(biāo)準(zhǔn)溶液分析純（10ppm的Fe）至要被檢查的溶解物質(zhì)中。來(lái)源：使用0.2納米的傳送帶的鐵空心陰極燈。波長(zhǎng)：248.3nm。霧化設(shè)備：空氣 - 乙炔火焰。重金屬（2.4.8）：最大20 ppm的;如果計(jì)劃用于腸胃外制劑，最大為10ppm。 用1.0g 符合測(cè)試的F. 制備2.0毫升標(biāo)準(zhǔn)溶液（10 ppm的鉛）R.的對(duì)照品溶液干燥失重（2.3.32）：最大20.0%，通過(guò)0.500克在100-110下干燥超過(guò)6小時(shí)的五氧化二磷分析純來(lái)確定。微生物污染TAMC：驗(yàn)收標(biāo)準(zhǔn)102 CFU/克（

11、2.6.12）。使用1克樣品進(jìn)行檢測(cè)。細(xì)菌內(nèi)毒素（2.6.14）：小于0.5IU/mg，如果打算用于腸胃外制劑，如果沒(méi)有更適合的除去細(xì)菌內(nèi)毒素的工藝; 小于0.05IU/毫克，如果用于在眼內(nèi)制劑或關(guān)節(jié)內(nèi)制劑的制造，如果沒(méi)有更適合的除去細(xì)菌內(nèi)毒素的工藝。含量測(cè)定通過(guò)與咔唑反應(yīng)確定的葡糖醛酸的含量如下所述。試劑A 溶解0.95克四硼酸二鈉于100.0毫升硫酸中試劑B 溶解0.125克咔唑R在100.0毫升無(wú)水乙醇R.中測(cè)試溶液。準(zhǔn)備三份這個(gè)溶液。溶解0.170克被檢查物質(zhì)于純水中，用相同的溶劑稀釋至100.0g。取10.0克這種溶液用純水稀釋至200.0克。參考原液。溶解0.100g的D-葡糖醛酸

12、分析純，經(jīng)五氧化二磷在真空中預(yù)先干燥至恒重（2.3.32），在水中和稀釋至100.0g用相同的溶劑。參考溶液。制備5種包含D-葡糖醛酸分析純?cè)?.5 g/g 和65 g/g 之間的參考原液的稀釋液放置25只試管在冰水中，編號(hào)為1到25。一式三份分別添加1.0mL5種參考溶液至115號(hào)試管中（參照管），一式三份添加1.0毫升3個(gè)測(cè)試溶液于試管16至24中（樣品管）和1.0毫升純水到試管25中（空白）。添加到每個(gè)試管5.0毫升之前在冰水冷卻的新制備的試劑A。蓋緊試管用塑料瓶蓋，搖勻，并將其置于水浴中15分鐘。冰水中降溫，并添加0.20毫升試劑B到每個(gè)試管.重新溫管，搖勻，然后再次把它們放在水浴中15分鐘。冷卻至室溫，并測(cè)量溶液在530nm處的吸光度（2.2.25），對(duì)照空白樣品。從校正曲線得到的各基準(zhǔn)溶液的平均吸光度，來(lái)確定D-葡糖醛酸在測(cè)試溶液中的平均濃度。利用下面的表達(dá)式計(jì)算透明質(zhì)酸鈉的百分含量：Cg=D-葡糖醛酸在試驗(yàn)溶液中濃度的平均值單位為毫克每克;Cs =試驗(yàn)溶液被測(cè)物質(zhì)的濃度平均值，單位為毫克每克;Z =確定的C6H10O7在D-葡糖醛酸分析純中的百