交叉配血(聚凝胺法、微柱凝膠法).ppt

1、交叉配血（聚凝胺法、微柱凝膠法）,臨床血液教研室,交叉配血,交叉配血聚凝胺法：,原理： 將紅細(xì)胞和血清放置在低離子介質(zhì)中孵育，可促進抗體和紅細(xì)胞膜血型抗原結(jié)合，再加入聚凝胺促進紅細(xì)胞非特異性凝集。離心后加入重懸液(電荷中和 )，正常紅細(xì)胞的凝集解散，而抗體抗原結(jié)合引起的紅細(xì)胞凝集仍然存在。,操作步驟：,抽取受血者靜脈血34ml，枸櫞酸鈉抗凝，以生理鹽水洗滌受血者紅細(xì)胞3次，配成3% 紅細(xì)胞懸液，同樣方法處理獻血者樣本； 取潔凈小試管2支，1支標(biāo)記為主側(cè)管，另1支標(biāo)為次側(cè)管； 主側(cè)管內(nèi)加受血者血清2滴、獻血者紅細(xì)胞懸液1滴；次側(cè)管加獻血者血清2滴、受血者紅細(xì)胞懸液1滴； 每管各加LIM溶液0.6

2、ml，混勻，室溫孵育1min; 每管各加2滴聚凝胺溶液，混合后靜置15s; 1300g離心15s，傾去上清液； 輕輕搖動試管，目測細(xì)胞有無凝集，如無凝集，必須重做； 加入2滴重新懸浮液，并輕輕轉(zhuǎn)動試管混合，肉眼觀察結(jié)果，必要時用顯微鏡觀察結(jié)果。,結(jié)果判斷：,主側(cè)管和次側(cè)管內(nèi)紅細(xì)胞凝集在1min散開，則為聚凝胺引起的非特異性凝集，表示受血者和獻血者配血相容。 如果主側(cè)管和/或次側(cè)管內(nèi)紅細(xì)胞凝集不散開，則表明兩血不相容，獻血者血液不可輸注。,注意事項： 實驗結(jié)果必須在3分鐘內(nèi)判讀 在冬天氣溫較低時，某些病人血清中含有冷凝集素而導(dǎo)致交叉配血假陽性;遇此現(xiàn)象可用37-40生理鹽水洗滌紅細(xì)胞并置37水溶

3、中輕輕搖動，觀察結(jié)果。,LIM:降低 溶液的離子強度,減少紅細(xì)胞周圍的陽離子云， 可促進抗體和紅細(xì)胞膜血型抗原結(jié)合。,聚凝胺:高價陽離子,中和紅細(xì)胞表面的負(fù)電荷，縮短細(xì)胞 間距,促進紅細(xì)胞非特異性凝集。,重懸液:電荷中和 。,微柱凝膠卡交叉配血試驗,原理： 將受血者、獻血者的血清和紅細(xì)胞，放置主側(cè)和次側(cè)管的反應(yīng)室中，放置37孵育器中孵育，如果血清中存在針對紅細(xì)胞抗原的血型抗體（lgM型或IgG型）時，紅細(xì)胞發(fā)生凝集，離心后留在微柱的表面，為陽性；如果血清中不含有針對紅細(xì)胞膜上血型抗原的抗體，紅細(xì)胞下沉到微柱管的底部，為陰性。,操作步驟：,按照試劑說明配制好獻血者、受血者的紅細(xì)胞懸液以及分離血清。 主側(cè)：25ul 受血者血清 + 50ul 1%獻血者紅細(xì)胞，加入主側(cè)管反應(yīng)室內(nèi)； 次側(cè)： 25ul獻血者血清+ 50ul 1%受血者紅細(xì)胞，加入到次側(cè)管反應(yīng)室內(nèi)； 加樣后的試劑卡放置專用孵育器37孵育15min； 取出試劑卡，放置專用離心機1000g離心9min； 取出試劑卡，肉眼觀察結(jié)果。,結(jié)果判