紫外分光光度法快速測(cè)定食品中三聚氰胺含量 畢業(yè)論文.doc

i 紫外分光光度法快速測(cè)定食品中三聚氰胺含量 摘 要 以牛奶、奶粉等乳制品為研究對(duì)象，建立紫外分光光度法快速測(cè) 定食品中三聚氰胺含量的方法。以三氯乙酸作為溶劑，用t6新世紀(jì)紫 外分光光度計(jì)在波長(zhǎng)為240nm下測(cè)定三聚氰胺的吸光度。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明： 三聚氰胺在濃度范圍為1.69.6g/ml內(nèi)線性關(guān)系良好；表觀摩爾吸 光系數(shù)為6.3104l/(molcm)；回收率為98.3%107.8%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)誤 差小于1.7%。該方法準(zhǔn)確、快速、簡(jiǎn)便,可用于測(cè)定實(shí)際樣品，為三聚 氰胺的檢測(cè)提供了新方法。 關(guān)鍵詞：紫外分光光度計(jì);食品;三聚氰胺 1 rapid content determination of melamine in food power by uv-spectrophotometer abstract with milk, milk powder, etc dairy for research object, establish uv spectrophotometry determine the food melamine content method. with thetrichloroacetic acid as solvent, the wave of melamine absorbency is determined with uv-t6 in new century-spectrophotometer at 240nm. showthat: a good linear relationship exists when the concent ration of melaminefalls within the range of 1.69.6g/ml; its apparent molar absorption coeffiencts are 6.3104l/(mol cm); recovery is 98.3% 107.8%. the method is accurate, rapid, simple, used for real samples fordetermination of melamine, provides a new method of detection. key words: uv spectrophotometer;food; melamine 2 目 錄 引引 言言1 第一章第一章 材料與方法材料與方法2 1.1 試驗(yàn)材料2 1.2 儀器設(shè)備2 1.3 試驗(yàn)設(shè)計(jì)2 1.3.1 溶液的配制2 1.3.2 檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇.3 1.3.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制.3 1.3.4 回收率試驗(yàn)4 1.3.5 樣品的測(cè)定5 第二章第二章 結(jié)果與分析結(jié)果與分析6 2.1 結(jié)果.6 2.2 分析.6 2.3 提取溶劑的選擇.6 2.4 結(jié)論.7 參考文獻(xiàn)參考文獻(xiàn)8 謝謝 辭辭.9 1 引 言 三鹿牌嬰幼兒奶粉違法添加三聚氰胺的事件，沖擊了中國(guó)整個(gè)奶制品行業(yè)，嚴(yán) 重?fù)p害了群眾利益，造成了極其惡劣的社會(huì)影響。動(dòng)物性食品及動(dòng)物飼料中同樣也 存在三聚氰胺殘留問(wèn)題，三聚氰胺在動(dòng)物源性食品中的潛在危害正引起全社會(huì)的關(guān) 注。 三聚氰胺（melamine） ，是一種三嗪類(lèi)含氮雜環(huán)有機(jī)化合物，重要的氮雜環(huán)有 機(jī)化工原料。簡(jiǎn)稱(chēng)三胺，又叫2，4，6-三氨基-1，3，5-三嗪、2，4，6-三氨基脲、 蜜胺、三聚氰酰胺、氰脲三酰胺，分子式c3n3（nh2）3，分子量126.12。三聚氰胺 為純白色單斜棱晶體，無(wú)味，密度1.573gcm3 (16)。常壓熔點(diǎn)354（分解） ； 快速加熱升華，升華溫度300。它溶于熱水，微溶于冷水，極微溶于熱乙醇，不 溶于醚、苯和四氯化碳，可溶于甲醇、甲醛、乙酸、熱乙二醇、甘油、吡啶等，低 毒。在一般情況下較穩(wěn)定，但在高溫下可能會(huì)分解放出氰化物。呈弱堿性（pkb=8） ， 與鹽酸、硫酸、硝酸、乙酸、草酸等都能形成三聚氰胺鹽。在中性或微堿性情況下， 與甲醛縮合而成各種羥甲基三聚氰胺，但在微酸性中（ph值5.56.5）羥甲基的衍 生物進(jìn)行縮聚反應(yīng)而生成樹(shù)脂產(chǎn)物。遇強(qiáng)酸或強(qiáng)堿水溶液水解，胺基逐步被羥基取 代，先生成三聚氰酸二酰胺，進(jìn)一步水解生成三聚氰酸一酰胺，最后生成三聚氰酸。 最主要的用途是作為生產(chǎn)三聚氰胺甲醛樹(shù)脂（mf）的原料，是不允許添加到食品中 的。不法商人利用其含氮量高(約66.7%)且無(wú)異味,價(jià)格低廉,用傳統(tǒng)的凱氏定氮法 無(wú)法區(qū)別是否是對(duì)動(dòng)物機(jī)體有益的蛋白氮還是不能被利用的非蛋白氮,在加工食品 或飼料中添加三聚氰胺能造成“高蛋白質(zhì)含量”的假象。食品和飼料中摻入三聚氰 胺會(huì)對(duì)人和動(dòng)物健康產(chǎn)生巨大的危害。2004年和2007年,韓國(guó)、臺(tái)灣和美國(guó)相繼發(fā) 生狗、貓等寵物因進(jìn)食含有三聚氰胺的寵物飼料而導(dǎo)致腎功能衰竭甚至導(dǎo)致死亡的 事1-3。研究顯示,三聚氰胺主要引起腎臟衰竭。因此通過(guò)有效的技術(shù)手段,對(duì)食品 中三聚氰胺殘留進(jìn)行檢測(cè),確保食品安全性具有十分重要意義。 目前，國(guó)家質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了高效液相色譜法、氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法、液相色 2 譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜法三種方法為三聚氰胺的檢測(cè)方法，其中高效液相色譜法為確證法。 許多研究者采用了該法及其改進(jìn)法測(cè)定食品中的三聚氰胺4 - 6 ,也有采用反相高 效液相色譜法7 、質(zhì)譜方法測(cè)定食品中的三聚氰胺的報(bào)道8-10 ，林立等11 報(bào)道 了離子色譜-紫外檢測(cè)測(cè)定液態(tài)奶中的三聚氰胺。但這些方法操作需時(shí)較長(zhǎng),設(shè)備要 求高。 三聚氰胺結(jié)構(gòu)中有不飽和共軛雙鍵,可在紫外區(qū)產(chǎn)生較強(qiáng)的吸收,故可用紫外分 光光度法快速測(cè)定其含量,且此法比高效液相色譜法更經(jīng)濟(jì)、省時(shí)和易于推廣。本 文以牛奶、奶粉等乳制品作為樣品,以三氯乙酸和乙酸鉛作為提取劑,用紫外分光光 度法在檢測(cè)波長(zhǎng)為240nm處測(cè)定三聚氰胺的含量。 第一章 材料與方法 1.1 試驗(yàn)材料試驗(yàn)材料 三聚氰胺標(biāo)準(zhǔn)樣品；乙酸鉛(分析純)；三氯乙酸(分析純)；實(shí)驗(yàn)用水為重蒸水。 1.2 儀器設(shè)備儀器設(shè)備 t6新世紀(jì)紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)，fa1004a型電子分析天平，燒杯，玻璃棒，離 心機(jī)，移液管，10ml容量瓶，50ml容量瓶，吸耳球。 1.3 試驗(yàn)設(shè)計(jì)試驗(yàn)設(shè)計(jì) 1.3.1 溶液的配制溶液的配制 三氯乙酸溶液的配制:準(zhǔn)確稱(chēng)取10g三氯乙酸用重蒸水配制成1%的溶液,置于1l 3 容量瓶中作為溶劑備用。 三聚氰胺母液的配制:準(zhǔn)確稱(chēng)取4mg三聚氰胺用配制好的1%的三氯乙酸溶液作為 溶劑,配制濃度為0.08mg/ml的三聚氰胺溶液于50ml容量瓶中備用。 1.3.2 檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇 用1%的三氯乙酸溶液作為空白對(duì)照,用t6新世紀(jì)紫外可見(jiàn)分光光度計(jì),將質(zhì)量 濃度分2.14,3.62,5.10,6.58g/ml的三聚氰胺溶液,在波長(zhǎng)200400nm范圍內(nèi)掃描， 發(fā)現(xiàn)三聚氰胺在236nm波長(zhǎng)處有最大吸收,綜合各方面條件及相關(guān)文獻(xiàn)，選擇240nm 為測(cè)定三聚氰胺含量的適宜檢測(cè)波長(zhǎng)。 1.3.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 分別吸取濃度為0.08mg/ml的母液0.2,0.4,0.6,0.8,1.0,1.2ml到10ml容量瓶中,用 1%三氯乙酸溶液進(jìn)行定容。在240nm的檢測(cè)波長(zhǎng)下測(cè)定其吸光度值a,然后以濃度為 橫坐標(biāo),吸光度為縱坐標(biāo)繪制三聚氰胺標(biāo)準(zhǔn)曲線,并對(duì)其進(jìn)行線性回歸。實(shí)驗(yàn)中三聚 氰胺濃度及其對(duì)應(yīng)的吸光度值a數(shù)據(jù)見(jiàn)表1和圖1。 表1 三聚氰胺濃度及其對(duì)應(yīng)的吸光度值a數(shù)據(jù) 三聚氰胺濃度 （g/ml） 吸光度值 a 1.60.1039 3.2 0.1800 4.80.2620 6.40.3323 8.0 0.4085 9.60.4847 斜率(k)=0.0475 4 三聚氰胺標(biāo)準(zhǔn)曲線圖 y = 0.0475x + 0.0293 r2 = 0.9997 0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6 024681012 三聚氰胺濃度（ug/ml） 吸光度值a 吸光度值a 線性(吸光度 值a) 圖1 三聚氰胺標(biāo)準(zhǔn)曲線圖 從表1和圖1可知，回歸方程為y=0.0475x+0.0293,表觀摩爾吸光系為 6.38104l/(molcm),相關(guān)系數(shù)r=0.9997,實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,工作曲線在所選定的濃 度范圍內(nèi)具有很好的線性關(guān)系。 1.3.4 回收率試驗(yàn)回收率試驗(yàn) 取適量三聚氰胺樣品作為對(duì)照,用1%的三氯乙酸作為溶劑,在線性范圍內(nèi)配制高、 中、低3個(gè)濃度的樣品(每個(gè)濃度各有3個(gè)平行樣,共9個(gè)樣),定容,在240nm下分別測(cè) 定其吸光度,測(cè)得的平均回收率為98.3%107.8%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)誤差rsd小于1.7%。結(jié) 果見(jiàn)表2 b=0.0293 回歸方程 y=0.0475x+0.0293 5 表2 三聚氰胺回收率試驗(yàn)結(jié)果 加入值（g/ml) 測(cè)定值（g/ml) 平均回收率/% rsd/% 2.362 2.1582.334 107.81.7 2.286 5.563 5.7805.794 98.9 1.2 5.695 7.732 7.8607.691 98.3 0.4 7.75 1.3.5 樣品的測(cè)定樣品的測(cè)定 稱(chēng)取約0.4g牛奶樣品(精確至0.01g)于100ml燒杯中,加入配好的1%三氯乙酸 50ml。用璃棒不停攪拌10min,使牛奶樣品全部均勻散布在溶液中,加入2ml2%的乙酸 鉛溶液,靜止沉降15min,取上清液在離心機(jī)中以5000r/min離心10分鐘，然后取離心 過(guò)的上清液過(guò)孔徑0.45m有機(jī)濾膜,供測(cè)試用。并將測(cè)定結(jié)果與高效液相色譜法進(jìn) 行比較,結(jié)果見(jiàn)表3。 表3 牛奶樣品測(cè)定結(jié)果對(duì)比(g/kg) 牛奶樣品 12 3 平均值 6 本法 647.33654.68 657.56 653.19 色譜法 687.6 692.5 691.4 690.5 第二章 結(jié)果與分析 2.1 結(jié)果結(jié)果 結(jié)果見(jiàn)表 3,可以看出,檢測(cè)結(jié)果與高效液相色譜法基本吻合。 2.2 分析分析 三聚氰胺回收率試驗(yàn)中的相關(guān)計(jì)算按如下公式計(jì)算： d=x-_x 式中： d-偏差 x-三聚氰胺回收的測(cè)定值 _x-三聚氰胺回收測(cè)定值的平均值 相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差（rsd%）=（sx）100% r-相關(guān)系數(shù) r值在-1r1之間，即當(dāng)0r1與a有關(guān)系，r越接近1，a 與濃度的線性關(guān)系越好。 2.3 提取溶劑的選擇提取溶劑的選擇 三聚氰胺與酸反應(yīng)生成三聚氰胺鹽,而且酸性條件下有利于樣品中蛋白質(zhì)的變 性,故宜采用酸性溶液提取三聚氰胺，如本實(shí)驗(yàn)中用到的三氯乙酸溶液。因?yàn)榧尤?重金屬鹽類(lèi)同樣起沉淀蛋白的作用，此外提取溶劑中加入乙酸鹽,可以與三氯乙酸 形成緩沖鹽而減少ph的波動(dòng)變化,有利于待測(cè)物的穩(wěn)定與提取效果,減少干擾如本實(shí) 7 驗(yàn)室中用到的乙酸鉛溶液。 2.4 結(jié)論結(jié)論 實(shí)驗(yàn)表明,此檢測(cè)方法操作準(zhǔn)確，快速，簡(jiǎn)便,具有良好的準(zhǔn)確性和回收率,檢 測(cè)限可達(dá)到1.0g/kg,實(shí)驗(yàn)檢測(cè)結(jié)果與高效液相色譜相比較二者基本吻合。實(shí)驗(yàn) 所用儀器應(yīng)用比較廣泛,價(jià)格相對(duì)便宜,應(yīng)用價(jià)值較高,可滿足各行業(yè)實(shí)驗(yàn)室對(duì)三聚 氰胺分析檢測(cè)的要求。 8 參考文獻(xiàn) 1brown c a, jeong k s, poppenga r h, etal1outbreaks ofrenalfailure associated with melamine and cyanuric acid in dogsand cats in 2004 and2007j1vet diagn invest, 2007,19:525- 5311. 2thomp son m e, lewin- smith m r, kalasinsky v f, et al1characterization of melamine - containing and calcium oxalatecrystalsin three dogs with suspected pet food-inducednephrotoxicosis j1vet pathol,2008,45:417-4261. 3cianciolore,bischoffk,ebeljg,etal1clinicopathologic,histologic,and toxicologic findings in 70 cats inadvertentlyexposed to pet food contaminated with melamine and cyanuric acidj1am vetmed assoc,2008,233:729-7371. 4劉海日,池曉峰,彭茵,等.高效液相色譜法快速測(cè)定乳制品中三聚氰胺j.中國(guó)衛(wèi)生檢驗(yàn)雜 志,2009,19(5):975-976. 5周建科,張明翠,宋歌,等.高效液相色譜法測(cè)定鴨肉中的三聚氰胺j.分析試驗(yàn)室, 2009,28(增刊):156-158. 6張微,楊秀飚,黃定芳,等.改進(jìn)乳制品中三聚氰胺液相色譜檢驗(yàn)方法的研究j.現(xiàn)代食品科 技,2009,25(7):846-847. 7侯升杰,王輝,丁明玉.反相高效液相色譜法同時(shí)分析三聚氰酸和三聚氰胺j.中國(guó)科學(xué)(b輯:化 學(xué)),