農(nóng)殘檢測(cè)中應(yīng)注意的問(wèn)題.ppt

農(nóng)殘檢測(cè)中應(yīng)注意的問(wèn)題,樣品制備,（1）樣本應(yīng)在冷凍狀態(tài)下運(yùn)送和保存，并避免在運(yùn)送期間解凍，樣品儲(chǔ)存一般需在20，樣品提取濃縮液儲(chǔ)存應(yīng)在05。通常動(dòng)植物樣品需攪拌或勻漿（籽粒需磨碎過(guò)40目篩），土壤樣本需去石塊等雜物，陰干后充分混勻，過(guò)40目篩。 樣品檢測(cè)前需混勻，可用粉碎機(jī)攪拌混勻，顆粒盡量小。 粉碎前應(yīng)保持半冷凍狀態(tài)，以免待測(cè)成份隨水分流失。,（2）提?。?用溶劑將待測(cè)樣品中農(nóng)藥溶解、分離出來(lái)的操作步驟。根據(jù)樣本和待測(cè)農(nóng)藥種類(lèi)，用不同溶劑和方法進(jìn)行提取。 原理：相似相溶。選擇與待測(cè)農(nóng)藥極性相似的溶劑，提取劑沸點(diǎn)應(yīng)4580，且不能與樣本發(fā)生作用，毒性低，價(jià)格便宜，必須能溶解待測(cè)農(nóng)藥。采用ECD時(shí)，不能選帶鹵素的溶劑。對(duì)含水量高的樣本，一般選與水相混溶的溶劑（乙腈、丙酮等），要求溶劑對(duì)樣本有較強(qiáng)的滲透能力，以便能將樣本中農(nóng)藥充分提取。當(dāng)單一溶劑效果不理想，可選擇2種或2種以上不同極性的溶劑，以不同比例配成混合提取劑，溶劑的級(jí)性由強(qiáng)到弱順序：水乙腈甲醇乙酸乙醇異丙醇丙酮正丁醇正戊醇乙酸乙酯二氯甲烷三氯甲烷苯甲苯二甲苯四氯化碳二硫化碳環(huán)己烷正己烷（石油醚）。,溶劑純化：目前我國(guó)市售的有機(jī)溶劑幾乎都需純化后方可使用。 方法：多采用重蒸餾的方法。純化后的溶劑檢驗(yàn)方法是將溶劑濃縮100倍，吸取1l注入氣相中無(wú)干擾峰即符合要求。也可采用中性氧化鋁、硅膠、活性炭等吸附劑制成層析柱純化。,提取方法：振蕩法：在盛有樣本的容器中加提取劑，振蕩一定時(shí)間。 均質(zhì)法：用均質(zhì)機(jī)對(duì)加提取劑的樣本快速均質(zhì)?？焖?、簡(jiǎn)便。 超聲法：樣本加入提取劑，以超聲波提取。 索氏提取：提取效果好，但時(shí)間長(zhǎng)，干擾物多。多用于動(dòng)物樣本。 快速混勻法：適用于液體樣品。,一般經(jīng)三次提取，第一次約提取70-90%，第二次和第三次提取殘?jiān)械氖Ｓ嗖糠?。無(wú)水硫酸鈉和氯化鈉的鹽析作用能提高待測(cè)組分的回收率。干性樣品（含水量10%）應(yīng)加入適量水分再提取，采用乙酸乙酯提取含水量高的樣本中農(nóng)藥時(shí)需加一定量的無(wú)水硫酸鈉，提取濃縮菜汁或含糖量高的樣本中農(nóng)藥時(shí)需加適量水，提取干燥土壤中農(nóng)藥時(shí)也需加適量水都能提高提取效果。,（3）凈化：將樣本中待測(cè)農(nóng)藥與干擾雜質(zhì)分離的步驟。原則是盡量完全除掉干擾雜質(zhì)，而又使待測(cè)農(nóng)藥損失盡量少。 液液分配：乙腈正己烷，丙酮正己烷，丙酮石油醚。 吸附柱層析：弗羅里硅土、三氧化二鋁、硅膠、活性炭、硅藻土等。存于干燥器中。 固相萃取：四步：固定相活化、樣品上柱、洗滌和洗脫。,（4）濃縮： 氮吹儀 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀：水浴溫度，蒸發(fā)速度，不能蒸干。,（5）定容：一定要準(zhǔn)確。 方法評(píng)價(jià)指標(biāo)：靈敏度（以方法最低檢出濃度表示），準(zhǔn)確度（添加回收率表示），精密度（標(biāo)準(zhǔn)偏差）。 精密度：指用某種方法重復(fù)測(cè)定同一均質(zhì)樣品所得測(cè)定值的彼此接近程度，表示分析結(jié)果的重復(fù)性。常用標(biāo)準(zhǔn)差（SD）或相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）表示。,精密度重復(fù)性 重現(xiàn)性 重復(fù)性：短期內(nèi)相同實(shí)驗(yàn)條件下（實(shí)驗(yàn)室、操作者、儀器型號(hào)和試劑批號(hào)），對(duì)同一樣品測(cè)定結(jié)果的精密度。 重現(xiàn)性：指不同實(shí)驗(yàn)條件下使用某種分析方法對(duì)同一樣品各個(gè)獨(dú)立測(cè)定值間的精密度。 （重現(xiàn)性重復(fù)性）,精密度與待側(cè)物的濃度關(guān)系： 濃度（g/kg） CV（%） 1 35 110 30 10100 20 100 15 對(duì)于定量方法，重復(fù)性精密度應(yīng)控制在15%為宜，最高不超過(guò)20%；重現(xiàn)性精密度可在重復(fù)性精密度基礎(chǔ)上加倍。,準(zhǔn)確度：指測(cè)定值（平均值）與真實(shí)值的接近程度，表示分析結(jié)果的正確性。通常用添加回收率表示。 回收率：在空白樣本中添加一定量待測(cè)農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)樣品，制成已知含量的樣本，然后按擬定的方法對(duì)樣本進(jìn)行提取、凈化和測(cè)定。所得到的實(shí)測(cè)值與已知值比較，實(shí)測(cè)值與已知值的百分率即為方法添加回收率。添加回收率應(yīng)以接近100%為最佳。但是由于試樣中種類(lèi)和農(nóng)藥品種多，以及雜質(zhì)干擾、操作誤差等原因。要求回收率為70110%，平均回收率80%即符合要求。,加標(biāo)量原則上應(yīng)以接近待測(cè)試樣中農(nóng)藥含量為宜，但由于待測(cè)樣本中農(nóng)藥殘留量未知，因此一般以該試樣的農(nóng)藥高殘留限量作為參照，一般以規(guī)定的MRL值接近的濃度作為中檔添加濃度，低于和高于MRL值一個(gè)數(shù)量級(jí)的濃度作為低檔和高檔添加濃度。 回收率=（測(cè)定值空白值）/添加量（如何添加標(biāo)準(zhǔn)） 定量方法回收率范圍：70%110%，平均回收率應(yīng)80%以上。實(shí)際工作中根據(jù)待測(cè)物的濃度范圍，只要精密度符合要求60%以上回收率也可以接受。但是回收率偏低會(huì)影響靈敏度，在殘留分析報(bào)告中一般不要求用回收率對(duì)測(cè)定值進(jìn)行校正。,參考數(shù)據(jù)： 檢測(cè)限（LOD limit of detection）：指分析方法能夠從樣品背景信號(hào)中檢測(cè)出待測(cè)物質(zhì)存在時(shí)所需最低濃度。LOD反映了分析方法整體的靈敏度效能指標(biāo)。一般對(duì)分析方法在LOD水平的定量可信性（如精密度、回收率）不作要求，一般要求殘留分析方法LOD0.1MRL LOD=B+2SD或B+3SD 影響LOD的因素：檢測(cè)器靈敏度、噪聲水平、基質(zhì)干擾（凈化效果）、樣品量和濃縮倍數(shù)，宜注重提高凈化效果，而不應(yīng)完全依據(jù)增加進(jìn)樣量或濃縮倍數(shù)來(lái)降低檢測(cè)限。,定量限（LOQ limit of quantitation）：指分析方法能夠?qū)悠分写郎y(cè)物進(jìn)行定量測(cè)定的最低濃度。用于定量方法的驗(yàn)證。 一般要求其CV20%,回收率70%，方法LOQ0.2MRL，LOQ=B+10SD。,線性范圍：待測(cè)物濃度與儀器的響應(yīng)信號(hào)呈線性關(guān)系并且能滿足定量要求的濃度范圍，用濃度最小值和最大值或二者之比表示。,定性定量方法,定性法： 1.保留值定性：樣品中組分保留值（保留時(shí)間、保留體積等）與已知物質(zhì)在 相同條件下測(cè)得保留值比較，如果數(shù)值在實(shí)驗(yàn)容許的誤差范圍內(nèi)，就可以推定此組分可能是該物質(zhì)。要求載氣流速、載氣溫度和柱溫一定恒定，否則其微小的波動(dòng)和變化都會(huì)改變保留值影響定性?？刹捎眉訕?biāo)法（避免載氣流速變化影響）和相對(duì)保留值定性法（柱溫和固定相一定時(shí)，相對(duì)保留值為定值，可作為定性較可靠參數(shù)，常用雙柱定性，兩個(gè)純化合物在性能不同的兩根以上色譜柱上有完全相同保留值，則這兩個(gè)純化合物基本可以認(rèn)定為同一化合物。使用柱子越多，可信度越高）。,2.MS定性： GC/MS法可給出組分分子量和結(jié)構(gòu)信息，以此可對(duì)組分進(jìn)行確證，是殘留分析最有效的定性方法。僅用質(zhì)譜碎片對(duì)同分異構(gòu)體等判斷較困難。一般采用色譜保留值與質(zhì)譜相結(jié)合的方法定性。 GC/MS能通過(guò)總離子流檢測(cè)得到色譜峰，對(duì)每個(gè)色譜峰進(jìn)行掃描，用解析法或標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)譜圖對(duì)照法定性。還可用質(zhì)量碎片法選擇高峰度特征性質(zhì)量峰進(jìn)行選擇離子檢測(cè)，為篩選分析提供更有效的定性或定量信息。 GC/MS還可以方便的判定色譜峰內(nèi)未分離開(kāi)的組分。,3.選擇性檢測(cè)器定性：選擇性檢測(cè)器只對(duì) 某類(lèi)或某幾類(lèi)化合物有信號(hào)，可用來(lái)判定 被測(cè)物是否此類(lèi)化合物，如FID，僅對(duì)含碳 化合物響應(yīng)；ECD，只對(duì)含強(qiáng)電負(fù)性基團(tuán) 有響應(yīng)。兩個(gè)或兩個(gè)以上檢測(cè)器串聯(lián)或并 聯(lián)還可以得到更多定性信息。,定量法： （1）外標(biāo)法：經(jīng)標(biāo)準(zhǔn)曲線定量（經(jīng)過(guò)原點(diǎn)），46個(gè)點(diǎn)，也可單點(diǎn)校正，但必須保證組分峰面積與標(biāo)樣峰面積相近，且色譜條件及進(jìn)樣量一致。若有系統(tǒng)誤差，則單點(diǎn)校正誤差較大。 優(yōu)點(diǎn)：直接定量，適合大批量樣品。標(biāo)線繪制后可使用一段時(shí)間，在此段時(shí)間內(nèi)可經(jīng)常用一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)樣品對(duì)曲線進(jìn)行校正，以確定其是否可以使用。 缺點(diǎn)：每次樣品分析色譜條件（柱溫、檢測(cè)器狀態(tài)、進(jìn)樣量、柱效果）很難完全相同，易出誤差。另外，樣品前處理中欲測(cè)組分變化無(wú)法補(bǔ)償。,（2）內(nèi)標(biāo)法：是在要測(cè)定的樣品中加入已知量的已知化合物，作為測(cè)定的比較標(biāo)準(zhǔn)，用待測(cè)物峰面積和內(nèi)標(biāo)物峰面積比值進(jìn)一步求得待測(cè)物組分濃度。 優(yōu)點(diǎn)：進(jìn)樣量變化，色譜條件微小變化對(duì)結(jié)果影響不大，前處理前加內(nèi)標(biāo)，可部分補(bǔ)償欲測(cè)組分在前處理時(shí)的損失。 缺點(diǎn)：內(nèi)標(biāo)物選擇困難，稱量要準(zhǔn)確，操作較麻煩。,（3）影響定量的因素 樣品制備：待測(cè)組分富集，凈化效果（影響積分、回收率），制備好的樣品儲(chǔ)存條件（溫度、濕度、避光、分解、氧化或其他化學(xué)反應(yīng)）。 樣品制備好后應(yīng)盡可能立即檢測(cè)。 進(jìn)樣技術(shù)：進(jìn)樣量主要影響外標(biāo)法，因素有二：一是進(jìn)樣裝置準(zhǔn)確度和精度；二是操作人員進(jìn)樣技術(shù)和熟練程度。進(jìn)樣時(shí)，插針?biāo)俣取⑦M(jìn)針位置、深度和熟練程度，影響進(jìn)樣準(zhǔn)確性和重復(fù)性。對(duì)沸程寬的樣品，進(jìn)針快，拔針慢，防止難揮發(fā)組分在拔針時(shí)未完全進(jìn)入柱子，還要注意橡膠墊漏氣問(wèn)題，引起樣品損失。,色譜條件選擇：柱溫變化影響保留時(shí)間和峰高，且對(duì)峰高的影響隨分子量增加而加大，即柱溫變化對(duì)各組分峰高影響是不等效的。而對(duì)峰面積影響小，故氣相中多采用峰面積定量。積分參數(shù)設(shè)置很重要。對(duì)定量結(jié)果影響很大。 總的原則是盡可能保持每次進(jìn)樣時(shí)色譜條件一致。 檢測(cè)器特性：檢測(cè)器穩(wěn)定性和線形范圍直接影響色譜定量分析結(jié)果的準(zhǔn)確性和重復(fù)性，因此應(yīng)盡可能維護(hù)好檢測(cè)器，保持其工作穩(wěn)定性。 分離度：待測(cè)物質(zhì)的色譜峰分離度直接影響到峰高和峰面積的積分，從而影響到待測(cè)物質(zhì)的準(zhǔn)確定量。,方法建立步驟,1.文獻(xiàn)檢索： 2.建立檢測(cè)方法： 3.建立樣品處理方法： 4.標(biāo)準(zhǔn)曲線： 5.穩(wěn)