DB51T 1367-2011 桑蠶中腸型膿病診斷技術(shù)規(guī)程.doc

ICS65.020.20B47備案號：32711-2012DB51四川省地方標準DB 51/ T13672011桑蠶中腸型膿病診斷技術(shù)規(guī)程2011 - 12 - 28發(fā)布2012 - 03 - 01實施四川省質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局發(fā)布DB51/ T13672011目次前言II1范圍12規(guī)范性引用文件13術(shù)語和定義14試劑15儀器、設(shè)備16診斷1前言本標準由四川省農(nóng)業(yè)廳提出并歸口。本標準由四川省質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局發(fā)布。本標準起草單位：四川省蠶業(yè)管理總站、樂山市蠶種質(zhì)量檢疫檢驗站、內(nèi)江市蠶種質(zhì)量監(jiān)督檢驗站。本標準主要起草人：吳鋼、張學清、馬露蕓、顏建平、何東。3桑蠶中腸型膿病診斷技術(shù)規(guī)程1 范圍本標準規(guī)定了桑蠶中腸型膿病診斷的技術(shù)要求。本標準適用于四川省桑蠶中腸型膿病診斷。2 規(guī)范性引用文件下列文件對于本文件的應用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅所注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T 6682 分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法DB/T 1207 桑蠶血液型膿病診斷技術(shù)規(guī)程3 術(shù)語和定義下列術(shù)語和定義適用于本文件。3.1桑蠶中腸型膿病(質(zhì)型多角體病) midgut polyhedrosis桑蠶中腸型膿病是質(zhì)型多角體病毒寄生桑蠶中腸圓筒狀細胞，并在細胞質(zhì)內(nèi)形成多角體的蠶病，又稱質(zhì)型多角體病。4 試劑4.1 鹽酸溶液c(HCl)=1mol/L。4.2 分析用水按GB/T 6682規(guī)定執(zhí)行。5 儀器、設(shè)備普通光學顯微鏡；相差顯微鏡；冰箱；載玻片；蓋玻片；乳缽；乳棒；解剖剪；鑷子；吸管；量筒；燒杯；樣品袋；凍存管（1.8 mL、5 mL）。6 診斷6.1 肉眼診斷6.1.1 外觀觀察肉眼觀察蠶在幼蟲階段是否具有下列癥狀。a) 群體癥狀：群體發(fā)育顯著不齊。b) 個體癥狀：病蠶體軀瘦小，食桑與行動不活潑，常呆伏于蠶座周邊或蠶沙中；大蠶病蠶體色灰白，胸部半透明；縮小、吐液及下??；嚴重時排便伴乳白色粘液。6.1.2 解剖觀察用手擠壓具有上述病癥的病蠶尾部，觀察是否有乳白色粘液排出；用解剖剪從背中線剪開，觀察中腸后部是否有乳白色皺褶。6.1.3 初步診斷幼蟲階段的蠶出現(xiàn)6.1.1表述的癥狀，擠壓病蠶尾部有乳白色粘液排出，解剖觀察中腸后部有乳白色皺褶，初步診斷為中腸型膿病。6.2 顯微鏡診斷6.2.1 樣品采集采集6.1.1表述的個體癥狀病蠶，置于樣品袋或凍存管中。6.2.2 樣品處置6.2.2.1 樣品保存樣品隨機分成2份，一份作檢樣，另一份作備樣。樣品置于0 4 冰箱中，保存期30 d60 d。6.2.2.2 樣品制備擠壓病蠶胸部與尾部，擠出排泄液和腸液，涂抹于載玻片上，制成腸液玻片樣本。剪取病蠶中腸后部小塊組織，置于載玻片上，滴入1滴3滴蒸餾水，輕壓，制成中腸組織玻片樣本。6.2.3 顯微鏡檢查6.2.3.1 直接檢查法將6.2.2.2鏡檢標本置于顯微鏡（1540倍或1640倍）下觀察有無多角體，每個樣本觀察不少于20個視野。6.2.3.2 多角體與類似顆粒鑒別用鹽酸溶解法。取病蠶中腸組織，用蒸餾水清洗后置于乳缽中磨碎，將磨碎液涂抹于載玻片上，陰干，用吸管滴1滴3滴鹽酸溶液c(HCl)=1 mol/L；室溫下放置3 min5 min，用蒸餾水清洗去酸液，鏡檢（1540倍或1640倍）。類似顆粒溶解消失，多角體存在。6.2.3.3 核型多角體和質(zhì)型多角體鑒別用焦寧甲基綠染色法。參見DB/T 1207 桑蠶血液型膿病診斷技術(shù)規(guī)程6.2.3.3。6.2.4 判定鏡檢發(fā)現(xiàn)有多角體存在，呈六角形、不規(guī)則四角形及三