輸血前相容性檢測閻.ppt

輸血前相容性檢測,教學目的和要求,掌握鹽水法、抗人球蛋白法、聚凝胺法的原理、方法及意義。 熟悉微柱凝膠法原理、方法。 了解酶法、白蛋白介質法、Liss法的原理和方法。 熟悉ABO/Rh血型鑒定方法及影響因素 熟悉抗體篩選原理和意義 熟悉交叉配血方法及意義 了解抗體鑒定原理和意義,血型鑒定,抗體篩選及鑒定,交叉配血,紅細胞抗原抗體檢測技術,紅細胞抗原抗體檢測技術應用,微柱凝膠免疫學技術,聚凝胺試驗,酶介質凝集試驗,鹽水介質凝集試驗,抗人球蛋白試驗,增強技術,鹽水介質凝集試驗,懸浮于鹽水介質中的紅細胞與相應抗體分子結合，交叉聯(lián)結形成肉眼可見的凝集。 主要檢測IgM類抗體（ABO系統(tǒng)、抗E）。 抗A抗B特異性IgG類抗體有時可直接凝集懸浮于鹽水中的紅細胞，與紅細胞表面抗原位點數(shù)目和抗原決定簇位置有關。,鹽水介質凝集試驗,方法：玻片法-便于顯微鏡觀察結果 試管法-適用于不同溫度、便于洗滌 反應溫度：422 臨床意義：鹽水凝集試驗陽性，并在37也有活性的抗體有意義，這些抗體通常能用其他方法證明。室溫有活性，37無活性者臨床意義不大。,試驗記錄 4+（+）：一個大凝集塊，背景透明，無游離細胞 3+（+）：數(shù)個大凝集塊，背景透明，無游離細胞 2+（+）：許多小凝集塊，背景稍混濁，有游離細胞 1+（+）：細小的凝集塊，背景渾濁 W+（）：極細小凝集塊，要用顯微鏡觀察結果 0（-）：無凝集，無溶血，細胞呈游離散在狀態(tài) PH：部分溶血 H：完全溶血,Weak reactions often difficult to interpret. Can also be downgraded due to shaking the completed test.,Conventional Testing.,鹽水介質凝集試驗,結果分析：陽性-凝集或溶血 陰性-無凝集或溶血 先觀察有無溶血、再觀察有無凝集 注意事項：細胞濃度25%（嚴格按說明 書操作）、血清與細胞比例、反應溫 度、弱凝集分析 優(yōu)點：簡便、快捷、直觀。 缺點：不能發(fā)現(xiàn)不完全抗體。,微柱凝膠免疫學技術,聚凝胺試驗,酶介質凝集試驗,鹽水介質凝集試驗,抗人球蛋白試驗,增強技術,抗人球蛋白試驗,抗球蛋白試驗是1945年由Coombs等人建立的，又稱Coombs試驗。抗球蛋白試驗的建立在血型血清學上有著非常重要的意義。 分為直接抗球蛋白試驗（DAT）和間接抗球蛋白試驗（IAT）。,抗人球蛋白試驗原理,IgG類血型抗體（主要是免疫抗體，如Rh血型抗體）分子量小，與紅細胞相應抗原結合后，在鹽水介質中不出現(xiàn)肉眼可見的凝集反應，稱之為不完全抗體，但在加入抗-IgG后，以其搭橋作用則可出現(xiàn)凝集反應。 補體成分在體內被紅細胞抗原抗體復合物激活以后，結合在紅細胞表面。在體外含補體的多克隆抗體，或抗C3b、抗C3d等單特異性抗體與補體致敏的紅細胞反應，使之凝集也稱為抗球蛋白試驗。,抗人球蛋白試劑,多特異性抗球蛋白試劑：應含有抗IgG和抗-C3d。 單特異性抗球蛋白試劑：抗IgG、抗IgM、抗IgA、抗C3、C4的片段。,直接抗人球蛋白試驗,DAT是用來檢測體內紅細胞致敏情況，尤其是IgG和C3d包被的紅細胞。 用于： HDN和自身免疫溶血性貧血的診斷 紅細胞被藥物抗體致敏的檢查 急性和遲發(fā)性溶血性輸血反應的檢查,間接抗人球蛋白試驗,用于測定在體外能引起紅細胞致敏的抗體。 用不完全抗體測定紅細胞血型，如Rh血型。 交叉配血。,結果分析-假陽性,用免疫兔或羊制備的抗人球蛋白含有種間抗體。 紅細胞在用鹽水洗滌時已有凝集。 IAT試驗中所用紅細胞本身DAT陽性。 不抗凝標本在冷環(huán)境里經過一段時間的保存后，自身冷抗體發(fā)生作用，激活補體，補體成分結合在紅細胞上，用多特異性抗球蛋白試劑會發(fā)生假陽性。 離心過度，紅細胞壓積過緊，不易充分搖散,結果分析-假陰性,致敏后的紅細胞洗滌不充分,殘留的球蛋白中和了試劑中的抗球蛋白，造成假陰性。 操作過程不連續(xù)，時間過長，結合在紅細胞上的抗體解離。 紅細胞、血清和抗人球蛋白試劑保存不當都可能發(fā)生活性減弱或喪失。 紅細胞過多，反應減弱；紅細胞過少，看結果不準確，都影響結果。 試劑中抗人球蛋白濃度過大，有前帶現(xiàn)象。 孵育時間和溫度不當，會使反應結果減弱或變?yōu)榧訇幮浴Ｓ^察結果時過度搖動試管，搖散細小凝塊。,注意事項,每次試驗要設有陰性和陽性對照。 陰性結果要加入一滴IgG致敏紅細胞 實驗器材清潔。 注意抗原抗體比例、孵育時間、溫度等條件。 嚴格按照實驗方法操作。 排除自身抗體干擾。,微柱凝膠免疫學技術,聚凝胺試驗,酶介質凝集試驗,鹽水介質凝集試驗,抗人球蛋白試驗,增強技術,抗人球蛋白試驗,微柱凝膠試驗,原理：微柱凝膠技術是用特定的化學物質做成微型凝膠柱，柱的上端有一個加樣反應室。抗原抗體反應后離心，凝膠柱起過篩作用，紅細胞凝集塊不能通過凝膠的間隙而留在凝膠的上部，未凝集的紅細胞通過凝膠的間隙，沉積到底部。,微柱凝膠反應本質：凝集反應,紅細胞抗原與相應抗體反應出現(xiàn)凝集。根據(jù)紅細胞在膠質介質中的位置肉眼判斷。,結果判斷標準,結果判定標準,微柱凝膠試驗注意事項,嚴格按照試劑說明書操作。 獻血者DAT陽性，干擾結果判讀。 患者自身抗體干擾。 注意加樣順序。 配制細胞濃度準確。,微柱凝膠免疫學技術,聚凝胺試驗,酶介質凝集試驗,抗人球蛋白試驗,增強技術,抗人球蛋白試驗,鹽水介質凝集試驗,聚凝胺試驗,原理：聚凝胺是一種多價陽離子聚合物，在溶液中有多個陽離子基團，能中和紅細胞表面的負電荷，并籍助正負電荷的作用，引起紅細胞的非特異性凝集。 當紅細胞與血清在低離子介質中孵育后，IgG抗體與紅細胞上相應的抗原結合，在聚凝胺的作用下發(fā)生凝聚。凝集和凝聚在表面上不能區(qū)分，再加入枸櫞酸鈉重懸液，枸櫞酸根的負電荷與聚凝胺上的正電荷中和，非特異性凝集現(xiàn)象消失，而真正的凝集不會消失。,+ + +聚凝胺,+,無凝集,+,有凝集反應,- - - - - 枸櫞酸納- - - - -,聚凝胺試驗,優(yōu)點：簡便快捷，可用于某些不完全抗體檢測。 缺點：對無唾液酸的紅細胞無作用， 例如多凝集紅細胞。 可增強自身抗體或冷凝集素干擾。 注意事項：抗原抗體比例適當 聚凝胺（1液）去除干凈。,微柱凝膠免疫學技術,聚凝胺試驗,酶介質凝集試驗,鹽水介質凝集試驗,抗人球蛋白試驗,增強技術,抗人球蛋白試驗,酶介質凝集試驗,原理：紅細胞表面有豐富的唾液酸，帶有負電荷，使紅細胞相互排斥。蛋白水解酶能消化破壞這種唾液酸，減少紅細胞表面的負電荷以及紅細胞之間的排斥力，縮短了紅細胞之間的距離，使IgG分子能與有相應抗原的紅細胞產生凝集。,酶介質凝集試驗,常用的酶：菠蘿酶、木瓜酶、胰酶、無花果酶。 方法：期法-酶液直接加入血清和細胞的混合物中。 期法-用酶處理細胞再與血清 進行反應。 兩種方法比較：期法 操作方便 期法 敏感,酶介質凝集試驗,優(yōu)點： 可以增強一些抗原抗體系統(tǒng)的反應活性 Rh和Kidd系統(tǒng)最明顯 缺點： 會破壞一些抗原的結構(M、N、Fya、Fyb) 酶液批次不同，都需標化最適孵育時間。 操作繁復，少數(shù)人對酶液過敏。,微柱凝膠免疫學技術,聚凝胺試驗,酶介質凝集試驗,鹽水介質凝集試驗,抗人球蛋白試驗,增強技術,抗人球蛋白試驗,增強技術,白蛋白增強凝集法 原理：白蛋白能提高紅細胞懸浮液中的介電常數(shù)，從而降低zete電位，縮小了細胞間距離，增加細胞與細胞的接觸面。 應用：血型鑒定和交叉配血 結果判定：出現(xiàn)凝集和溶血現(xiàn)象為陽性結果。,增強技術,低離子強度鹽溶液（Liss）法 原理：在凝集反應第一階段，若降低介質的離子強度，就會減少紅細胞周圍的陽離子云，促進帶正電荷的IgG與帶負電荷的紅細胞發(fā)生反應。 注意事項：不能增加額外血清量 延長孵育時間會使某些抗原 變質，如Fya。,抗體篩選及鑒定,交叉配血,紅細胞抗原抗體檢測技術,紅細胞抗原抗體檢測技術應用,紅細胞抗原抗體檢測技術,血型鑒定,ABO血型鑒定,方法：常用室溫鹽水技術檢測紅細胞上 的血型抗原，以及血清中存在的血型 抗體。結果判定參見凝集試驗。 ABO血型鑒定的常規(guī)試驗： 1、正定型：用已知抗體的標準血清檢查紅細胞上未知的抗原。常規(guī)用抗A抗B 2、反定型：用已知血型的標準紅細胞檢查血清中未知的抗體。常規(guī)用A、B和O三種紅細胞。,正反定型的意義,準確的血型判定利于指導臨床用血 發(fā)現(xiàn)亞型 抗原強度的改變與疾病相關 新抗原出現(xiàn)與疾病相關 排除假陰性或假陽性結果干擾,ABO血型反應格局,血型 正定型 反定型 抗A 抗B Ac Bc Oc A + - - + - B - + + - - O - - + + - AB + + - - -,Cells v Serum,Serum v Cells,ABO亞型鑒定,亞型通常表現(xiàn)為凝集反應強度弱，或正、反定型不符 增加試劑：抗A1-區(qū)分A1和A2 抗H-有較強的H抗原性 抗A,B-與Ax的反應強度增強 增加方法：吸收放散試驗 唾液中血型物質鑒定 PCR方法,Rh血型鑒定,紅細胞Rh表型可用特殊的具有抗D、C、c、E、和e抗血清檢測來鑒定。但常規(guī)只用抗D血清檢查有無D抗原 D抗原陽性者為Rh陽性，否則為陰性,Rh血型鑒定方法, Rh抗體屬IgG類，一般不能在鹽水介質中與紅細胞發(fā)生凝集，因此須采用以下鑒定方法（其中一種）： 1、酶介質法 2、抗人球蛋白法+增強試驗 （Liss/白蛋白技術） RhD檢測常用鹽水法。,血型鑒定,交叉配血,紅細胞抗原抗體檢測技術,紅細胞抗原抗體檢測技術應用,紅細胞抗原抗體檢測技術,抗體篩選及鑒定,抗體篩選和鑒定,有臨床意義的抗體： 能引起新生兒溶血病、引發(fā)溶血性輸血反 應，或者使輸入的紅細胞存活期減少，在 37有反應的同種抗體。 意外抗體： 抗A，抗B以外的抗體。,目的和原則,目的：對受血者的血清或血漿，應常規(guī)作抗體篩選實驗，以發(fā) 現(xiàn)有臨床意義的意外抗體。 原則：讓受檢血清或血漿與特殊的試劑紅細胞（篩選細胞）起反應，以發(fā)現(xiàn)37有反應活性的抗體。,對血清中抗體檢測的要求,選擇足夠敏感、高特異性的技術檢測出受檢者血清中低水平的有臨床意義的抗體。 2. 要高度注意，即使受血者血清中的抗體對輸入的不相容紅細胞抗原呈弱反應，也能夠發(fā)生快速回憶反應，抗體迅速產生，破壞紅細胞。,對試劑紅細胞的要求,不能將多人份紅細胞混合，一定要用2-3人份的試劑紅細胞，以避免紅細胞混合后，對弱抗原紅細胞的稀釋。 美國FDA對注冊和批準作為商品供應的用作不規(guī)則抗體篩檢的試劑紅細胞的要求為必須表達：D、C、E、c、e、M、N、S、s，Pl、Lea、Leb、K、k、Fya、Fyb，JKa、JKb。,臨床重要的人血清紅細胞抗體,抗體篩選方法,鹽水凝集法 抗人球蛋白法 聚凝胺法 微柱凝膠法 LISS抗球蛋白法,結果的判讀和解釋,溶血和血液凝集意義相同，都是抗原抗體反應陽性結果。先觀察有無溶血，后觀察有無凝集。 記錄結果，并與以前結果對照。 抗體篩選試驗不一定能檢出所有有臨床意義的抗體。一些低頻抗原的抗體或有劑量效應的抗體，可能被漏檢。,抗體鑒定,通過篩選，抗體一經檢出，應進一步 作抗體鑒定試驗，以確定其特異性。 自身細胞檢查-排除非特異性 2.譜紅細胞檢查,譜紅細胞： 一般是由8-16人份的已知血型表現(xiàn)型O型紅細胞組成，具有各種不同的抗原成分，根據(jù)譜紅細胞的反應格局一般可以鑒定常見的抗體。 方法： 在鹽水法基礎上、靈活應用白蛋白介質法、酶技術及抗人球蛋白實驗。,血型鑒定,抗體篩選及鑒定,交叉配血,紅細胞抗原抗體檢測技術,紅細胞抗原抗體檢測技術應用,紅細胞抗原抗體檢測技術,交叉配血,主側：受血者血清+供者紅細胞 檢測對供者紅細胞起反應的抗體 次側：受血者紅細胞+供者血清 檢測對受者紅細胞起反應的抗體 自身對照：受血者紅細胞+受血者血清 排除自身抗體、直接抗球蛋白試驗陽性及紅細 胞緡錢狀凝集干擾,接收申請單和血標本,核對無誤 （如有錯誤與醫(yī)生/護士聯(lián)系）,進行交叉配血,相合 結果輸入微機,不相合,打印發(fā)血單,血液中心,交叉配血工作流程,注意事項,用于交叉配血的標本應該是新獲得的（3天之內）；供者血標本應剛從血袋上剪下。 不能用玻片法作交叉配血。 必要時用生理鹽水洗滌細胞。 紅細胞濃度一般是2-5%。 嚴格按照試劑說明書操作。,抗篩和配血結果分析,紅細胞方面問題處理,血清方面問題處理,常見問題處理,紅細胞抗原抗體檢測技術,抗體篩選和交叉配血結果分析,抗體篩選陰性，交叉配血相合 見于臨床上絕大多數(shù)標本。 抗體篩選陰性，血清中仍有可能含有臨床有意義的抗體（方法或篩選細胞） 鹽水介質試驗作配血可能漏檢有意義的IgG類抗體。 只有用非鹽水介質交叉配血，才能保證待輸?shù)难褪苷呦嗪稀?抗體篩選和交叉配血結果分析,抗體篩選陰性，鹽水直接離心交叉配血不合 ABO血型錯誤。 抗A1存在于A2或A2B，在直接鹽水交叉配血實驗中，抗A1能引起大部分A型紅細胞不相合。 存在室溫反應的同種抗體，如抗M。,抗體篩選和交叉配血結果分析,抗體篩選陰性，抗人球蛋白交叉配血不合 獻血者紅細胞DAT陽性（約1/10000） 患者抗體弱，獻血者紅細胞抗原性很強，表現(xiàn)為抗人球蛋白試驗陽性。 針對低頻抗原的抗體，如Diego系統(tǒng)抗-Wra。,抗體篩選和交叉配血結果分析,抗體篩選陽性，交叉配血不合 同種抗體、自身抗體、試劑問題、緡錢狀凝集，應在輸血前查明原因。 必須進行包括抗人球蛋白試驗在內的交叉配血。 緊急情況下無法找到血清學配合的血液時，輸血科人員應告之主管醫(yī)生此種情況下輸血存在的可能危險。,同種抗體的處理對策,交叉配合相合與否取決于涉及抗原的頻率。 鑒定抗體的特異性后，先用抗血清篩選相應抗原陰性者，再與受者血清作交叉配血。用受血者血清還是試劑抗血清篩選血液，應根據(jù)病人的血清反應強度，能得到的受者血清量以及抗血清的來源和費用等決定。 醫(yī)院庫存血中難以找到配合血時，求助血液中心。,自身抗體,冷自身抗體干擾血型鑒定、抗體篩選和鑒定以及交叉配血試驗，結果判讀困難。最常見的特異性是抗-I。 溫反應自身抗體很少引起ABO定型困難，但可引起Rh定型困難。 注意：確認有無同種抗體