自動(dòng)生化分析儀分析技術(shù)人衛(wèi).ppt

衛(wèi)生部“十二五” 規(guī)劃教材 全國(guó)高等醫(yī)藥教材建設(shè)研究會(huì)規(guī)劃教材,南方醫(yī)科大學(xué) 曾方銀 中南大學(xué)湘雅醫(yī)學(xué)院 唐愛(ài)國(guó),學(xué)習(xí)要求,了解自動(dòng)生化分析儀的分類(lèi)及系統(tǒng)完整性的要求,熟悉自動(dòng)生化分析儀的分析原理、分析技術(shù),掌握自動(dòng)生化分析儀的日常操作、性能檢定,第一節(jié) 自動(dòng)生化分析儀概述,自動(dòng)生化分析儀的發(fā)展 分立式自動(dòng)生化分析儀的分析原理 干式自動(dòng)生化分析儀的分析原理 全自動(dòng)化實(shí)驗(yàn)室構(gòu)建,一、自動(dòng)生化分析儀的發(fā)展,按照反應(yīng)裝置：連續(xù)流動(dòng)式、離心式、分立式和干片式 按照測(cè)定項(xiàng)目：?jiǎn)瓮ǖ篮投嗤ǖ?按照自動(dòng)化程度：全自動(dòng)和半自動(dòng) 按照儀器的復(fù)雜程度：小型、中型、大型及超大型 按照程序可否更改：程序固定和程序可變型,自動(dòng)生化分析儀的分類(lèi),二、分立式自動(dòng)生化分析儀,順序分析示意圖,分立式自動(dòng)生化分析儀的基本結(jié)構(gòu),樣品處理系統(tǒng),樣品架與試劑盤(pán)：圓盤(pán)狀、傳送條帶狀、軌道式及鏈?zhǔn)竭M(jìn)樣 加樣裝置：定量吸量器與加樣針 混勻裝置：攪拌混勻與超聲混勻,檢測(cè)系統(tǒng),1.光路系統(tǒng),前分光光路,后分光光路,分光裝置,比色杯,硬質(zhì)石英玻璃 硬質(zhì)玻璃 丙烯酸塑料 光徑0.51cm，自動(dòng)沖洗備用,恒溫裝置,干式（空氣浴式） 水浴循環(huán)式 恒溫液循環(huán)間接加熱式,工作原理 多層薄膜固相試劑技術(shù) 測(cè)定方法：反射光度法、差示電位法,干化學(xué)式自動(dòng)生化分析儀,干化學(xué)式自動(dòng)生化分析儀,分類(lèi)： 反射光度法技術(shù)分析儀 膠片涂層技術(shù)分析儀 袋式分析儀,干片試劑結(jié)構(gòu)示意圖,全自動(dòng)化實(shí)驗(yàn)室構(gòu)建,前處理系統(tǒng) 標(biāo)本運(yùn)送系統(tǒng) 樣本分析系統(tǒng) 實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)/結(jié)果處理系統(tǒng)（包括LIS系統(tǒng)） 樣本保存系統(tǒng)和計(jì)算機(jī)硬件,一、生化分析儀常用分析方法 終點(diǎn)分析法（平衡法） 固定時(shí)間法 連續(xù)監(jiān)測(cè)法 比濁測(cè)定法,第二節(jié) 自動(dòng)生化分析儀的分析技術(shù),一點(diǎn)終點(diǎn)法,(一) 終點(diǎn)分析法（平衡法）,兩點(diǎn)終點(diǎn)法,A,A1,A2,(二) 固定時(shí)間法,（三）連續(xù)監(jiān)測(cè)法,(一) 波長(zhǎng)的選擇原則 待測(cè)物質(zhì)在該波長(zhǎng)下的光吸收最大 其吸收峰宜較寬而鈍 常見(jiàn)干擾物在該波長(zhǎng)下的光吸收最小,二、分析參數(shù)設(shè)置,單波長(zhǎng) 雙波長(zhǎng) 多波長(zhǎng),波長(zhǎng)的選擇,有25、30、37三種溫度 一般固定為37,溫度的選擇,最小反應(yīng)液總體積為80500l SVF=Vs/Vt SVF越大，線性范圍越窄，但靈敏度越高 隨意改變SVF不盡可靠，尤其是酶活性測(cè)定,樣品量與試劑量,試劑的選擇,單試劑法 雙試劑法,其他參數(shù)設(shè)置,測(cè)定方法的選擇 分析時(shí)間的選擇 線性范圍的選擇 校正方法的選擇：一點(diǎn)、兩點(diǎn)、多點(diǎn),三、生化分析儀的校準(zhǔn),校準(zhǔn)品：配套校準(zhǔn)品、第三方校準(zhǔn)品 酶活性測(cè)定的校準(zhǔn)：理論K值與校準(zhǔn)K值 校準(zhǔn)頻率：更換試劑(批號(hào))、重要儀器部件的保養(yǎng)維護(hù)和更換、質(zhì)控結(jié)果失控及其它糾正措施無(wú)效時(shí)、每6個(gè)月,計(jì)量部門(mén)對(duì)儀器進(jìn)行的計(jì)量學(xué)檢定或校準(zhǔn),波長(zhǎng) 反應(yīng)溫度 加樣(試劑和樣本)精度 吸光度準(zhǔn)確性(半峰寬) 基線漂移,一、安裝及使用前準(zhǔn)備 （一）工作環(huán)境 周?chē)凶銐蚩臻g，避免陽(yáng)光直射，防塵、煙霧和振動(dòng) 電源電壓波動(dòng)應(yīng)小于10%，可靠接地 電源頻率、功率應(yīng)符合要求，應(yīng)使用UPS 遠(yuǎn)離強(qiáng)烈電磁場(chǎng) 溫度1832之間（波動(dòng)小于2），濕度40%80%之間；空調(diào)出風(fēng)口不宜直對(duì)儀器,第三節(jié) 自動(dòng)生化分析儀的日常操作,（二）實(shí)驗(yàn)用水,超純水一般要求電阻率10 M-cm 總有機(jī)碳（TOC）應(yīng)50ppb 使用0.5m或更細(xì)的濾膜過(guò)濾除菌，細(xì)菌水平5cfu/ml 干擾元素越少越好,儀器簡(jiǎn)介 儀器的工作原理 儀器工作環(huán)境要求 授權(quán)操作人 開(kāi)機(jī)程序 室內(nèi)質(zhì)控程序 常規(guī)樣本檢測(cè)程序 樣本檢驗(yàn)結(jié)果的處理程序 工作后保養(yǎng)與關(guān)機(jī)程序 其他支持性文件：如校準(zhǔn)程序、維護(hù)與保養(yǎng)程序等,（四）操作程序文件的主要內(nèi)容,二、基本操作步驟,儀器自檢 加試劑、取樣和混勻 保溫反應(yīng)與吸光度檢測(cè) 計(jì)算、顯示或打印結(jié)果,（一）操作前檢查,檢查試劑注射器、樣品注射器等有無(wú)滲漏 檢查純水是否正常或足量、各種清洗劑是否足夠 檢查各項(xiàng)分析試劑是否充足、 檢查試劑針、加樣針等是否需要特別清潔處理 檢查樣品運(yùn)行通道是否通暢無(wú)障礙,（二）質(zhì)控品測(cè)定,檢測(cè)頻率：每批次 質(zhì)控品個(gè)數(shù)：?jiǎn)巍㈦p、三水平 質(zhì)控規(guī)則：出現(xiàn)12s為警告，出現(xiàn)13s、22s、R4s、41s、10x為失控,（三）患者標(biāo)本的測(cè)定,項(xiàng)目錄入： 手工錄入：逐項(xiàng)錄入，組合項(xiàng)目錄入， 批量錄入 條形碼識(shí)別 急診優(yōu)先檢驗(yàn),三、主要的維護(hù)保養(yǎng),1.每天維護(hù) 檢查樣品針、試劑針、攪拌棒有無(wú)明顯磨損，位置是否正確，需否特殊清潔 添加或更換試劑 添加清洗劑 清洗ISE單元：用CLEAN液 執(zhí)行每日清洗程序，然后關(guān)機(jī),2.每周維護(hù),執(zhí)行比色杯清洗程序?qū)Ρ壬M(jìn)行清洗 對(duì)比色杯進(jìn)行空白吸光度檢查，了解透光性的改變情況 清洗樣品探針、試劑探針、攪拌棒、電極管道 清洗恒溫水槽,3.每月維護(hù),對(duì)清洗裝置本身、純水桶、供水過(guò)濾器、散熱器過(guò)濾網(wǎng)等進(jìn)行清洗 清洗電極模塊,4.不定期維護(hù),檢查進(jìn)樣注射器是否需要更換、各沖洗管路是否暢通、各機(jī)械運(yùn)轉(zhuǎn)部分是否工作正常 徹底清洗比色杯和比色杯輪盤(pán)，檢查比色杯是否需要更換 更換光源燈 更換樣品探針和試劑探針、攪拌棒 更換電極、蠕動(dòng)泵管,一、生化分析儀的性能檢定 1.雜散光 50g/L亞硝酸鈉溶液直接加入比色杯，測(cè)定波長(zhǎng)340nm的吸光度 * 吸光度應(yīng)不小于2.3,第四節(jié) 自動(dòng)生化分析儀性能檢定與統(tǒng)完整性,2溫度準(zhǔn)確度測(cè)定,比色杯中加入500l去離子水，溫度穩(wěn)定，測(cè)溫儀每隔30s讀數(shù)一次，連續(xù)20次。求出平均溫度和20次中最大值與最小值之差-波動(dòng)度。 * 溫度應(yīng)在設(shè)定值的0.3內(nèi)，波動(dòng)度不大于0.2,3吸光度線性范圍檢定,將色素原液稀釋成11個(gè)濃度梯度，各梯度液重復(fù)測(cè)定5次吸光度，計(jì)算平均值。以稀釋比例為橫坐標(biāo)，吸光度平均值為縱坐標(biāo)，畫(huà)出散點(diǎn)圖，用最小二乘法先對(duì)前4個(gè)點(diǎn)進(jìn)行線性擬合，并計(jì)算511點(diǎn)的相對(duì)偏倚。 * 各測(cè)定值的相對(duì)偏倚在5%范圍內(nèi)的最大吸光度應(yīng)不小于2.0。,4吸光度穩(wěn)定性檢定,340nm吸光度為0.5的重鉻酸鉀標(biāo)準(zhǔn)溶液，600nm700nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)任一波長(zhǎng)的吸光度為0.5的硫酸銅標(biāo)準(zhǔn)溶液。設(shè)定最小試劑量、最小樣本量，最長(zhǎng)反應(yīng)時(shí)間或10min，讀數(shù)間隔為儀器的測(cè)定周期或30s，測(cè)定上述溶液的吸光度值 * 最大與最小值吸光度之差應(yīng)不大于0.01,5.吸光度準(zhǔn)確度檢定,以蒸餾水空白，340nm處吸光度分別約為0.5和1.0的重鉻酸鉀標(biāo)準(zhǔn)溶液，重復(fù)測(cè)定3次，計(jì)算3次測(cè)量的算術(shù)平均值與標(biāo)準(zhǔn)值之差 * 吸光度為0.5的允許誤差為0.025，吸光度應(yīng)為1.0的允許誤差應(yīng)為0.07,6吸光度重復(fù)性檢定,吸光度為0.5的重鉻酸鉀標(biāo)準(zhǔn)溶液同時(shí)作為樣品和試劑，加入量為分析儀標(biāo)稱(chēng)的最小反應(yīng)體積，反應(yīng)時(shí)間為分析儀最長(zhǎng)反應(yīng)時(shí)間或10min，340nm連續(xù)測(cè)定20條反應(yīng)曲線的最后一個(gè)讀點(diǎn)的吸光度值 * 該吸光度的變異系數(shù)CV應(yīng)不大于1.5%,7試劑加樣精確度與重復(fù)性檢定,采用稱(chēng)量法：恒溫、恒濕的實(shí)驗(yàn)室內(nèi)，帶蓋容器在高精度電子天平調(diào)零?？刂圃噭┽樆驑颖踞樛撊萜髦屑尤胍?guī)定量除氣蒸餾水，蓋蓋再稱(chēng)重。每種規(guī)定加入量重復(fù)稱(chēng)量20次，求出實(shí)際加入量(l)，計(jì)算加樣誤差 * 儀器的最小、最大試劑加樣量，準(zhǔn)確度誤差應(yīng)不超過(guò)%，變異系數(shù)應(yīng)不超過(guò)2%。,8.樣品加樣準(zhǔn)確性與重復(fù)性檢定,稱(chēng)量法 比色法,9樣品攜帶污染率檢定,以去離子水為試劑，以高濃度orange G原液和去離子水為樣品，樣品的加入量為分析儀最大樣品量，按照原液、原液、原液、去離子水、去離子水、去離子水的順序?yàn)橐唤M，測(cè)定上述樣品反應(yīng)結(jié)束時(shí)的吸光度，共進(jìn)行5組測(cè)定，按照相應(yīng)公式計(jì)算攜帶污染率 * 5組的平均攜帶污染率，其值應(yīng)小于0.5%,10臨床項(xiàng)目批內(nèi)與批間精密度檢定,雙水平質(zhì)控血清，測(cè)定不同的檢測(cè)項(xiàng)目采用某種試劑時(shí)的批內(nèi)與批間平均值、SD值及CV值。 不同項(xiàng)目不同濃度水平的CV有不同要求,二、生化分析系統(tǒng)的完整性和有效性,（一）生化測(cè)定結(jié)果的量值溯源 生化分析系統(tǒng)的概念 一個(gè)完整和有效的生化分析系統(tǒng)，是指生化分析儀、試劑、校準(zhǔn)品、及相關(guān)的操作程序、質(zhì)量控制程序、設(shè)備維護(hù)程序等的組合；若是手工操作，還包括具體的操作人員。,生化分析儀的測(cè)定結(jié)果的溯源性,（二）保證生化分析系統(tǒng)的完整性與有效性的方法,分析系統(tǒng)的性能核實(shí)（demonstration） 分析系統(tǒng)的性能確認(rèn)（validation or verification） 分析系統(tǒng)的性能評(píng)價(jià)（evaluation）,小 結(jié)（1）,自動(dòng)生化分析儀是臨床生化檢驗(yàn)最常用的設(shè)備，目前以分立式最為普遍。現(xiàn)代生化分析儀已能達(dá)到很高的精度。既可采用比色杯作為反應(yīng)和檢測(cè)的載體，也可采用干片試劑進(jìn)行檢測(cè)，還可采用透射比濁法測(cè)定更加微量的標(biāo)志物。 兩點(diǎn)終點(diǎn)法結(jié)合雙波長(zhǎng)測(cè)定等能有效消除樣品溶血、黃疸和脂濁等造成的光吸收干擾。連續(xù)監(jiān)測(cè)法以時(shí)間-吸光度曲線中線性反應(yīng)期的單位時(shí)間內(nèi)吸光度變化值（A/min）乘以K值來(lái)計(jì)算結(jié)果，采用校準(zhǔn)K值常優(yōu)于理論K值和實(shí)測(cè)K值。,小 結(jié)（2）,分析儀的基本參數(shù)設(shè)置包括試驗(yàn)名稱(chēng)、分析方法、主波長(zhǎng)、次波長(zhǎng)、樣品量、R1量、R2量、稀釋液量、讀數(shù)時(shí)間、線性范圍、校準(zhǔn)參數(shù)和質(zhì)控參數(shù)