葡萄糖鉗夾技術.ppt

葡萄糖鉗夾技術的建立與應用,1,鉗夾技術,高葡萄糖鉗夾技術 高胰島素正葡萄糖鉗夾技術,DeFronzo RA,Tobin JP,Andres R.Am J Physiol,1979,237:E214-S223,2,相關背景知識,糖尿病是高度異質(zhì)性疾病，目前認為主要是由于胰島素抵抗合并胰島B-細胞分泌胰島素缺陷或B-細胞分泌缺陷伴或不伴胰島素抵抗引起。,3,如何評價胰島素抵抗？,高胰島素正葡萄糖鉗夾技術。（可重復性好，最精確。） 微小模型法（MMT）。 各種簡易指數(shù)。,4,如何評價B-細胞功能?,葡萄糖刺激的胰島素分泌： 高葡萄糖鉗夾、最小模型法、IVGTT、OGTT 非糖物質(zhì)刺激： 胰高糖素試驗、精氨酸試驗、甲苯磺丁脲 B-細胞產(chǎn)生的非胰島素肽類： C-肽、胰淀素。,5,高葡萄糖鉗夾技術 的建立與應用,6,原理及應用 1,通過輸注外源性葡萄糖使血糖濃度較空腹狀態(tài)迅速升高,并在一定時間內(nèi)維持相對平穩(wěn)的高糖狀態(tài)。在這種持續(xù)的高糖狀態(tài)下，可以觀察到胰島素在糖刺激后的快速分泌相（第一相），以及隨后出現(xiàn)的與高糖持續(xù)時間一致的第二相分泌，并能測定穩(wěn)態(tài)下機體最大的分泌胰島素的能力，從而能完整的評估胰島B細胞的儲備和分泌胰島素的功能。,7,原理及應用 2,同時由于大部分的內(nèi)源性葡萄糖生成被抑制，外源性葡萄糖的輸注率即被認為是組織葡萄糖的利用率，通過計算可以得到胰島素敏感性指數(shù)，其與評價胰島素敏感性的“金標準”-高胰島素正葡萄糖鉗夾的相關性較好。,8,實驗儀器：,1、輸液泵一臺。 2、快速血糖測定儀一臺。 3、溫度控制儀一臺。 4、多功能計時秒表兩個。,9,實驗物品,1、輸液管（輸液泵專用）。 2、三通管3個。 3、連接管2條。 4、靜脈留置針2個。 5、針筒：1ml，5ml，60ml針筒各若干個。,10,受試者準備,試驗前晚8點鐘后禁食，可少量飲水，早晨8點到實驗室，排空小便后仰臥。 試驗前，將試驗的性質(zhì)、目的以及可能產(chǎn)生的不良反應告知受試對象，并填寫知情同意書。 受試者應排除肝腎疾病。 試驗前三天，受試對象每日至少進食250克以上碳水化學物，維持體重穩(wěn)定。,11,主要試劑,1、葡萄糖液：50%。 2、葡萄糖液：10%。 3、氯化鈉溶液：0.9%。,12,高葡萄糖鉗夾操作流程 1,1. 配備20%葡萄糖液：可在10%葡萄糖液 中加入50%葡萄糖混合配制。 2. 令受試者排空小便后仰臥于床，整個實驗過程中保持清醒安靜狀態(tài)。 3. 分別在兩側(cè)上肢靜脈留置穿刺針，以生理鹽水維持通道，以備抽血及輸注20%葡萄糖。,13,高葡萄糖鉗夾操作流程 2,4.分別于-30，-15，0分鐘留取基礎血樣后，一側(cè)上肢置于一溫度為50C，濕度為70%的恒溫箱中以獲得動脈化的靜脈血樣，另一側(cè)靜脈通道用于輸注20%葡萄糖。,14,高葡萄糖鉗夾操作流程 3,5. 20%葡萄糖的輸注分兩個階段：第一階段為初始劑量階段，使血糖在14分鐘內(nèi)升高7.9mmol/L，其具體的輸注率按DeFronzo提供的體表面積經(jīng)驗值及實際操作中每2分鐘測得的血糖值調(diào)節(jié)。第二階段為維持劑量階段，葡萄糖輸注率以實驗15-150分鐘內(nèi)每5分鐘測得的血糖值根據(jù)負反饋原則調(diào)節(jié)，并記錄調(diào)節(jié)時間。,15,高葡萄糖鉗夾操作流程4,6. 標本采集；于開始輸注葡萄糖0-10分鐘內(nèi)每2分鐘取血測定胰島素，以后每10分鐘取血一次，測定胰島素。每30分鐘取血一次測定胰高糖素。實驗結(jié)束后收集實驗過程中的尿液，測定尿糖含量。 7.留取部分實驗中輸注的葡萄糖液測定精確的葡萄糖濃度。,16,結(jié)果處理 1,一） 評價B細胞功能： 1.計算第一時相胰島素分泌（first-phase insulin release,1PH）： 1PH =Ins(2,4,6,8,10 mins). 2.計算第二時相胰島素分泌（second-phase insulin release,2PH）； 2PH=Ins（20-150 mins）/14 3.最大胰島素分泌量（maximum insulin secretion,INS120-150）: INS120-150=Ins（120-150 mins）/4,17,結(jié)果處理 2,二） 評價胰島素敏感性： 1.葡萄糖輸注率（INF，mg/kg/min）:根據(jù)輸液泵調(diào)節(jié)情況及個體體重校正實際葡萄糖濃度后計算。 2.空間校正值（SC，mg/kg/min）： 是對實際血糖變化時葡萄糖空間充溢或不足的情況加以校正。,18,2019/10/26,19,結(jié)果處理 3 二） 評價胰島素敏感性,4.尿糖（UC，mg/kg/min）：實驗過程中尿糖的排出量。 5.葡萄糖代謝率（M，mg/kg/min）：M=INF-SC-UC 6.胰島素敏感性指數(shù)（SI）：SI=M120-150/I120-150*100,20,高胰島素正葡萄糖鉗夾技術 的建立與應用,21,一 原理及應用 1,通過持續(xù)輸注外源性胰島素和葡萄糖，抑制內(nèi)源性肝糖產(chǎn)生和胰島素分泌，達到外源性胰島素-葡萄糖代謝平衡狀態(tài)后，評價個體內(nèi)胰島素對葡萄糖代謝的作用程度，也就是胰島素的敏感性。,22,二 實驗儀器,輸液泵一臺。 注射泵一 臺。 快速血糖測定儀一臺。 溫度控制儀一臺。 多功能計時秒表兩個。,23,三 實驗物品,輸液管（輸液泵專用）。 三通管4個。 連接管2條。 靜脈留置針2個。 針筒：1ml，5ml，60ml針筒各若干個。 胰島素針管（BD筆）。,24,四 主要試劑：,葡萄糖液：50%。 葡萄糖液：10%。 氯化鈉溶液：0.9%。 人正規(guī)胰島素。,25,五 受試者準備：,試驗前三天，受試對象每日至少進食250克以上碳水化學物，維持體重穩(wěn)定。 試驗前晚8點鐘后禁食，可少量飲水，早晨8點到實驗室，排空小便后仰臥。 試驗前，將試驗的性質(zhì)、目的以及可能產(chǎn)生的不良反應告知受試對象，并填寫知情同意書。,26,六 高胰島素正葡萄糖鉗夾技術高葡萄糖鉗夾操作流程,1. 配備20%葡萄糖液：可在10%葡萄糖液中加入50%葡萄糖混合配制 2. 配制胰島素輸注液：根據(jù)研究對象的體重計算胰島素需要量，在100 ml 0.9%生理鹽水中先加入2 ml受試者的血，以防止胰島素粘附于瓶壁，然后加入胰島素混合。 3. 受試者空腹12小時，早晨8點到實驗室，排空小便后仰臥于床，于整個實驗過程中保持清醒安靜狀態(tài)。,27,六 高胰島素正葡萄糖鉗夾技術高葡萄糖鉗夾操作流程,4.分別在兩側(cè)上肢靜脈留置穿刺針，以生理鹽水維持通道，以備抽血及輸注胰島素及20%葡萄糖。 5.分別于-30，-15，0分鐘留取基礎血樣后，一側(cè)上肢置于一溫度為50C，濕度為70%的恒溫箱中以獲得動脈化的靜脈血樣，另一側(cè)靜脈通道用于輸注胰島素及20%葡萄糖。,28,六 高胰島素正葡萄糖鉗夾技術高葡萄糖鉗夾操作流程,6. 胰島素的輸注分兩個階段：在鉗夾開始10分鐘內(nèi)快速輸注胰島素液使血漿胰島素水平迅速升高，隨后140分鐘內(nèi)用注射泵以40m U/m2/min速度持續(xù)輸注。在此期間每5分鐘測一次動脈化的血漿葡萄糖濃度，調(diào)整20%葡萄糖輸注率，使受試者血糖值維持在正常水平，通常設置在80-90mg/dl。 7. 標本采集；于開始輸注葡萄糖0-10分鐘內(nèi)每2分鐘取血測定胰島素，以后每10-20分鐘取血一次，測定胰島素。每30分鐘取血一次測定C肽、胰高糖素、皮質(zhì)醇及生長激素。,29,六 高胰島素正葡萄糖鉗夾技術高葡萄糖鉗夾操作流程,8. 留取部分實驗中輸注的葡萄糖液及胰島素溶液測定精確的葡萄糖和胰島素濃度。,30,七 結(jié)果處理,1. 葡萄糖輸注率（INF，mg/kg/min）:根據(jù)輸液泵調(diào)節(jié)情況及個體體重校正實際葡萄糖濃度后計算。INF=set(ml/min)*time(min)*200/BW*10. 2. 空間校正值（SC，mg/kg/min）： 是對實際血糖變化時葡萄糖空間充溢或不足的情況加以校正。SC=3.795*SA*(G1-G2)/BW. 3. 葡萄糖代謝率（M，mg/kg/min）：M=INF-SC，為方便讀數(shù)可乘以100。,31,鉗夾技術的優(yōu)缺點評價,優(yōu)點: 準確。 缺點： 復雜、昂貴、費時。,32,高糖鉗夾在科研和臨床中 的應用,1. 通過了解胰島素的早期和晚期分泌相，了解早期潛在的B細胞功能損害，并能直接比較不同個體在相同的葡萄糖濃度介導下的胰島素分泌反應。 2. 可應用逐步高糖鉗夾來獲得最大的胰島素分泌量，了解B細胞在不同濃度葡萄糖刺激下的分泌胰島素的能力。,33,高糖鉗夾在科研和臨床中 的應用,3.可在行高糖鉗夾的同時輸注其它物質(zhì)，如脂肪、氨基酸等，觀察這些物質(zhì)對B細胞分泌胰島素能力的影響。 4.對存在B細胞功能損害的人進行藥物或其他干預后，重復高糖鉗夾評價干預的效果。,34,高糖鉗夾在科研和臨床中 的應用,5.根據(jù)葡萄糖輸注率及血漿胰島素濃度可知曉機體葡萄糖利用率，即胰島素敏感性。 6.高糖鉗夾可作為標準，對其它有關評價B細胞功能的簡易參數(shù)的精確性進行評估。,35,正糖鉗夾在