（外科學(xué)專業(yè)論文）fascin及p27蛋白在膽囊癌中的表達及意義.pdf

目錄 一、摘要 中文論著摘要l 英文論著摘要3 二、論文 前言5日u 吾 材料與方法6 結(jié)果7 討論”lo 結(jié) 念”l1 三、本研究創(chuàng)新性的自我評價”1 2 四、參考文獻”1 3 五、附錄 綜述”1 4 在學(xué)期間科研成績2 7 致謝”2 8 個人簡介2 9 中文論著摘要 f a s c i n 及p 2 7 蛋白在膽囊癌中的表達及意義 目的 通過檢測膽囊癌及膽囊息肉組織中f a s c i n 蛋白和p 2 7 的表達情況，探討膽囊 癌中f a s c i n 蛋白表達與膽囊癌的腫瘤分級、臨床分期、腫瘤大小等及膽囊癌中p 2 7 表達的相關(guān)性。尋找與膽囊癌發(fā)生發(fā)展有關(guān)的分子標(biāo)記物，為膽囊癌的早期診斷、 惡性行為評估及預(yù)后治療研究提供新的思路。 方法 收集我院2 0 0 7 年1 月一2 0 0 9 年1 2 月的手術(shù)切除膽囊癌標(biāo)本3 0 例，3 0 例膽 囊息肉，均有術(shù)后病理證實。所有組織均用1 0 中性福爾馬林固定，石蠟包埋， 連續(xù)切片，厚度4 9 m 。應(yīng)用免疫組織化學(xué)方法( s p 法) 檢測所有標(biāo)本中f a s c i n 、 p 2 7 的表達情況。統(tǒng)計分析膽囊癌中f a s c i n 蛋白和p 2 7 與膽囊癌臨床病理指標(biāo)及 p 2 7 表達的相關(guān)性。 結(jié)果 膽囊息肉組織中無f a s c i n 表達，3 0 例膽囊癌標(biāo)本中有3 0 例表達陽性，f a s c i n 蛋白在膽囊息肉和膽囊癌中的表達具有明顯差異性( p 0 0 5 ) 。 結(jié)論；口匕 f a s c i n 蛋白和p 2 7 在膽囊癌中表達上調(diào)，其表達與膽囊的生長、惡性進展密 切相關(guān)。f a s c i n 蛋白可以作為膽囊癌的一個分子標(biāo)記物，聯(lián)合檢測p 2 7 可用于膽 囊癌的早期診斷、惡性評估及預(yù)后分析，并有可能成為一個新的靶點，用于膽囊 癌的分子靶向治療。 關(guān)鍵詞 膽囊癌；f a s c i n 蛋白；p 2 7 ；免疫組化； 2 英文論著摘要 e x la n d g n i f i c a n c qo ff a s c i na n dpxpression a ns i 2 n f l i c a n c eo la s c | na n d2 7i nzl g a l l b l a d d e r c a n c e r o b j e c t i v e t oo b s e r v et h ee x p r e s s i o no ff a s c i na n d p 2 7i ng a l l b l a d d e rc a n c e ta n dc h o l e s t e r o l p o l y p ，a n a l y s ei t s c o r r e l a t i o nw i t ht u m o rg r a d e ，c l i n i c a ls t a g e ，t u m o rs i z e ，a n dt h e e x p r e s s i o no fp 2 7 i ng a l l b l a d d e rc a n c e r m e t h o d s at o t a lo f3 0p a t i e n t sw i t hg a l l b l a d d e rc a n c e rt r e a t e da tt h ed e p a r t m e n to f g e n e r a l s u r g e r y , t h ef i r s ta f f i l i a t e dh o s p i t a lo fc h i n am e d i c a lu n i v e r s i t yb e t w e e n2 0 0 7a n d 2 0 0 9w e r ei n c l u d e di n t ot h e s t u d y a l ls p e c i m e n sw e r ef i x e di n 10 f o r m a l i i l e m b e d d e di np a r a f f i n ，a n dc u ti n t o4 心【i ls e r i a ls e c t i o n s i m m u n o h i s t o c h e m i s t r yw a s u s e dt oo b s e r v et h ee x p r e s s i o no f f a s c i n ，p 2 7i n3 0t i s s u e so fg a l l b l a d d e rc a n c e ra n d3 0 c h o l e s t e r o l p o l y p t h er e l a t i o n s h i p b e t w e e nt h e e x p r e s s i o n o f f a s c i na n d c l i n i c o p a t h l o g i c a lp a r a m e t e r s , e x p r e s s i o no f p 2 7w e r ea n a l y s e ds t a s t i c a l l y r e s u l t o v e r a l l ，n o n - f a s c i ne x p r e s s i o nw a sf o u n di nn o r m a lc h o l e s t e r o lp o l y p 3 0i n e a s e so f g a l l b l a d d e rc a n c e rs p e c i m e n ss h o wp o s i t i v ef a s c i ne x p r e s s i o n t h ee x p r e s s i o n o f f a s c i ni nc h o l e s t e r o lp o l y pa n dc a r c i n o m at i s s u e sh a v ea nd i f f e r e n c e 畎o 0 0 1 ) t h e e x p r e s s i o no ff a s c i ni sp o s i t i v e l yc o n n e c t e d 晰t hd i n i c a ls t a g e ( p = - 0 0 01 ) ，l y m p h a t i c m e t a s t a s i s 儼o 0 11 ) ，e x p r e s s i o no f p 2 7 ( p = 0 0 0 1 ) ，a n dh a sn oc o n n e c t i o nw i t ha g e ，s e x ， t u m o rg r a d ep 0 0 5 ) ，1 - l ：0 m c l u s i o u f a s c i np r o t d na n di n c r e a s e de x p r e s s i o no fp 2 7i ng a l l b l a d d e rc a r c i n o m aa n di t s 3 e x p r e s s i o na n dt h eg r o w t ho ft h eg a l l b l a d d e r , i sc l o s e l y r e l a t e dt o m a l i g n a n t p r o g r e s s i o n f a s c i np r o t e i nc a nb eu s e da sam o l e c u l a rm a r k e ro fg a l l b l a d d e rc a r c i n o m a ， t h ej o i n td e t e c t i o no fp 2 7c a nb eu s e df o re a r l yd i a g n o s i so fg a l l b l a d d e rc a n c e r , m a l i g n a n te v a l u a t i o na n dp r o g n o s i s ，a n dm a yb e c o m ean e wt a r g e tf o rm o l e c u l a r t a r g e t e dt h e r a p yo fg a l l b l a d d e rc a r c i n o m a k e vw o r d s g a l l b l a d d e rc a n c e r ；f a s c i n ；p 2 7 4 論文 f a s e i n 和p 2 7 蛋白在膽囊癌中的表達及意義 刖看 原發(fā)性膽囊癌是膽道腫瘤中最多見的一種類型，其發(fā)病率近年來有增高的趨 勢，由于該病缺少特有的臨床表現(xiàn)，一經(jīng)發(fā)現(xiàn)多屬中晚期，根治切除率低( 2 0 - 3 8 ) ， 療效及預(yù)后極差，5 年的生存率僅5 以下，影響膽囊癌的預(yù)后的主要原因為早期診 斷率低與腫瘤早期的浸潤和轉(zhuǎn)移。目前，腫瘤自發(fā)侵襲轉(zhuǎn)移的治療仍是十分艱巨 的任務(wù)。由于基因不穩(wěn)定和基因變異的積累，影響了促進因子和抑制因子之間的 平衡，使腫瘤侵襲性增強、新生血管形成，最終引起轉(zhuǎn)移。這其中涉及多個癌基 因與抑癌基因的改變，并與激活的癌基因及抑癌基因之間的平衡有關(guān)。癌基因的 活化、過度表達及抑癌基因的失活，在腫瘤發(fā)生過程中發(fā)揮了重要作用。因此， 深入了解腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移相關(guān)基因的功能，有助于人類利用分子技術(shù)手段，如基因 治療等，改變腫瘤細胞基因遺傳性或糾正基因突變，從而逆轉(zhuǎn)甚至消除腫瘤擴散 轉(zhuǎn)移等惡性行為【4 】。 f a s c i n 蛋白是肌動蛋白結(jié)合蛋白家族中的一員，定位于運動細胞釘狀突起和 片狀突起的肌動蛋白束的核心【1 1 。它具備兩個肌動蛋白結(jié)合位點，分別起到調(diào)節(jié) f a s e i n 蛋白與f 肌動蛋白的結(jié)合活性以及細胞膜表面絲狀偽足和微棘的形成的作 用【2 1 。近年來研究發(fā)現(xiàn)，f a s c i n 蛋白在許多上皮來源的腫瘤細胞系及腫瘤組織中表 達上調(diào)，如乳腺癌、食管癌等。并與腫瘤侵襲及轉(zhuǎn)移有關(guān)。這提示f a s e i n 蛋白的 上調(diào)表達在上皮腫瘤組織中可能具有組織特異性，并與腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移有關(guān)【3 4 1 。本研究旨在檢測膽囊癌組織中f a s e i n 蛋白及p 2 7 的表達情況，并探討f a s c i n 蛋白及p 2 7 表達與膽囊癌發(fā)生及生物學(xué)行為的關(guān)系。 我們在此理論基礎(chǔ)上應(yīng)用免疫組化方法研究f a s e i n 蛋白和p 2 7 在膽囊癌中的 表達情況，旨在分析探討f a s e i n 蛋白和p 2 7 與膽囊癌發(fā)生發(fā)展等生物學(xué)行為的關(guān) 系，為膽囊癌的早期診斷、惡性行為評估及預(yù)后治療的研究提供更多的理論依據(jù)。： s 實驗材料 收集我院2 0 0 7 2 0 0 9 年間手術(shù)切除的原發(fā)性膽囊癌標(biāo)本3 0 例?；颊吣? 7 例， 女1 3 例，年齡3 2 - 7 7 歲( 中位年齡5 9 歲) 。按w h o 病理學(xué)分類：腺癌3 0 例。 組織學(xué)分級：高分化1 4 例，中分化1 1 例，低分化5 例。n e v i n 分期：i 期7 例， i i 期8 例，3 例、期7 例，v 期5 例。膽囊息肉3 0 例，全部為膽囊膽固醇息 肉作為對照，全部患者術(shù)前均未接受化療及放療。 主要試劑 l 、鼠抗人f a s c i n 單克隆抗體： 構(gòu)自美國m i l l i p o r e 公司( 克隆號：5 5 k - 2 ) 2 、鼠抗人p 2 7 單克隆抗體： 購自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司。 3 、s p 二抗試劑盒及d a b 顯色劑： 購自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司。 實驗方法 1 、免疫組化檢測( s p 法) 染色步驟： ( 1 ) 組織經(jīng)1 0 福爾馬林固定，石蠟包埋，連續(xù)切片，厚度4 啪；將組織切片貼 附于載玻片上并烤干。 ( 2 ) 按順序進行切片脫蠟：二甲苯i ( 2 0 m i n ) , - - 二甲苯i i ( 2 0 m i n ) - - - 無水乙醇i ( 1 0 m i n ) 無水乙醇i i ( 10 r a i n ) - - 9 5 7 , 醇i ( 3 m i n 卜9 5 乙醇i i ( 3 n 岫卜7 5 乙醇( 3 r a i n ) - 水 洗( 3 m i n ) 蒸餾水洗( 一過) p b s 浸泡( 5 r a i n ) 。 ( 3 ) 抗原熱修復(fù)：蒸餾水沖洗，2 m i n x 3 次，將切片放入盛有抗原修復(fù)液的容器中， 置微波爐內(nèi)加熱使容器內(nèi)液體溫度保持在9 6 一9 8 c 之間，1 5m i n 。取出容 器，室溫冷卻2 0 - - 3 0m i n ，p b s 浸泡5m i n 。 ( 4 ) 3 過氧化氫室溫孵育1 0 m i n ，p b s 沖洗，5 m i n x 3 次。 ( 5 ) 正常山羊血清封閉，室溫孵育3 0 m i n 。 ( 6 ) 滴加l ：1 0 0 0 稀釋的f a s c i n 抗體工作液，p 2 7 抗體稀釋比1 ：2 0 0 ，4 過夜，p b s 6 沖洗，5 m i n x 3 次。 ( 7 ) 滴加生物素化二抗工作液( i g g b i o ) ，3 7 。c 孵育3 0 m i n ，p b s 沖洗，5 m i n x 3 次。 ( 8 ) 滴加辣根酶標(biāo)記鏈霉卵白素工作液( s a m r p ) ，3 7 c 孵育3 0 m i n ，p b s 沖洗， 5 m i n x 3 次。 ( 9 ) d a b 顯色劑顯色。 ( 1 0 ) 自來水充分沖洗、復(fù)染、脫水透明、封片。 2 、結(jié)果判定： f a s c i n 蛋白表達定位于癌細胞的胞漿中，指標(biāo)表達通過兩方面評價：表達面積 和表達強度。按照表達面積分為5 組：無表達細胞( o ，陰性) 、表達的細胞數(shù)占 切片總細胞數(shù) 7 5 ( 4 + ) 。按照表 達強度分為3 組：用以確定為陽性的轉(zhuǎn)移性乳腺癌標(biāo)本的反應(yīng)強度作為對照，弱 于它( 1 + ) 、與其相同( 2 + ) 、表達強度比之強( 3 + ) 。每張切片3 種指標(biāo)綜合表達 情況用表達面積與表達強度的乘積表示，即o 1 2 。并分為4 個級別：0 、1 + ( 1 - 4 ) 、 2 + ( 5 8 ) 、3 + ( 9 1 2 ) 。p 2 7 蛋白表達的判定：陽性細胞為細胞核和或胞漿內(nèi)可見棕 黃、棕褐及淺黃色顆粒。每張切片分別取上、下、左、右及中共5 個區(qū)域進行細 胞計數(shù)，每個區(qū)計數(shù)2 0 0 個細胞，共計數(shù)1 0 0 0 個細胞，對照陽性切片，計算染色陽性細 胞所占比例。結(jié)果分為：陽性細胞 1 0 為( 一) ；1 0 s 陽性細胞 2 5 為( + ) ；2 5 冬 陽性細胞 5 0 ( + + ) ；陽性細胞5 0 為( 卅) 。陽性細胞比例5 0 視為高表達， 陽性細胞比例 5 0 視為低表達【1 3 1 。 3 、統(tǒng)計學(xué)分析： f a s c i n 蛋白在膽囊癌和膽囊息肉組織中的表達差別及f a s c i n 蛋白表達與膽囊 癌生物學(xué)行為及相關(guān)蛋白指標(biāo)的關(guān)系應(yīng)用s p s s l 3 0 軟件進行卡方檢驗進行分析， 所有結(jié)果認為當(dāng)p o 0 5 有意義。 齄里 當(dāng)日7 r 1 、f a s c i n 及p 2 7 的表達： 在3 0 例膽囊癌中有3 0 例( 1 0 0 ) f a s c i n 蛋白呈陽性表達，1 6 例p 2 7 ( 5 3 。3 ) 呈陽性表達。3 0 例膽囊息肉中有3 0 例p 2 7 ( 1 0 0 ) 呈陽性表達，鳳c i i l 無表達。 7 2 、f a s c i n 蛋白表達和p 2 7 ，臨床病理指標(biāo)的關(guān)系： f a s c i n 蛋白在膽囊癌中的表達與其在膽囊息肉中的表達均具有顯著差異性( p o 0 5 ) 。f a s c i n 蛋白表達強度與以下因素具有相關(guān)性：n e v i n 分期( p o 0 5 ) ，淋巴 結(jié)轉(zhuǎn)移( p o 0 5 ) - 與p 2 7 呈負相關(guān)( p 0 0 5 ) 。f a s c i n 蛋白表達與年齡，性別，腫瘤大小， 組織學(xué)分類無相關(guān)性見( 表1 ) 表1 ，f a s c i n 在膽囊癌中的表達及與膽囊癌癌生物學(xué)行為的關(guān)系： 8 論文圖片 免疫組化( s p 染色) f a s c i n 在膽囊 息肉組織中呈( ) x 2 0 0 免疫組化( s - p 染色法) f a s c i n 在膽囊癌 組織中呈( - - - h - ) x 2 0 0 免疫組化( s - p ) p 2 7 在膽囊癌 組織中呈陰性x 2 0 0 9 免疫組化( s - p 染色法) f a s c i n 在膽囊癌組織中呈( + ) x 2 0 0 免疫組化( s - p ) p 2 7 在膽囊 息肉組織中呈陽性x 2 0 0 免疫組化( s - p ) p 2 7 在膽囊癌 組織中呈陽性) 【2 0 0 討論 膽囊癌作為擔(dān)道系統(tǒng)常見的惡性腫瘤，其初期表現(xiàn)隱匿，早期診斷比較困難， 其高度的生物學(xué)惡性行為已越來越引起人們的注意。由于膽囊癌早期無明顯特異 性體征，確診時多數(shù)患者已失去根治手術(shù)的機會。近年來在分子生物學(xué)及基因技術(shù) 領(lǐng)域的研究，為膽囊癌的早期診斷、早期治療及預(yù)后判斷提供了新的途徑。尋找腫 瘤治療的新靶點，保護正常組織細胞，調(diào)節(jié)脫離正常細胞周期軌道的腫瘤細胞回到 正常軌道上來是今后腫瘤治療的新途徑【5 1 。f a s c i n 蛋白作為肌動蛋白結(jié)合蛋白家 族中的一員，近年來研究發(fā)現(xiàn)，其在大多數(shù)脊椎動物組織中表達，特別是在腦、 卵巢及睪丸中高表達。但在不同細胞類型中表達不均一，在幾種上皮細胞系中低 或不表達，而在神經(jīng)元和神經(jīng)膠質(zhì)細胞系、骨骼肌和平滑肌細胞系、內(nèi)皮細胞系 和一些上皮性腫瘤細胞系中高表達，并與腫瘤侵襲及轉(zhuǎn)移有關(guān)【5 1 。在人體組織中， f a s c i n 蛋白在乳腺癌、卵巢癌、肺癌、食管癌、胃癌、結(jié)腸癌、膽管癌等腫瘤組 織中均出現(xiàn)高頻率的陽性表達，并與高腫瘤級別、高增殖分數(shù)相關(guān)【6 】。這些均提 示f a s c i n 蛋白的上調(diào)表達在上皮腫瘤組織中可能具有組織特異性，并且與惡性腫 瘤存在顯著的相關(guān)關(guān)系。本研究應(yīng)用免疫組織化學(xué)方法檢測f a s c i n 蛋白和p 2 7 在 膽囊癌中的表達，通過對染色強度、陽性細胞計數(shù)評分總體的分析，突出了對趨 勢的判定。證實了f a s c i n 蛋白在膽囊癌中表達上調(diào)，提示f a s c i n 蛋白的高表達可 能有助于膽囊癌早期的診斷。目前認為f a s c i n 蛋白在腫瘤中上調(diào)表達的分子機制 可能存在多條途徑。有研究者認為，f a s c i n 蛋白可能是c - e r b b 2 在細胞骨架上的一 種效應(yīng)蛋白，c - e r b b 2 具有酪氨酸蛋白激酶活性，可通過n f k b 和t a t a 核心因子 ( t a t a c o r ef a c t o r , t c f ) 激活f a s c i n 基因的轉(zhuǎn)錄【刀。另外g r o t h e y 等【8 1 通過免疫組 織化學(xué)方法研究5 8 例原發(fā)性乳腺癌患者，發(fā)現(xiàn)雌激素受體及孕激素受體水平與 f a s c i n 表達呈負相關(guān)，提示受體缺失可能促成f a s c i n 表達上調(diào)，而f a s c i n 蛋白表達上 調(diào)可能導(dǎo)致其侵襲行為。楊強掣9 】發(fā)現(xiàn)，結(jié)、直腸癌中f a s c i n 蛋白表達與p 5 3 表達 相關(guān)，而p 5 3 基因缺失是癌變過程后期發(fā)生的重要分子水平改變。關(guān)于f a s c i n 蛋白 在腫瘤中上調(diào)表達的具體途徑仍有待進一步研究，以便有助于實現(xiàn)其分子靶向治 療。，：? 1 0 研究證明接受f a s d n 基因轉(zhuǎn)染的結(jié)直腸癌細胞株s w l 2 2 2 ，隨著f a s c i n 蛋白 表達的增加，細胞膜表面突起增多，細胞間連接發(fā)生解離，細胞分化程度降低， 細胞增殖旺盛，肌動蛋白骨架重建，細胞運動性相應(yīng)增強。在三維基質(zhì)中細胞侵 襲能力增加2 5 倍【1 0 】。我們的研究同樣發(fā)現(xiàn)f a s d n 蛋白在膽囊癌中的表達強度隨 n e v i n 分期的升高而升高，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組表達程度明顯高于無淋巴轉(zhuǎn)移組與p 2 7 呈負相關(guān)。目前認為f a s c i n 基因促進腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移主要通過兩種途徑實現(xiàn)，一為 f a s c i n 基因編碼產(chǎn)物f a s c i n 蛋白通過與f 肌動蛋白結(jié)合，使細胞膜表面突起增多， 進而改變細胞骨架、細胞與細胞、細胞與細胞外基質(zhì)的黏附促進腫瘤細胞轉(zhuǎn)移【l l 】。 另一個是f a s c i n 基因的s e r 3 9 位點磷酸化，一方面雖然f a s c i n 蛋白與f 肌動蛋白 結(jié)合受到一定程度的抑制，但卻可以促進p k c 信號傳導(dǎo)通路的激活，形成 f a s c i n p k c 復(fù)合物，通過p k c 通路促進腫瘤細胞侵襲轉(zhuǎn)移【1 2 】。以上結(jié)果均提示高 表達f a s c i n 蛋白的惡性腫瘤組織組織可能具有更強的侵襲性和轉(zhuǎn)移性。如何提早 明確其作用方式，并在其分子路徑上限制其作用，將會有助于惡性腫瘤的早期診 斷及治療。 結(jié)論 從目前的研究來看，f a s c i n 蛋白在膽囊癌的發(fā)生進展過程中發(fā)揮著很大作用， 其可以作為一個生物學(xué)標(biāo)記，聯(lián)合檢測用做膽囊癌的早期診斷和預(yù)后評估。并有 可能成為膽囊癌治療的一個新靶點。 本研究創(chuàng)新性的自我評價 本研究在國內(nèi)是首次探討f a s c i n 蛋白在膽囊癌中的表達情況，首創(chuàng)性地分析 在膽囊癌中f a s c i n 蛋白表達與p 2 7 表達的相互關(guān)系。從而能進一步說明f a s c i n 蛋 白表達與膽囊癌發(fā)生發(fā)展及預(yù)后治療的關(guān)系。這為在膽囊癌乃至人體惡性腫瘤中 f a s c i n 蛋白的研究及惡性腫瘤浸潤進展等生物學(xué)行為的研究積累了更多了資料。 1 2 參考文獻 1g a ox ，w ud h f a s c i ne x p r e s s i o ni nh u m a ne p i t h e l i a lt u m o r sa n di t sc l i n i c a ls i g n i f i c a n c e n a n f a n gy ik ed ax u ex u eb a o , 2 0 0 8 ，2 8 ( 6 ) ：9 5 3 - 9 5 5 2 o p a s s i r ikp o m t h o n gb ，a k i y a m at ，e ta 1 as t r e s s - i n d u c e dr i c e ( o r y z a s a t i v a l ) b e t a - g l u c o s i d a s er e p r e s e n t s an e ws u b f a m i l yo fg l y c o s y lh y d r o l a s ef a m i l y5c o n t a i n i n ga f a s c i n - l i k ed o m a i n b i o e h e mj ，2 0 0 7 ，4 0 8 ( 2 ) ：2 4 1 2 4 9 3 k o s t o p o u l o ue ，d a p o n t ea ，te l z i $ a ，e ta 1 f a s c i ni no v a r i a ne p i t h e l i a lt u m o r s h i s t o l h i s t o p a t h o l ，2 0 0 8 ，2 3 ( 8 ) ：9 3 5 9 4 4 4x u el y , s o n gy m ，t o n gt ，e ta 1 e x p r e s s i o no ff 蹈c i na n dc y t o k e r a t i n1 4i ne s o p h a g e a l s q u a m o l l sc e l lc a r c i n o m a z h o n g h u a y ix u ez az h i ，2 0 0 7 ，8 7 ( 3 5 ) ：2 4 9 4 - 2 4 9 8 5 b l a g o s k l o n n y m v , p a r d e ea b e x pl o i t i n gc a n c e rc e l lc y c l i n gf o r s e l e c t i v epr o t e c t i o no fn o r m a l c e l l s 【j 】c a n c e rr e s ，2 0 0 1 ，6 1 ( 1 1 ) ：4 3 0 1 4 3 0 5 6 a d a m sj c r o l e so ff a s c i ni nc e l la d h e s i o na n dm o t i l i t y c u r ro p i nc e l lb i o l ，2 0 0 4 ，16 ( 5 ) ： 5 9 0 5 9 6 7 k a b u k c u o g l us ，o n e ru ，o z a l ps s ，e ta 1 p r o g n o s t i cs i g n i f i c a n c eo ff a s c i ne x p r e s s i o ni n e n d o m e t r i o i dc 觚c i n o m a e u rjg y n a e e o lo n c o l ，2 0 0 6 ，2 7 ( 5 ) ：4 81 - 4 8 6 8 g r o t h e ya ，h a s h i z u m eks a h i n 地e ta 1 f a s c i n ，a na e t i n - b u n d - l i n gp r o t e i na s s o c i a t e d 誦t h c e l lm o t i l i t y , i su pr e g u l a t e di nh o r m o n er e c e p t o rn e g a t i v eb r e a s tc a n c e r b rjc a n c e r , 2 0 0 0 ， 8 3 ( 7 ) ：8 7 0 - 8 7 3 9 楊強，盧朝輝，羅玉鳳，等f a s c i a 蛋白在結(jié)、直腸腺瘤和癌中的表達及意義診斷病理學(xué)雜 志，2 0 0 6 ，1 3 ( 5 ) ：3 5 9 3 6 1 1 0j a w h a r ia u ，b u d aa ，j e n k i n sm ，e ta 1 f 勰c i n ，a na e t i n - b u n d l i n gp r o t e i n , m o d u l a t e sc o l o m c e p i t h e l i a lc e l li n v a s i v e n e s sa n d d i f f e r e n t i a t i o ni n 、，i 仃d a mjp a t h o l ，2 0 0 3 ，16 2 ( 1 ) ：6 9 - 8 0 1 l k u r e i s h yn ，s a p o u n t z ivp r a gs f a s c i n s ，a n dt h e i rr o l e si nc e l ls t r u c t u r ea n df u n c t i o n b i o e s s a y s ，2 0 0 2 ，2 4 ( 4 ) ：3 5 0 3 6 1 12h a s h i m o t ozi t o 乃i n o u eh ，e ta 1 p r o g n o s t i cs i g n i f i c a n c eo ff a s c i no v e r e x p r e s s i o ni nh u m a n e s o p h a g e a ls q u a m o u sc e l le 鯽c i n o m a c l i nc a n c e rr e s ，2 0 0 5 ，11 ( 7 ) ：2 5 9 7 - 6 0 5 1 3 陶緒雄，王衛(wèi)星，陳志丹，等p 2 7 和p c n a 在原發(fā)性膽囊癌中的表達和相關(guān)性【j 】武漢大 學(xué)學(xué)報( 醫(yī)學(xué)版) ，2 0 0 6 ，2 7 ( 3 ) ：3 6 1 3 6 2 ，? 1 3 綜述 f a s c i n 與p 2 7 基因的研究現(xiàn)狀 上世紀(jì)7 0 年代b r y a n 等【l 】從海膽卵母細胞胞質(zhì)中分離得到一種蛋白，由于此 蛋白與f - a c t i n 形成緊密穩(wěn)定的絲狀結(jié)構(gòu)，被命名為f a s c i n ( 聚束蛋白) 。9 0 年代 在人、果蠅、蠕蟲以及其他脊椎動物細胞中f a s c i n 相繼被發(fā)現(xiàn)。人類f a s c i n 現(xiàn)已 知有3 種不同形式【2 1 ，即脊椎動物f a s c i n 或f a s c i n - 1 ( 通常簡稱為f a s c i n ) ，分布在大 多數(shù)脊椎動物組織內(nèi)；視網(wǎng)膜f a s c i n 或f a s c i n 2 局限在視網(wǎng)膜；睪丸f a s c i n 即 f a s c i n - 3 ，特有地在睪丸表達【3 卅。 1 、f a s c i n 基因的生物學(xué)特性 f a s c i n 蛋白是肌動蛋白結(jié)合蛋白家族中的一員，f s c i n 基因c 末端的4 9 3 個氨 基酸多肽的序列與其他肌動蛋白結(jié)合蛋白明顯不同川。通過基因序列分析及 f a s c i n 蛋白晶體結(jié)構(gòu)研究發(fā)現(xiàn)f a s c i n 蛋白屬于1 3 三葉蟲結(jié)構(gòu)蛋白家族中的一員， 含有四個p 三葉蟲結(jié)構(gòu)域。 人類f a s c i n 基因定位于染色體7 q 2 2 ，編碼一種分子質(zhì)量為5 5k u 的能與f 肌 動蛋白結(jié)合的細胞骨架蛋白，定位于細胞質(zhì)張力纖維和細胞膜皺褶( r u f f l e s ) 邊緣的 絲狀偽足、微棘( m i c r o s p i k e s ) 的核心肌動蛋白束中【引。f a s c i n 蛋白具備兩個肌動蛋 白結(jié)合位點：其中一個位于氨基端第一個p 三葉蟲結(jié)構(gòu)域的3 3 4 7 氨基酸之間； 另外一個位點位于第2 7 7 _ _ 4 9 3 氨基酸之間。f a s c i n 基因n 端1 1 5 0 之間的氨 基酸殘基高度保守，其中第3 9 位的絲氨酸( s e r - 3 9 ) 為蛋白激酶c ( p r o t e i nk i n a s e c ，p k c ) 的磷酸化位點【9 1 。s e r - 3 9 位于f a s e i n 基因肌動蛋白結(jié)合位點1 ，該位點 的磷酸化一方面可調(diào)節(jié)f a s c i n 蛋白與f 肌動蛋白的結(jié)合活性以及細胞膜表面絲 狀偽足和微棘的形成【1 0 1 。f a s c i n 的第二個作用位點位于第三、四個1 3 三葉蟲結(jié)構(gòu) 域的第2 3 6 - - - 4 9 3 氨基酸之間，能與包漿區(qū)的p 7 5 n t r ( p 7 5 神經(jīng)營養(yǎng)因子受體) 結(jié) 合發(fā)揮相應(yīng)功能。 2 、f a s c i n 基因的相關(guān)表達研究一-。 1 4 f a s c i n 在大多數(shù)脊椎動物組織中表達，特別是在腦、卵巢及睪丸中高表達。 但在不同細胞類型中表達不均一，在t 細胞和幾種上皮細胞系中低或不表達，而 在神經(jīng)元和神經(jīng)膠質(zhì)細胞系、骨骼肌和平滑肌細胞系、內(nèi)皮細胞系和一些上皮性 腫瘤細胞系中高表達【1 1 】。 ( 1 ) f a s c i n 在哺乳動物正常組織的表達 在小鼠胚胎發(fā)育8 - 1 6 5 天，f a s c i n 1 主要在發(fā)育中的神經(jīng)系統(tǒng)和發(fā)育中的 體節(jié)以及其他中胚層衍生的組織中表達【1 2 】，小鼠胚胎8 天時f a s c i n 1 在胚胎的前 后軸的神經(jīng)上皮組織中高表達，隨著發(fā)育，腦、脊髓和其它外周神經(jīng)系統(tǒng)也都高 表達f a s c i n 1 ，胃平滑肌和骨骼肌細胞以及腦神經(jīng)節(jié)和其它外周神經(jīng)節(jié)細胞等持 續(xù)遷移和分化的細胞都高表達f a s c i n 1 ，但上皮組織不表達【1 3 】。成年哺乳類正常組 織血管內(nèi)皮細胞、神經(jīng)元細胞和成纖維細胞高表達f a s c i n - 1 ，在免疫系統(tǒng)，f a s c i n - 1 僅在成熟的樹突狀細胞中表達，在胃、膽、乳腺、結(jié)腸、卵巢和胰腺的柱狀細胞 中，用免疫組化的方法均檢測不到f a s c i n - 1 的表達。在食道和表皮組織的基地細 胞層中，f a s c i n - 1 低水平表達，在上層的鱗狀細胞層中f a s c i n - 1 不表達【1 4 】。 ( 2 ) f a s c i n 在人類腫瘤中的表達及其與預(yù)后的關(guān)系研究 f a s c i n 蛋白在正常上皮中不表達或低表達，但在惡性腫瘤細胞中卻截然不同。 近年來研究發(fā)現(xiàn)f a s c i n 在許多上皮來源的腫瘤細胞系及腫瘤組織中也表達上調(diào)， 并與腫瘤侵襲及轉(zhuǎn)移有關(guān) n d 5 】。f a s c i n 蛋白的表達上調(diào)具有組織特異性，在不同 組織來源的癌細胞中f a s c i n 蛋白的表達率差異很大( 表1 ) 。 f a s c i n 與乳腺癌 研究發(fā)現(xiàn)，在c e r b b 2 h e r 2 高表達的人類乳腺癌細胞系m d a m b 4 3 5 中f a s c i nm r n a 及蛋白水平明顯增加，并表現(xiàn)出a c t i n 細胞骨架明顯重排且細胞 運動性明顯增加。提示f a s c i n 蛋白可能是c e r b b 2 在細胞骨架上的一種效應(yīng)蛋 白，c e r b b 2 具有酪氨酸蛋白酶活性，可通過核因子( n f k s ) 和t a t a 核心因子 仃a t ac o r ef a c t o r ，t c f ) 激活f a s c i n 的轉(zhuǎn)錄，從而促進這些細胞動力學(xué)改變并增 加細胞的運動性和惡性程度 1 6 1 。此外，乳腺癌細胞系m c f 7 中i g f i r 激活可引 起f a s c i n 棘和突起短暫形成，但并不改變f a s c i n 蛋白水平。在乳腺癌組織標(biāo)本 中，f a s c i n 表達上調(diào)并與e r 陰性、p r 陰性、腫瘤級別、分期相關(guān)，而且f a s c i n ： 1 5 陽性者存活時間短，并與e r p r 狀態(tài)或級別相判1 7 1 。 f a s c i n 與卵巢癌 h u 掣1 8 】應(yīng)用免疫組化方法發(fā)現(xiàn)3 4 例卵巢癌原發(fā)灶及相應(yīng)轉(zhuǎn)移灶中f a s c i n 蛋 白表達差異有顯著性，進一步研究發(fā)現(xiàn)，有轉(zhuǎn)移卵巢癌原發(fā)灶中，f a s c i n b r m s l m r n a 表達的比值是無轉(zhuǎn)移癌原發(fā)灶的2 2 8 倍，在卵巢癌轉(zhuǎn)移灶中f a s c i n b r m s l 比值是無轉(zhuǎn)移癌原發(fā)灶的4 6 5 倍，以上差異均有顯著性，可見隨卵巢癌轉(zhuǎn)移表型 的出現(xiàn)，f a s c i n 運動相關(guān)蛋白作為癌轉(zhuǎn)移的正調(diào)控基因表達增高，而b r m s l 基因 作為負調(diào)控基因表達減低，f a s c i n b r m s l 比值隨之上升，提示該比值在反映基因 表達調(diào)控變化的同時也可成為提示卵巢癌發(fā)生轉(zhuǎn)移的一個指標(biāo)【l9 】。f a s c i n 在正常 卵巢上皮不表達，但在所有卵巢上皮病變( 包括交界性腫瘤、原發(fā)及轉(zhuǎn)移性卵巢癌) 中出現(xiàn)，而轉(zhuǎn)移性卵巢癌中表達更為彌漫。卵巢癌細胞系中f a s c i n 的表達上調(diào)雖 然與組織學(xué)類型、腫瘤級別或d n a 倍性無明顯關(guān)系，但明顯與其接種至腹膜后 的生長能力相關(guān)。這都說明f a s c i n 與腫瘤細胞的侵襲性有關(guān)6 , 2 0 。 f a s c i n 與肺癌 f a s c i n 在非小細胞肺癌中表達上調(diào)，并與高腫瘤級別、高增殖分數(shù)相關(guān)。而 且在大多血管癌栓中特有地普遍表達，在大多數(shù)腫瘤微血管內(nèi)皮細胞而不是大血 管中表達，且與腫瘤類型無關(guān)。細支氣管肺泡癌成分多的腺癌常比侵襲性腫瘤反 應(yīng)少，腺癌中對側(cè)胸或遠處轉(zhuǎn)移與f a s c i n 彌漫表達明顯相關(guān)。這些結(jié)果提示， f a s c i n 參與了腫瘤侵襲和血管侵犯【3 1 。 f a s c i n 與皮膚腫瘤 f a s c i n 在皮膚的大多數(shù)細胞廣泛表達，但在癌中的表達與腫瘤來源有關(guān)1 2 1 1 ， 即局部浸潤且很少轉(zhuǎn)移的如基底細胞癌中彌漫并強表達，而高轉(zhuǎn)移風(fēng)險癌如惡性 黑色素瘤中沒有或弱表達；而且所有這些有轉(zhuǎn)移可能的惡性腫瘤中都有f a s c i n 陰 性的上皮內(nèi)佩吉特細胞成分2 2 1 。提示f a s c i n 表達和局部浸潤有聯(lián)系，而f a s c i n 喪失與腫瘤細胞在真皮及全身散布相關(guān)。f a s c i n 在這兩種過程中的作用可能與 a c t i n 細胞骨架、細胞基質(zhì)連接的相互作用有關(guān)。f a s c i n 表達喪失可使腫瘤容易通 過外力，如生長的上皮、淋巴或血流而轉(zhuǎn)移。這種可能可以解釋皮膚癌的轉(zhuǎn)移機 制【l l 】。 一 ：? 1 6 另外，研究發(fā)現(xiàn)，在侵襲性胰腺導(dǎo)管癌中有9 5 ( n = 2 5 ) 出現(xiàn)f a s c i n 基因高表 達【2 3 】；在膽管癌2 4 ，2 5 1 、食管癌【2 6 1 、結(jié)腸癌【2 0 1 、胃癌【1 明中均出現(xiàn)高頻率的f a s c i n 基因陽性表達，而在相對應(yīng)的正常上皮組織中除了食管上皮基底層可檢測到 f a s e i n 基因低表達之外，其他部位的上皮組織均未見f a s c i n 基因陽性表達。另外， f a s c i n 基因在許多上皮來源的腫瘤細胞系，如宮頸癌h e l a 、胃癌a g s 、結(jié)直腸 癌l i m l 2 1 5 和s w 4 8 0 ，胰腺癌b x p c 3 和t 3 h 4 中均表達上調(diào)，這提示f a s c i n 基因的上調(diào)表達在上皮腫瘤組織中可能具有組織特異性，并且與惡性腫瘤可能存 在顯著的正相關(guān)關(guān)系【2 7 1 。 3 、f a s c i n 在腫瘤細胞中過表達的機制 現(xiàn)在還不清楚導(dǎo)致f a s c i n 在腫瘤中過表達的分子機制是發(fā)生在轉(zhuǎn)錄水平還是 轉(zhuǎn)錄后水平。由于不同的腫瘤中f a s c i n 的表達情況也不一致，因此現(xiàn)在有觀點認 為，不同組織來源的腫瘤中f a s c i n 表達的機制可能不一樣。 腫瘤中基因產(chǎn)物過度表達普遍是由于染色體的異常所造成。比如，h e r 2 n e u 的編碼產(chǎn)物是表皮生長因子受體家族的一個成員。該受體在約3 0 的乳腺癌有過 表達并和病人預(yù)后相關(guān)。而乳腺癌中這種蛋白的過度表達與其編碼基因h e r 2 n e u 的擴增有著密切的關(guān)系【2 7 1 。然而，在別的類型的腫瘤，h e r 2 n e u 蛋白過度表 達的幾率變異很大而且經(jīng)常比預(yù)測的水平高，這提示了還存在別的調(diào)控失衡機制。 對于f a s c i n ，從m i t e l m a n 的腫瘤染色體變異數(shù)據(jù)庫的檢索結(jié)果顯示，7 p 區(qū)域的擴 增并不是所有的f a s c i n 過度表達腫瘤的共同特征，雖然這并不足以排除f a s c i n 的 過表達與染色體的變異有關(guān)，但現(xiàn)有的研究結(jié)果提示轉(zhuǎn)錄水平或和轉(zhuǎn)錄后水平的 調(diào)控異常發(fā)生的可能性更大。 比較基因轉(zhuǎn)錄水平變化的另一種方法是檢測基因表達譜即基因芯片。這種方 法正被廣泛應(yīng)用于腫瘤生物學(xué)的研究，而各種數(shù)據(jù)庫也隨之誕生。比如o n e o m i n e 數(shù)據(jù)庫。該數(shù)據(jù)庫收集了其它一些不同數(shù)據(jù)庫中腫瘤和相應(yīng)正常組織的基因表達 數(shù)據(jù)。a d m 嬲【9 】等在該數(shù)據(jù)庫搜索了f a s c i n 在各種腫瘤中m r n a 的水平，結(jié)果顯 示胰腺腫瘤和結(jié)腸腫瘤中f a s c i n 的m r n a 水平比正常組織的高，而其余組織來源 的腫瘤如肺癌、乳腺癌和卵巢癌等f a s c i n 的m r n a 水平比正常組織低或者差異沒 有統(tǒng)計學(xué)意義( 表2 ) 。這些結(jié)果提示轉(zhuǎn)錄水平的上調(diào)或者m r n a 穩(wěn)定性的改變 1 7 只在部分腫瘤中存在。 m o s a l i o s 等人研究了樹突狀細胞中f a s c i n - 1 基因轉(zhuǎn)錄水平的調(diào)控機制。f a s c i n 蛋白是樹突狀細胞發(fā)育成熟的一個可靠的標(biāo)記，探索其在d c 細胞中的表達調(diào)控 有助于揭開f a s c i n 在腫瘤中過表達的機制。他們的研究結(jié)果顯示f a s c i n 的啟動子 位于基因的5 側(cè)3 k b 區(qū)域內(nèi)，其表達由順式作用元件控制。這個啟動子在d c 和 f a s c i n 表達陽性的神經(jīng)元細胞系內(nèi)有很強的活性，并且這個啟動子的活性隨著d c 細胞的成熟狀況而提高。通過累進式5 缺失，在距起始密碼子約2 0 0 b p 內(nèi)己鑒定 一個核心啟動子區(qū)域，它含有一個公認的g c