畢業(yè)論文答辯-從林蛙皮中提取膠原蛋白的方法比較.ppt

從林蛙皮中提取膠原蛋白的方法比較,學(xué)院：化學(xué)與生命科學(xué)學(xué)院專業(yè)：食品科學(xué)與工程姓名：指導(dǎo)老師：,目錄,圖1林蛙,一.研究意義,中國林蛙，屬于兩棲類珍稀動物，林蛙以其獨特的營養(yǎng)價值與藥用價值日益受到人們的重視。林蛙富含多種氨基酸、激素、微量元素和維生素等營養(yǎng)成分，在藥用、滋補和美容等方面都具有非常高的利用價值。,我國林蛙資源十分豐富，近年來關(guān)于中國林蛙的相關(guān)研究也越來越多，但人們過于粗放式的大量采集蛤士蟆油的同時，將林蛙其他的寶貴資源作為廢棄物丟棄十分可惜，既污染環(huán)境，又無法充分發(fā)揮林蛙的藥用和保健價值。林蛙皮是摘取林蛙油后作為飼料或廢棄物的物質(zhì)，富含多種生物活性物質(zhì)，具有很高的綜合利用價值。從林蛙皮中提取膠原蛋白方法比較的研究必將拓寬中國林蛙開發(fā)和利用的新途徑，不僅能豐富我國的藥用資源，還將為帶動林蛙產(chǎn)業(yè)的工業(yè)化生產(chǎn)帶來貢獻和影響。,二.研究內(nèi)容,本試驗研究的三個階段,膠原蛋白的方法從林蛙皮中提取,三.實驗部分,1.膠原蛋白的提取工藝方法,2.對二甲氨基苯甲醛法測定林蛙皮中膠原蛋白的含量,相關(guān)試劑0.75%氯化亞錫溶液氯胺T試劑對二甲氨基苯甲醛試劑羥脯氨酸標準儲備液A，500g/ml：準確稱取羥脯氨酸標準品50.0mg，用少量水溶解于100ml容量瓶中，加入一滴3mol/L硫酸，定容至刻度。羥脯氨酸標準儲備液B，10g/ml：吸取5ml羥脯氨酸標準儲備液A于250容量瓶中，用蒸餾水稀釋定容至刻度。羥脯氨酸標準工作液：吸取2ml羥脯氨酸標準儲備液A及40ml羥脯氨酸標準儲備液B于100ml容量瓶中，用蒸餾水稀釋定容至刻度。,羥脯氨酸標準曲線的繪制,表1羥脯氨酸標準曲線的繪制,取具塞試管24支，三支一組編號從0至7（每組三支為平行樣），第0組作為對照組。按照表1所示加入相應(yīng)試劑后，搖勻后迅速將試管移至60的水浴鍋中，保溫20min，再用流動的自來水冷卻試管至少3min，室溫下放置30min，最后用紫外可見分光光度計在560nm波長處測定吸光度，繪制標準曲線，建立線性回歸方程。,膠原蛋白提取的含量測定,式中：W樣品中膠原蛋白含量，mg/g；A標準曲線上相應(yīng)的羥脯氨酸濃度，g/ml；11.1換算系數(shù)；m稱取樣品質(zhì)量。,公式計算,根據(jù)公式可知，測定樣品中膠原蛋白含量在稱取等量樣品且稀釋倍數(shù)相同的情況下與羥脯氨酸含量成正比。,3.結(jié)論與討論,圖2對二甲氨基苯甲醛法測定膠原蛋白的標準曲線,羥脯氨酸標準曲線的繪制,膠原蛋白提取試驗結(jié)果比較與討論,表2五種方法提取膠原蛋白所得浸提液中羥脯氨酸含量,由于樣品中膠原蛋白含量在稱取等量樣品且稀釋倍數(shù)相同的情況下與羥脯氨酸含量成正比，因此羥脯氨酸含量最高的一組即為膠原蛋白含量最高的一組，該方法即為最佳提取方法。根據(jù)試驗結(jié)果對五種方法浸提膠原膠原蛋白的數(shù)據(jù)進行處理，通過分析表明在同樣提取條件下酸法提取羥脯氨酸含量最高，即酸法為從林蛙皮中提取膠原蛋白的最優(yōu)方法。,4.最佳提取方法的工藝優(yōu)化,單因素試驗,實驗結(jié)果表明，選取檸檬酸、鹽酸、冰醋酸分別為提取劑，在相同條件下，用檸檬酸提取所得浸提液中羥脯氨酸含量最高，故本實驗采用檸檬酸作為浸提溶劑。,1.提取溶劑的選擇,圖3提取溶劑對膠原提取的影響,2.液料比對膠原提取的影響,圖4液料比對膠原提取的影響,實驗結(jié)果表明，當液料比超過201時浸提液中羥脯氨酸含量在逐漸降低。可能是此時檸檬酸溶液對膠原的溶解已經(jīng)趨于飽和，過多的檸檬酸用量不能有效增加提取率，反而因為檸檬酸用量的增多降低了膠原蛋白在溶劑中的濃度，使浸提液羥脯氨酸含量有所下降。,3.檸檬酸溶液濃度對膠原提取的影響,圖5檸檬酸濃度對膠原提取的影響,實驗結(jié)果表明，隨著檸檬酸溶液濃度的提高，浸提液中羥脯氨酸含量逐漸升高，原因可能是隨著提取劑濃度的增加，膠原蛋白的溶解度增加；但當檸檬酸濃度超過0.1mol/L時，浸提液中羥脯氨酸含量逐漸降低，可能是此時檸檬酸溶液對膠原的溶解已經(jīng)趨于飽和，過高的檸檬酸濃度不能有效增加提取率，反而降低了膠原蛋白在溶劑中的濃度。,4.提取時間對膠原提取的影響,圖6提取時間對膠原提取的影響,實驗結(jié)果表明，隨著浸提時間的增加，浸提液中羥脯氨酸含量逐漸增加。但當提取時間超過48h以后，浸提液出現(xiàn)變味酸敗，蛙皮上有部分被霉菌感染，因此60h及72h兩組試驗均被直接否定。,5.提取溫度對膠原提取的影響,圖7提取溫度對膠原提取的影響,實驗結(jié)果表明，在37之前，浸提液中羥脯氨酸含量隨溫度上升而增高，但當溫度超過37時，羥脯氨酸含量反而下降，這可能與膠原蛋白的溶解度有關(guān)?？赡苁堑蜏貢r提高溫度使分子動能增加，提高了溶質(zhì)擴散的速率，導(dǎo)致膠原溶解度的增加；但當溫度高于37時，由于反應(yīng)是放熱反應(yīng)，溶解度隨溫度升高而減少。,正交試驗,在單因素試驗的基礎(chǔ)上，選取四個主要影響因素：液料比、檸檬酸濃度、提取時間、提取溫度，進行L9(34)正交試驗，因素水平見表3，以浸提液中羥脯氨酸含量為指標，確定最佳提取工藝。,表3正交試驗表,表4正交試驗結(jié)果表,四.實驗結(jié)論,本研究對從林蛙皮中膠原蛋白的提取方法進行了比較，分別利用熱水法、酸法、堿法、酶法及鹽法對林蛙皮中膠原蛋白進行了提取，通過使用等量林蛙皮，等量浸提液，并取等量部分浸提液利用對二甲氨基苯甲醛法對浸提液中膠原含量進行了測定，經(jīng)試驗表明酸法為最佳提取方法。在得出酸法為最佳提取方法后，對試驗工藝進行優(yōu)化，在單因素試驗的基礎(chǔ)上，經(jīng)正交試驗確定了酸法提取的最佳工藝條件：檸檬酸濃度0.1mol/L，提取溫度37，提取時間48h，液料比為20:1。,本文是在導(dǎo)師邱芳萍老師悉心指導(dǎo)和大力支持下完成的。邱老師以其嚴謹求實的科學(xué)態(tài)度、實事求是的科研作風(fēng)深深地感染和激勵著我，她淵博的知識、開闊的視野和敏銳的思維給了我深深的啟迪，令我終生受用。其次，感謝王志兵老師在論文試驗和撰寫過程中給出寶貴的意見和建議。王老師不僅是我求學(xué)路上的良師，更是我生活中的益友，在此對王老師四年來的幫助表示深深的感謝。再次，在整個試驗的設(shè)計和實施過程中，