（森林保護學專業(yè)論文）云南省部分地區(qū)木霉屬真菌多樣性及its序列分析.pdf

簽名：囊幺蛆日期：2 鯉z 笸弘 關于論文使用授權的說明 本人同意：西南林學院有權保留論文的復印件，可以采用影印、縮印或其他復制 手段保存論文；提交論文一年后，允許論文被查閱和借閱，學校可以公布論文的全部 或部分內容。 ( 保密的論文在解密后應遵守此規(guī)定) 馥圣蛙吼蚴 摘要：摻屬! 嬰幽9 蠹嬲。s p p 0 裹蓖l 屬王圭知菌亞陡翼孢級、名孢日丸絲孢弛 木霉除個別種可導致蘑菇生產(chǎn)污染，造成減產(chǎn)外，大多數(shù)成員在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)上有獨特的 生防作履玉木霉菌對人類的生產(chǎn)、生活和科學研究十分重要。云南省因其地理位置特 - _ _ _ m 一 殊，生物多樣性豐富，但對于云南省木霉菌菌種多樣性和系統(tǒng)發(fā)育研究少見于報道。 - 一 。 一一 、q v ：i 因此，對于云南省木霉菌菌種的鑒定十分必要。本研究對采自云南省昆明、普洱、大 一一，1 理、麗江、保山和昭通6 個地區(qū)的腐木和腐殖土壤的木霉進行分離，純化h 羞對分離。 一一一一， 。1 。 獲得的1 1 2 株木霉，采用形態(tài)學分類的方法結合i t s 序列分析，對其進行分類研究； 一，r * ，- 7t”jt7v ， 采取最大簡約法( m p ) 和貝葉斯法構建系統(tǒng)發(fā)育樹，探討木霉菌菌種之間系統(tǒng)發(fā)育的 1。 關系。為木霉菌的物種多樣性研究及分子系統(tǒng)學研究提供依據(jù)。研究結果如下： ( 1 ) 木霉的形態(tài)學鑒定。對分離的1 1 2 株木霉菌，根據(jù)形態(tài)學特征和培養(yǎng)性狀， ，一一” “ 有1 0 5 株木霉菌鑒定到種，鑒定出9 種木霉菌，有7 株木霉未鑒定到種。鑒定種分別 一_ ，一一 -，。a - - “ 為深綠木霉za t r o v i r i d e ，哈茨木霉zh a r z i a n u m ，康氏木霉zk o n i n g i i ，長枝木霉 z l o n g i b r a c h i a t u m ，里氏木霉zr e e s e i ，鉤狀木霉t h a m a t u m ，裝絮木霉7 = t o m e n t o s u m ， 變綠木霉zv i r i d e s c e n s 和蓋姆斯木霉zg a m s i i 。其中裝絮木霉zt o m e n t o s u m 和蓋姆 斯木霉zg a m s i i 為中國新紀錄種。變綠木霉7 = v i r i d e s c e n s 為中國大陸新發(fā)現(xiàn)中，里 _ ，”? r 。 一“一 b _ _ h 氏木霉zr e e s e i 為首次在云南省發(fā)現(xiàn)的木霉種。 ( 2 ) i t s 序列測定結果。1 1 2 株菌的i t s 序列( 包含i t s l ，5 8 s ，i t s 2 ) 長度為 5 1 8 b p 5 5 4 b p ，共4 8 個單倍型。遺傳距離結果顯示，各組內木霉的遺傳距離差異較小， 其中l(wèi) o n g i b r a c h i a t u m 組內差異最小。p a c h y b a s i u m 組和t r i c h o d e r m a 組間差異不大。 l o n g i b r a c h i a t u m 組則與其他兩組組間差異較大。 ( 3 ) 根據(jù)i t s 區(qū)域序列構建的系統(tǒng)發(fā)育樹_ 將菌株分a ，b ，c3 個群：a 群主要是 l o n g i b r a c h i a t u m 組的7 = r e e s e i 和zl o n g i b r a c h i a t u m ，又可分為兩個分支a i ( t r e e s e o ， a 2 ( r 1 0 n g i b r a c h i a t u m ) ，兩個分支中都包含了它們的模式菌株。b 群為p a c h y b a s i u m 組下的木霉，由4 個分支組成，其中b l 包含了哈茨木霉( s w f c 8 7 0 0 ，s w f c 8 7 1 0 ， s w f c 8 7l8 ，s w f c 8 7 2 6 ，s w f c 8 7 31 ，s 、肝c 8 9 2 7 ，s w f c 8 9 2 9 ，s w f c 8 9 5 2 ， s w f c l 0 2 3 6 ，s w f c l 0 3 2 1 和s w f c l 0 3 2 2 ) 和哈茨木霉1 1 1 1 群的參考菌株以及裝絮木 霉( t t o m e n t o s u m ) s w f c 8 6 6 7 。b 2 中主要是哈茨木霉( s w f c 8 6 6 4 ，s w f c 8 6 7 2 ， s w f c 8 6 9 3 ，s w f c 8 9 4 5 ，s w f c 8 9 4 7 和s w f c 8 9 5 4 ) 和哈茨木霉的模式菌株。b 3 為 i 哈茨木霉s w f c l 0 2 1 6 ，t h 2 群和t h 4 群哈茨木霉的參考菌株以及裝絮木霉的模式菌 株。b 4 分支則是未鑒定到種的s w t c 9 1 0 9 和卷曲木霉的模式菌株。本次研究中 s w f c 8 6 6 7 與裝絮木霉的模式菌株i t s 序列有一定的差異。c 群為木霉屬下的 t r i c h o d e r m a 組，由5 個分支組成，c l 主要是本次鑒定的深綠木霉及其模式菌株以及 t h 3 型的哈茨木霉。c 2 為康氏木霉( s w f c 8 6 6 5 ，s w f c 8 6 7 4 ，s w f c 8 6 7 5 ，s w f c1 0 3 1 7 ， s w f c1 0 31 9 和s w f c 8 6 8 5 ) 及其的模式菌株、蓋姆斯木霉和兩株參考蓋姆斯木霉菌株 以及未鑒定到種的s w f c l 0 3 1 9 。c 3 則是由康氏木霉s w f c 8 6 7 6 、變綠木霉及其模式 菌株組成。c 4 由未鑒定到種的木霉s w f c1 0 1 6 4 ，s w f c l 0 2 1 0 和s w f c l 0 2 3 5 組成。 c 5 為鉤狀木霉分支，包含了鑒定的鉤狀木霉及其模式菌株。 ( 4 ) 通過i t s 序列建立系統(tǒng)發(fā)育樹，劃分出了三個不同的組。其中 l o n g i b r a c h i a t u m 組在發(fā)育進化中，與其他兩組關系比較遠。t f i c h o d e r m a 組和 p a c h y b a s i u m 組在進化分支中，處于同一個進化群中，關系比較近。l o n g i b r a c h i a t u m 組為單系組，t r i c h o d e r m a 組和為p a c h y b a s i u m 組為多系組。i t s 序列在組間關系上， 劃分比較明確。 ( 5 ) 本研究利用i t s 序列輔助鑒定，將形態(tài)上相近的里氏木霉和長枝木霉鑒定出， 1， 明確了里氏木霉和長枝木霉為兩個不同的種。對于集合種，完全利用i t s 序列分析種 p 一一一一 一 。 。一 一_ 間關系上，還存在著一定的不足之處。 關鍵詞：木霉，形態(tài)鑒定，i t s 序列測定，系統(tǒng)發(fā)育 i i a b s t r a c t ：t r i c h o d e r m as p p a r ef u n g iw h i c hb e l o n gt ot h ef a m i l yo fm o n i l i a c e a e ，t h eo r d e r h y p h o m y c e t a l e , t h e c l a s sh y p h o m y c e t e sa n dt h es u b p h ) r l u md e u t e r o m y c o t i n a e x c e p t s o m eo ft h e mi n f e c tm u s h r o o m st od e t e r i o r a t ec o m m e r c i a lf a n n i n g , m o s to ft h e ma r eu s e d a sb i o c o n t r o la g e n t sa g a i n s ta g r i c u l t u r a ld i s e a s e so fc r o p s ，v e g e t a b l e s ，a n df r u i t s t r i c h o d e r m as p p p l a ya ni m p o r t a n tr o l ei nh u m a np r o d u c t i o n , l i v i n ga n ds c i e n t i f i cr e s e a r c h t h e i rs p e c i a lg e o g r a p h i cp o s i t i o ni si ny u n n a np r o v i n c ea n d t l l e yp r o v i d e dw i t hv e r ya b - u n d a n tb i o - d i v e r s i t y t h e i rp h y l o g e n ya n db i o d i v e r s i t ya r es t u d i e di n f r e q u e n t l yi ny u n n a n , a l t h o u g ht r c h o d e r m as p p a r et h em o s ta b u n d a n ta n dt h em o s to fn e wr e c o r d so fc h i n aa r e r e p o r t e di ny u n n a n i nt h i sp a p e r , 112s t r a i n so f t r i c h o d r e m as p p w e r ei s o l a t ef r o ms o i l a n dp l a n ts a m p l e sw h i c hc o l l e c t e df r o mk u n m i n g ，p u e r ，d a l i ，l i j i a n g ，b a o s h a na n dz h a - o t o n g t h em o r p h o l o g ya r es t u d i e df i r s t , a n df o l l o w e db yi t ss e q u e n c i n ga n dp h y l o g e n t i c c l a d o g r a me s t a b l i s h i n g t h er e s u l t sc o n c l u d e da sf o l l o w s ： ( 1 ) t h r o u g hm o r p h o l o g i c a la n a l y s i s ，n i n es t r a i n sa m o n g11 2w e r ei d e n t i f i e da s t a t r o v i r i d e , zh a r z i a n u m , zk o n i n g i i , zl o n g i b r a c h i a t u m , zr e e s e i , zh a m a t u m , zt o m e n t o s u m , zv i r i d e s c e n sa n dzg a m s i i zt o m e n t o s u ma n dz g a m s i i s e v e ns t r a i n so f t h e ma r er e p o r t e da sn e wr e c o r d si nc h i n a i na d d i t i o nt o ，t w oo fs t r a i n si n c l u d e dz 俯扛 d e s c e n sa n dzr e e s e ia r en e wr e c o r d si ny u n n a n ( 2 ) t h ei t sr e g i o n sr a n g i n gi nl e n g t hf r o m518 b pt o5 5 4 b pw e r es e q u e n c e d ，112 s t r a i n sw e r ed i s t r i b u t e di n4 8h a p l o t y p l e s t h eg e n e t i cd i s t a n c eb a s e do ni t ss e q u e n c e s s h o w e dt h e r ew e r el i t t l ed i f f e r e n c e si ns a m es e c t i o n s t h em i n i m a ld i f f e r e n c ea p p e a r e d a m o n gm e m b e r so fs e c t i o nl o n g i b r a c h i a t u m t h e r ew e r el i t t l ed i f f e r e n c eb e t w e e nt r i o - c h o d e r m aa n ds e c t p a c h y b a s i u m a m o n gs e c t i o n s ，t h es e c t l o n g i b r a c h i a t u mw a sm o r e d i f f e r e n tf r o mt h eo t h e rs e c t i o n s ( 3 ) ap h y l o g e n i cc l a d g r a mb a s e do ni t ss e q u e n c e sw e r ee s t a b l i s h e d ，t h ep h y l o g e n i c c l a d g r a mr e v e a l e dt h a ta l lo fs t r a i n sw e r ea s s o r t e dt h r e ep h y l o g e n e t i cg r o u p s ( a ，ba n dc ) w i t hs t r o n gb o o t s t r a ps u p p o r t g r o u pa c o m p r i s e dt w oc l a d e s ( a 1a n da 2 ) c l a d e sa 1i n - e l u d e dzl o n g i b r a c h i a t u ma n dt h eh o l o t y p es t r a i n s ，c l a d e sa 2c o v e r e ds t r a i n szr e e s e i a n dt h eh o l o t y p es t r a i n s g r o u pb c o m p r i s e dt h r e ec l a d e s ( b 1 ，b 2a n d8 3 ) c l a d e s b 1 i i t c o v e r e dt h e i rh o l o t y p cs t r a i n sa n dt t o m e n t o s u m ，zh a r z i a n u m c l a d e s b 2c o v e r e dzh a r - z i a n u m c l a d e s b 3c o n t a i n e ds w f c 9 1 0 9 t h e yb e l o n g e dt os e c t p a c h y b a s i u m g r o u pc c o m p r i s e df o u rc l a d e s ( cl ，c 2 ，c 3a n dc 4 ) c l a d e c 1i n c l u d e dzh a m a t u m c l a d e c 2c o m - p r i s e dt h r e eu n i d e n t i f i e ds p e c i e s c l a d e c 3i n c l u d e dt a t r o v i r i d ea n dzv i r i d e s c e n s , a l s o c o v e r dt h e i rh o l o t y p e s c l a d e c 4c o v e r e dzg a m s i ia n dz k o n i n g i ia n dt h i sh o l o t y p c t h e y b e l o n g e dt os e c t t f i o c h o d e r m a ( 4 ) t h r o u g ht h ep h y l o g e n t i et r e e ，t h r e es e c t i o n sw e r ed i s c r i m i n a t e d s e c t 1 力n g i - b r a c h i a t u mw a sf a rr e l a t i o n s h i p 、析ms e c t t r i o c h o d e r m aa n ds e c t p a e h y b a s i u m s e c t t r i o c h o d e r m aa n ds e c t p a c h y b a s i u mw e r et h ec l o s e s tg r o u pi np h y l o g e n i cr e l a t i o n s h i p s e c t l o n g i b r a c h i a t u mw a sm o n o p h y l e t i cc l a d e ，s e c t t r i o c h o d e r m aa n ds e c t p a c h y - b a s i u m w e r em u l t i l i n e ( 5 ) i t ss e q u e n c i n gc o u l dd i f f e r e n t i a t eb e t w e e nzr e e s e ia n dzl o n g i b r a c h i a t u ma l t h o u g ht h e yc h a r a c t e r i z e dt h es a m em o r p h o l o g i c a lc h a r a c t e r s b u tt h em e t h o di d e n t i f i e d s o m ea g g r e g a t es p e c i e si n e f f i c i e n t l y i t ss e q u e n c i n gw e r ed e f i c i e n tt oi d e n t i f yt r i c h o d e r m as p p k e yw o r d s ：t r i c h o d e r m a , m o r h o l o g o c i a l ，i t ss e q u e n c e ，p h y l o g e n t i cc l a d g r a m i v 2 1 1b i s s e t t 系統(tǒng)4 2 1 2g a m s & b i s s e t t 分類系統(tǒng)5 2 1 3k u l l n i n g 等建立的分組系統(tǒng)。6 2 2 我國木霉研究現(xiàn)狀7 2 3 現(xiàn)在分子生物學技術在木霉分類上的應用9 2 4i t s 序列分析和系統(tǒng)發(fā)育學在分類中的應用1 2 2 4 1i t s 序列在真菌分類中的應用1 2 2 4 2 系統(tǒng)發(fā)育學在分類學中的應用1 4 3 木霉的分離、純化、保存及形態(tài)學鑒定1 9 3 1 材料與方法19 3 1 1 標本來源1 9 3 1 2 主要儀器設備1 9 3 1 3 木霉分離、純化及保藏1 9 3 1 4 木霉的形態(tài)鑒定j 2 0 3 2 結果與分析2 0 3 2 1 木霉菌的分離結果2 0 3 2 2 鑒定結果2 2 3 2 2 形態(tài)學分類依據(jù)2 2 3 2 4 鑒定各種特征集要2 7 3 2 5 未鑒定到種的菌株4 2 3 3 結論與討論4 5 4i t s 序列測定4 7 4 1 材料與方法4 7 1 3 2 j 4 1 1 材料來源4 7 4 1 2 試驗用主要藥品和儀器4 7 4 1 3 實驗方法4 8 4 2 結果與分析。5 0 4 2 1d n a 的檢測結果。5 0 4 2 2i t s 序列p c r 擴增結果5l 4 2 3i t s 序列測定結果5 2 5i t s 序列的系統(tǒng)發(fā)育分析5 3 5 1 方法5 3 5 2 結果與分析5 4 5 2 1 測定菌株單倍型統(tǒng)計5 4 5 2 2 遺傳距離計算結果5 7 5 2 3i t s 序列系統(tǒng)發(fā)育分析5 8 5 3 討論6 4 5 3 1 木霉的種間關系及組間關系“ 5 3 2 木霉屬真菌的分支群劃分6 5 。 6 結論與展望6 6 6 1 結論6 6 6 2 展望6 6 參考文獻一6 8 致 射。7 5 附錄。7 7 和生態(tài)系統(tǒng)多樣性的前提和基 在國際科技競爭和商品經(jīng)濟時代、信息經(jīng)濟時代飛速發(fā)展的今天，種質資源不僅 是傳統(tǒng)育種的基礎材料，還是基因工程等現(xiàn)代育種的重要必備資源，也是未來生物經(jīng) 濟時代基因工程不可替代的戰(zhàn)略性原材料。目前，國際上對種質資源的搶占、基因資 源的爭奪愈來愈激烈。發(fā)達國家早在半個世紀前就將森林遺傳資源的保護列入本國戰(zhàn) 略計劃，投資了大量資金和人力、物力進行研究開發(fā)【2 4 】。 我國已被列為世界上1 2 個高度生物多樣性的國家和地區(qū)之一，但作為生物多樣 性重要組成部分的真菌其物種多樣性的研究遠落后于許多國家，我們目前很難準確地 說明我國或任何一個地區(qū)的真菌物種種類的分布和生態(tài)壞境等。真菌有1 0 0 余目，我 國研究涉及到的不及一半，許多目、科在國外已有專著，而我國卻知之甚少?？梢哉f 我國在真菌物種研究上空白頗多，家底嚴重不清。 另一方面，隨著地球上人口膨脹，人類對自然資源的濫用，已直接和間接地威脅 著現(xiàn)存生物的生存，許多珍稀真菌正在從它們的原分布區(qū)逐漸消失，熱帶和亞熱帶的 許多物種很可能在我們確定它的存在及對其價值做出判斷以前就滅絕了。 云南特殊的地理位置，獨特的自然環(huán)境，復雜的生態(tài)系統(tǒng)和多樣化的生境條件， 孕育了極為豐富的生物資源，包括真菌資源。但目前對云南省真菌多樣性的研究較少， 特別是對微真菌的研究更為欠缺。 微真菌因研究力量和資金等條件的限制，缺乏調查研究資料，難以談及對其經(jīng)濟 價值的研究。所以加快對各種環(huán)境條件下的真菌，尤其是微真菌種類及其經(jīng)濟價值的 調查研究并對其進行必要的保存是十分重要的【5 6 1 。 木霉屬( t r i c h o d e r m ap e r s ：f r ) 真菌，在a i n s w o r t h 系統(tǒng)下屬于，真菌門( e u m y c o t a ) 半知菌f - j ( d e u t e r o m y c o t i n a ) ，絲孢綱( h y p h o m y e e t e s ) 、絲孢n ( h y p h o m y e e t a l e s ) ，絲 科( h y p h o m y c e t a e e a e ) 1 7 1 ，是自然界分布廣，數(shù)量大的一類真菌。它既是土壤微生物 的重要群落，也容易從植物的根際、葉片、種子及球莖表面、植物殘體及腐朽木材上 1 云南省部分地區(qū)木霉屬真菌多樣性及i t s 序列分析 都分離到o l 。 木霉除個別種可導致蘑菇生產(chǎn)污染造成減產(chǎn)外，大多數(shù)因其在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)上越來越 重要的生防作用，以及通過發(fā)酵所產(chǎn)生的纖維素酶、半纖維素酶、木聚糖酶、幾丁質 酶和蛋白酶等，被食品、衛(wèi)生、飼料、制漿、紡織、造紙、生物基因工程和環(huán)保等領 域廣泛應用，而越來越受到人們的關注。有些木霉菌還能通過與植物形成共生關系， 促進植物生長發(fā)育，誘導并激發(fā)植物自身免疫功能。對于木霉菌生活史的研究，有助 于查清子囊菌和半知菌類的對應關系。木霉在科學研究上也有重要價值。 由于木霉對人類的生產(chǎn)、生活和科學研究十分重要，而云南省因其特殊地理位置， 物種多樣性豐富，對于云南省木霉物種多樣性和系統(tǒng)發(fā)育研究卻少有報道。因此，研 究云南省木霉菌菌種的多樣性十分必要。 本實驗采用形態(tài)學分類的方法，對云南省部分地區(qū)采集的木霉進行分類鑒定，結 合i t s 序列分析進行同源性比較和系統(tǒng)發(fā)育學的研究。采取最大簡約法o v t p ) 和貝葉 斯法構建系統(tǒng)發(fā)育樹，探討木霉菌菌種之間系統(tǒng)發(fā)育的關系，為木霉分子系統(tǒng)學的深 入研究，提供依據(jù)。 本研究是國家自然科學基金資助的國家科技基礎平臺項目子項目“西南地區(qū)資源 真菌菌株標準化整理，整合及共享 的一部分內容。供研究的菌株及其數(shù)據(jù)庫提交國 家普通微生物菌種保藏中心永久保存，對于木霉屬種種質資源的異地保護，其意義重 大。 2 2 文獻綜述 2 文獻綜述 2 1 木霉的分類歷史沿革 木霉屬是p e r s o o n 于1 7 9 4 年建立的。最先描述的有4 個種：za u r e u mp e r s ，z n i g r e s c e n sp e r s ，zr o s e u mp e r s 和z 俯娩p e r s ，種間的區(qū)別是不同的分生孢子顏色。 現(xiàn)已證明p e r s o o n 當時所研究的4 個種只有綠色木霉zv i r i d e 仍屬于木霉屬，p e r s o o n 當時并沒有認識到木霉的有性型【l l , l ：z 。 1 8 6 0 年t u l a s n e t l 3 1 第一個闡明了zv i r i d e 和其有性型h y p o c r e ar u f a ( p e r s ：f r ) f r 的關系 1 8 7 1 年h a r z 提出了第一個精確的木霉屬界定，強調微觀特征，特別是產(chǎn)孢瓶體 ( p h i a l i d e ) 的重要性。 1 9 0 2 年，k o n i n g 首先從土壤中分離得到木霉。 1 9 3 9 年，a i s b y 研究了木霉的變異性，認為這些形態(tài)變異的木霉菌株都可描述為 一個種，即zv i r i d e 。主張木霉屬為單種屬( m o n o t y p i cg e n u s ) 。此后相當長一段時間， 凡是產(chǎn)綠色孢子的木霉都被定名為zv i r i d e l l 2 】。 r i f a i t l 4 1 依據(jù)微觀特征，界定了t r i c h o d e r m a 屬。即分生孢子梗為重復多次分枝， 排列成規(guī)則的樹狀結構；最早形成的分枝較長，后續(xù)形成的分枝隨著離基部距離的增 加而逐步變短。產(chǎn)孢瓶體為安瓿形至燒瓶形，基部常常收縮，在中間部位稍微膨大， 在近頂端突然變細而形成近柱形的頸部。產(chǎn)孢瓶體的排列為輪狀，位于分生孢子梗分 枝的終端，有時單生，位于靠近分生孢子梗與其分枝分隔的下方。在鼬f a i 發(fā)表有關 專論之前，一直沒有發(fā)現(xiàn)可用于屬下分類的特征。 1 9 6 9 年r i f a i t l 4 1 提出木霉屬的第一個分類系統(tǒng)，將木霉屬分為9 個集合種( s p e c i e s a g g r e g a t e s ) 。即綠色木霉( zv i r i d e ) 、康氏木霉( zk o n i n g i io u d ) 、黃綠木霉( za i r - r e o v i r i d er i f a i ) 、哈茨木霉( zh a r z i a n u mr i f a i ) 、長枝木霉( zl o n g i b r a c h i a t u mr i f a i ) 、擬 康氏木霉( zp e u d o k o n i n g i ir i f a i ) 、鉤狀木霉( zh a m a t u m ( b o n ) b a i n ) 、多孢木霉( z p o l y s p o r u m ( l i n k ：f r ) r i f a i ) 和小球木霉( zp i l u l i f e r u mw e b s t e r & r i f a i ) 。他將集合種定義 3 云南省部分地區(qū)木霉屬真菌多樣性及i t s 序列分析 為“形態(tài)上非常相似而且難以彼此區(qū)分的集合 ，例如，zh a m a t u m ，zh a r z i a n u m ， t p o l y s p o r u m 和t p i l u l i f e r u m 集合種各具有類似的分生孢子梗分枝方式，具有短的側 枝以及短而膨大的瓶體。zl o n g i b r a c h i a t u m 和zp s e u d o k o n i n g i i 都具有不規(guī)則分枝的 分生孢子梗，分枝和瓶體常常單生而不是呈輪狀排列。這個系統(tǒng)至今仍然在木霉分類 系統(tǒng)中使用，盡管現(xiàn)在已經(jīng)認識到集合種不能容納所有的形態(tài)變異。 此外，鼬筋、w e b s t e r 和d o ie ta l 研究了木霉與其有性型肉座菌屬( h y p o c r e af l ) 的聯(lián)系1 2 , 1 5 - 1 9 。s 鋤u e l s 【1 刎和其同事進一步研究了有性型的分類。2 0 世紀8 0 年代中 后期到9 0 年代初b i s s e t tj 2 0 - 2 4 1 提出了一個新的分類系統(tǒng)，在其分類系統(tǒng)中引進了組 的概念，他將木霉屬分成了5 個組：l o n g i b r a c h i a t u m 組、s a t t l m i s p o r u m 組、t r i c h o d e r m a 組、p a c h y b a s i u m 組和h y p o c r e a u m 組，組下設若干個種。b i s s e t t 的分類系統(tǒng)都是以 無性型形態(tài)性狀為依據(jù)建立起來的，而形態(tài)性狀易受環(huán)境影響而產(chǎn)生同塑性進而導致 趨同進化，從而可能錯誤地確定性狀的同源性，不能真正反映木霉屬各類群間的親緣 關系和演化系統(tǒng)。以生物大分子為主要研究內容的分子系統(tǒng)學研究表明，不同分類水 平的遺傳變異可以被描述并用作木霉屬級、種級的界定0 2 1 。 結合當時的分子生物學研究結果，g a i n s 和b i s s e t t 2 5 j 于1 9 9 8 年重新修訂了木霉 的分類組，在專著 t r i c h o d e r m aa n dg l i o c l a d i u m ) ) 中的形態(tài)學部分有詳細論述。將5 個組降為4 個組，取消了s a t u m i s p o r u m 組。其分組的主要依據(jù)是產(chǎn)孢區(qū)的形狀、分 生孢子梗的分枝方式及大小、瓶體的著生方式、形狀及數(shù)量。k u l l n i g e ta 1 【2 6 j 于2 0 0 2 年將h y p o c r e a u m 組并入p a c h y b a s i u m 組。由于木霉分類單位的不斷變化，而且木霉 種之間在形態(tài)上的相似性，美國農(nóng)業(yè)部植物菌物系統(tǒng)學實驗室建立了一個在線的木霉 分類鑒定系統(tǒng)( h t t p ：n t a r s g r i n g o v t a x a d e s c r i p t i o n s k e y s t r i c h o d e r m a l n d e x c f m ) 。這個 系統(tǒng)描述了4 5 個木霉種，包括沒有無性型名稱的肉座菌。 2 1 1b i s s e t t 系統(tǒng) b i s s e t t 在研究了木霉菌的形態(tài)變異后，認為m 筋集合種的分類系統(tǒng)中有的種概 念過寬，有必要從形態(tài)學上進一步細化。他結合d o i 等以及其他學者對肉座菌屬 ( h y p o c r e a ) 的研究成果，對木霉屬進行重新劃分，在木霉屬下設5 個鯉t ( s e c t i o n ) - 木霉 組( t d c h o d e r m a ) 、長枝木霉( l o n g i b a c h i a t u m ) 、粗梗綞 ( p a c h y b a s i u m ) 、肉座組 4 有性型是肉座菌 特征歸入了不同 康氏木霉( z 幻一 組包含桔綠木霉 ( zc i t r i n o v i r i d eb i s s e t t ) 、擬康氏木霉( zp s e u d o k o n i n g i o 、長枝木霉( zl o n g i b r a c h i a t u m ) 和疏枝木霉( t p a r c e r a m o u mb i s s e t t ) ；p a c h y b a s i u m 組包含t f a s c i c u l a t u mb i s s e t t 、哈茨 木霉( zh a r z i a n u m ) 、棕孢木霉i t f l a v o f u s c u m ( j m i l l e r , g i d d e n s & f o s t e r ) b i s s e t t 、假 綠木霉( zc r a s s u mb i s s e t t ) 、粘綠木霉 zv i r e n s ( j m i l l e r , g i d d e n s & f o s t e r ) v o na r x 、 zp o l y s p o r u m 、zp i l u l i f e r u m 、zc r o c e u mb i s s e t t 、小孢木霉( z = m i n u t i s p o u mb i s s e t t ) 、 裝絮木霉( zt o m e n t o s u mb i s s e t t ) 、頂孢木霉( zf e r t i l eb i s s e t t ) 、卷曲木霉( zs p i r a l e b i s s e t t ) 、長孢木霉( zl o n g i p i l eb i s s e t t ) 、方孢木霉( zo b l o n g i s p o r u mb i s s e t t ) 、粗狀木 霉( zs t r i g o s u mb i s s e t t ) 、短孢鉤狀木霉( zs t r i c t i p i l eb i s s e t t ) 、鉤狀木霉( zh a m a t u m ) 和 柔枝鉤狀木霉( zp u b e s c e n sb i s s e t t ) ；本組還包括早已命名的兩種膠質肉座菌暇艫 1 a t i n o s a ( t 0 d e ) f r 】和半圓肉座菌瞄s e m i o r b i s ( b e r k ) b e r k 】的無性型，但該無性型沒有予 以正式木霉菌種名名稱：h y p o e r e a n u m 包含肉座菌hl a c t e a ( f r ：f r ) f r 的無性型； s a t u m i s p o r u m 包含土孢木霉( zs a t u r n i s p o r u mh a m m i l ) 和加納木霉( zg h a n e n s ed o i ，y a b e & j s u g i y a m a ) 。b i s s e t t 雖然從屬的層次將木霉菌與肉座菌聯(lián)系起來，但多數(shù)種 的有性型并沒有闡述；該系統(tǒng)保留了硒陸系統(tǒng)中定義的種名，但種的范圍相對窄， 并為zh a m a t u m 選定了新模式標本( n c o t y p c ) ；還通過對里氏木霉( zr e e s e ie g s i m m o n s ) 和假鉤狀木霉( zi n h a m t u mv e e r k a m p & w g a i n s ) 的模式標本的形態(tài)觀察研 究，認為此二者分別為zl o n g i b a c h i a t u m 和zh a r z i a n u m 的異名。與融蹦僅用一種培 養(yǎng)基培養(yǎng)觀察木霉菌株不同，b i s s e t t 通過不同培養(yǎng)基對同一菌株進行培養(yǎng)，以確定其 變異特征；并且運用掃描電子顯微鏡對絕大部分種類的孢子進行了掃描觀察，使木霉 各種間區(qū)分的形態(tài)性狀更加精細準確，種的范圍變窄，同時也使木霉的分類鑒定工作 變得更為復雜1 2 , 2 0 - 2 4 。 2 1 2g a m s & b i s s e t t 分類系統(tǒng) 2 0 世紀9 0 年代末，g a i n s 和b i s s e t t p 5 1 對b i s s e t t 分類系統(tǒng)重新進行了修訂，保留 5 云南省部分地區(qū)木霉屬真菌多樣性及i t s 序列分析 了原系統(tǒng)的絕大部分核心內容，僅將部分內容作了調整。新系統(tǒng)將s a t u r n i s p o r u m 組 并入l o n g i b a c h i a t u m 組，使原系統(tǒng)的5 個組降為4 個，其分組依據(jù)仍是產(chǎn)孢方式及產(chǎn) 孢區(qū)的形態(tài)、分生孢子梗的分枝方式及粗細、瓶體的著生方式和形態(tài)以及孢子的形態(tài)、 顏色等；還根據(jù)k u h l s l 2 7 】等對r d n a 的i t s 序列分析，重新承認zr e e s e i 為一個種。 此外，依據(jù)g a m sw 等在對zh a r i z i a n u m 種進行的新模式標定中，與zi n h a m a t u m 的 前模式標本兩者在r f l p 和i t s l 序列分析上的微小差別，以及與zv i r i d e 和za l t o v i r i d e 的關系，將zi n h a m a t u m 重新建立，并將zh a r i z i a n u m 歸入t r i c h o d e r m a 。另外， 在t r i c h o d e r m a 組中還增加了酒紅肉座菌( hv i n o s ac o o k e ) 的無性型，該無性型也沒有 予以正式的木霉菌種的名稱。g a m s & b i s s e t t 系統(tǒng)包含的木霉菌種類有3 4 個。該系統(tǒng) 的另一個特點是對現(xiàn)有種的有性型資料進行了總結，雖明確的種類僅限于zc i t r i n o v i r i d e ( 有性型為月= s c h w e i n i t z i i ：f r ) s a c c ) 、zr e e s e 故有性型為月= j e c o r i n ab e r k & b r ) 和z 即6 印d ，“小( 有性型為hp a c h y b a s i o i d e sd o i ) 1 1 2 2 洌。 2 1 3k u l l n i n g 等建立的分組