1挑戰(zhàn)杯資料 大挑 校賽 第十一屆挑戰(zhàn)杯各學(xué)院資料匯總初賽-200812 動(dòng)科學(xué)院 何桑

序號(hào)： 編碼： 第十一屆“挑戰(zhàn)杯”全國(guó)大學(xué)生課外學(xué)術(shù)科技作品競(jìng)賽華南農(nóng)業(yè)大學(xué)選拔賽作品申報(bào)書(shū) 作品名稱(chēng)： pIFN-多位點(diǎn)基因打靶載體的構(gòu)建 所在學(xué)院： 動(dòng)物科學(xué)學(xué)院 申報(bào)者姓名 （集體名稱(chēng)）： 何桑 何英俊 李凱華 袁玉娟 類(lèi)別：自然科學(xué)類(lèi)學(xué)術(shù)論文哲學(xué)社會(huì)科學(xué)類(lèi)社會(huì)調(diào)查報(bào)告和學(xué)術(shù)論文科技發(fā)明制作A類(lèi)科技發(fā)明制作B類(lèi)說(shuō) 明1. 申報(bào)者應(yīng)在認(rèn)真閱讀此說(shuō)明各項(xiàng)內(nèi)容后按要求詳細(xì)填寫(xiě)。2申報(bào)者在填寫(xiě)申報(bào)作品情況時(shí)只需根據(jù)個(gè)人項(xiàng)目或集體項(xiàng)目填寫(xiě)A1或A2表，根據(jù)作品類(lèi)別（自然科學(xué)類(lèi)學(xué)術(shù)論文、哲學(xué)社會(huì)科學(xué)類(lèi)社會(huì)調(diào)查報(bào)告和學(xué)術(shù)論文、科技發(fā)明制作）分別填寫(xiě)B(tài)1、B2或B3表。所有申報(bào)者可根據(jù)情況填寫(xiě)C表。3表內(nèi)項(xiàng)目填寫(xiě)時(shí)一律用打印，字跡要端正、清楚，此申報(bào)書(shū)可復(fù)制。4序號(hào)、編碼由競(jìng)賽組委會(huì)填寫(xiě)。5學(xué)術(shù)論文、社會(huì)調(diào)查報(bào)告及所附的有關(guān)材料必須是中文（若是外文，請(qǐng)附中文本），請(qǐng)用4號(hào)楷體打印在A4紙上，附于申報(bào)書(shū)后，字?jǐn)?shù)在8000字以?xún)?nèi), 調(diào)查報(bào)告類(lèi)每篇在15000字以?xún)?nèi)。6其他參賽事宜請(qǐng)向校團(tuán)委咨詢(xún)。聯(lián)系電話：85283396，電子郵箱：A2申報(bào)者情況（集體項(xiàng)目）說(shuō)明：1.必須由申報(bào)者本人按要求填寫(xiě)； 2.申報(bào)者代表必須是作者中學(xué)歷最高者，其余作者按學(xué)歷高低排列； 3.本表中的學(xué)籍管理部門(mén)簽章視為對(duì)申報(bào)者情況的確認(rèn)。申報(bào)者代表情況姓名何桑性別男出生年月1989-6-25學(xué)院動(dòng)物科學(xué)學(xué)院系別、專(zhuān)業(yè)、年級(jí)動(dòng)物科學(xué)專(zhuān)業(yè)2007級(jí)學(xué)歷高中學(xué)制4年入學(xué)時(shí)間2007-9作品名稱(chēng)pIFN-多位點(diǎn)基因打靶載體的構(gòu)建畢業(yè)論文題目通訊地址華南農(nóng)業(yè)大學(xué)華山宿舍11棟302郵政編碼辦公電住地通訊地址華南農(nóng)業(yè)大學(xué)華山宿舍11棟302郵政編碼住宅電話其他作者情況姓 名性別年齡學(xué)歷所在單位何英俊男20高中華南農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科學(xué)學(xué)院李凱華女22高中華南農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科學(xué)學(xué)院袁玉娟女19高中華南農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科學(xué)學(xué)院資格認(rèn)定學(xué)院學(xué)籍管理部門(mén)意見(jiàn)以上作者是否為2009年7月1日前正式注冊(cè)在校的全日制非成人教育、非在職的高等學(xué)校中國(guó)籍本科生、碩士研究生或博士研究生。是 否 （學(xué)院蓋章）2008年 12 月 14 日院、系負(fù)責(zé)人或?qū)熞庖?jiàn)本作品是否為課外學(xué)術(shù)科技或社會(huì)實(shí)踐活動(dòng)成果。是 否負(fù)責(zé)人簽名：2008年 12 月14 日B1申報(bào)作品情況（自然科學(xué)類(lèi)學(xué)術(shù)論文）說(shuō)明：1必須由申報(bào)者本人填寫(xiě)；2本部分中的科研管理部門(mén)簽章視為對(duì)申報(bào)者所填內(nèi)容的確認(rèn)；3作品分類(lèi)請(qǐng)按作品的學(xué)術(shù)方向或所涉及的主要學(xué)科領(lǐng)域填寫(xiě)；4碩士研究生、博士研究生作品不在此列。作品全稱(chēng)作品分類(lèi)（D） A機(jī)械與控制（包括機(jī)械、儀器儀表、自動(dòng)化控 制、工程、交通、建筑等） B信息技術(shù)（包括計(jì)算機(jī)、電信、通訊、電子等） C數(shù)理（包括數(shù)學(xué)、物理、地球與空間科學(xué)等） D生命科學(xué)（包括生物、農(nóng)學(xué)、藥學(xué)、醫(yī)學(xué)、健 康、衛(wèi)生、食品等） E能源化工（包括能源、材料、石油、化學(xué)、化 工、生態(tài)、環(huán)保等）作品撰寫(xiě)的目的和基本思路本論文通過(guò)基因克隆獲得豬rRNA基因，并利用其ITS重復(fù)序列作為靶位點(diǎn)，以pIFN-為目的基因構(gòu)建多位點(diǎn)打靶載體，為后期結(jié)合精子載體法生產(chǎn)轉(zhuǎn)基因豬提供重要材料。作品的科學(xué)性、先進(jìn)性及獨(dú)特之處轉(zhuǎn)基因技術(shù)育種可以根據(jù)人們的需要向動(dòng)物基因組導(dǎo)入外源基因，甚至可以避開(kāi)物種間雜交不育的生殖隔離導(dǎo)入外種生物的基因，在較短的時(shí)期內(nèi)培育出自然界不能產(chǎn)生或常規(guī)育種方法不能培育或難以培育的動(dòng)物新品種，從而加快動(dòng)物改良進(jìn)程，提高選擇效率。豬pIFN-是機(jī)體內(nèi)具有調(diào)節(jié)免疫應(yīng)答和抗病毒感染作用的重要細(xì)胞因子之一，能夠促進(jìn)T細(xì)胞分化成熟和增殖，激活細(xì)胞毒性T細(xì)胞和NK細(xì)胞，增強(qiáng)這些細(xì)胞的殺傷活性。從而提高豬的抗疾病能力。本作品所用技術(shù)科學(xué)、先進(jìn)，轉(zhuǎn)基因豬可能獲得較好的抵抗疾病的能力。作品的實(shí)際應(yīng)用價(jià)值和現(xiàn)實(shí)意義以pIFN-為目的基因構(gòu)建多位點(diǎn)打靶載體，為后期結(jié)合精子載體法生產(chǎn)轉(zhuǎn)基因豬提供重要材料。如果成功獲得轉(zhuǎn)pIFN-基因的豬，將可能提高豬的抗疾病能力，增加養(yǎng)豬生產(chǎn)效益。學(xué)術(shù)論文文摘在傳統(tǒng)的轉(zhuǎn)基因方法中，外源基因一般隨機(jī)整合到染色體的基因組上或以附加體形式存在，難以在轉(zhuǎn)基因動(dòng)物體內(nèi)穩(wěn)定表達(dá)和遺傳。利用基因打靶技術(shù)可以做到外源基因的定點(diǎn)整合。但是常規(guī)的基因打靶又存在技術(shù)要求高、打靶效率太低的問(wèn)題。動(dòng)物rRNA基因是一種GC含量高、結(jié)構(gòu)復(fù)雜的重復(fù)序列，以其ITS序列作為基因打靶位點(diǎn)可以顯著提高基因的打靶效率，而且使外源基因得到高水平穩(wěn)定表達(dá)。本研究以豬的全基因組DNA為模板成功擴(kuò)增豬rRNA基因間的ITS重復(fù)序列，并以此重復(fù)序列作為靶位點(diǎn)，以pIFN-基因?yàn)槟康幕驑?gòu)建多位點(diǎn)基因打靶載體，為后期結(jié)合精子載體法生產(chǎn)轉(zhuǎn)pIFN-基因豬提供載體材料。研究以pUC18質(zhì)粒作為骨架，從豬基因組DNA擴(kuò)增HRDS1,并從已有的質(zhì)粒上獲得pIFN-基因，將pIFN-基因插入到pCDNA3.1(+)質(zhì)粒中，設(shè)計(jì)引物擴(kuò)增出含有CMV啟動(dòng)子和BGH終止信號(hào)的基因表達(dá)盒CMV-IFN。綜合分析pUC18和兩個(gè)序列的酶切位點(diǎn)，首先把豬CMV-IFN表達(dá)盒插入pUC18質(zhì)粒中構(gòu)建成PUCIFN質(zhì)粒，然后成功的構(gòu)建多位點(diǎn)基因打靶載體PUCIFN-HRDS1。作品在何時(shí)、何地、何種機(jī)構(gòu)舉行的會(huì)議上或報(bào)刊上發(fā)表及所獲獎(jiǎng)勵(lì)待發(fā)表鑒定結(jié)果待鑒定請(qǐng)?zhí)峁?duì)于理解、審查、評(píng)價(jià)所申報(bào)作品具有參考價(jià)值的現(xiàn)有技術(shù)及技術(shù)文獻(xiàn)的檢索目錄 提交作品時(shí)提供申報(bào)材料清單（申報(bào)論文一篇，相關(guān)資料名稱(chēng)及數(shù)量） 科研管理部門(mén)簽章 情況屬實(shí)。 2008年 12 月 14 日C.當(dāng)前國(guó)內(nèi)外同類(lèi)課題研究水平概述說(shuō)明：1.申報(bào)者可根據(jù)作品類(lèi)別和情況填寫(xiě)； 2.填寫(xiě)此欄有助于評(píng)審。轉(zhuǎn)基因研究水平：自1982年美國(guó)科學(xué)家Palmiter等將大鼠生長(zhǎng)激素(GH)基因?qū)胄∈笫芫阎蝎@得轉(zhuǎn)基因“超級(jí)鼠”以來(lái)，轉(zhuǎn)基因動(dòng)物已經(jīng)成為當(dāng)今生命科學(xué)中發(fā)展最快，最熱門(mén)的領(lǐng)域之一。1985年，美國(guó)人用轉(zhuǎn)移GH基因、GRF基因和IGFl基因的方法，生產(chǎn)出轉(zhuǎn)基因兔、轉(zhuǎn)基因羊和轉(zhuǎn)基因豬。同年，德國(guó)Berm轉(zhuǎn)入人的GH基因生產(chǎn)出轉(zhuǎn)基因兔和轉(zhuǎn)基因豬；1987年，美國(guó)的Gordon等人首次報(bào)道在小鼠的乳腺組織中表達(dá)了人的tPA基因；1991年，英國(guó)人在綿羊乳腺中表達(dá)了人的抗胰蛋白酶基因。隨后，世界各國(guó)先后開(kāi)展此項(xiàng)技術(shù)的研究，并相繼在兔、羊、豬、牛、雞、魚(yú)等動(dòng)物上獲得成功。我國(guó)在轉(zhuǎn)基因動(dòng)物研究方面也取得了較大的進(jìn)展。1985年首次成功獲得轉(zhuǎn)基因魚(yú)，1990年成功研制出轉(zhuǎn)基因豬，1991年獲得快速生長(zhǎng)的轉(zhuǎn)基因羊。1998年2月中國(guó)科學(xué)家又獲得了在所分泌的乳汁中含有蛋白凝血因子X(jué)的轉(zhuǎn)基因山羊。目前大部分轉(zhuǎn)基因家畜均已在我國(guó)研制成功。基因打靶水平：基因打靶技術(shù)興起于20世紀(jì)80年代（Doetschman et al,1987; Thomas et al,1987; Koller et al,1989）。具體是指通過(guò)DNA定點(diǎn)同源重組，改變基因組中的某一特定基因，從而在生物活體內(nèi)研究此基因的功能。基因打靶技術(shù)是一種定向改變生物活體遺傳信息的實(shí)驗(yàn)手段，它的產(chǎn)生和發(fā)展建立在胚胎干(ES)細(xì)胞技術(shù)和同源重組技術(shù)成就的基礎(chǔ)之上，并促進(jìn)了相關(guān)技術(shù)的進(jìn)一步發(fā)展。基因打靶技術(shù)將廣泛應(yīng)用于基因功能研究、人類(lèi)疾病動(dòng)物模型的研制以及經(jīng)濟(jì)動(dòng)物遺傳物質(zhì)的改良等方面。目前國(guó)際上已經(jīng)建立了條件性、可誘導(dǎo)性基因打靶系統(tǒng)，它使得對(duì)基因靶位點(diǎn)在時(shí)間和空間上的調(diào)控更加精確（Orban PC et al,1992; Lakso M et al,1996）。pIFN-研究：pIFN-是機(jī)體內(nèi)具有調(diào)節(jié)免疫應(yīng)答和抗病毒感染作用的重要細(xì)胞因子之一，能夠促進(jìn)T細(xì)胞分化成熟和增值，激活細(xì)胞毒性T細(xì)胞和NK細(xì)胞，增強(qiáng)這些細(xì)胞的殺傷活性。pIFN-基因全長(zhǎng)為501bp，編碼166個(gè)氨基酸，前23個(gè)氨基酸組成信號(hào)肽，后143個(gè)氨基酸為pIFN-活性成熟蛋白，不含有半胱氨酸（Kishko et al,1999）。實(shí)驗(yàn)表明，重組pIFN-能抑制感染傳染性胃腸炎病毒的豬上皮細(xì)胞和肺巨噬細(xì)胞中的病毒復(fù)制；Bautista(1999) pIFN-能明顯一只豬繁殖與呼吸綜合征病毒（Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV）在豬肺泡巨噬細(xì)胞中的增值（Bautista et al,1999），在抗豬瘟病毒（CSFV）的細(xì)胞免疫中發(fā)揮重要作用（Suradhat et al,2001）。非病毒源的佐劑功能研究表明，pIFN-能夠增強(qiáng)仔豬對(duì)痢疾抗原的免疫應(yīng)答（Heath et al,1990），其在抗沙門(mén)氏菌感染中也起重要作用（Bao et al,2000）。據(jù)研究報(bào)道，通過(guò)原核表達(dá)系統(tǒng)對(duì)pIFN-的體外表達(dá)取得了成功（郭瀛軍，2001；吳文學(xué)等，2002；曹瑞兵等，2004閆麗萍等，2004），且表達(dá)產(chǎn)物具有抗病毒的生物學(xué)活性（任慧英，2005）。目前，尚無(wú)成功地構(gòu)建轉(zhuǎn)pIFN-基因的打靶載體的報(bào)道，也沒(méi)有發(fā)現(xiàn)成功地將pIFN-基因轉(zhuǎn)入家畜體內(nèi)并得到表達(dá)的報(bào)道。D.推薦者情況及對(duì)作品的說(shuō)明說(shuō)明：1由推薦者本人填寫(xiě)； 2推薦者必須具有高級(jí)專(zhuān)業(yè)技術(shù)職稱(chēng)，并是與申報(bào)作品相同或相關(guān) 領(lǐng)域的專(zhuān)家學(xué)者或?qū)I(yè)技術(shù)人員（教研組集體推薦亦可）； 3推薦者填寫(xiě)此部分，即視為同意推薦； 4推薦者所在單位簽章僅被視為對(duì)推薦者身份的確認(rèn)。推薦者情況姓 名劉德武性別男年齡42職稱(chēng)副教授工作單位華南農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科學(xué)學(xué)院通訊地址廣東省廣州市天河區(qū)五山路483號(hào)華南農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科學(xué)學(xué)院郵政編碼510642單位電宅電話推薦者所在單位簽章劉德武老師是華南農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科學(xué)學(xué)院副教授 （簽章） 2008 年 12 月 14 日請(qǐng)對(duì)申報(bào)者申報(bào)情況的真實(shí)性作出闡述申報(bào)者在本校動(dòng)物遺傳育種實(shí)驗(yàn)室完成上述工作，申報(bào)內(nèi)容屬實(shí)請(qǐng)對(duì)作品的意義、技術(shù)水平、適用范圍及推廣前景作出您的評(píng)價(jià)轉(zhuǎn)基因豬的生產(chǎn)是目前國(guó)內(nèi)外研究的熱點(diǎn)問(wèn)題。08年我國(guó)發(fā)布的重大轉(zhuǎn)基因?qū)ｍ?xiàng)中就將轉(zhuǎn)基因豬新材料的培育作為重要內(nèi)容。轉(zhuǎn)pIFN-基因的打靶載體的構(gòu)建對(duì)進(jìn)一步生產(chǎn)轉(zhuǎn)基因豬打下了良好的基礎(chǔ)。轉(zhuǎn)pIFN-基因豬的生產(chǎn)將為培育抗病新品種提供新材料。其它說(shuō)明推薦者情況姓 名吳珍芳性別男年齡38職稱(chēng)教授工作單位華南農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科學(xué)學(xué)院通訊地址廣東省廣州市天河區(qū)五山路483號(hào)華南農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科學(xué)學(xué)院郵編5106