游離三碘甲狀腺原氨酸測定SOP.doc

文件名稱：游離三碘甲狀腺原氨酸（FT3）測定SOP版次： （共 頁）文件編號(hào)：批準(zhǔn)者：編寫者：審核者：生效日期：1.目的 規(guī)范游離三碘甲狀腺氨酸（FT3）測定程序，確保檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性。2.測定方法 競爭性結(jié)合酶免疫檢驗(yàn)。3. 測定原理 Access Free T3 測定是一種競爭結(jié)合免疫法測定，將樣本添加到含堿性磷酸酶結(jié)合物抗T3 單克隆抗體的反應(yīng)管中。在溫育過程中，樣本中的游離T3 與抗T3 抗體發(fā)生反應(yīng)。然后將包被著鏈霉親和素和生物素化T3 相似物的微粒添加到混合物中。抗T3 抗體上的未結(jié)合位點(diǎn)通過T3 相似物與微粒相結(jié)合。在反應(yīng)管內(nèi)溫育完成后，結(jié)合在固相上的物質(zhì)將置于一個(gè)磁場內(nèi)被吸住，而未結(jié)合的物質(zhì)被沖洗除去。然后，將化學(xué)發(fā)光底物 Lumi-Phos* 530添加到反應(yīng)管內(nèi)，然后由照度計(jì)對(duì)反應(yīng)中所產(chǎn)生的光進(jìn)行測量。所產(chǎn)生光的量與樣本內(nèi)游離T3 的濃度成反比。樣本內(nèi)分析物的量由所儲(chǔ)存的多點(diǎn)校準(zhǔn)曲線來確定。4.性能參數(shù)無須輸入操作參數(shù)，儀器根據(jù)預(yù)設(shè)的分析項(xiàng)目參數(shù)和試劑條碼的信息自動(dòng)進(jìn)行分析。標(biāo)本量125 L。 4.1 精密度：批內(nèi)CV 12.5。4.2 分析范圍：0.3 30.0 pg/ml (0.4 50.0 pmol/L ) 。4.3 靈敏度：0.3 pg/ml。4.4 方法的有限性及干擾因素：膽紅素10mg/L、TG 18 g/L、肝素、Hb 2.5 g/L在檢測允許的精密度范圍內(nèi)對(duì)結(jié)果沒有影響。5.原始樣本系統(tǒng)5.1 總則：符合本室檢驗(yàn)標(biāo)本采集手冊(cè) 5.2 常規(guī)靜脈采血約2ml，不抗凝，置普通試管中?；虿捎煤蛛x膠的真空采血管。5.3 檢驗(yàn)申請(qǐng)單和血標(biāo)本試管標(biāo)上統(tǒng)一且唯一的標(biāo)識(shí)符。5.4 急診標(biāo)本采集后，在檢驗(yàn)申請(qǐng)單上填寫標(biāo)本采集時(shí)間。5.5 標(biāo)本采集后與檢驗(yàn)申請(qǐng)單一起及時(shí)運(yùn)送至檢驗(yàn)科。專人負(fù)責(zé)標(biāo)本的接收并記錄標(biāo)本的狀態(tài)，對(duì)不合格標(biāo)本予以拒收。5.6 標(biāo)本拒收標(biāo)準(zhǔn)5.6.1 標(biāo)本量過少。5.6.2 檢驗(yàn)申請(qǐng)單上姓名或條碼與標(biāo)本上姓名或條碼不一致。5.6.3 檢驗(yàn)項(xiàng)目與標(biāo)本類型不符，或抗凝劑不符。5.6.4 標(biāo)本送檢時(shí)已放置時(shí)間過久。5.6.5 輸液時(shí)在同側(cè)血管抽血。5.6.6 標(biāo)本嚴(yán)重容血或脂血。5.6.7 無標(biāo)本（空管）5.6.8 條碼包含信息不全（如無采樣時(shí)間等）。 6.標(biāo)本保存6.1 接收標(biāo)本后在30min內(nèi)將標(biāo)本離心分離出血清, 避免溶血。6.2 標(biāo)本保存時(shí)間：室溫（1525）下可穩(wěn)定8h，普通冰箱中（28）穩(wěn)定48h。需較長時(shí)間保存應(yīng)將血清存放于-20。冰凍標(biāo)本僅可凍融一次。為避免標(biāo)本中水分揮發(fā)使血清濃縮，對(duì)保存時(shí)間超過1d的標(biāo)本均密閉保存。6.3 已完成測試的標(biāo)本保持完整的識(shí)別號(hào)，置28冰箱內(nèi)保存7d。7.設(shè)備和試劑7.1 設(shè)備： 美國Beckman Coulter公司 DXI 800免疫分析系統(tǒng)。7.2 試劑： ACCESS專用FT3測定試劑盒，由美國Beckman Coulter公司出品，產(chǎn)品號(hào)33830。未打開的試劑包保存于28在效期內(nèi)穩(wěn)定，不可凍存。開啟的試劑包載入系統(tǒng)中可使用28d。7.3 試劑盒組分7.3.1 磁性微粒子：包被了鏈親和素的磁性微粒子，和Tris緩沖液。7.3.2 液體試劑：鼠抗T3單克隆抗體-ALP結(jié)合物和Tris緩沖液。7.3.3結(jié)合于生物素上的T3類似物，Tris緩沖液。7.3.40.4N NaOH，和0.4N HCl。7.3.5試劑包即開即用，無須特殊準(zhǔn)備。7.4 其他試劑與用品7.4.1 化學(xué)發(fā)光底物：ACCESS的通用發(fā)光劑底物液，Cat. No. 81906。7.4.2 清洗緩沖液、反應(yīng)杯等。8.校準(zhǔn)程序8.1 校準(zhǔn)品: 美國Beckman Coulter公司提供的FT3配套校準(zhǔn)液需貯28。5個(gè)濃度。有校準(zhǔn)卡片。8.2 校準(zhǔn)類型和校準(zhǔn)點(diǎn)數(shù)目：非線性模式，6個(gè)校準(zhǔn)點(diǎn)。8.3 校準(zhǔn)周期：在同一批號(hào)試劑的使用效期內(nèi)校準(zhǔn)曲線有效，但在間隔14d后需要重新校準(zhǔn)。每當(dāng)：更換試劑批號(hào)或出現(xiàn)質(zhì)控漂移時(shí)；儀器進(jìn)行全面保養(yǎng)后；儀器的重要零件更換后，進(jìn)行一次校準(zhǔn)。8.4 校準(zhǔn)液重建方法：液體試劑，直接使用。9.質(zhì)量控制程序 9.1 質(zhì)控品：采用美國Beckman Coulter公司提供配套的質(zhì)控品。9.2 質(zhì)控液準(zhǔn)備9.2.1 小心打開瓶蓋，避免內(nèi)容物的任何損失。9.2.2 在2025的室溫下，準(zhǔn)確吸取5ml蒸流水復(fù)容1瓶質(zhì)控血清。9.2.3 蓋上橡皮塞，擰緊瓶蓋，使用前避光30分鐘。9.2.4 輕輕旋轉(zhuǎn)，確保所有的凍干物完全溶解。9.2.5 勿搖晃小瓶。9.2.6 分裝致離心管中，每管0.5ml -20保存。9.3質(zhì)控品測定：在每一批標(biāo)本中測定質(zhì)控血清一次。9.4 質(zhì)控規(guī)則：采用L-J質(zhì)控圖，以3s為失控限。標(biāo)準(zhǔn)差由本室實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)得出。9.5 如出現(xiàn)失控情況，按室內(nèi)質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)操作程序采取各種有效的糾正措施及時(shí)糾正，并在確認(rèn)重新回復(fù)到控制狀態(tài)后開始標(biāo)本檢測。10.檢驗(yàn)程序步驟裝載試劑 進(jìn)行校準(zhǔn) 進(jìn)行質(zhì)控 輸入標(biāo)本檢測項(xiàng)目 加載標(biāo)本 標(biāo)本測定 結(jié)果復(fù)核 報(bào)告11. 結(jié)果計(jì)算儀器根據(jù)校準(zhǔn)曲線自動(dòng)給出每個(gè)標(biāo)本測定結(jié)果。測定結(jié)果單位以pg/mL或pmol/L 表示。換算公式：pmol/L pg/ml1.53612. 檢驗(yàn)結(jié)果的報(bào)告及范圍12.1 結(jié)果的報(bào)告12.1.1 結(jié)果經(jīng)審核后，確認(rèn)準(zhǔn)確無誤后發(fā)出報(bào)告。12.1.2 報(bào)告單上標(biāo)明結(jié)果的計(jì)量單位、參考區(qū)間、報(bào)告日期、時(shí)間、操作者和審核者簽名，并有與申請(qǐng)單相同的醫(yī)學(xué)信息。12.1.3 如收到標(biāo)本的質(zhì)量可能對(duì)測定結(jié)果有影響的也在報(bào)告單上指出。11.2 報(bào)告范圍0.3 30.0 pg/ml (0.4 50.0 pmol/L )，超過此范圍的標(biāo)本應(yīng)當(dāng)報(bào)告為50.0 pmol/L。對(duì)高值標(biāo)本不作稀釋后重測，因?yàn)橄♂寱?huì)干擾標(biāo)本中游離激素和總激素之間的平衡。13. 參考范圍參考值（血清）： 5.8 9.2pg/ml (3.86 pmol/L )14 臨床意義14.1 FT3是血液中主要的具有生理活性的甲狀腺素，甲狀腺素結(jié)合蛋白濃度正常時(shí)，F(xiàn)T3水平與TT3相關(guān)。14.2當(dāng)甲狀腺素結(jié)合蛋白或血清白蛋白的濃度低下時(shí)，如 TT3的濃度有改變，測定FT3就很有意義。大約有5%甲亢患者有單獨(dú)的FT3增高。14.3 當(dāng)甲狀腺機(jī)能亢進(jìn)時(shí)，F(xiàn)T3濃度水平通常升高，這是區(qū)分甲狀腺機(jī)能正常與中毒的界限，也是確認(rèn)甲狀腺機(jī)能亢進(jìn)癥及對(duì)其的治療監(jiān)測的良好指標(biāo)。14.4 當(dāng)甲狀腺機(jī)能減退時(shí)，F(xiàn)T3濃度水平有減低趨勢(shì)，但是這種減低并不能為診斷提供充分明確的信息。15 結(jié)果審核以及與相關(guān)項(xiàng)目的聯(lián)系15.1 由資深專業(yè)人員負(fù)責(zé)檢驗(yàn)結(jié)果的審核。15.2 審核者認(rèn)真審核每一個(gè)測定結(jié)果，對(duì)發(fā)出報(bào)告結(jié)果的可靠性負(fù)責(zé)，并在報(bào)告單的審核者處簽名。15.3 相關(guān)項(xiàng)目：審核與其他相關(guān)甲狀腺激素等的關(guān)系，如出現(xiàn)與臨床不符甚至相悖的情況，應(yīng)分析與查找原因16有關(guān)引用程序與文件16.1 DXI 800自動(dòng)發(fā)光免疫分析儀儀器標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程。16.2免疫檢驗(yàn)室內(nèi)質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)操作程序。16.3檢驗(yàn)結(jié)果審核程序。16.4標(biāo)本送檢和接收程序。17參考文獻(xiàn)17.1陸永綏，張偉民主編. 臨床檢驗(yàn)管理與技術(shù)規(guī)程. 杭州:浙江大學(xué)出版社, 2004.17.2 Beckman Coulter 游離三碘甲狀腺氨酸（FT3）測定試劑盒說明書。17.3 葉應(yīng)嫵，王毓三，申子瑜主編. 全國臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程 (第三版). 東南大學(xué)