韓國檢測霉菌的方法是Howard霉菌計(jì)數(shù)法.doc

韓國檢測霉菌的方法是Howard霉菌計(jì)數(shù)法（Howard Mold Counting Assay）。其方法如下：1.所需設(shè)備1) 高速混合器可調(diào)速的高速混合器，4-8個(gè)尖銳的不銹鋼刃在200ml容量的不銹鋼杯容器的底部附近旋轉(zhuǎn)，使用旋轉(zhuǎn)速度最少010，000rpm之間，并用帶有旋轉(zhuǎn)速度儀的高速混合器。2) Howard霉菌計(jì)數(shù)玻片（Howard Mold Counting Slide）依外壕被圍繞的2015mm大小的四角的玻璃片。試料點(diǎn)滴平面的兩個(gè)側(cè)面蓋玻片支架比試料點(diǎn)滴平面高出0.1mm的整齊突起。蓋玻片放在支架上面時(shí)，使用試料點(diǎn)滴平面與蓋玻片之間的深度達(dá)到0.1mm的玻片。3) 顯微鏡使用配有4個(gè)黑白接物鏡并以10-400倍的倍率可以觀察的顯微鏡。2.試劑1）1%氫氧化鈉溶液（NaOH）2）氧化硅膠液小包制或者2-辛醇（2-octanol）3）穩(wěn)定液（5%果膠溶液）：高速攪拌器里注入475ml、85水?dāng)嚢璧耐瑫r(shí)將25g的果膠（pectin）少量的添加并溶解。3試驗(yàn)操作1）試驗(yàn)溶液的調(diào)配 稱5g檢樣放入高速混合器。100ml的1%氫氧化鈉溶液分2次添加，第一次添加約30ml在10，000rpm的速度下攪拌5秒，然后用余下的70ml清洗混合器內(nèi)壁上的附著物。把混合器內(nèi)的混合物以10，000rpm的速度攪拌3分鐘后，滴入氧化硅膠液34滴除去泡沫，以上的混合物100g與25g的穩(wěn)定液混合作為顯微鏡鏡檢試料。 2）試驗(yàn)操作 （1）顯微鏡鏡檢試料的操作 Howard霉菌計(jì)數(shù)玻片的試料平面上利用滴管點(diǎn)滴試料。在點(diǎn)滴的試料上，大的檢樣片或籽等用微型鑷子取出后，盡量不產(chǎn)生斑點(diǎn)或線條的小心放上蓋玻片，然后在顯微鏡載物臺上插入霉菌計(jì)數(shù)玻片。 （2）霉菌菌絲的診斷 在顯微鏡的100450倍觀察時(shí)，霉菌菌絲有下列外觀特性。 細(xì)胞壁的平行 分節(jié) 形成粒子 分枝 菌絲的末梢 非折射性的外觀 （3）陽性劃區(qū)判定 對一個(gè)可視劃區(qū)判定陽性或者陰性。哪一個(gè)劃區(qū)也不能一次以上的判定陽性。為判定一個(gè)劃區(qū)為陽性，三根以下的霉菌菌絲的總長度（合計(jì)長度）需要超過可視劃區(qū)直徑的1/6.大部分的陽性劃區(qū)判定是包括分枝長度的一個(gè)菌絲的長度為依據(jù)，并且要超過可視劃區(qū)直徑的1/6。下列長度中只要有一個(gè)超過可視劃區(qū)直徑的1/6，該可視劃區(qū)判定為陽性。l 沒有分枝的一個(gè)菌絲的長度l 分枝的長度合計(jì)的一個(gè)菌絲的長度l 2個(gè)菌絲的長度合計(jì)的長度l 3個(gè)菌絲的長度合計(jì)的長度l 由霉菌塊形成的所有菌絲的總長度(霉菌塊是作為1個(gè)碎片來看待并且所有菌絲的總長度) （4）顯微鏡鏡檢適當(dāng)?shù)恼{(diào)整粗調(diào)螺絲和微調(diào)螺絲，在90125倍的倍率范圍里，調(diào)準(zhǔn)焦距到可視劃區(qū)內(nèi)的物體能夠清晰可見。在試料平面上設(shè)定25個(gè)圓型的可視劃區(qū)，按號碼順序判定霉菌菌絲體的各可視劃區(qū)的霉菌菌絲體是陽性或者陰性。 從1號可視劃區(qū)到25號可視劃區(qū)逐一鏡檢，按各可視劃區(qū)分別判定霉菌菌絲體的陽性或者陰性。從1號到25號劃區(qū)的鏡檢結(jié)束后，從顯微鏡拿出Howard霉菌計(jì)數(shù)玻片清洗干燥。使用同一試驗(yàn)溶液反復(fù)（1）的試驗(yàn)操作，從25號劃區(qū)起至1號劃區(qū)逐一實(shí)施鏡檢，對總共50個(gè)可視劃區(qū)判