高考生物總復(fù)習(xí) 第三章第1節(jié) 酶的制備及活力測(cè)定課件 中圖版選修1.ppt

第三章酶的制備及應(yīng)用 第三章酶的制備及應(yīng)用 第1節(jié)酶的制備及活力測(cè)定 學(xué)習(xí)導(dǎo)航1 研究酶的存在及提取方法 重點(diǎn) 2 嘗試?yán)妹富盍y(cè)定的一般原理和方法 難點(diǎn) 一 酶的存在及影響因素1 合成場(chǎng)所 在生物體活細(xì)胞中合成 2 反應(yīng)部位 多數(shù)在 直接參與生物化學(xué)反應(yīng) 少數(shù)在 發(fā)揮作用 3 影響因素 等多種環(huán)境條件都可能影響酶的 導(dǎo)致酶變性 直至喪失活力 細(xì)胞內(nèi) 細(xì)胞外 溫度 酸堿性 空間結(jié)構(gòu) 判一判 1 人體內(nèi) 參與物質(zhì)分解的酶都可以在分泌物中提取 2 高溫 低溫 過酸和過堿等環(huán)境條件都能改變酶的空間結(jié)構(gòu) 導(dǎo)致酶變性失活 3 新采摘的甜玉米放在沸水中浸泡后 可使甜味保持的時(shí)間長(zhǎng)些 4 薩姆納第一次證明了脲酶是蛋白質(zhì) 二 酶的活力及測(cè)定方法1 酶的活力 以單位時(shí)間內(nèi) 或者在單位時(shí)間內(nèi) 來表示 2 酶活力的測(cè)定 1 方法 利用 進(jìn)行比色 底物的消耗量 產(chǎn)物的生成量 分光光度法 2 實(shí)例 植物淀粉酶的制備及活力測(cè)定 使酶失活 鈍化酶的活性使反應(yīng)終止 3 5 二硝基水楊酸試劑 煮沸 黃褐色 520m 想一想進(jìn)行酶活力測(cè)定時(shí) 出現(xiàn)了 恒溫處理 沸水加熱 鈍化處理 是否矛盾 各有什么目的呢 提示 不矛盾 恒溫處理是為酶促反應(yīng)提供必要的溫度條件 與之形成對(duì)照的是經(jīng)沸水浴加熱變性失活的酶液 而鈍化處理是使反應(yīng)后的酶失活 使反應(yīng)終止 過氧化氫酶粗酶液的制備及活力測(cè)定a 制備過氧化氫酶粗酶液以新鮮動(dòng)物肝臟 馬鈴薯塊莖或蘿卜塊根為材料 經(jīng)過切碎 研磨 取 即可得到過氧化氫酶粗酶液 離心 上清液 b 分光光度法測(cè)定過氧化氫酶的活力在過氧化氫酶存在時(shí) 過氧化氫將 氧化生成 色產(chǎn)物 待酶反應(yīng)終止后 過濾 取濾液適當(dāng)稀釋 在波長(zhǎng) nm處測(cè)吸光值 計(jì)算出過氧化氫酶的活力 愈創(chuàng)木酚 茶褐 470 c 高錳酸鉀滴定法測(cè)定過氧化氫酶的活力過氧化氫酶可以催化h2o2分解為水和氧 如果在反應(yīng)系統(tǒng)中加入適當(dāng)過量的過氧化氫溶液 經(jīng)酶促反應(yīng)后 在酸性條件下 用標(biāo)準(zhǔn)高錳酸鉀溶液滴定多余的 反應(yīng)如下 5h2o2 2kmno4 4h2so4 5o2 2khso4 8h2o 2mnso4 h2o2 h2o2的量 要點(diǎn)一粗酶液的制取1 胞內(nèi)酶 絕大多數(shù)酶 如呼吸酶 淀粉酶 過氧化氫酶等 用破碎儀 研磨器或勻漿器等機(jī)械將組織細(xì)胞破碎 然后過濾 離心 2 胞外酶 消化酶等 直接從動(dòng)物分泌物或組織間隙中提取 h2o2酶粗酶液的制備過程中敘述錯(cuò)誤的是 a 以新鮮動(dòng)物肝臟 馬鈴薯塊莖或蘿卜塊根為材料b 材料需要破碎 過濾和離心處理c 取上清液即可得到粗酶液d 粗酶液需要鈍化處理保存 解析 h2o2酶分布于很多組織細(xì)胞中 可有效地去除h2o2的危害 它屬于細(xì)胞內(nèi)的酶 所以要進(jìn)行破碎或研磨 然后過濾 離心 但鈍化處理是使酶失去活性的方法 不是保存方法 答案 d 互動(dòng)探究 1 如果換成胰蛋白酶的制備 具體方法又是怎樣 2 從哪些方面考慮酶液的保存 提示 1 細(xì)胞外的酶可直接從分泌物中提取 2 酶液保存應(yīng)考慮影響酶活性的因素 如低溫 適宜ph等條件 要點(diǎn)二影響酶活力的因素1 溫度酶活力隨溫度的變化而變化的趨勢(shì)可用圖示表示 1 溫度從t1到t時(shí) 隨著溫度的升高 酶活力逐漸增強(qiáng) 2 溫度從t到t2時(shí) 隨著溫度的升高 酶活力逐漸降低 3 溫度高于t2時(shí) 酶活力全部喪失 4 t3 t4條件下 酶活力相同 5 t為最適溫度 即在該溫度時(shí) 酶的活力最強(qiáng) 2 ph每種酶都有一定的最適ph范圍 例如 過氧化氫酶最適ph范圍為6 8 7 3 過酸 過堿都會(huì)使酶發(fā)生不可逆失活 3 酶的激活劑有時(shí)加入酶的激活劑可以提高酶活力 4 酶的抑制劑加入酶的抑制劑后可以降低酶活力 甚至使酶失去活力 特別提醒酶活力的高低受溫度 ph 激活劑等多種因素的影響 所以酶的提取一般選擇在低溫和適合的ph下進(jìn)行 有時(shí)還要加入酶的激活劑以提高酶活力 胰蛋白酶作用于一定量的某種物質(zhì) 底物 溫度保持在37 ph保持在最適值 生成物量與反應(yīng)時(shí)間的關(guān)系如圖所示 請(qǐng)回答下列問題 1 該酶作用的底物是 2 在140min后 曲線變成水平 這是因?yàn)?3 若增加胰蛋白酶濃度 其他條件不變 請(qǐng)?jiān)谠瓉韴D上畫出生成物量變化的示意曲線 4 若胰蛋白酶濃度和其他條件不變 反應(yīng)液ph由2逐漸升高到10 則酶催化反應(yīng)的速度將 原因是 5 如圖中能正確表示胰蛋白酶對(duì)底物的分解速度和溫度關(guān)系的是 解析 酶的專一性是指一種酶只能催化一種或一類化合物反應(yīng) 蛋白酶只能催化蛋白質(zhì)水解 隨著反應(yīng)時(shí)間的推移 反應(yīng)底物逐漸耗盡 生成物量不再增加 催化性是指酶只能改變反應(yīng)速度 不改變反應(yīng)結(jié)果 故畫坐標(biāo)曲線時(shí) 反應(yīng)速度加快 時(shí)間縮短 最終生成物量不變 受ph影響 酶在強(qiáng)酸或強(qiáng)堿環(huán)境中會(huì)因結(jié)構(gòu)改變而失活 所以反應(yīng)速度不變 因?yàn)樵趐h為2時(shí)酶已變性失活 受溫度影響 低溫影響酶活性 但不使其變性失活 隨溫度升高 反應(yīng)速度加快 超過最適溫度 酶活性隨溫度升高而下降 本題側(cè)重于考查胰蛋白酶的最適溫度為37 答案 1 蛋白質(zhì) 2 底物量一定 底物已被耗盡 3 如圖 4 不變?cè)趐h 2時(shí)酶已失活 5 c a 在b點(diǎn)之前 淀粉酶的活性和溫度成正比 之后 成反比b 當(dāng)溫度到達(dá)b 點(diǎn)時(shí) 淀粉酶的活性最高c a點(diǎn)時(shí) 淀粉酶的活性很低 但隨著溫度升高 淀粉酶的活性可以上升d c點(diǎn)時(shí) 淀粉酶的活性很低 當(dāng)溫度降低時(shí) 酶的活性也可以恢復(fù)上升 解析 選d 從題圖中可以看出隨著溫度的不斷升高 淀粉酶的活性上升 在b點(diǎn)時(shí) 酶的活性達(dá)到最