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維生素C含量測定方法綜述 勁舞團SF 1 摘要 目前研究維生素C測定方法的報道較多 如滴定法 光度分析法 高效液相色譜法等 各種方法各有特點 特別是高效液相色譜法是近年來發(fā)展較快的一種方法 本文對近年來有關維生素C的測定方法進行了綜述 2 關鍵詞 維生素C滴定法光度分析法高效液相色普法等 3 概述 維生素C是可溶于水的無色結晶 是一種分子結構最簡單的維生素 維生素C有防治壞血病的功能 所以在醫(yī)藥上常把它叫做抗壞血酸 維生素C能保持巰基酶的活性和谷胱甘肽的還原狀態(tài) 起解毒作用等 其廣泛存在于植物組織中 新鮮的水果 蔬菜 特別是棗 辣椒 苦瓜 柿子葉 獼猴桃 柑橘等食品中含量尤為豐富 準確測定維生素C的含量 對飲食健康 醫(yī)療保健都具有十分重要的意義 近年來報道的測定方法主要有滴定法 光度法 高效液相色譜法等 4 維生素C的結構式 維生素C 六碳的多羥基內(nèi)酯 5 6 1滴定法測定維生素C 1 12 6一二氯靛酚法1 2微量滴定法 7 2 6 二氯酚靛酚滴定法測定維生素C含量 其能還原2 6 二氯酚靛酚染料 維生素C具有還原性的烯二醇基 我們通過氧化還原滴定來測定維生素C 8 2 6 二氯靛酚法 原理 2 6 二氯靛酚是一種染料 其氧化型在酸性介質(zhì)中為紅色 堿性介質(zhì)中為藍色 與Vc反應后 生成無色的還原型酚亞胺 因此 在酸性條件下 用2 6 二氯靛酚滴定至溶液顯玫瑰紅色 即為終點 無需另加指示劑 9 2 6 二氯靛酚法 方法 取本品適量 約相當于Vc50mg 用適量水溶解 置100ml量瓶中 加偏磷酸 醋酸試液20ml 再用水稀釋置刻度 搖勻 精密量取稀釋液適量 約相當于Vc2mg 置50ml的錐形瓶中 加偏磷酸 醋酸試液5ml 用2 6 二氯靛酚滴定液滴定 至溶液顯玫瑰紅色 并持續(xù)5s不褪 空白試驗 取偏磷酸 醋酸試液5 5ml 加水15ml 用2 6 二氯靛酚滴定液滴定 計算 V V0 F T W W 標示量 標示量 反應摩爾比 100 10 維生素C2 6 二氯酚靛酚維生素C2 6 二氯酚靛酚 還原型 氧化型 粉紅色 氧化型 還原型 2 6 二氯酚靛酚染料的鈉鹽在水溶液中顯藍色 在酸性溶液中呈紅色 被還原后紅色消失 11 碘量法 原理 由于維生素C分子中的烯二醇基有極強的還原性 能被碘氧化 用碘滴定VCEC6H6O6 C6H8O6 0 18 EI2 I 0 535終點 淀粉為指示劑 溶液出現(xiàn)穩(wěn)定的藍色即為終點反應式 12 碘量法 碘的濃度由已知濃度的Na2S2O3標準溶液標定反應式 計算式 Wvc C I2 V I2 M vc m vc 100 13 碘量法 注意 測定時 加HAC使溶液呈弱酸性原因 1 Vc還原性很強 在空氣中很容易被氧化 在堿性介質(zhì)中更甚 2 I2在堿性介質(zhì)中會發(fā)生歧化反應加HAC可減少VC的副反應 避免實驗誤差 14 電位滴定法 原理 根據(jù)滴定過程中電池電動勢的變化來確定反應終點 Pt為指示電極 甘汞作參比電極E池 E E E液接電位 EI2 I k 常數(shù) 15 電位滴定法 原理 具體來說 隨著滴定劑的加入 由于發(fā)生化學反應 待測離子濃度將不斷變化 從而指示電極電位發(fā)生相應變化 導致電池電動勢發(fā)生相應變化 計量點附近離子濃度發(fā)生突變 引起電位的突變 因此由測量工作電池電動勢的變化就能確定終點 16 電位滴定法 右圖 電位滴定法基本儀器裝置計算式 與碘量法相同 Wvc C I2 V I2 M vc m vc 100 優(yōu)點 解決了滴定分析中遇到有色或渾濁溶液時無法指示終點的問題 17 2分光光度測定維生素C 2 12 4一二硝基苯肼分光光度法2 2鉬藍比色法2 3其他方法 18 2 4一二硝基苯肼分光光度法 原理 維生素C在空氣中尤其在堿性介質(zhì)中極易被氧化成脫氫抗壞血酸反應式 19 2 4一二硝基苯肼分光光度法 pH 5 脫氫抗壞血酸內(nèi)環(huán)開裂 形成二酮古洛糖酸二酮古洛糖酸 20 2 4一二硝基苯肼分光光度法 脫氫抗壞血酸 二酮古洛糖酸均能和2 4 二硝基苯肼生成可溶于硫酸的脎脎在500nm波長有最大吸收脎的結構 21 分光光度法 樣品溶液與VC標準溶液按上述方法同樣處理500nm處測吸光度下圖 721型分光光度計 22 鉬藍比色法 馬占玲等用鉬藍比色法測定青椒中還原型維生素C含量的基本原理和方法 測定波長839nm 維生素C含量在0 004 0 024mg mL范圍內(nèi)呈線性關系 回收率為97 2 該方法簡單 快速 準確 23 鉬藍比色法 逯家輝等提出了一種測定維生素C的新方法 它是基于FolinB試劑與抗壞血酸在pH 3的三氯乙酸酸性介質(zhì)中反應生成脫氫抗壞血酸 反應產(chǎn)物在910nm波長處有最大吸光度進行定量分析 該方法的線性范圍為0 50 0 g mL 相關系數(shù)r 0 99986 回收率為98 12 102 15 24 差示旋光法 原理 方法 結果 維生素C片在不同PH值的溶液中旋光度有顯著差異 而片劑輔料旋光度保持不變差示旋光法消除輔料的影響 直接測出該制劑的含量 討論 與 25 差示旋光法 方法 TEXT 1 標準溶液的配制準確稱取維生素C精制品5 0g 乙二胺四乙酸鈉0 37g 置于100mL容量瓶中 用新沸冷卻的蒸餾水溶解 加水到指定刻度 配制成50mg mL的維生素C標準溶液 TEXT 原理 方法 結果 討論 與 26 差示旋光法 2 比旋光度與溶液pH值的關系量取10 0mL維生素C標準液于50mL量瓶中 用水稀釋至50mL 測定溶液的pH及旋光度 然后逐次分批加入氫氧化鈉固體 每次約50mg 每次溶解后 測定一次溶液的pH及其旋光度 得到維生素C溶液的pH及旋光度關系 原理 方法 結果 討論 與 27 差示旋光法 選定pH為2 2和6 2 28 差示旋光法 2 差示旋光度與溶液濃度關系吸取2 0 4 0 8 0 16 0 20 0mL的維生素C標準液各兩份 分別置于50mL的容量瓶 一份用pH2 2的鹽酸鹽緩沖液定容 一份用pH6 2的磷酸鹽緩沖液定容 靜置3min后 用220mm測定管 以前者為空白 測定后者的差示旋光度 a 文獻結果 線性方程為 a 0205 C 0 05 r 0 9964 原理 方法 結果 討論 與 29 差示旋光法 3 輔料干擾試驗取混合輔料20mg 淀粉 硬脂酸鎂 EDTA 糊精等按處方比例混勻 兩份分別置于50mL的容量瓶 一份用pH2 2的鹽酸鹽緩沖液定容 一份用pH6 2的磷酸鹽緩沖液定容 濾去不溶物 濾液在兩種pH值測定差示旋光度 文獻結果 輔料的差示旋光度為零 說明輔料對維生素C含量的測定不干擾 原理 方法 結果 討論 與 30 差示旋光法 4 穩(wěn)定性試驗同一測試樣品 在120min內(nèi) 每隔3min測定一次差示旋光度 文獻結果 差示旋光度基本不變 原理 方法 結果 討論 與 31 差示旋光法 5 回收率試驗精密稱取維生素C精制品500 0mg兩份 分別置于50mL容量瓶中 各加入20mg輔料 分別用鹽酸鹽緩沖液及磷酸鹽緩沖液配制成50mL溶液 測定差示旋光度 文獻結果 平均回收率為97 8 變異系數(shù)cv為1 03 原理 方法 結果 討論 與 32 差示旋光法 方法 TEXT 6 樣品測定取維生素C片劑10片 稱重研碎后分別用鹽酸鹽緩沖液及磷酸鹽緩沖液配制成50mL溶液 相當于含Vc20mg mL 濾去不溶物 測定濾液的差示旋光度 根據(jù)回歸方程計算其含量 TEXT 原理 討論 方法 結果 與 33 差示旋光法 方法 TEXT 1 維生素易被氧化 空氣及水中的氧均可使其氧化分解 配制溶液時使用新沸冷卻水 同時加人EDTA作為穩(wěn)定劑 2 樣品測定時 片劑部分物質(zhì)不能完全溶解 必須過濾除去 然后測定濾液的差示旋光度 TEXT 原理 討論 方法 結果 與 34 3高效液相色譜法測定維生素C 3 1HYPERSIL C8色譜柱法3 2VenusilXBP C18柱法3 3其他方法 35 HYPERSIL C8色譜柱法 采用HYPERSIL C8色譜柱 用0 1 低濃度的草酸作流動相 陳昌云等采用0 05mol L磷酸二氫鉀緩沖液 甲醇 80 20 v v 作流動相 流速為1 0mL min 二極管陣列檢測器 檢測波長為254nm 36 3 2VenusilXBP C18柱法 系統(tǒng)采用VenusilXBP C18柱 4 6x250mm 5 g 用0 2 的偏磷酸的水溶液作為流動相 流速1ml min 檢測波長240nm 維生素C濃度在0 1 1 0mg mL范圍內(nèi)有良好的線性關系 該方法回收率99 89 標準偏差0 91 操作簡便 靈敏 可靠 37 薄層掃描法 原理維生素C具有較強還原性 可使藍色染料2 6 二氯靛酚鈉定量地還原成無色的酚亞胺 而本身被氧化成去氫抗壞血酸 利用此特征進行薄層掃描法測定含量 38 薄層掃描法 操作方法與結果 1 試紙的制備2 6 二氯靛酚鈉 DCP Na 溶于無水乙醇配成0 05 的DCP Na乙醇溶液 濾紙在盛有DCP Na乙醇溶液的展開缸中浸漬3min 邊浸邊搖展開缸 使濾紙均勻著色 充分被染料溶液所飽和 取出懸掛于暗處 晾干后 立即放入干燥器中避光保存 備用 39 薄層掃描法 2 緩沖溶液的配制稱取檸檬酸水合物10g 放入1000ml容量瓶中 加入1M氫氧化鈉420ml 并用蒸餾水稀釋至刻度 此溶液的pH應為3 5 否則 用酸或堿調(diào)整pH值 保存于冰箱中 40 薄層掃描法 3 掃描條件確定在制備的染料試紙上定量點上維生素C對照品進行掃描 維生素C在290nm處有最大吸收 420nm處無吸收 故選擇 1 290nm 2 420nm 雙波長反射式鋸齒掃描 原理 方法 結果 討論 與 41 薄層掃描法 4 線性實驗4 1 對照品溶液的配制精密稱取維生素C標準品100mg 用緩沖溶液配成lmg ml的標準溶液 精密稱取維生素C標準溶液1 2 3 4 5ml 分別置于10ml容量瓶中 用緩沖溶液稀釋至刻度 4 2 測定用5 l定量毛細管 分別吸取上述溶液各5 l 點于試紙上 點樣后晾干 并將試紙固定在20cm 20cm玻璃板上 放入薄層掃描儀 測定 A的積分值 峰面積 作為縱坐標Y 點樣量為橫坐標X 得一直線方程Y 15692X 130225 r 0 9991 原理 方法 結果 討論 與 42 薄層掃描法 方法 TEXT 5 樣品的含量測定取維生素C片10片 研細 精密稱取平均片重一片的粉末 放入100ml容量瓶中 加入緩沖液至刻度 振搖 使維生素C溶解 放置 澄清 用吸液管取3ml移至10ml容量瓶中 用緩沖液稀釋至刻度 用5 l定量毛細管點樣品溶液與不同濃度的標準液于同一試紙上 然后掃描測定峰面積 由工作曲線法計算維生素C片中的維生素C含量 TEXT 原理 方法 結果 討論 與 43 薄層掃描法 6 回收率實驗精密稱取維生素C對照品20mg 其它原輔料適量 置10ml容量瓶中 加緩沖液稀釋至刻度 振搖 濾過 棄初濾液 分別吸取續(xù)濾液與對照品維生素C液各5 l點于同一試紙上 按上述條件進行掃描測定 44 薄層掃描法 點樣時各點間距應大于10mm 掃描測不定期波長可做少量變動 但每次測定必須固定同一測定波長點樣量在3 8 l之間線性關系較好 當點樣量為10 l 線性關系較差 原理 方法 結果 討論 與 45 結束語 總之 維生素C的測定方法很多 各種方法各有特點 常用的滴定法方法簡單 但在滴定有色物質(zhì)終點不易判斷 分光光度法操作費時 高效液相色譜法是目前發(fā)展較快的一種方法 方法靈敏 選擇性好 有較好的發(fā)展前景 毛細管電泳n51是近幾年新興的分析方法 具有效率高 分析時間短 樣品處理簡單等特點 但有待于進一步完善 46 參考文獻 1 吳春艷 水果中維生素C含量的測定及比較 J 武漢理工大學學報 2oo7 29 3 90 91 2 王元秀 莊海燕 微量滴定法測定獼猴桃中維生素C的含量 J1 濟南大學學報 自然科學版 2001 15 4 374 3 張穎 等 不同產(chǎn)地枸杞子中維生素C含量測定 J 中國醫(yī)院藥學雜志 2004 24 8 500 501 4 袁葉飛 甄漢深 歐賢紅 分光光度法測定大棗中的維生素C含量 J 安徽中醫(yī)學院學報 2006 25 2 40 41 5 馬占玲 等 青椒中還原型維生素C含量的測定 J 渤海大學學報 自然科學版 2006 27 2 111 113 47 參考文獻 6 逯家輝 等 F0linB分光光度法測定蔬菜中維生素C的含量 J 分析檢測 2oo5 26 8 171 172 7 王艷穎 等 高效液相色譜法測定草莓中維生素C含量 J 大連大學學報 2006 27 2 21 22 8 姜波 范圣第 劉長建 花艷紅 菠蘿中維生素C的高效液相色譜分析 J 大連民族學院學報 2003 5 1 52 53 9 劉長建 青椒中維生素C的高效液相色譜分析 J 大連輕工業(yè)學院學報 2004 23 3 229 230 10 陳昌云 李小華 劉莉莉 高效液相色譜法測定蜜柚中維生素C的含量 J 化工時刊 2oo7 21 8 19 21 48 參考文獻 11 王愛月 張向兵 李發(fā)生 高效液相色譜法測定食品及保健品中維生素C含量的研究 J 中國衛(wèi)生檢驗雜志 2006 16 10 1175 1176 12 雍莉 等 高效液相色譜法快速測定保健食品和果蔬中的VitC J 現(xiàn)代預防醫(yī)學 2005 32 3 247 248 13 胡志群 王惠聰 胡桂兵 高效液相色譜測定荔枝果肉中的糖 酸和維生素C J 果樹學報 2005 22 5 582 14 張秀梅 等 高效液相色譜法測定菠蘿