中藥藥理毒理研究技術(shù)規(guī)范若干問(wèn)題的探討.ppt

中藥藥效毒理研究技術(shù)規(guī)范若干問(wèn)題的探討 北京中醫(yī)藥大學(xué)中藥學(xué)院中藥藥理系孫建寧教授 中藥藥效評(píng)價(jià)的現(xiàn)狀與探索 中藥新藥的基本要求是安全 有效 可控和穩(wěn)定 侯選樣品 藥效學(xué) 侯選藥物毒性研究 藥效學(xué)研究的基本目的 一 通過(guò)藥效學(xué)研究確定有效性是否有效 作用的強(qiáng)弱 優(yōu)缺點(diǎn)和特色 確定有無(wú)開(kāi)發(fā)前景 重視前期藥效的篩選 力求得到較準(zhǔn)確的藥效評(píng)價(jià) 設(shè)法找出主要藥效學(xué)的特點(diǎn) 有效作用劑量范圍 量效關(guān)系 有效作用時(shí)間長(zhǎng)短 時(shí)效關(guān)系 二 提高臨床療效應(yīng)充分運(yùn)用現(xiàn)代科學(xué)特別是現(xiàn)代醫(yī)學(xué)的理論 方法和手段 制定科學(xué) 嚴(yán)密 具有中醫(yī)藥特點(diǎn)的試驗(yàn)計(jì)劃 建立與臨床相符的 病 癥 或 證 相似的動(dòng)物模型與指標(biāo) 對(duì)新藥的有效性作出科學(xué)的評(píng)價(jià) 藥效研究參考資料 1 中藥新藥研究指南 藥學(xué)藥理學(xué)毒理學(xué) 中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部藥政管理局 1994 66 672 中藥新藥研制開(kāi)發(fā)技術(shù)與方法王北嬰 李儀奎主編上?？茖W(xué)技術(shù)出版社2001 123 中藥復(fù)方研究思路與方法 2004年出版 4 中藥藥理研究方法學(xué)陳奇主編人民衛(wèi)生出版社 1993年版 新版待出 5 中藥藥理方法學(xué)李儀奎主編上?？茖W(xué)技術(shù)出版社19916 國(guó)內(nèi)外研究論文 二 藥效學(xué)研究的基本要求 試驗(yàn)負(fù)責(zé)人受試藥物研究單位實(shí)驗(yàn)動(dòng)物試驗(yàn)記錄統(tǒng)計(jì)處理 三 藥效學(xué)研究的方法及注意事項(xiàng) 1 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)符合中藥特點(diǎn) 符合國(guó)家新藥研究申報(bào)的有關(guān)規(guī)定 隨機(jī) 對(duì)照 重復(fù)重視中藥復(fù)方配伍規(guī)律性的研究 1 單味研究法 2 藥對(duì)研究法 3 藥物組間關(guān)系法 4 撤藥分析法 5 聚類分析法 6 正交設(shè)計(jì)法 7 正交t值法 8 均勻設(shè)計(jì)法 9 量效關(guān)系法 撤藥分析法 從復(fù)方中撤出一味或一組藥進(jìn)行實(shí)驗(yàn)黃芩湯 黃芩 芍藥 甘草 大棗結(jié)果 減黃芩顯著影響藥效 分別減芍藥 甘草 大棗變化不大 說(shuō)明君藥在全方中起主導(dǎo)地位 均勻設(shè)計(jì)法 按均勻設(shè)計(jì)表安排 實(shí)驗(yàn)次數(shù)與各因素所取水平數(shù)相等 如治療感染復(fù)方 五種中藥X1 X2 X3 X4 X5 根據(jù)因素與水平 選用U11表設(shè)計(jì) 結(jié)果算得回歸方程 有顯著性意義 從標(biāo)準(zhǔn)相關(guān)系數(shù)可看出藥物 抗炎 作用大小 進(jìn)行優(yōu)選 量效關(guān)系法 四君子湯 黨參 白術(shù) 茯苓 甘草1 1 1 0 5巨噬細(xì)胞吞噬功能增強(qiáng) 調(diào)整甘草到1 3 功能減弱 當(dāng)歸補(bǔ)血湯 黃芪 當(dāng)歸5 1免疫增強(qiáng)作用 調(diào)整黃芪劑量 1 2 2 4倍 均作用不明顯 2 動(dòng)物選擇種類 實(shí)驗(yàn)常用小鼠和大鼠 豚鼠 家兔 狗品系動(dòng)物等級(jí) 二級(jí)動(dòng)物即清潔動(dòng)物 CL 性別 一般試驗(yàn)選用雌雄各半動(dòng)物 數(shù)量 一般小鼠不得少于10只 大鼠為8只 貓 狗為4只以上 3 方法的選擇 一 根據(jù)主治 參考功能 選擇試驗(yàn)方法針對(duì)性強(qiáng) 重點(diǎn)突出 主次分明 如缺血性中風(fēng) 1 增加缺血區(qū)腦血流量2 神經(jīng)細(xì)胞的保護(hù)治療 中藥治療缺血性中風(fēng)主要藥效學(xué)研究方案 一 對(duì)腦缺血試驗(yàn)選用大鼠大腦中動(dòng)脈血栓模型 middlecerebralarterythrombosis MCAT 和雙側(cè)頸總動(dòng)脈阻斷致不完全性腦缺 觀察連續(xù)給藥2 3天對(duì)局部腦缺血和不完全性全腦缺血性損傷的保護(hù)作用 1 大鼠神經(jīng)癥狀檢測(cè) 根據(jù)改進(jìn)的Bedorson等人的分級(jí)打分法記分 2 對(duì)MCAT大鼠腦水腫的影響 分別稱量腦缺血側(cè)和非缺血側(cè)腦組織濕重和干重 以腦水含量百分比為指標(biāo) 3 藥物對(duì)MCAT大鼠腦梗塞范圍的影響 采用TTC染色法 以梗塞組織重量占總腦重量的百分比為指標(biāo) 4 生化指標(biāo) 包括能量代謝和毒性產(chǎn)物 如三磷酸腺苷 ATPase 磷酸肌酸 Per 乳酸 LA 乳酸脫氫酶 LDH 自由脂肪酸 FFA 脂質(zhì)過(guò)氧化物 LPO 興奮性氨基酸 EAA 及基因表達(dá)等 5 藥物對(duì)模型大鼠腦組織病理改變的影響 采用HE染色和尼氏體染色法 以病理切片尼氏體數(shù)量和神經(jīng)細(xì)胞形態(tài)為指標(biāo) 二 血流動(dòng)力學(xué)試驗(yàn)采用麻醉犬進(jìn)行試驗(yàn) 用電磁流量計(jì)測(cè)頸內(nèi)動(dòng)脈血流量 腦血管阻力 血壓 心電圖和心率 觀察受試藥物對(duì)腦血管及腦血流量的影響 三 毛細(xì)血管通透性試驗(yàn) 試驗(yàn)用大鼠 采用比色法觀察藥物對(duì)伊文思藍(lán)等染料通透性的影響 四 抗血栓形成試驗(yàn)和溶栓試驗(yàn) 1 大鼠動(dòng) 靜脈旁路血栓形成試驗(yàn) 以血栓濕重和干重為指標(biāo) 2 溶栓試驗(yàn) 體外試驗(yàn) 血清藥理 新鮮血塊溶解試驗(yàn) 指標(biāo)為給藥前 后血塊重量并計(jì)算血塊溶解百分率 五 血小板聚集試驗(yàn) 實(shí)驗(yàn)用大鼠或家兔 觀察受試藥物對(duì)ADP 膠原所致血小板聚集的抑制作用 六 藥物對(duì)血液凝固性的影響 凝血時(shí)間 凝血酶時(shí)間 TT 凝血酶原時(shí)間 PT 和部分凝血活酶時(shí)間 APTT 二 采用能夠反映中藥特點(diǎn)的試驗(yàn)方法及動(dòng)物模型 抗病毒感染中藥復(fù)方研究實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)急性感染期用藥1 對(duì)病原體的抑制作用2 對(duì)癥治療退熱作用抗?jié)B出抗炎作用抗肺纖維化作用抗多臟衰作用 1 感病毒所致小鼠肺炎的保護(hù)作用 選擇流感病毒肺炎模型 以肺指數(shù) 死亡率 血清NO含量為觀察指標(biāo) 2 抗高熱作用 對(duì)毒素所致家兔發(fā)熱模型的退熱作用 酵母所致大鼠發(fā)熱模型的退熱作用 3 抗?jié)B出 抗炎 選擇油酸致呼吸窘迫癥模型油觀察所選藥物對(duì)呼吸功能的影響 4 對(duì)吸入性肺炎的保護(hù)作用 選擇內(nèi)毒素吸入性肺炎損傷模型以BALF中彈性蛋白酶 蛋白含量為觀察指標(biāo) 5 抗炎作用 急性炎癥 對(duì)二甲苯所致小鼠耳腫脹的影響 常規(guī)藥理試驗(yàn) 對(duì)角叉菜膠所致大鼠足腫脹的影響 常規(guī)藥理試驗(yàn) 6 對(duì)內(nèi)毒素所致大鼠多臟器衰竭的保護(hù)作用 選擇內(nèi)毒素或角叉菜膠多臟器損傷模型觀察所選藥物對(duì)重要臟器的保護(hù)作用 評(píng)價(jià)指標(biāo) 生化指標(biāo) ALT AST GREA BUN 臟器指數(shù) 心 肝 脾 肺 腎 血象測(cè)定 WBC及分類 RBC PLT 凝血時(shí)間 恢復(fù)期用藥1 對(duì)過(guò)量甲狀腺激素所致陰虛模型的改善作用2 對(duì)過(guò)量皮質(zhì)激素所致陰虛模型的改善作用3 對(duì)過(guò)量皮質(zhì)激素所致消化道功能障礙的改善作用4 強(qiáng)壯作用 以耐缺氧時(shí)間 小鼠游泳時(shí)間為觀察指標(biāo)5 對(duì)免疫功能的影響 三 主要藥效為主 配合輔助試驗(yàn)治療神經(jīng)根型頸椎病主要藥效 1 對(duì)神經(jīng)根無(wú)菌性炎癥模型的影響 1 一般行為學(xué) 步態(tài) 患肢運(yùn)動(dòng)等 肌張力 感覺(jué) 觸覺(jué) 痛覺(jué) 2 神經(jīng)電生理檢測(cè) 測(cè)定神經(jīng)纖維的傳導(dǎo)速度 觀察藥物的改善作用 3 神經(jīng)纖維軸索計(jì)數(shù)和再生率 觀察藥物對(duì)損傷神經(jīng)的再生作用 4 對(duì)致炎物重量的影響 觀察藥物對(duì)模型動(dòng)物致炎物重量的抑制作用 2 對(duì)模型鼠腦組織內(nèi)cAMP與cGMP的影響 3 病理組織學(xué)檢查 異物巨細(xì)胞反應(yīng) 肉芽組織 炎性細(xì)胞等 2 抗炎作用3 鎮(zhèn)痛作用 對(duì)血液流變學(xué)的影響采用血瘀大鼠模型 測(cè)定全血粘度 血漿粘度 紅細(xì)胞壓積 紅細(xì)胞聚集性 紅細(xì)胞變形性 觀察藥物對(duì)血液流變學(xué)的作用 初步分析該方治療神經(jīng)根性頸椎病的作用環(huán)節(jié) 四 整體和離體方法選擇中藥由于成分復(fù)雜 特別是復(fù)方粗制劑 為多種化學(xué)成分 或有效部位 的混合體 除有效成分外 尚有一些無(wú)關(guān)成分及干擾成分 因此 藥效學(xué)試驗(yàn)應(yīng)以體內(nèi)試驗(yàn)為主 體外試驗(yàn)為輔 以消化道給藥為主 其他給藥途徑為輔 若為中藥有效成分 或部位 制劑較純者 或臨床為注射給藥者 可用體外試驗(yàn)或注射給藥進(jìn)行主要藥效學(xué)試驗(yàn) 4 指標(biāo)的選擇 一 特異性強(qiáng) 二 敏感性高 三 重現(xiàn)性好 四 客觀性 五 定量指標(biāo) 六 多指標(biāo)綜合運(yùn)用 生理 生化 形態(tài)等各類指標(biāo)合理搭配 綜合運(yùn)用 5 試驗(yàn)組給藥劑量 一 根據(jù)半數(shù)致死量 LD50 計(jì)算凡是能夠測(cè)出LD50者 可用其1 10 1 20 1 30 1 40等相近劑量 作為藥效學(xué)試驗(yàn)的高中低劑量組 二 根據(jù)臨床用量計(jì)算其粗略的等效倍數(shù)為1 人 3 狗 猴 5 貓 兔 7 大鼠 豚鼠 10 11 小鼠 三 根據(jù)文獻(xiàn)估計(jì)劑量 四 根據(jù)體表面積估計(jì)劑量根據(jù)體表面積折算法換算的同等體表面積 m2 cm2 單位時(shí)的劑量 6 給藥方式7 對(duì)照藥的選擇 一 陽(yáng)性對(duì)照藥1 可比性 其功用 主治 劑型 給藥途徑應(yīng)與新藥相似2 合法性 陽(yáng)性藥應(yīng)是國(guó)家 中國(guó)藥典 或部頒標(biāo)準(zhǔn) 或新批準(zhǔn)生產(chǎn)的合法藥物3 擇優(yōu)選用 學(xué)術(shù)界或社會(huì)公認(rèn)有效的 有代表性的 好 藥 二 原劑型對(duì)照改劑型新藥的陽(yáng)性對(duì)照藥 三 空白對(duì)照品 四 隨著科學(xué)技術(shù)發(fā)展涌現(xiàn)出中藥復(fù)方藥效研究的創(chuàng)新思路和方法 一 建立中醫(yī)藥信息系統(tǒng) 將大大提高中藥復(fù)方藥效的研究效率中醫(yī)藥信息系統(tǒng) 方劑庫(kù) 藥用植物庫(kù) 中藥有效成分三維結(jié)構(gòu)數(shù)據(jù)庫(kù)及靶酶結(jié)構(gòu)數(shù)據(jù)庫(kù) 二 引入基因組學(xué)與蛋白質(zhì)組學(xué)及基因芯片技術(shù)中藥復(fù)方突出的特點(diǎn)是活性多組分 作用多靶點(diǎn) 多途徑 突出多層次 多臟器 多水平調(diào)理過(guò)程 復(fù)制證的動(dòng)物模型 基因芯片對(duì)中藥復(fù)方研究和中藥藥物篩選 指通過(guò)用藥前后表達(dá)譜的變化 找出靶基因及受靶基因調(diào)控的基因 培養(yǎng)的人細(xì)胞 細(xì)胞水平 和動(dòng)物模型 整體水平 兩種方法相互參照和比較 中藥的毒性及安全性研究 一 藥物毒理學(xué)的研究目的1 量化人體安全用藥的劑量和時(shí)程 包括中毒劑量及其與有效劑量的比值 安全劑量范圍 服藥周期2 毒性反應(yīng)的表現(xiàn)和特點(diǎn) 急性毒性反應(yīng) 慢性毒性反應(yīng) 或蓄積性 毒性反應(yīng)可逆與否等 毒性的靶器官及作用機(jī)理 3 毒性成分的體內(nèi)過(guò)程或毒代動(dòng)力學(xué)研究4 毒理學(xué)方法學(xué)的研究5 毒性反應(yīng)的預(yù)防 治療 6 如何將動(dòng)物毒理學(xué)數(shù)據(jù)外延或推論到人體 嚙齒和非嚙齒兩種動(dòng)物進(jìn)行毒理學(xué)試驗(yàn) 它們所表現(xiàn)出來(lái)的毒性反應(yīng)和人體的毒性反應(yīng)之間的一致性有約70 的概率 而單用嚙齒動(dòng)物所作的毒性試 其和人的一致性概率僅為43 單用非嚙齒動(dòng)物的一致性概率為63 1 一致性 94 的人體毒性反應(yīng)可在給藥和觀察周期為一個(gè)月的動(dòng)物試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn) 多數(shù)人體毒性反應(yīng)可在單次給藥的毒性試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn) 25 的人體毒性反應(yīng)可在安全性藥理學(xué) 一般藥理學(xué) 實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn) 2 不一致性 貫葉連翹對(duì)不同動(dòng)物生殖系統(tǒng)的影響不一致 二 中藥毒理學(xué)研究?jī)?nèi)容 1 急性 單次給藥 毒性試驗(yàn)2 長(zhǎng)期 慢性或重復(fù)給藥 毒性試驗(yàn)3 一般藥理學(xué) 安全性藥理學(xué) 試驗(yàn)4 三致 試驗(yàn) 遺傳毒性 生殖毒性 致癌性 5 免疫學(xué)毒性試驗(yàn)6 藥物依賴性試驗(yàn)7 局部 皮膚 黏膜 給藥的毒性試驗(yàn)8 注射劑的制劑安全性試驗(yàn) 局部刺激 過(guò)敏試驗(yàn) 溶血試驗(yàn) 9 毒代動(dòng)力學(xué)研究10 其它 光敏試驗(yàn)等 三 毒性安全性評(píng)價(jià)中的注意事項(xiàng) 一般藥理學(xué)試驗(yàn)研究 安全性藥理 Safetypharmacology 研究目的 通過(guò)一般藥理學(xué)研究 可以確定受試物非期望出現(xiàn)藥物效應(yīng)的情況 它可能關(guān)系到人的安全性 評(píng)價(jià)受試物在毒理學(xué)和 或臨床研究中觀察到的藥物不良反應(yīng)和 或病理生理作用 研究所觀察到的和 或推測(cè)的藥物不良反應(yīng)機(jī)制 通過(guò)一般藥理學(xué)研究 它可為長(zhǎng)期毒性試驗(yàn)設(shè)計(jì)提供參考 為臨床研究和安全用藥提供信息 為開(kāi)發(fā)新的適應(yīng)癥提供信息 一 受試物 建議受試物采用制備工藝穩(wěn)定 符合臨床試用質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的中試樣品 并注明受試物的名稱 來(lái)源 批號(hào) 含量 或規(guī)格 保存條件及配制方法等 如不采用中試樣品 應(yīng)有充分的理由 如果由于給藥容積或給藥方法限制 可采用原料藥 提取物 進(jìn)行試驗(yàn) 二 劑量設(shè)置中 高劑量應(yīng)高于藥效學(xué)的有效劑量 并與低劑量呈倍數(shù)關(guān)系 應(yīng)設(shè)至少4個(gè)劑量組三 試驗(yàn)指標(biāo)的選擇 一 心血管系統(tǒng)測(cè)定并記錄給藥前后血壓 包括收縮壓 舒張壓和平均壓 心電圖 包括QT間期 PR間期 QRS波 ST段和QRS波等 和心率等的變化 治療劑量出現(xiàn)明顯血壓或心電圖改變時(shí) 應(yīng)進(jìn)行相應(yīng)整體或離體的進(jìn)一步研究 二 呼吸系統(tǒng)測(cè)定并記錄給藥前后的呼吸頻率 節(jié)律和呼吸深度 治療劑量出現(xiàn)明顯的呼吸興奮或抑制時(shí) 應(yīng)進(jìn)行相應(yīng)整體或離體進(jìn)一步研究 三 精神神經(jīng)系統(tǒng)動(dòng)物自主活動(dòng) 平衡能力 與戊巴比妥鈉的協(xié)同 四 結(jié)果及分析應(yīng)根據(jù)詳細(xì)的試驗(yàn)記錄 對(duì)結(jié)果進(jìn)行定量和定性統(tǒng)計(jì)分析 說(shuō)明具體的統(tǒng)計(jì)方法和選擇理由 同時(shí)應(yīng)注意對(duì)個(gè)體試驗(yàn)結(jié)果的評(píng)價(jià) 根據(jù)統(tǒng)計(jì)結(jié)果 分析受試物的一般藥理作用 結(jié)合非臨床藥效學(xué) 毒理學(xué)及臨床試驗(yàn)結(jié)果 綜合分析這些藥理作用所提示的臨床意義 追加的安全藥理學(xué)研究?jī)?nèi)容 中樞神經(jīng)系統(tǒng) 觀察藥物對(duì)行為藥理 學(xué)習(xí)記憶 神經(jīng)生化 視覺(jué) 聽(tīng)覺(jué)和 或電生理等的影響心血管系統(tǒng) 觀察藥物對(duì)心輸出量 心肌收縮作用 血管阻力等心血管功能的影響 并探討其作用機(jī)制 呼吸系統(tǒng) 觀察藥物對(duì)氣道阻力 肺動(dòng)脈壓力 血?dú)夥治?血液pH值等的影響 補(bǔ)充的安全藥理學(xué)研究 泌尿系統(tǒng) 觀察藥物對(duì)腎功能的影響 如對(duì)尿量 比重 滲透壓 pH 電解質(zhì)平衡 蛋白質(zhì) 細(xì)胞和血生化 如尿素氮 肌酐 蛋白質(zhì) 等指標(biāo)的檢測(cè) 自主神經(jīng)系統(tǒng) 觀察藥物對(duì)自主神經(jīng)系統(tǒng)的影響 如與自主神經(jīng)系統(tǒng)有關(guān)受體的結(jié)合 體內(nèi)或體外對(duì)激動(dòng)劑或拮抗劑的功能反應(yīng) 對(duì)自主神經(jīng)的直接刺激作用和對(duì)心血管反應(yīng) 壓力反射和心率的影響 胃腸系統(tǒng) 觀察藥物對(duì)胃腸系統(tǒng)的影響 如胃液分泌量和pH 胃腸損傷 膽汁分泌 體內(nèi)轉(zhuǎn)運(yùn)時(shí)間 體外回腸收縮的測(cè)定 其它器官系統(tǒng) 當(dāng)出于對(duì)安全性的關(guān)注時(shí) 在其它有關(guān)研究中尚未研究藥物對(duì)下列器官系統(tǒng)的影響 如潛在的依賴性 骨骼肌 免疫和內(nèi)分泌功能等的影響 則應(yīng)考慮藥物對(duì)這方面的影響 三 其它相關(guān)問(wèn)題 1 給藥途徑原則上應(yīng)與臨床擬用途徑一致 2 監(jiān)測(cè)的儀器設(shè)備 3 麻醉狀態(tài) 4 監(jiān)測(cè)的時(shí)間 5 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì) 急性毒性試驗(yàn) Acutetoxicitytesting 是指在一日內(nèi)一次或多次應(yīng)用受試藥物給予動(dòng)物后 短期內(nèi)所產(chǎn)生的毒性反應(yīng)及死亡情況 一 受試物 建議受試物采用制備工藝穩(wěn)定 符合臨床試用質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的中試樣品 并注明受試物的名稱 來(lái)源 批號(hào) 含量 或規(guī)格 保存條件及配制方法等 如不采用中試樣品 應(yīng)有充分的理由 一 動(dòng)物一般應(yīng)選擇與受試藥物的藥效學(xué) 藥代動(dòng)力學(xué) 長(zhǎng)期毒性試驗(yàn)相關(guān)的動(dòng)物 小鼠 大鼠 要求雌雄各半 二 給藥途徑 溶媒 體積 三 劑量和試驗(yàn)周期 四 觀察指標(biāo)及記錄 五 試驗(yàn)方法半數(shù)致死量 LD50 最大耐受量 maximumtolerateddose MTD 試驗(yàn) 長(zhǎng)期毒性試驗(yàn)研究 Chronictoxicitytesting 試驗(yàn)設(shè)計(jì)至關(guān)重要 試驗(yàn)設(shè)計(jì)應(yīng)作到科學(xué) 周到 合理 一 試驗(yàn)動(dòng)物選用動(dòng)物的生長(zhǎng)敏感期階段進(jìn)行試驗(yàn) 即大鼠5 8周齡 體重80 100g左右 Beagle犬4 12月齡二 劑量設(shè)置高劑量應(yīng)使動(dòng)物出現(xiàn)明顯毒性或嚴(yán)重的毒性反應(yīng) 或個(gè)別動(dòng)物出現(xiàn)死亡 中劑量應(yīng)使動(dòng)物出現(xiàn)輕微的或中等程度的毒性反應(yīng) 應(yīng)注意的問(wèn)題 一 劑量設(shè)置較低 與藥效學(xué)劑量間無(wú)安全范圍 二 與藥效學(xué)劑量的表示方法不一致 1 參考急性毒性試驗(yàn)的LD50值 大鼠大 中 小三劑量一般為L(zhǎng)D50值的1 10 1 50 1 100 2 參考最大給藥量 3 參考擬用臨床劑量 4 參考藥動(dòng)學(xué)試驗(yàn)結(jié)果 5 據(jù)等效劑量推算 6 據(jù)體表面積折算 三 樣品提供和給藥途徑一次性提供中試樣品 要求與臨床擬用途徑一致 三 預(yù)試驗(yàn)易被忽略 實(shí)驗(yàn)全程耗時(shí)耗力 一般重復(fù)不起 用少量動(dòng)物進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)很有必要 其中重點(diǎn)解決最大給藥量的問(wèn)題 四 給藥周期長(zhǎng)期毒性試驗(yàn)的給藥周期 長(zhǎng)期毒性試驗(yàn)的給藥周期臨床療程長(zhǎng)期毒性給藥周期嚙齒類動(dòng)物非嚙齒類動(dòng)物 1周2周2周 2周1個(gè)月1個(gè)月 1個(gè)月3個(gè)月3個(gè)月 3個(gè)月6個(gè)月6個(gè)月 3個(gè)月6個(gè)月9個(gè)月 對(duì)于一些慢性病需長(zhǎng)期反復(fù)應(yīng)用的藥物 長(zhǎng)期毒性試驗(yàn)則要求根據(jù)臨床實(shí)際用藥的療程 按照最長(zhǎng)試驗(yàn)周期進(jìn)行試驗(yàn) 即觀察大鼠給藥6個(gè)月 犬給藥9個(gè)月的長(zhǎng)期毒性試驗(yàn)五 指標(biāo)選擇一般狀態(tài) 血液學(xué) 血液生化學(xué) 尿常規(guī) 主要臟器的病理組織檢查 1 血液學(xué)指標(biāo)紅細(xì)胞計(jì)數(shù)血紅蛋白紅細(xì)胞容積平均紅細(xì)胞容積平均紅細(xì)胞血紅蛋白平均紅細(xì)胞血紅蛋白濃度網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)白細(xì)胞計(jì)數(shù)及其分類血小板計(jì)數(shù)凝血時(shí)間骨髓涂片 2 血液生化學(xué)指標(biāo)天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)換酶丙氨酸氨基轉(zhuǎn)換酶堿性磷酸酶 谷氨酰轉(zhuǎn)移酶尿素氮 肌酐 總蛋白 白蛋白 血糖總膽紅素 總膽固醇 甘油三酯 鈉離子濃度 鉀離子濃度 氯離子濃度 肌酐磷酸激酶 3 非嚙齒類動(dòng)物尿液分析指標(biāo) 尿液外觀 比重 pH值 尿糖 尿蛋白 尿膽紅素 尿膽原 酮體 尿液沉渣的顯觀察 4 長(zhǎng)期毒性研究中需稱重并計(jì)算臟器系數(shù)的器官 腦 心臟 肝臟 腎臟 腎上腺 胸腺 脾臟 雄性動(dòng)物睪丸 雄性動(dòng)物附睪 雌性動(dòng)物卵巢 雌性動(dòng)物子宮 5 嚙齒類動(dòng)物需進(jìn)行病理組織學(xué)檢查的組織 腦 大腦 小腦 腦干 脊髓 頸 胸 腰段 垂體 胸腺 甲狀腺 甲狀旁腺 食管 唾液腺 胃 小腸和大腸 肝臟 胰腺 腎臟 腎上腺 脾臟 心臟 氣管 肺 主動(dòng)脈 雄性動(dòng)物睪丸 雄性動(dòng)物附睪 雌性動(dòng)物子宮 雌性動(dòng)物卵巢 雌性動(dòng)物乳腺 雄性動(dòng)物前列腺 膀胱 坐骨神經(jīng) 骨髓 給藥局部 淋巴結(jié) 包括給藥局部淋巴結(jié) 腸系膜淋巴結(jié) 6 非嚙齒類動(dòng)物需進(jìn)行病理組織學(xué)檢查的組織 腦 大腦 小腦 腦干 脊髓 頸 胸 腰段 垂體 胸腺 甲狀腺 甲狀旁腺 食管 唾液腺 胃 小腸和大腸 肝臟 膽囊 腎臟 腎上腺 脾臟 胰腺 氣管 肺 主動(dòng)脈 心臟 雄性動(dòng)物附睪 雄性動(dòng)物睪丸 雌性動(dòng)物卵巢 雌性動(dòng)物子宮 雄性動(dòng)物前列腺 雌性動(dòng)物乳腺 坐骨神經(jīng) 膀胱 視神經(jīng) 給藥局部 骨髓 淋巴結(jié) 包括給藥局部淋巴結(jié) 腸系膜淋巴結(jié) 六 恢復(fù)期了解毒性反應(yīng)的可逆程度和可能出現(xiàn)的遲發(fā)性反應(yīng)停藥后2 6周 某些檢查指標(biāo)出現(xiàn)異常 可將恢復(fù)期相應(yīng)延長(zhǎng)七 結(jié)果的判斷應(yīng)事實(shí)求是地科學(xué)地分析結(jié)果 報(bào)告毒性反應(yīng)出現(xiàn)和恢復(fù)的時(shí)間 分析有無(wú)蓄積的情況沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 不等于沒(méi)有生理學(xué)意義 有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義也不等于有生物學(xué)意義要有本實(shí)驗(yàn)室的背景資料 中藥的特殊毒理學(xué)研究包括致突變性 致癌性 生殖毒性 致敏性 依賴性 其他毒性研究 一 皮膚刺激試驗(yàn)分別進(jìn)行完整皮膚 破損皮膚 多次給藥的刺激試驗(yàn) 芎龍止痛滴鼻液對(duì)完整