土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離.ppt

土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù) 重點(diǎn) 從土壤中分離分級(jí)纖維素的微生物 二 研究思路 一 篩選菌株 aq細(xì)菌能忍受93OC左右的高溫 是美國(guó)微生物學(xué)家托馬斯 布魯克于1966年在美國(guó)黃石國(guó)家公園的一個(gè)熱泉中發(fā)現(xiàn)的 這說(shuō)明尋找目的菌株時(shí) 要根據(jù)他雖生存環(huán)境的要求 到相應(yīng)的環(huán)境中去尋找 2 實(shí)驗(yàn)室中微生物篩選的原理 人為提供目的菌株的生長(zhǎng)的條件 包括營(yíng)養(yǎng) 溫度 PH等 同時(shí)抑制或阻止其他微生物的生長(zhǎng) 選擇培養(yǎng)基 在微生物學(xué)中 將允許特定種類微生物生長(zhǎng) 同時(shí)抑制其他種類微生物生長(zhǎng)的培養(yǎng)基 稱作選擇培養(yǎng)基作用 主要應(yīng)用于菌種分離 分析本課題使用的培養(yǎng)基 KH2PO4Na2HPO4MgSO4 7H2O葡萄糖尿素瓊脂碳源 葡萄糖 氮源 尿素 無(wú)機(jī)鹽 KH2PO4Na2HPO4MgSO4 7H2O凝固劑 瓊脂該培養(yǎng)基的選擇作用主要是通過(guò)尿素來(lái)實(shí)現(xiàn)的 原因 在這個(gè)培養(yǎng)基中 尿素是唯一的氮源 只有能夠利用尿素的細(xì)菌才能在這種培養(yǎng)基上正常生活 二 統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目 常用稀釋涂布平板法來(lái)統(tǒng)計(jì)樣品中活菌的數(shù)目 原理 當(dāng)樣品的稀釋度足夠時(shí) 培養(yǎng)基表面生長(zhǎng)的一個(gè)菌落來(lái)源于樣品稀釋液中的一個(gè)活菌 注 1 為保證結(jié)果準(zhǔn)確 一般選擇菌落數(shù)在30 300的平板進(jìn)行計(jì)數(shù) 2 為增強(qiáng)實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)確性 一定要涂布至少3個(gè)平板 作為重復(fù)組 4 顯微鏡直接計(jì)數(shù)法 鏡檢計(jì)數(shù) 也是測(cè)定微生物數(shù)量的常用方法 另外也可采用濾膜法 三 設(shè)置對(duì)照1 目的 排除試驗(yàn)組中非測(cè)試因素對(duì)實(shí)驗(yàn)的結(jié)果的影響 提高實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可信度 注 對(duì)照實(shí)驗(yàn)的分類 空白對(duì)照 不給對(duì)照組任何處理因素條件對(duì)照 給對(duì)照組部分對(duì)照因素 但不是所要研究的處理因素 自身對(duì)照 對(duì)照和實(shí)驗(yàn)都在同一研究對(duì)象上進(jìn)行 相互對(duì)照 不單設(shè)對(duì)照組 而是幾個(gè)試驗(yàn)組相互對(duì)照 分析 P23A同學(xué)出現(xiàn)不同試驗(yàn)結(jié)果的原因 土樣不同 培養(yǎng)基被污染或操作有誤對(duì)照組設(shè)置 方案一 其他同學(xué)取與A同學(xué)相同的圖樣進(jìn)行培養(yǎng) 若結(jié)果與A相同 則說(shuō)明A無(wú)誤 反之 則有誤 方案二 將A同學(xué)配置的培養(yǎng)基在不加土樣情況下進(jìn)行培養(yǎng) 作為空白對(duì)照 以證明A的培養(yǎng)基是否受到污染 三 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì) 一 土壤取樣 注 有機(jī)物含量高 土質(zhì)肥 一般其中微生物含量高 土壤中微生物大約70 90 是細(xì)菌 而細(xì)菌適宜在酸堿度接近中性的潮濕土壤中生活 因此 在距地表3 8cm的土壤層分布較多 取土樣用的小鐵鏟及裝土樣的信封要事先滅菌 二 樣品稀釋 注 分離不同的微生物要采用不同的稀釋度 原因 土壤中各類微生物的數(shù)量是不同的 采用不同的稀釋度以保證獲得菌落數(shù)在30 300之間適于計(jì)數(shù)的平板 三 涂布平板 四 微生物的培養(yǎng)與觀察注 細(xì)菌一般在30 37OC的溫度下培養(yǎng)1 2天 放線菌一般在25 28OC溫度下培養(yǎng)5 7天 而霉菌一般在25 28OC溫度下培養(yǎng)3 4天 每隔24小時(shí)統(tǒng)計(jì)一次數(shù)目 防止因培養(yǎng)時(shí)間不足而導(dǎo)致遺漏菌落數(shù)目一般來(lái)說(shuō) 在一定條件下 同種微生物表現(xiàn)出穩(wěn)定的菌落特征 鑒別分