和地中海貧血的遺傳篩查和產(chǎn)前診斷GeneticScreening.ppt

和 地中海貧血的遺傳篩查和產(chǎn)前診斷GeneticScreeningandPrenatalDiagnosisfor and thalassemiainGuangdongMeizhou2006 December07徐湘民南方醫(yī)科大學(xué) 醫(yī)學(xué)遺傳學(xué)教研室南方醫(yī)院產(chǎn)前診斷和遺傳病診斷技術(shù)中心SouthernMedicalUniversity 地中海貧血是全球最大的單基因遺傳病之一 中國(guó)南方不同高發(fā)地區(qū)人群攜帶率1 23 研究背景 中國(guó)南方 和 地貧的人群攜帶率 珠海 韶關(guān) 廣州 汕頭 湛江 廣東省五個(gè)地區(qū)地中海貧血遺傳流行病學(xué)調(diào)查 西 南 東 北 中 JournalofClinicalPathology 2004 57 5 517 22 廣東省人群中 地貧的攜帶者頻率 廣東省人群中 地貧的攜帶者頻率 廣東省年高風(fēng)險(xiǎn)妊娠預(yù)測(cè)數(shù)據(jù) 95 CI 重型或中間型 地貧 645 480 835 Bart s胎兒水腫綜合征 1714 1498 1945 血紅蛋白 Hb H病 1677 1467 1901 廣州市主要出生缺陷的發(fā)生率 1998 2001 地貧純合子 致死性出生缺陷 重型 地貧 胎兒水腫綜合征 早產(chǎn)死胎或出生前后死亡 可導(dǎo)致嚴(yán)重產(chǎn)科并發(fā)癥 無(wú)理想治療方法 重型 地貧 出生后1年內(nèi)發(fā)病 多于未成年前因嚴(yán)重貧血而夭折 輸血和去鐵治療可維持 代價(jià)昂貴 研究地中海貧血的意義 重癥地貧患兒的出生是世界公認(rèn)的公共衛(wèi)生問(wèn)題 通過(guò)產(chǎn)前診斷阻止重癥患兒出生是首選預(yù)防措施 WHO優(yōu)先推薦在發(fā)展中國(guó)家實(shí)施預(yù)防的遺傳性疾病 預(yù)防地貧是中國(guó)南方高發(fā)區(qū)減少出生缺陷的戰(zhàn)略需求 研究背景 應(yīng)用于地貧控制的人群篩查策略 基于醫(yī)院水平的預(yù)防計(jì)劃 基于社區(qū)水平的預(yù)防計(jì)劃 擴(kuò)展的家系篩查計(jì)劃 中國(guó)南方地貧人群預(yù)防的首個(gè)前瞻性篩查計(jì)劃 時(shí)間 1993 01 01 2003 12 31 基于醫(yī)院的預(yù)防計(jì)劃 廣州市婦嬰醫(yī)院占廣州市出生數(shù)的1 17 策略 孕期雜合子篩查 結(jié)合現(xiàn)行的孕期健康產(chǎn)科檢查實(shí)施 地貧攜帶者篩查及產(chǎn)前診斷流程 篩查結(jié)果 異常血紅蛋白篩查結(jié)果 廣州市婦嬰醫(yī)院1993 2003篩查計(jì)劃的結(jié)果 cont d 篩查發(fā)現(xiàn)的陽(yáng)性孕婦或陽(yáng)性夫婦 地貧1 地貧 地貧 地貧5 7 3 6 4 4 1 8 Totalof4503couplesscreened 54例Bart s水腫兒和HbH病 18例重型 地貧 28041783198對(duì)83對(duì) 產(chǎn)前診斷 187例 地貧82例 地貧 廣州市婦嬰醫(yī)院1993 2003篩查計(jì)劃的結(jié)果 產(chǎn)前診斷結(jié)果 地中海貧血的產(chǎn)前診斷 胎兒取樣技術(shù) DNA診斷技術(shù) 地貧的診斷 地貧的診斷 羊膜穿刺 amniocentesis 抽取胎兒樣品示意圖 DNA診斷技術(shù) 多重PCR multiplexPCR 等位基因特異性性寡核苷酸雜交 ASO 反向點(diǎn)雜交 RDB 變性高效液相色譜 DHPLC 多重引物延伸DHPLC multiplexPE DHPLC 用于 和 地貧產(chǎn)前診斷的方法 1993 2003 胎兒臍帶血血紅蛋白電泳圖譜 DiagnosisPatient1Bart shydropsfetalisPatient2HbHdiseasePatient3 thaltrait 本實(shí)驗(yàn)室應(yīng)用的主要技術(shù) 采用Gap PCR進(jìn)行 SEA 地貧基因缺失的基因分型 SEA 地貧缺失的基因分型結(jié)果 與美國(guó)商品化UBI試劑盒的對(duì)比研究 中國(guó)南方 地貧突變的變異類型和位置 EXON1 IVS1 EXON2 EXON3 IVS2 Fragmentsize A 453bpB 364bpC 423bp OnesetofPCRconditions DHPLC分析人 珠蛋白基因 三個(gè)PCR片段擴(kuò)增 IVS2 3 UTR A B C DHPLC的三種操作模式 非變性分析 50 C 雙鏈DNA大小測(cè)定 半變性分析 52 78 C 突變鑒定 全變性分析 78 80 C Oligo和RNA分析 PCR產(chǎn)物的半變性分析 52 78 C WildtypeMutantHeteroduplexesHomoduplexes ReferenceSamples PCRProducts DHPLC檢測(cè) 地貧突變的結(jié)果 DHPLC檢測(cè) 地貧突變的結(jié)果 DHPLC檢測(cè) 地貧突變的結(jié)果 RDBanalysis applicationtorapidprenataldiagnosisforeight thalassaemiamutations GenotypeFatherCDs41 42 CTTT NMotherIVS 2 654 C T NFetusCDs41 42 IVS 2 654NormalcontrolN N 83例 地貧高風(fēng)險(xiǎn)胎兒產(chǎn)前診斷結(jié)果 cont d 266例高風(fēng)險(xiǎn)妊娠的產(chǎn)前診斷結(jié)果 ThreeHbHdiseaseinvolved 269 95 7 孕婦實(shí)施產(chǎn)前診斷 187 地貧 83 地貧 1雙胞胎 72 26 7 孕婦要求終止妊娠 54重型 地貧 18重型 地貧 1雙胞胎 69重型地貧被預(yù)防 51水腫胎 18重型 地貧 1雙胞胎 12孕婦不接受產(chǎn)前診斷 197例孕婦繼續(xù)妊娠 3例HbH病出生 2例水腫胎出生 廣東省 和 地中海貧血預(yù)防模式研究現(xiàn)場(chǎng) 廣東省四會(huì)市時(shí)間 2001 1 2005 12人口 40萬(wàn)目標(biāo) 為制定2006年廣東省全境地貧預(yù)防計(jì)劃提供方法和經(jīng)驗(yàn) 產(chǎn)前遺傳學(xué)的臨床和公共衛(wèi)生問(wèn)題利用有效的公共衛(wèi)生教育資源 首先使醫(yī)生和公眾了解更多的地貧知識(shí)和知曉選擇遺傳服務(wù)及其對(duì)待產(chǎn)前診斷的態(tài)度是我們面臨的一個(gè)重要課題 2 為滿足大規(guī)模預(yù)防工作的需要 我們須大力加強(qiáng)?？漆t(yī)生 遺傳咨詢師 及其他相關(guān)專業(yè)人員的培訓(xùn)工作 3 預(yù)防監(jiān)測(cè)系統(tǒng)建立過(guò)程中 要特別注重轉(zhuǎn)診 病例登記 實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制的把關(guān) 4 政