免疫組化檢查在病理診斷中的應(yīng)用及其意義.doc

免疫組化檢查在病理診斷中的應(yīng)用及其意義免疫組化是利用抗原與抗體特異性結(jié)合的原理，通過(guò)化學(xué)反應(yīng)使標(biāo)記抗體的顯色劑 (熒光素、酶、金屬離子、同位素) 顯色來(lái)確定組織細(xì)胞內(nèi)抗原(多肽和蛋白質(zhì))，對(duì)其進(jìn)行定位、定性及定量的研究，稱(chēng)為免疫組織化學(xué)。免疫組化實(shí)驗(yàn)中常用的抗體為單克隆抗體和多克隆抗體。實(shí)驗(yàn)所用主要為組織標(biāo)本和細(xì)胞標(biāo)本兩大類(lèi)，前者包括石蠟切片（病理大片和組織芯片）和冰凍切片，后者包括組織印片、細(xì)胞爬片和細(xì)胞涂片。其中石蠟切片是制作組織標(biāo)本最常用、最基本的方法，對(duì)于組織形態(tài)保存好，且能作連續(xù)切片，有利于各種染色對(duì)照觀察；還能長(zhǎng)期存檔，供回顧性研究；石蠟切片制作過(guò)程對(duì)組織內(nèi)抗原暴露有一定的影響，但可進(jìn)行抗原修復(fù)，是免疫組化中首選的組織標(biāo)本制作方法。石蠟切片標(biāo)本均用甲醛固定，使得細(xì)胞內(nèi)抗原形成醛鍵、羧甲鍵而被封閉了部分抗原決定簇，同時(shí)蛋白之間發(fā)生交聯(lián)而使抗原決定簇隱蔽。所以要求在進(jìn)行IHC染色時(shí)，需要先進(jìn)行抗原修復(fù)或暴露，即將固定時(shí)分子之間所形成的交聯(lián)破壞，而恢復(fù)抗原的原有空間形態(tài)。常用的抗原修復(fù)方法有微波修復(fù)法，高壓加熱法，酶消化法，水煮加熱法等，常用的修復(fù)液是pH6.0的0.01 mol/L的檸檬酸鹽緩沖液。免疫組化常用的染色方法根據(jù)標(biāo)記物的不同分為免疫熒光法，免疫酶標(biāo)法，親和組織化學(xué)法，后者是以一種物質(zhì)對(duì)某種組織成分具有高度親合力為基礎(chǔ)的檢測(cè)方法。這種方法敏感性更高，有利于微量抗原(抗體)在細(xì)胞或亞細(xì)胞水平的定位，其中生物素抗生物素染色法最常用。一、病理外檢中常用抗體標(biāo)記上皮類(lèi)標(biāo)記AE1/AE3最常用，胞漿陽(yáng)性著色，細(xì)絲狀，與低、中分子量角蛋白反應(yīng)，肝細(xì)胞為陰性，而膽管細(xì)胞陽(yáng)性，用于確定腫瘤為上皮源性；CAM5.2胞漿陽(yáng)性著色，細(xì)絲狀，包含CK8 和CK18，主要染色神經(jīng)內(nèi)分泌細(xì)胞和腺上皮，正常鱗狀上皮陰性，用于染小細(xì)胞癌、胸腺瘤和梭形細(xì)胞癌、肝細(xì)胞癌：AE1/AE3（-） CAM5.2 （+），用于乳腺外的Pagets??；CK34BE胞漿陽(yáng)性著色，鱗狀上皮和鱗狀細(xì)胞癌陽(yáng)性，用于染前列腺的基底層細(xì)胞，鑒別浸潤(rùn)癌，染涎腺腫瘤的肌上皮，用于染Mallory小體；EMA細(xì)胞膜/細(xì)胞漿陽(yáng)性著色，上皮標(biāo)記的替代品，漿細(xì)胞陽(yáng)性，很好的內(nèi)對(duì)照，用于染滑膜肉瘤 、大細(xì)胞分化不良性淋巴瘤 、L&H 富于淋巴細(xì)胞的結(jié)節(jié)狀何杰金、腦膜瘤EMA（+）AE1/AE3（）、漿細(xì)胞瘤；CK7和CK20胞漿陽(yáng)性著色，兩者聯(lián)合應(yīng)用可鑒別很多種癌的原發(fā)部位，CK7 常常在胃腸道的癌為陰性 ，CK20 只有胃腸道癌和Merkel 細(xì)胞癌陽(yáng)性。間皮細(xì)胞標(biāo)記Calretinin細(xì)胞核和細(xì)胞漿陽(yáng)性著色，核陽(yáng)性著色為必需，間皮強(qiáng)陽(yáng)性，Sertoli和肥大細(xì)胞陽(yáng)性，用于鑒別間皮瘤（+）和腺癌（-），常加CEA，鑒別梭形細(xì)胞間皮肉瘤（+）和其他的漿膜腔肉瘤（-），鑒別胸、腹水中的癌細(xì)胞和間皮細(xì)胞，確定為間皮細(xì)胞，如大網(wǎng)膜內(nèi)陷入的一團(tuán)細(xì)胞或腺瘤樣瘤，神經(jīng)元分化標(biāo)記，如中樞神經(jīng)細(xì)胞瘤，幫助確診心臟粘液瘤，幾乎全為（+）。白細(xì)胞標(biāo)記非何杰金淋巴瘤大致分類(lèi)CD20（L26），CD3懷疑T 細(xì)胞淋巴瘤者加UCHL-1（CD45RO），懷疑漿細(xì)胞瘤者LCA（CD45RB）,CD79a, CD138，小B 細(xì)胞淋巴瘤者，CD79a, CD43（MT1）；LCA（CD45RB）幾乎所有的白細(xì)胞（+），有些淋巴母細(xì)胞淋巴瘤、大細(xì)胞分化不良性淋巴瘤、外周T 細(xì)胞淋巴瘤（- ），經(jīng)典Hodgkin 的R-S 細(xì)胞（-），以往漿細(xì)胞瘤（-），現(xiàn)（+），HE 下明確的淋巴瘤不必要染LCA。B細(xì)胞相關(guān)標(biāo)記CD20（L26）胞膜陽(yáng)性著色，漿陽(yáng)者不可判為陽(yáng)性，各階段B 細(xì)胞陽(yáng)性，除了原始的前B 和非常成熟的漿母、漿細(xì)胞 ，用于染B 細(xì)胞淋巴瘤，除了小細(xì)胞、淋巴母細(xì)胞（不恒定）和漿細(xì)胞瘤常（-） ，梭形細(xì)胞胸腺瘤（+）；CD79a胞漿陽(yáng)性著色，有/無(wú)核周聚集，全B 細(xì)胞標(biāo)記，包括漿母和漿細(xì)胞，標(biāo)記濾泡中心比mantle和濾泡間B要弱，比CD20貴得多，用于鑒別淋巴母細(xì)胞淋巴瘤/白血病，彌漫性小B 細(xì)胞淋巴瘤/白血病，漿細(xì)胞瘤常CD20()而CD79a 50% (+)。T細(xì)胞相關(guān)標(biāo)記CD3（polyclonal）胞漿陽(yáng)性著色，核周凝聚，有時(shí)高爾基體也陽(yáng)性，極好的T 細(xì)胞標(biāo)記，與CD43 不同，髓系細(xì)胞和組織細(xì)胞不著色，極好的T 細(xì)胞和NK 淋巴瘤標(biāo)記，雖然有些大細(xì)胞型T 細(xì)胞淋巴瘤陰性；CD43 （MT1）只有膜陽(yáng)性才能判為陽(yáng)性，T 細(xì)胞、T 細(xì)胞淋巴瘤、真性組織細(xì)胞腫瘤、粒細(xì)胞肉瘤陽(yáng)性，一部分漿細(xì)胞瘤陽(yáng)性，小B 細(xì)胞淋巴瘤陽(yáng)性，這一特點(diǎn)可輔助表明增生的小淋巴細(xì)胞為腫瘤性！EBV 感染的B 細(xì)胞陽(yáng)性；UCHL-1（CD45RO）細(xì)胞膜陽(yáng)性著色，有時(shí)Golgi 陽(yáng)性，彌漫性胞漿陽(yáng)性者非真陽(yáng)性 ，陽(yáng)性：正常/ 反應(yīng)性的T 細(xì)胞，組織細(xì)胞、粒細(xì)胞肉瘤和T 細(xì)胞淋巴瘤，罕見(jiàn)情況下B 細(xì)胞淋巴瘤陽(yáng)性；CD5細(xì)胞膜陽(yáng)性著色，T 細(xì)胞陽(yáng)性，但極少B 細(xì)胞也陽(yáng)性，尤其用于慢性淋巴細(xì)胞性白血病和Mantle 淋巴瘤，而MALToma 和Marginal Zone 淋巴瘤陰性，用于鑒別胸腺癌（CD5+）和其他癌瘤。與激活相關(guān)的標(biāo)記CD30（Ki-I，Ber-H2）只有膜染色和Golgi體染色才是真陽(yáng)性，正常淋巴濾泡周單個(gè)的大細(xì)胞為陽(yáng)性，激活的淋巴細(xì)胞陽(yáng)性：如傳單、弓漿蟲(chóng)感染、Kikuchi淋巴結(jié)炎等、漿細(xì)胞也陽(yáng)性，用于大細(xì)胞分化不良性淋巴瘤、一些傳統(tǒng)的大細(xì)胞淋巴瘤、外周T和B細(xì)胞淋巴瘤中的一些單個(gè)大細(xì)胞、經(jīng)典何杰金病中的R-S細(xì)胞，但非L&H細(xì)胞、淋巴瘤樣丘疹病等皮下CD30+的淋巴增生疾病、一些漿細(xì)胞瘤、胚胎性癌。組織細(xì)胞標(biāo)記CD68（PGM1）胞漿內(nèi)顆粒狀陽(yáng)性著色，較好的組織細(xì)胞和單核細(xì)胞（包括漿樣單核細(xì)胞）及其腫瘤的標(biāo)記，有些非組織細(xì)胞也可陽(yáng)性，包括：腎小管、粒細(xì)胞肉瘤、惡黑、血管瘤樣惡纖組等，髓系細(xì)胞標(biāo)記；Myeloperoxidase胞漿陽(yáng)性著色，常呈顆粒狀，髓系細(xì)胞及其腫瘤的高度特異且敏感的標(biāo)記，奇怪的是在Kikuchi 淋巴結(jié)炎和狼瘡性壞死性淋巴結(jié)炎中，其中的組織細(xì)胞myeloperoxidase 也為 陽(yáng)性。與淋巴瘤相關(guān)的標(biāo)記ALK-1(Anaplastic lymphoma kinase-1)胞核+ 胞漿陽(yáng)性著色用于大細(xì)胞分化不良性淋巴瘤，不能證實(shí)ALK1+ 與良好預(yù)后有關(guān)，一種罕見(jiàn)的大B 細(xì)胞細(xì)胞瘤，ALK1 陽(yáng)性而CD20 陰性，但I(xiàn)gA 陽(yáng)性；Bcl-2在核周?chē)鷧^(qū)陽(yáng)性著色，在正常淋巴結(jié)，生發(fā)中心陰性，但mantle 和濾泡間細(xì)胞強(qiáng)陽(yáng)性，在濾泡性淋巴瘤，（80% 病例）生發(fā)中心強(qiáng)陽(yáng)性，陰性不能排除濾泡性淋巴瘤，也用于鑒別單核樣B 細(xì)胞增生（-）和單核樣B 細(xì)胞淋巴瘤（+），有人用于診斷孤立性纖維性腫瘤；Cyclin-D1核陽(yáng)性著色，主要用于Mantle 區(qū)淋巴瘤，幾乎所有病例均為陽(yáng)性，有些可能為弱陽(yáng)性。與分化階段相關(guān)的標(biāo)記Tdt細(xì)胞核陽(yáng)性著色，不成熟的T或B淋巴細(xì)胞標(biāo)記，前T前B細(xì)胞，用于診斷淋巴母細(xì)胞淋巴瘤/ 白血病，診斷胸腺瘤（富于不成熟的T細(xì)胞）。肌原性標(biāo)記Desmin胞漿陽(yáng)性著色，平滑肌/ 骨骼肌及其腫瘤的良好標(biāo)記，肌纖維母細(xì)胞有時(shí)也陽(yáng)性，但肌上皮陰性，一些間皮瘤陽(yáng)性,desmoplastic small cell tumor；MSA（Muscle-specific actin）胞漿陽(yáng)性著色，極好的肌源性標(biāo)記，用于平滑肌、骨骼肌及其腫瘤，肌纖維母細(xì)胞及相關(guān)腫瘤（惡纖組、結(jié)節(jié)性筋膜炎等），肌上皮及其腫瘤，血管周細(xì)胞腫瘤，一些間皮瘤。血管原性標(biāo)記CD31細(xì)胞膜陽(yáng)性著色，內(nèi)皮細(xì)胞、巨核系細(xì)胞/ 血小板陽(yáng)性，有時(shí)漿細(xì)胞/ 漿細(xì)胞瘤陽(yáng)性，主要用于診斷血管性腫瘤：特異且敏感，識(shí)別骨髓中不正常的巨核細(xì)胞，巨核細(xì)胞系白血病 ；CD34細(xì)胞膜+/-細(xì)胞漿陽(yáng)性著色，血管內(nèi)皮/巨核細(xì)胞/血小板 +，很好的血管標(biāo)記，但特異性差，多種腫瘤CD34陽(yáng)性。血管原性標(biāo)記Factor VIII related antigen (F-VIII) 胞漿 陽(yáng)性著色，常為顆粒狀，內(nèi)皮細(xì)胞、巨核系細(xì)胞/ 血小板陽(yáng)性，主要用于血管原性腫瘤，特異性好，敏感性差，神經(jīng)、神經(jīng)內(nèi)分泌及神經(jīng)外胚層；Syn細(xì)胞漿陽(yáng)性著色，是神經(jīng)和神經(jīng)內(nèi)分泌細(xì)胞很好的標(biāo)記，特異性和敏感性均好，包括：Paraganglioma、Pheochromocytoma、Neuroblastoma、Olfactory neuroblastoma、Ganglioneuroma、Ganglioneuroblastoma、PNET等；CgA胞漿內(nèi)顆粒狀著色，染神經(jīng)內(nèi)分泌細(xì)胞的分泌小泡，因此神經(jīng)元和神經(jīng)節(jié)細(xì)胞陰性，神經(jīng)內(nèi)分泌非常特異性指標(biāo)，敏感性較差，陽(yáng)性信號(hào)取決于瘤細(xì)胞內(nèi)神經(jīng)內(nèi)分泌顆粒的多少，小細(xì)胞癌：信號(hào)少，類(lèi)癌、Merkel細(xì)胞癌、甲狀旁腺腺瘤等強(qiáng)陽(yáng)性，神經(jīng)性腫瘤可陽(yáng)可陰；GFAP（Glial fibrillary acidic protein）胞漿陽(yáng)性著色，星形細(xì)胞、室管膜細(xì)胞陽(yáng)性，一些肌上皮陽(yáng)性，星形細(xì)胞瘤、多形性膠質(zhì)母細(xì)胞瘤、室管膜瘤和脈絡(luò)叢乳頭狀瘤陽(yáng)性，少突膠質(zhì)細(xì)胞瘤常陰性；一些外周神經(jīng)鞘瘤可陽(yáng)性，涎腺多形性腺瘤常可陽(yáng)性，乳腺的肌上皮有時(shí)也可陽(yáng)性；S-100細(xì)胞核+/-細(xì)胞漿陽(yáng)性著色，核陽(yáng)性著色為必需，用處非常多；HMB45胞漿內(nèi)顆粒狀著色，惡性黑色素瘤和交界痣，而正常的痣細(xì)胞常為陰性，腎和肝的血管平滑肌脂肪瘤、腎被膜瘤，肺的淋巴管肌瘤病、糖瘤；Melan-A胞漿內(nèi)顆粒狀著色，陽(yáng)性表達(dá)的細(xì)胞包括：黑色素細(xì)胞、腎上腺皮質(zhì)、性索（Leydig, granulosa），用于黑色素瘤、支持-