潔凈區(qū)環(huán)境消毒方法及效果驗證方案.doc

.驗 證 文 件類 別：清潔驗證方案 編碼：QJYZ001R00 頁碼：共17頁第1頁消毒劑消毒效果及使用周期的驗證方案目 錄1. 概述2. 職責3. 驗證內(nèi)容3.1 消毒方法及效果的驗證3.1.1 臭氧消毒3.1.1.1 概述3.1.1.2臭氧消毒原理3.1.1.3 消毒時間確定3.1.1.4 可接受標準3.1.1.5 取樣計劃3.1.1.6 檢驗方法3.1.1.7 消毒效果評價3.1.2 甲酚皂消毒劑消毒滅菌法3.1.2.1 原理3.1.2.2 取樣計劃3.1.2.3 檢驗方法3.1.2.4 確定可接受限度標準3.1.3 新潔爾滅消毒劑消毒滅菌法3.1.3.1 原理3.1.3.2 取樣計劃3.1.3.3 檢驗方法3.1.3.4 確定可接受限度標準3.1.4 消毒劑消毒頻次，消毒劑更換頻次的驗證3.1.4.1 消毒劑消毒頻次的驗證3.1.4.1.1 原理3.1.4.1.2 沉降菌檢測取樣計劃3.1.4.1.3 沉降菌檢測方法3.1.4.1.4 表面細菌檢測取樣計劃3.1.4.1.5 表面細菌檢測方法3.1.4.1.6 確定可接受限度標準3.1.4.2 消毒劑更換頻次的驗證3.1.4.2.1 原理3.1.4.2.2 沉降菌檢測取樣計劃3.1.4.2.3 沉降菌檢測方法3.1.4.2.4 表面細菌檢測取樣計劃3.1.4.2.5 表面細菌檢測方法3.1.4.2.6 確定可接受限度標準4. 驗證實施5. 驗證報告1. 概述。1.1 背景。潔凈生產(chǎn)廠房用于D級口服固體制劑、外用制劑、丸劑生產(chǎn)。設(shè)備廠房于2002年8月全面完成安裝施工。根據(jù)GMP要求，結(jié)合生產(chǎn)實際情況，決定于2012年10月2012年6月對其清潔消毒效果進行驗證。1.2 驗證目的。清潔消毒方案及效果是否達到標準要求。2. 職責。2.1 驗證領(lǐng)導小組。驗證方案的批準，驗證的協(xié)調(diào)工作，驗證數(shù)據(jù)及結(jié)果的審核，驗證報告的審批，發(fā)放驗證證書。2.2 生產(chǎn)部。制訂驗證方案，并負責驗證方案的實施，收集各項驗證試驗記錄，報驗證領(lǐng)導小組，起草潔凈區(qū)清潔消毒操作程序。2.3 質(zhì)量部。驗證方案的審核，按驗證方案規(guī)定的取樣計劃和標準操作規(guī)程進行取樣和實驗，并報告檢驗結(jié)果；審核驗證中的評價結(jié)論。2.4 工程部。儀器的校正、公用系統(tǒng)、設(shè)備監(jiān)護等項工作提供可靠的服務。3. 驗證內(nèi)容。3.1 消毒方法及效果的驗證。3.1.1臭氧消毒3.1.1.1 概述：臭氧可消滅空氣中的細菌和微生物。在常溫常壓下，分子結(jié)構(gòu)不穩(wěn)定，很快分解成氧和單個氧原子，單個氧原子具有很強的氧化作用，可破壞細菌內(nèi)部氧化葡萄糖所必須的酶，從而破壞其細胞膜，將細菌和微生物殺死。臭氧通過高頻臭氧發(fā)生器來獲得。3.1.1.2 原理： 將臭氧發(fā)生器通向組合式空調(diào)器內(nèi)，通過與空氣接觸發(fā)生臭氧而隨空氣流動進入潔凈區(qū)，保持一定的時間起到消毒的目的。3.1.1.3 口服制劑、外用劑、丸劑HVAC系統(tǒng)分別設(shè)有臭氧消毒功能，來完成潔凈區(qū)空間的消毒工作。使用時根據(jù)潔凈區(qū)消毒后的微生物檢查情況，確定消毒時間及消毒周期。3.1.1.4 可接受標準。項 目可接受標準總菌落數(shù)10個/皿3.1.1.5 取樣計劃。3.1.1.5.1 取樣地點：應選擇產(chǎn)塵量大、工作人員多的房間。3.1.1.5.2 取樣：每個房間2個培養(yǎng)皿。 3.1.1.5.3 取樣時間：按規(guī)定時間通進臭氧后，迅速取樣。3.1.1.5.4 取樣部位：在距取樣點地面0.8米水平面上均勻分布，每點設(shè)培養(yǎng)皿1個。3.1.1.5.5 取樣點數(shù)目。外用劑潔凈區(qū)潔凈區(qū)域面積m2取樣點（個）稱量室92配液室302灌封室342洗烘瓶室402男二更92女二更92口服制劑潔凈區(qū)潔凈區(qū)域面積m2取樣點（個）粉碎室182稱量室92濕混制粒室362整?；旌鲜?72壓片室172膠囊填充室332包衣室102男二更92女二更923.1.1.5.6 取樣點布置 如圖示： 在房間部位均勻布置，一次與一次的取樣位置不能重復。3.1.1.5.7 取樣次數(shù)：每點一次。3.1.1.5.8 取樣器具應無菌。取樣操作遵循無菌操作法。取樣員應穿無菌服并套上無菌腳套，以防污染。3.1.1.6 檢驗方法。將已準備好的肉湯瓊脂培養(yǎng)皿置于取樣點，打開培養(yǎng)皿，使培養(yǎng)基表面暴露0.5h，再蓋上蓋。按照中國藥典（2010年版二部）附錄J微生物限度檢查法項下平皿菌落計數(shù)法檢測菌落數(shù)。檢驗結(jié)果以算術(shù)平均值計算。并跟蹤檢驗三個批次。檢驗結(jié)果與可接受限度標準相比較，消毒效果達到預期標準并且照射時間最短的時間即為所要選的最佳照射時間。結(jié)果計算： C1+C2 A室=- 2 A室：為室的平均菌落數(shù)。 C1：為第一取樣點取樣菌落數(shù)。C2：為第二取樣點取樣菌落數(shù)。3.1.1.7 取樣周期：每次消毒后連續(xù)取樣10天進行檢測；共計進行三次消毒和取樣。3.1.1.8結(jié)果判定：3.1.1.8.1消毒效果判定：根據(jù)已知的臭氧消毒量、消毒時間，根據(jù)取樣檢測的微生物結(jié)果，判定消毒效果是否符合標準。3.1.1.8.2消毒周期判定：根據(jù)已知的臭氧消毒量、消毒時間，根據(jù)取樣檢測的微生物結(jié)果，以微生物出現(xiàn)不合格或不合格邊沿線的時間為基準，縮短三天后的時間既定為消毒周期。3.1.1.9消毒效果評價及周期確定：根據(jù)連續(xù)三個周期檢測結(jié)果，由質(zhì)量管理部做出臭氧消毒效果評價，并確定消毒周期及確認每次消毒時間。3.1.2 甲酚皂消毒劑消毒滅菌法。3.1.2.1 原理。甲酚皂溶液溶于水，呈堿性反應，有除垢作用，并能破壞細菌的細胞膜，導致細胞內(nèi)物質(zhì)外滲或漏出，從而呈現(xiàn)出抑菌或殺菌作用。其殺菌作用與濃度有著直接的關(guān)系。所以通過對甲酚皂消毒液濃度的確認并與規(guī)定的可接受限度標準相比較，若在可接受限度標準范圍之內(nèi)，則可判定該消毒方法的有效性及穩(wěn)定性。具體方法為：在潔凈區(qū)內(nèi)指定幾個房間，然后設(shè)定3個濃度梯度，分別為1.5%、2.5%、3.5%，按照濃度梯度，配制好相應濃度的甲酚皂溶液。然后用不同濃度的甲酚皂溶液擦拭潔凈區(qū)墻壁（指定位置），并在擦拭后的對應位置上分別取樣，做潔凈區(qū)房間表面污染試驗。根據(jù)試驗結(jié)果以及潔凈區(qū)最大允許微生物濃度限度標準來確認最佳消毒濃度。3.1.2.2 取樣計劃。3.1.2.2.1 取樣地點：應選擇產(chǎn)塵量大、工作人員多的房間。3.1.2.2.2 取樣面積：2inch2/每個棉簽。3.1.2.2.3 取樣時間：用規(guī)定濃度的甲酚皂溶液充分擦拭地面，10分鐘后取樣。3.1.2.2.4 取樣部位：地面。3.1.2.2.5 取樣點數(shù)目。30萬級潔凈區(qū)（液體制劑車間）潔凈區(qū)域面積m2取樣點（個）稱量室92配液室302灌封室342洗烘瓶室402男二更92女二更9230萬級潔凈區(qū)（固體制劑車間）潔凈區(qū)域面積m2取樣點（個）粉碎室182稱量室92制粒室362整?；旌鲜?72壓片室172膠囊填充室332包衣室102男二更92女二更923.1.2.2.6 取樣點布置 如圖示： 在地面上均勻布置。3.1.2.2.7 取樣次數(shù)：每點一次。3.1.2.2.8 取樣器具應無菌。取樣操作遵循無菌操作法。3.1.2.3 檢驗方法。用滅菌生理鹽水潤濕的滅菌脫脂棉按規(guī)定取樣面積充分擦拭取樣部位，然后放入裝有生理鹽水的滅菌容器內(nèi)，充分振搖。按照中國藥典（2000年版二部）附錄J微生物限度檢查法項下平皿菌落計數(shù)法檢測浸出液的含菌量即可。并做空白試驗。檢驗結(jié)果以算術(shù)平均值計算。并跟蹤檢驗三個批次。檢驗結(jié)果與可接受限度標準相比較，消毒效果達到預期標準并且消毒濃度最低的濃度即為所要選的最佳消毒濃度。結(jié)果計算： C1+C2 A室=- 2 A室：為室的平均菌落數(shù)。 C1：為第一取樣點取樣菌落數(shù)。 C2：為第二取樣點取樣菌落數(shù)。3.1.2.4 確定可接受限度標準。 項目可接受標準菌落數(shù)10CFU/inch23.1.2.5 消毒效果及周期評價。3.1.3 新潔爾滅消毒劑消毒滅菌法。3.1.3.1 原理。新潔爾滅為陽離子型表面活性劑，能吸附于細胞表面，改變細胞壁的通透性，從而呈現(xiàn)出強大的殺菌作用。其殺菌作用與濃度有著直接的關(guān)系。所以通過對新潔爾滅消毒液濃度的確認并與規(guī)定的可接受限度標準相比較，若在可接受限度標準范圍之內(nèi)，則可判定該消毒方法的有效性及穩(wěn)定性。具體方法為：在潔凈區(qū)內(nèi)指定幾個房間，然后設(shè)定3個濃度梯度，分別為0.05%、0.10%、0.15%，按照濃度梯度，配制好相應濃度的新潔爾滅溶液。然后用不同濃度的新潔爾滅溶液擦拭潔凈區(qū)墻壁（指定位置），并在擦拭后的對應位置上分別取樣，做潔凈區(qū)房間表面污染試驗。根據(jù)試驗結(jié)果以及潔凈區(qū)最大允許微生物濃度限度標準來確認最佳消毒濃度。3.1.3.2 取樣計劃。3.1.3.2.1 取樣地點：應選擇產(chǎn)塵量大、工作人員多的房間。3.1.3.2.2 取樣面積：2inch2/每個棉簽。3.1.3.2.3 取樣時間：用規(guī)定濃度的新潔爾滅溶液充分擦拭墻壁，10分鐘后取樣。3.1.3.2.4 取樣部位：墻壁。3.1.3.2.5 取樣點數(shù)目。30萬級潔凈區(qū)（液體制劑車間）潔凈區(qū)域面積m2取樣點（個）稱量室92配液室302灌封室342洗烘瓶室402男二更92女二更9230萬級潔凈區(qū)（固體制劑車間）潔凈區(qū)域面積m2取樣點（個）粉碎室182稱量室92制粒室362整粒混合室272壓片室172膠囊填充室332包衣室102男二更92女二更923.1.3.2.6 取樣點布置 如圖示： 在墻壁的水平面上均勻布置。3.1.3.2.7 取樣次數(shù)：每點一次。3.1.3.2.8 取樣器具應無菌。取樣操作遵循無菌操作法。3.1.3.3 檢驗方法。用滅菌生理鹽水潤濕的滅菌脫脂棉按規(guī)定取樣面積充分擦拭取樣部位，然后放入裝有生理鹽水的滅菌容器內(nèi)，充分振搖。按照中國藥典（2000年版二部）附錄J微生物限度檢查法項下平皿菌落計數(shù)法檢測浸出液的含菌量即可。并做空白試驗。檢驗結(jié)果以算術(shù)平均值計算。并跟蹤檢驗三個批次。檢驗結(jié)果與可接受限度標準相比較，消毒效果達到預期標準并且消毒濃度最低的濃度即為所要選的最佳消毒濃度。結(jié)果計算： C1+C2 A室=- 2 A室：為室的平均菌落數(shù)。 C1：為第一取樣點取樣菌落數(shù)。 C2：為第二取樣點取樣菌落數(shù)。3.1.3.4 確定可接受限度標準： 項目可接受標準總菌落數(shù)30CUF/inch23.1.3.5 消毒效果評價。3.2 消毒劑消毒頻次、消毒劑更換頻次的驗證。3.2.1 消毒劑消毒頻次的驗證。3.2.1.1 原理。不同級別的潔凈區(qū)有不同等級的潔凈度要求。潔凈度受到人員、內(nèi)環(huán)境、設(shè)備等諸多因素的影響。潔凈區(qū)工作人員每日雖按SOP對潔凈區(qū)環(huán)境進行全面清潔，但卻不能保證把進入室內(nèi)人員或物品散發(fā)的細菌全部殺死或清除出潔凈區(qū)。所以潔凈區(qū)應定期進行消毒。通過對潔凈區(qū)沉降菌及表面污染細菌這兩項指標的跟蹤檢測（一天一次，連續(xù)十天），以出現(xiàn)不符合可接受限度標準（一個指標不符合即為不符合）的那一天（dx）為界，統(tǒng)計dx以前的天數(shù)，此天數(shù)即為消毒劑消毒頻次確定的理論依據(jù)，從而判定該消毒頻次確定的有效性及合理性。3.2.1.2 沉降菌檢測取樣計劃。3.2.1.2.1 取樣地點：應選擇產(chǎn)塵量大、工作人員多的房間。3.2.1.2.2 取樣時間：潔凈區(qū)凈化空調(diào)系統(tǒng)正常運行30分鐘后取樣。3.2.1.2.3 取樣點數(shù)目。30萬級潔凈區(qū)（液體制劑車間）潔凈區(qū)域面積m2取樣點（個）稱量室92配液室302灌封室342洗烘瓶室402男二更92女二更9230萬級潔凈區(qū)（固體制劑車間）潔凈區(qū)域面積m2取樣點（個）粉碎室182稱量室92濕混制粒室362整?；旌鲜?72壓片室172膠囊填充室332包衣室102男二更92女二更923.2.1.2.4 取樣點布置 如圖示： 3.2.1.2.4.1 取樣點在離地0.8米高的水平面上均勻布置。3.2.1.2.4.2 布置取樣點時，應避開回風口。3.2.1.2.5 取樣器具應無菌。取樣操作遵循無菌操作法。3.2.1.3 沉降菌檢測方法。3.2.1.3.1 將已準備好的肉湯瓊脂培養(yǎng)皿置于取樣點，打開培養(yǎng)皿蓋，使培養(yǎng)基表面暴露0.5h，再將培養(yǎng)皿蓋蓋上。3.2.1.3.2 全部取樣結(jié)束后，將培養(yǎng)皿倒置于30-35恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48小時。3.2.1.3.3 按中國藥典（2000年版二部）附錄J微生物限度檢查法項下平皿菌落計數(shù)法計數(shù)。3.2.1.3.4 結(jié)果計算： 1號培養(yǎng)皿菌落數(shù)+2號培養(yǎng)皿菌落數(shù) A= 2 其中 A為各個室的平均菌落數(shù)。3.2.1.4 表面細菌檢測取樣計劃:3.2.1.4.1 取樣地點：應選擇產(chǎn)塵量大、工作人員多的房間。見4.5項下所列表格。3.2.1.4.2 取樣部位：墻壁。3.2.1.4.3 取樣面積：2inch2/每個棉簽。3.2.1.4.4 取樣時間：潔凈區(qū)凈化空調(diào)系統(tǒng)正常運行30分鐘后取樣。3.2.1.4.5 取樣點數(shù)目。30萬級潔凈區(qū)（液體制劑車間）潔凈區(qū)域面積m2取樣點（個）稱量室92配液室302灌封室342洗烘瓶室402男二更92女二更9230萬級潔凈區(qū)（固體制劑車間）潔凈區(qū)域面積m2取樣點（個）粉碎室182稱量室92制粒室362整?；旌鲜?72壓片室172膠囊填充室332包衣室102男二更92女二更923.2.1.4.6 取樣點布置 如圖示： 在墻壁的水平面上均勻布置。3.2.1.4.7 取樣次數(shù)：每點一次。3.2.1.4.8 取樣器具應無菌。取樣操作遵循無菌操作法。3.2.1.5 表面細菌的檢測方法。用滅菌生理鹽水潤濕的滅菌脫脂棉按規(guī)定取樣面積充分擦拭取樣部位，然后放入裝有生理鹽水的滅菌容器內(nèi)，充分振搖。按照中國藥典（2000年版二部）附錄J微生物限度檢查法項下平皿菌落計數(shù)法檢測浸出液的含菌量即可。檢驗結(jié)果以算術(shù)平均值計算。結(jié)果計算： C1+C2 A室=- 2 A室：為室的平均菌落數(shù)。 C1：為第一取樣點取樣菌落數(shù)。 C2：為第二取樣點取樣菌落數(shù)。3.2.1.6 確定可接受限度標準:項目可接受標準沉降菌15CFU/皿表面細菌30CFU/inch23.2.1.7 消毒頻次 dx值確定：根據(jù)檢測結(jié)果，確定消毒劑消毒頻次 dx值。3.2.1.8 消毒頻次評價報告。3.2.2 消毒劑更換頻次的驗證。3.2.2.1 原理。細菌與其它生物一樣，存在著遺傳與變異。細菌的變異按其本質(zhì)原因可分為遺傳型變異與非遺傳型變異兩大類型。其中與消毒滅菌有很大關(guān)系的就是耐藥性變異。耐藥性變異是指細菌對許多藥物（包括消毒劑）是敏感的，但在使用一段時間后，細菌會對該種藥物（包括消毒劑）產(chǎn)生抵抗力，從而影響到療效或者消毒滅菌效果。所以潔凈區(qū)使用的消毒劑品種應定期更換，以防耐藥菌株產(chǎn)生。通過使用一種消毒劑（甲酚皂或新潔爾滅溶液）按照SOP要求對潔凈區(qū)環(huán)境定期消毒（消毒頻次已驗證過），每消毒一次，對潔凈區(qū)環(huán)境沉降菌與表面細菌這兩項指標就取樣檢測一次。連續(xù)消毒檢測幾個周期（以周為單位，共設(shè)定12個時間周期，分別為1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12），然后將檢測結(jié)果與潔凈區(qū)沉降菌、可接受限度標準相比較，以出現(xiàn)不符合可接受限度標準（一項指標不合格即為不合格）的那一個消毒周期（Wx）為界，統(tǒng)計Wx以前的消毒周期，此周期即為消毒劑更換頻次確定的理論依據(jù)，從而判定該消毒劑更換頻次確定的有效性及合理性。3.2.2.2 沉降菌檢測取樣計劃。3.2.2.2.1 取樣地點：應選擇產(chǎn)塵量大、工作人員多的房間。3.2.2.2.2 取樣時間：按清潔SOP對各房間全面消毒后取樣。3.2.2.2.3 取樣點數(shù)目。30萬級潔凈區(qū)（液體制劑車間）潔凈區(qū)域面積m2取樣點（個）稱量室92配液室302灌封室342洗烘瓶室402男二更92女二更9230萬級潔凈區(qū)（固體制劑車間）潔凈區(qū)域面積m2取樣點（個）粉碎室182稱量室92濕混制粒室362干燥整?；旌鲜?72壓片室172膠囊填充室332包衣室102男二更92女二更923.2.2.2.4 取樣點布置 如圖示： 3.2.2.2.4.1 取樣點在離地0.8米高的水平面上均勻布置。3.2.2.2.4.2 布置取樣點時，應避開回風口。3.2.2.2.5 取樣器具應無菌。取樣操作遵循無菌操作法。3.2.2.3 沉降菌檢測方法。3.2.2.3.1 將已準備好的肉湯瓊脂培養(yǎng)皿置于取樣點，打開培養(yǎng)皿蓋，使培養(yǎng)基表面暴露0.5h，再將培養(yǎng)皿蓋蓋上。3.2.2.3.2 全部取樣結(jié)束后，將培養(yǎng)皿倒置于30-35恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48小時。3.2.2.3.3 按中國藥典（2000年版二部）附錄J微生物限度檢查法項下平皿菌落計數(shù)法計數(shù)。3.2.2.3.4 結(jié)果計算： 1號培養(yǎng)皿菌落數(shù)+2號培養(yǎng)皿菌落數(shù) A= 2 其中 A為各個室的平均菌落數(shù)。3.2.2.4 表面細菌檢測取樣計劃:3.2.2.4.1 取樣地點：應選擇產(chǎn)塵量大、工作人員多的房間。見4.5項下所列表格。3.2.2.4.2 取樣部位：墻壁。3.2.2.4.3 取樣面積：2inch2/每個棉簽3.2.2.4.4 取樣時間：按清潔SOP對各房間全面消毒后取樣。3.2.2.4.5 取樣點數(shù)目。30萬級潔凈區(qū)（液體制劑車間）潔凈