HIV實(shí)驗(yàn)室生物安全和質(zhì)量控制.docx

艾滋病實(shí)驗(yàn)室生物安全一、HIV的生物危害第一類(lèi)、第二類(lèi)病原微生物統(tǒng)稱(chēng)為高致病性病原微生物。人類(lèi)免疫缺陷病毒（HIV）屬第二類(lèi)病原微生物，是高致病性病原微生物。HIV相關(guān)檢測(cè)的生物安全級(jí)別HIV抗體檢測(cè)（包括篩查和確證實(shí)驗(yàn)）、抗原檢測(cè)和相關(guān)的免疫學(xué)檢測(cè)應(yīng)在符合級(jí)生物安全實(shí)驗(yàn)室（BSL-2）要求的艾滋病檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室中進(jìn)行。HIV分離培養(yǎng)、濃縮、中和試驗(yàn)、細(xì)胞培養(yǎng)及研究工作及其它需要應(yīng)用活病毒的研究工作，應(yīng)在級(jí)生物安全實(shí)驗(yàn)室（BSL-3）中進(jìn)行。HIV核酸提取和檢測(cè)均應(yīng)在符合級(jí)生物安全實(shí)驗(yàn)室（BSL-2）要求的艾滋病檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室中進(jìn)行。HIV病毒株應(yīng)保存在符合級(jí)生物安全實(shí)驗(yàn)室（BSL-3）要求的艾滋病實(shí)驗(yàn)室；HIV陽(yáng)性樣品，包括全血、血清、血槳和其他組織（液）、核酸提取物應(yīng)保存在符合BSL-2要求的艾滋病實(shí)驗(yàn)室。二、生物安全保證措施1.建立安全制度實(shí)驗(yàn)室的安全工作制度或安全標(biāo)準(zhǔn)操作程序（S-SOP）。意外事故處理預(yù)案，主要是生物安全意外事故。內(nèi)容包括應(yīng)急處理、登記和報(bào)告、調(diào)查和處理。信息安全及保密制度：與HIV/AIDS檢測(cè)相關(guān)的所有資料均應(yīng)嚴(yán)格保密，包括送檢單、檢測(cè)記錄、樣品登記、報(bào)告單及工作人員年度檢測(cè)結(jié)果等，不得對(duì)無(wú)關(guān)人員透露檢測(cè)結(jié)果。培訓(xùn)和管理實(shí)驗(yàn)室應(yīng)進(jìn)行全員安全培訓(xùn)并強(qiáng)化普遍性防護(hù)原則安全意識(shí)，所有的血液、未固定的組織和組織液樣品，均應(yīng)視為有潛在的傳染性，都應(yīng)以安全的方式進(jìn)行操作。所有管理和檢測(cè)人員都應(yīng)接受省級(jí)以上艾滋病檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室主持的安全培訓(xùn)，包括上崗前培訓(xùn)和復(fù)訓(xùn)，并接受管理人員的監(jiān)督。必須對(duì)新上崗人員進(jìn)行安全教育和培訓(xùn)，使他們清楚實(shí)驗(yàn)室工作的潛在危險(xiǎn)，通過(guò)考核等方式確認(rèn)他們具備安全操作的能力后方可單獨(dú)工作。必須對(duì)新調(diào)入人員、外來(lái)合作、進(jìn)修和學(xué)習(xí)的人員進(jìn)行生物安全培訓(xùn)，經(jīng)實(shí)驗(yàn)室主任批準(zhǔn)后，方可進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室。生物安全培訓(xùn)和監(jiān)督應(yīng)有客觀(guān)詳實(shí)的記錄。實(shí)驗(yàn)室主任應(yīng)詳細(xì)了解所有工作人員的教育和培訓(xùn)背景、特長(zhǎng)、性格特點(diǎn)等。要根據(jù)人員特點(diǎn)、工作種類(lèi)、所涉及的生物材料合理安排工作區(qū)域，要定期對(duì)實(shí)驗(yàn)室環(huán)境進(jìn)行安全檢查。2.個(gè)人保健和防護(hù)2.1遇有手部皮膚有開(kāi)放性傷口及其他不適于工作的情況，應(yīng)暫停工作。2.2皮膚的微小傷口、擦傷等，應(yīng)用防水敷料嚴(yán)密覆蓋。2.3應(yīng)為每一名在艾滋病實(shí)驗(yàn)室工作的人員提供充足的防護(hù)服、一次性乳膠手套、口罩、帽子和覆蓋足背的工作鞋。2.4應(yīng)將清潔的防護(hù)服和其他個(gè)人防護(hù)用品置于實(shí)驗(yàn)室清潔區(qū)內(nèi)的專(zhuān)用處存放。2.5實(shí)驗(yàn)室應(yīng)設(shè)置應(yīng)急沖洗眼睛裝置。2.6工作人員上崗前必須進(jìn)行HIV抗體和乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒等肝炎病毒標(biāo)志物檢測(cè)，應(yīng)接種乙肝疫苗。應(yīng)每年對(duì)工作人員采血檢測(cè)HIV抗體，血清應(yīng)長(zhǎng)期保留。2.7進(jìn)實(shí)驗(yàn)室工作前要摘除首飾，修剪長(zhǎng)的帶刺的指甲，以免刺破手套，嚴(yán)禁在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)進(jìn)食、飲水、吸煙和化妝。2.8實(shí)驗(yàn)操作時(shí)應(yīng)穿合適防護(hù)服（白大衣、隔離衣或一次性工作服）、戴手套和口罩、穿實(shí)驗(yàn)室專(zhuān)用的工作鞋。如接觸物的傳染性大、應(yīng)戴雙層手套；含有HIV的液體（樣品或病毒培養(yǎng)液）有可能?chē)姙R時(shí)，應(yīng)戴防護(hù)眼鏡、穿防水（如塑料）圍裙。工作完畢，先脫去手套，再脫去防護(hù)服，用肥皂和流動(dòng)水洗手。穿過(guò)的污染的防護(hù)服應(yīng)及時(shí)放入污物袋中，消毒后方可洗滌或廢棄。2.9操作過(guò)程中，如發(fā)現(xiàn)防護(hù)服被污染應(yīng)立即更換，如手套破損，應(yīng)立即丟棄、洗手并換上新手套。不能用戴手套的手觸摸暴露的皮膚、口唇、眼睛、耳朵和頭發(fā)等。不要將手套清洗或消毒后再次使用，因?yàn)槭褂帽砻婊钚詣┣逑纯墒故痔讓?duì)水的通透性增加，消毒劑可以引起手套的破損。2.10禁止使用口腔吸液管，必須使用移液器來(lái)操作實(shí)驗(yàn)的所有液體。3.試劑及樣品的管理應(yīng)嚴(yán)格按要求妥善保存血清及其它體液樣品，應(yīng)按有關(guān)規(guī)定設(shè)立專(zhuān)門(mén)儲(chǔ)存陽(yáng)性血清、質(zhì)控品的血清庫(kù)和/或毒種庫(kù)，應(yīng)上鎖并指定專(zhuān)人管理。對(duì)存放試劑和有毒有害物質(zhì)的區(qū)域應(yīng)進(jìn)行監(jiān)控，冷藏柜、冰箱、培養(yǎng)箱和存放生物試劑、化學(xué)危險(xiǎn)品、放射性物質(zhì)的容器，置于工作人員視線(xiàn)之外的地點(diǎn)時(shí)應(yīng)上鎖。4.實(shí)驗(yàn)室的清潔和消毒工作完畢應(yīng)對(duì)工作臺(tái)面消毒，推薦用0.10.2%的次氯酸溶液消毒；用消毒液清洗后要干燥20min以上；操作過(guò)程中如有樣品、檢測(cè)試劑外濺，應(yīng)及時(shí)消毒。如有大量高濃度的傳染性液體濺出，在清潔之前應(yīng)先用1%的次氯酸鈉溶液浸泡，然后戴上手套擦凈。5樣品的采集和處理抽取靜脈血液（或以其它方式收集血液樣品）時(shí)要注意安全，應(yīng)使用一次性注射器，戴手套，謹(jǐn)慎操作，防止血液污染雙手。應(yīng)小心防止被針頭和其它利器刺傷。如用濾紙采樣，應(yīng)按常規(guī)將手指或耳垂局部消毒。刺破皮膚后，迅速把濾紙沾上，切勿讓血液滴落在其它物體表面造成污染。采血后待血樣干燥后再包裝送檢。離心樣品時(shí)要使用密閉的罐和密封頭，防止離心時(shí)液體溢出或在超/高速離心時(shí)形成氣溶膠。6樣品的帶入、帶出和操作不得將非實(shí)驗(yàn)室物品帶入實(shí)驗(yàn)室。包裝有測(cè)試樣品的包裹應(yīng)在實(shí)驗(yàn)室的安全柜內(nèi)打開(kāi)，不能在收發(fā)地點(diǎn)或倉(cāng)庫(kù)等地點(diǎn)打開(kāi)，同時(shí)，打開(kāi)包裹的人員應(yīng)接受過(guò)處理感染源方面的訓(xùn)練并穿戴合適的防護(hù)服；實(shí)驗(yàn)室應(yīng)具有處理感染源的設(shè)備并準(zhǔn)備好可消毒的容器。打開(kāi)樣品容器時(shí)要小心，防止內(nèi)容物潑濺。要核對(duì)樣品與送檢單，檢查樣品管有無(wú)破損和溢漏。如發(fā)現(xiàn)溢漏應(yīng)立即將尚存留的樣品移出，對(duì)樣品管和盛器進(jìn)行消毒，同時(shí)要按照程序報(bào)告有關(guān)負(fù)責(zé)人。要檢查樣品的狀況，記錄有無(wú)嚴(yán)重溶血、微生物污染、血脂過(guò)多以及黃疸等情況。如污染過(guò)重或者認(rèn)為不能接受，則應(yīng)將樣品用安全方式廢棄，同時(shí)將情況通知送樣人。常規(guī)處理血液、體液樣品可在工作臺(tái)上進(jìn)行，如樣品有可能濺出，則應(yīng)戴手套、口罩和防護(hù)眼鏡，在生物安全柜中操作。將樣品轉(zhuǎn)送到其他實(shí)驗(yàn)室時(shí)，應(yīng)防止對(duì)工作人員、患者或環(huán)境造成污染。護(hù)送樣品的人應(yīng)清楚接收地點(diǎn)和接收人，實(shí)驗(yàn)室負(fù)責(zé)人或其指定的人員應(yīng)及時(shí)確認(rèn)樣品已送達(dá)指定的實(shí)驗(yàn)室，被轉(zhuǎn)入安全位置并得到妥善處理。被污染或可能污染的材料在帶出實(shí)驗(yàn)室前應(yīng)進(jìn)行消毒。用后的包裹應(yīng)進(jìn)行消毒。用于國(guó)際空運(yùn)的樣品要按照國(guó)際空運(yùn)協(xié)會(huì)（IATA）的規(guī)則進(jìn)行包裝和標(biāo)記，并提交相應(yīng)的資料。7使用利器注意事項(xiàng)7.1應(yīng)盡量避免在實(shí)驗(yàn)室使用針頭、刀片、玻璃器皿等利器，以防刺傷。如果必須使用，在處理或清洗時(shí)應(yīng)采取措施防止刺傷或劃傷，并應(yīng)對(duì)用過(guò)的物品進(jìn)行消毒。7.2應(yīng)使用安全針具采血，如蝶形真空針，自毀性針具等，以降低直接接觸血液和刺傷的危險(xiǎn)性。7.3應(yīng)將用過(guò)的銳器直接放入耐穿、防滲漏的利器盒，用過(guò)的針頭應(yīng)直接放入堅(jiān)固的容器內(nèi)，消毒后廢棄7.4禁止將使用后的一次性針頭重新套上針頭套。禁止用手直接接觸使用過(guò)的針頭、刀片等利器。污染物處理7.5艾滋病實(shí)驗(yàn)室產(chǎn)生的所有廢棄物，包括不再需要的樣品、培養(yǎng)物和其它物品，均應(yīng)視為感染性廢棄物，應(yīng)置于專(zhuān)用的密封防漏容器中，安全運(yùn)至消毒室，經(jīng)高壓消毒后再進(jìn)行處理或廢棄。8.艾滋病檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室常用的消毒方法物理消毒方法高壓蒸汽消毒，121，保持1520min;干燥空氣烘箱消毒（干烤消毒）140，保持23h?；瘜W(xué)消毒方法含氯消毒劑（次氯酸鈉，含有效氯20005000mg/L）75%乙醇2%戊二醛艾滋病檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室物品常用的消毒方法廢棄物缸：5000mg/L次氯酸鈉。生物安全柜工作臺(tái)面和儀器表面：75%乙醇。溢出物：5000mg/L次氯酸鈉。污染的臺(tái)面和器具：2000mg/L次氯酸鈉,也可以用過(guò)氧化氫或過(guò)氧乙酸。器械可用2%戊二醛消毒。生物安全柜9.生物安全柜處理危險(xiǎn)性微生物時(shí)所用的箱型空氣凈化安全裝置。I類(lèi)生物安全柜至少裝置一個(gè)高效空氣過(guò)濾器對(duì)排氣進(jìn)行凈化，工作時(shí)柜正面玻璃推拉窗打開(kāi)一半，上部為觀(guān)察窗，下部為操作窗口。外部空氣由操作窗吸進(jìn)，而不可能由操作窗口逸出。工作狀態(tài)時(shí)保證工作人員不受侵害，但不保證實(shí)驗(yàn)對(duì)象不受污染。類(lèi)生物安全柜至少裝置一個(gè)高效空氣過(guò)濾器對(duì)排氣進(jìn)行凈化，工作空間為經(jīng)高效過(guò)濾器凈化的無(wú)渦流的單向流空氣。工作時(shí)柜正面玻璃推拉窗打開(kāi)一半，上部為觀(guān)察窗，下部為操作窗口。外部空氣由操作窗吸進(jìn)，而不可能由操作窗口逸出。工作狀態(tài)下遵守操作規(guī)程時(shí)既保證工作人員不受侵害，又保證實(shí)驗(yàn)對(duì)象不受污染。CLASSII級(jí)生物安全柜CLASSII級(jí)生物安全柜根據(jù)結(jié)構(gòu)以及氣流分配不同主要是外排氣流不同分為：A型:（30%排在室內(nèi)）B型:B1（70%接管道外排）；B2（100%接管道外排）；B3（30%接管道外排）CLASSIIA生物安全柜生物安全柜的使用位置操作人員。10.意外事故處理發(fā)生意外事故時(shí)，應(yīng)針對(duì)事故的類(lèi)型立即進(jìn)行緊急處理，主要包括：皮膚針刺傷或切割傷，應(yīng)立即用肥皂和大量流水沖洗，盡可能擠出損傷處的血液，用70%乙醇或其它消毒劑消毒傷口。皮膚污染：用水和肥皂沖洗污染部位，并用適當(dāng)?shù)南緞┙?，?0%乙醇或其它皮膚消毒劑。粘膜污染：用大量流水或生理鹽水沖洗污染部位。衣物污染：盡快脫掉污染的衣物，進(jìn)行消毒處理。污染物潑濺：小范圍污染物潑濺，應(yīng)立即進(jìn)行消毒處理和清洗。發(fā)生大范圍污染物潑濺事故時(shí)，應(yīng)立即通知實(shí)驗(yàn)室主管領(lǐng)導(dǎo)和安全負(fù)責(zé)人到達(dá)事故現(xiàn)場(chǎng)，查清情況，確定消毒的程序。發(fā)生空氣污染時(shí)，可采用低溫蒸汽甲醛氣體對(duì)空氣進(jìn)行消毒，但甲醛有致癌作用，不宜用于生物安全柜和實(shí)驗(yàn)室的常規(guī)空氣消毒。如果發(fā)生重大潑濺事故，應(yīng)采取以下措施進(jìn)行：從污染處疏散人員，但要防止污染擴(kuò)散；控制污染擴(kuò)散，鎖門(mén)并禁止人員進(jìn)入；通知實(shí)驗(yàn)室主管領(lǐng)導(dǎo)、安全負(fù)責(zé)人等，查清情況，確定消毒處理的程序；必要時(shí)可進(jìn)行生物安全柜和/或?qū)嶒?yàn)室的低溫蒸汽甲醛氣體消毒，使用這種方法生物安全柜和/或?qū)嶒?yàn)室必須密閉，人員必須離開(kāi)。具體操作可按說(shuō)明書(shū)執(zhí)行。溢漏處可用經(jīng)消毒劑浸泡的吸水物質(zhì)覆蓋；消毒劑作用1015分鐘后，移走吸水性物質(zhì)，用消毒劑沖洗，用水清洗.11.意外及事故的登記、報(bào)告和檢測(cè)對(duì)重大意外和事故必須進(jìn)行登記，對(duì)職業(yè)暴露事故應(yīng)填寫(xiě)艾滋病職業(yè)暴露人員個(gè)案登記表。對(duì)重大意外和事故必須進(jìn)行報(bào)告和檢測(cè)步驟1：確定暴露級(jí)別步驟2：確定HIV傳染源頭嚴(yán)重程度哪些情況暴露不會(huì)導(dǎo)致HIV感染由于職業(yè)暴露而導(dǎo)致的HIV感染的概率是很小的，并不是每一次職業(yè)暴露都會(huì)導(dǎo)致HIV感染的發(fā)生，許多情況下可以不必過(guò)度緊張擔(dān)心，如：（1）經(jīng)證實(shí)接觸的可疑血液或體液為HIV陰性；（2）完整無(wú)損皮膚或無(wú)新鮮流血的陳舊性傷口等接觸HIV陽(yáng)性血液、感染性體液；（3）完整無(wú)破損皮膚或無(wú)新鮮流血的陳舊性傷口等接觸HIV陽(yáng)性血液、感染性體液且及時(shí)沖洗消毒后；（4）完整粘膜或皮膚粘膜結(jié)合部短時(shí)接觸少量、低滴度（如HIV血漿濃度低于1500拷貝/毫升）HIV陽(yáng)性血液或感染性體液；感染風(fēng)險(xiǎn)應(yīng)將職業(yè)暴露補(bǔ)救防護(hù)藥品放在醫(yī)務(wù)人員24小時(shí)都能拿取的地方。保證有足夠的醫(yī)療防護(hù)用品貯存，并能隨時(shí)取用。要求醫(yī)護(hù)人員在發(fā)生職業(yè)暴露的第一時(shí)間按照處置流程進(jìn)行防護(hù)，并及時(shí)報(bào)告感染辦進(jìn)行職業(yè)暴露備案登記存檔管理。規(guī)范建立健康檔案，定期免疫接種。加強(qiáng)過(guò)程控制中相關(guān)細(xì)節(jié)的管理改善洗手條件：配備感應(yīng)或腳踏式洗手裝置，以洗手液替代肥皂。洗手標(biāo)準(zhǔn)化：將洗手的步驟、時(shí)間以圖示方式張貼于洗手處。醫(yī)療廢物嚴(yán)格按分類(lèi)處理，明顯標(biāo)識(shí)，雙層包裝，防滲漏，防遺撒。銳器置入銳器盒內(nèi)。制定減輕職業(yè)壓力的策略新職員安全操作培訓(xùn)建立暴露后預(yù)防和普遍性應(yīng)急預(yù)防方案案例提示在處理一次性醫(yī)療用品時(shí)，要將針頭、刀片等銳器與其它物品分開(kāi)存放和處理，銳器等要裝在耐刺的朔料桶中，以免發(fā)生被混在污物中的銳器扎傷等事故。暴露級(jí)別為2級(jí)，暴露源級(jí)別為重度類(lèi)型；3、在發(fā)生職業(yè)暴露后馬上進(jìn)行局部緊急處理是對(duì)的；4、發(fā)生職業(yè)暴露后，最好在4小時(shí)內(nèi)服藥，即使超過(guò)了24小時(shí)仍然要服藥。案例提示1、在臨床工作中，尤其在為艾滋病人的醫(yī)療操作中，一要注意戴口罩，二要戴防護(hù)眼鏡。2、這屬于粘膜的暴露，不要用眼藥水滴眼，否則容易損傷粘膜，增加感染的機(jī)會(huì)。3、在暴露源不明時(shí)，先采取必要的預(yù)防措施，待暴露源明確后，要根據(jù)暴露級(jí)別和暴露源類(lèi)型重新調(diào)整用藥方案。三、實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制室內(nèi)質(zhì)量控制試劑盒內(nèi)部對(duì)照：陽(yáng)性、陰性對(duì)照室內(nèi)質(zhì)控品：外部質(zhì)控品。