流式細(xì)胞周期結(jié)果圖解讀.docx

流式檢測細(xì)胞周期操作步驟1. 細(xì)胞培養(yǎng)：取對數(shù)生長期的細(xì)胞，按1106cells/ mL以1mL接種24孔板或2mL接種于6孔板內(nèi)，進(jìn)行所需的處理（比如加入藥物），特定時間后終止培養(yǎng)，進(jìn)行下一步的實(shí)驗(yàn)。2. 細(xì)胞固定：800rpm離心5min，收集細(xì)胞沉淀，棄上清，用預(yù)冷PBS洗滌兩次，加入預(yù)冷75%乙醇，于4固定4h以上。3. 細(xì)胞染色：1500rpm離心5min，棄上清，以3mL的PBS洗滌一次，加入400uL溴化乙錠（PI，50ug/mL），100ul RNase A（100ug/mL ），4避光孵育30min。4. 流式分析：以標(biāo)準(zhǔn)程序用流式細(xì)胞儀檢測，一般計(jì)數(shù)23萬個細(xì)胞，結(jié)果用細(xì)胞周期擬和軟件ModFit分析。注：上機(jī)前要以50um尼龍網(wǎng)膜或35um細(xì)胞過濾器過濾細(xì)胞！因?yàn)镻I具有很強(qiáng)的粘附性，容易使細(xì)胞聚團(tuán)！流式細(xì)胞周期結(jié)果圖解讀 1、縱坐標(biāo)Cell Number：即計(jì)數(shù)的有效細(xì)胞數(shù)；2、橫坐標(biāo)DNA Content：即DNA含量；3、G1、G2、S三期在圖中已經(jīng)標(biāo)示；4、右側(cè)數(shù)字含義：Dip G1-53.84% at 55.56，即G1期DNA含量平均值為55.56；53.84%即G1期細(xì)胞數(shù)占總數(shù)的53.84%；Dip G2-5.64% at 107.72，即G2期DNA含量平均值為107.72，5.64%即G2期細(xì)胞數(shù)占總數(shù)的5.64%；以此類推 流式細(xì)胞周期結(jié)果圖的意義，主要從細(xì)胞周期的角度看各參數(shù)的意義：1、細(xì)胞周期指由細(xì)胞分裂結(jié)束到下一次細(xì)胞分裂結(jié)束所經(jīng)歷的過程，所需的時間叫細(xì)胞周期時間。1、細(xì)胞周期可分為四個階段： G1期(gap1)，指從有絲分裂完成到期DNA復(fù)制之前的間隙時間； S期(synthesis phase)，指DNA復(fù)制的時期； G2期(gap2)，指DNA復(fù)制完成到有絲分裂開始之前的一段時間； M期又稱D期(mitosis or division)，細(xì)胞分裂開始到結(jié)束。2、從增殖的角度來看，可將高等動物的細(xì)胞分為三類：連續(xù)分裂細(xì)胞，在細(xì)胞周期中連續(xù)運(yùn)轉(zhuǎn)因而又稱為周期細(xì)胞，如表皮生發(fā)層細(xì)胞、部分骨髓細(xì)胞。休眠細(xì)胞暫不分裂，但在適當(dāng)?shù)拇碳は驴芍匦逻M(jìn)入細(xì)胞周期，稱G0期細(xì)胞，如淋巴細(xì)胞、肝、腎細(xì)胞等。不分裂細(xì)胞，指不可逆地脫離細(xì)胞周期，不再分裂的細(xì)胞，又稱終端細(xì)胞，如神經(jīng)、肌肉、多形核細(xì)胞等等。細(xì)胞周期的時間長短與物種的細(xì)胞類型有關(guān)，如：小鼠十二指腸上皮細(xì)胞的周期為10小時，人類胃上皮細(xì)胞24小時，骨髓細(xì)胞18小時，培養(yǎng)的人成纖維細(xì)胞18小時，CHO細(xì)胞14小時，HeLa細(xì)胞21小時。不同類型細(xì)胞的G1長短不同，是造成細(xì)胞周期差異的主要原因。3、流式細(xì)胞結(jié)果圖各參數(shù)的意義：常用的流式細(xì)胞術(shù)分析細(xì)胞周期的方法是依據(jù)細(xì)胞DNA含量（橫坐標(biāo)）來分析的：G1期：DNA復(fù)制還沒開始，也是DNA含量最少的，即流式檢測結(jié)果圖的第一個峰；S期：DNA開始復(fù)制，到完成復(fù)制，是一個一倍DNA到二倍DNA的過程，在流式結(jié)果圖中顯示期跨度特別大（第二個不高但很寬的峰）；G2期：DNA復(fù)制完成至分裂的一段時間，此時細(xì)胞內(nèi)含二倍DNA，在流式結(jié)果圖中的第