儲炬---氮源在工業(yè)發(fā)酵中的重要調(diào)控作用

儲 炬華東理工大學(xué)國家生化工程技術(shù)研究中心(上海）2016.4.17， 湖北宜昌,氮源在工業(yè)發(fā)酵中的重要調(diào)控作用,2016年工業(yè)生物過程優(yōu)化與控制研討會,Outline,工業(yè)發(fā)酵的重要性N源在工業(yè)發(fā)酵中的調(diào)控作用基于碳氮磷利用速率動態(tài)調(diào)控的紅霉素基因工程菌發(fā)酵過程優(yōu)化基于N源調(diào)控的其他發(fā)酵產(chǎn)品案例用于考察N源的專用設(shè)備及多尺度參數(shù)分析結(jié)論與展望,一、工業(yè)發(fā)酵在國民經(jīng)濟(jì)中的重要地位,工業(yè)生物技術(shù)在國民經(jīng)濟(jì)發(fā)展中的作用,發(fā)酵工程,醫(yī)藥、輕工食品、農(nóng)業(yè)、環(huán)保、能源、,社會可持續(xù)發(fā)展生物技術(shù)發(fā)展,需求,醫(yī)藥、食品領(lǐng)域的重要工作內(nèi)容和關(guān)鍵技術(shù),新型食品添加劑、防腐劑、功能食品,食品,微生物藥物,新藥、抗體疫苗、酶,生物能源,纖維素乙醇、生物柴油,環(huán)境保護(hù),生物治理、生物預(yù)報(bào),農(nóng)業(yè),農(nóng)產(chǎn)品深加工、生物農(nóng)藥與肥料,數(shù)千年歷史技術(shù)持續(xù)發(fā)展,工業(yè)生物技術(shù)基礎(chǔ) 社會經(jīng)濟(jì)發(fā)展必須,動物細(xì)胞大規(guī)模培養(yǎng),抗生素、維生素、基因產(chǎn)品,生物基化學(xué)品,可降解塑料、生物乙烯、1、3丙二醇,以多參數(shù)檢測相關(guān)性分析為基礎(chǔ)的生物過程控制優(yōu)化理念,二 、N源在工業(yè)發(fā)酵中的調(diào)控作用,氮是活細(xì)胞生存所必須的營養(yǎng)大分子， 氮的吸收是微生物代謝的關(guān)鍵步驟。為了滿足生物對氮的需求，即使在氮限制的情況下，仍能確保充足的氮供應(yīng)，因?yàn)槲⑸镆呀?jīng)進(jìn)化了針對不同氮源復(fù)雜的攝取和吸收機(jī)理。,培養(yǎng)基成分,培養(yǎng)基成分,水,培養(yǎng)基成分氮源,N源主要用于構(gòu)建菌體細(xì)胞物質(zhì)（氨基酸、蛋白質(zhì)和核酸等）和含氮代謝物，主要可分為有機(jī)氮源和無機(jī)氮源常用的有機(jī)氮源有花生餅粉、黃豆餅粉、棉籽餅粉、玉米漿、玉米蛋白粉、蛋白胨、酵母粉、酵母膏、魚粉、尿素等 在蛋白酶作用下，水解為氨基酸被吸收分解代謝 含有豐富的蛋白質(zhì)、多肽和游離氨基酸外，還含有少量糖類、脂肪、無機(jī)鹽、維生素及某些生長因素，因此微生物在此環(huán)境下能夠生長旺盛，菌濃增長迅速,源在工業(yè)發(fā)酵調(diào)控中的作用,促進(jìn)生長，調(diào)節(jié)初級代謝及次級代謝的通量控制合適水平，啟動次級代謝產(chǎn)物形成控制生長速率，影響菌型形成，從而影響發(fā)酵液流變特性影響供氧水平，增加功率消耗,氮源在發(fā)酵過程中的作用,菌體生長,產(chǎn)物代謝產(chǎn)物、生物轉(zhuǎn)化、酶、生物量,氮源,碳源：CO2,無機(jī)氮源：硫酸銨、硝酸銨、氨水、,有機(jī)碳源：玉米漿、黃豆餅粉、尿素、酵母粉、,促進(jìn)生長，調(diào)節(jié)初級代謝及次級代謝的通量,N源的選擇與篩選,不同菌種對不同N源的利用度、利用速率不同黃豆餅粉：紅霉素 酵母粉： 阿維菌素、肌苷/鳥苷、基因工程菌魚粉：螺旋霉素 玉米漿：青霉素?zé)o機(jī)氮源與有機(jī)氮源的組合不同有機(jī)氮源的組合、搭配碳、氮源的搭配,在線監(jiān)控考察N源的質(zhì)量、可利用度和替代效果,背景,N源調(diào)控分子機(jī)制的理解，有助于發(fā)酵過程工藝的改進(jìn),Maltose,優(yōu)先利用,受抑制,S.erythraea,Carbon Catabolite Repression(CCR):菌體優(yōu)先利用PTS轉(zhuǎn)運(yùn)的碳源，ABC系統(tǒng)轉(zhuǎn)運(yùn)的碳源利用受抑制,發(fā)酵過程中增加ABC轉(zhuǎn)運(yùn)系統(tǒng)碳源能有效降低發(fā)酵成本。,培養(yǎng)基糖成本不斷上升,背景,N源調(diào)控分子機(jī)制的理解，有助于發(fā)酵過程工藝的改進(jìn),研究發(fā)現(xiàn)，N源全局調(diào)控子GlnR能夠激活A(yù)BC型轉(zhuǎn)運(yùn)基因，促進(jìn)麥芽糖、甘露糖等CCR碳源的利用,降低發(fā)酵成本,Proc Natl Acad Sci, 2015,10.1073; Biochem Biophys Res Commun.2016.02.044,背景,N源調(diào)控分子機(jī)制的理解，有助于發(fā)酵過程工藝的改進(jìn),N源全局調(diào)控子GlnR和P源代謝雙組分系統(tǒng)PhoP存在相互調(diào)控關(guān)系，并使N調(diào)控和P調(diào)控存在交叉。,培養(yǎng)基豆餅粉過多，使發(fā)酵后期N、P源釋放增多，PhoP會促進(jìn)GlnR表達(dá)，抑制紅霉素合成,eryAI,解釋發(fā)酵現(xiàn)象,培養(yǎng)基優(yōu)化,Appl Environ Microbiol, 82(1), 409-420于曉光，儲炬. 磷氮調(diào)控對紅霉素重組工程菌ZL1004發(fā)酵過程的影響,三、基于碳氮磷利用速率動態(tài)調(diào)控的紅霉素基因工程菌發(fā)酵過程優(yōu)化,問題：玉米漿質(zhì)量不穩(wěn)定引起紅霉素產(chǎn)量波動大,1 紅霉素基因工程菌發(fā)酵培養(yǎng)基氮源優(yōu)化與中試放大,解決方案：采用質(zhì)量穩(wěn)定的酵母浸粉和酵母粉作為速效有機(jī) 氮源,黃豆餅粉33g/L、面包酵母浸粉6.0g/L， 發(fā)酵水平比對照提高了6.3%。,黃豆餅粉33g/L、啤酒酵母浸粉6.0g/L， 發(fā)酵水平比對照提高了20.6%。,黃豆餅粉33g/L、酵母粉10g/L， 發(fā)酵水平略高于對照。,面包酵母浸粉啤酒酵母浸粉,對照培養(yǎng)基1培養(yǎng)基2培養(yǎng)基3培養(yǎng)基4培養(yǎng)基5,酵母粉培養(yǎng)基1酵母粉培養(yǎng)基2酵母粉培養(yǎng)基3,不同速效氮源下的淀粉酶和蛋白酶活比較,1 紅霉素基因工程菌發(fā)酵培養(yǎng)基氮源優(yōu)化與中試放大,采用新型速效有機(jī)氮源后，胞外淀粉酶和蛋白酶活力大大提高，表明新型氮源下，菌體利用淀粉和黃豆餅粉的能力增強(qiáng)。,玉米漿面包酵母浸粉啤酒酵母浸粉,玉米漿面包酵母浸粉啤酒酵母浸粉,酵母粉培養(yǎng)基1酵母粉培養(yǎng)基2酵母粉培養(yǎng)基3,酵母粉培養(yǎng)基1酵母粉培養(yǎng)基2酵母粉培養(yǎng)基3,紅霉素效價(jià)提高15.9%,15L罐二級種子比較,50L罐發(fā)酵水平比較,玉米漿種子酵母粉種子,1 紅霉素基因工程菌發(fā)酵培養(yǎng)基氮源優(yōu)化與中試放大,25m3罐發(fā)酵水平比較,酵母粉種子培養(yǎng)基優(yōu)化及25噸罐放大,采用酵母粉后的發(fā)酵水平比對照組提高了21.7%，紅霉素A提高了13.0%。,50L罐發(fā)酵水平比較,1 紅霉素基因工程菌發(fā)酵培養(yǎng)基氮源優(yōu)化與中試放大,酵母粉替代玉米漿對工業(yè)生產(chǎn)菌發(fā)酵的影響,采用酵母粉后的發(fā)酵水平和A組分比對照組提高了分別提高了15.3%和14.4%。,工業(yè)生產(chǎn)菌,采用新型速效有機(jī)氮源替代工業(yè)培養(yǎng)基中的玉米漿成分，并對種子培養(yǎng)基和發(fā)酵培養(yǎng)基進(jìn)行優(yōu)化，成功實(shí)現(xiàn)了25噸罐規(guī)模下紅霉素產(chǎn)量的大幅提升（21.7%）。采用新型氮源速效有機(jī)氮源，實(shí)現(xiàn)了工業(yè)生產(chǎn)菌紅霉素效價(jià)的大幅提升（15.4%）。新型速效氮源解決了玉米漿質(zhì)量不穩(wěn)定引起紅霉素產(chǎn)量波動大的問題,1 小結(jié),問題：發(fā)酵液粘度過高,解決方案：調(diào)節(jié)培養(yǎng)基成份,Kanda M, Yamamoto E, Hayashi A, et al. Scale-up fermentation of echinocandin type antibiotic FR901379. Bioscience and Bioengineering. 2010,109(2): 138-144,采用無機(jī)銨鹽結(jié)合添加營養(yǎng)因子而非傳統(tǒng)有機(jī)氮源已經(jīng)成功地使棘白霉素類抗生素發(fā)酵液粘度降低了50%。,發(fā)酵液中殘留的黃豆餅粉是影響菌體分離提取過程的重要因素,Davies JL, Baganz F, Ison AP, et al. Studies on the interaction of fermentation and microfiltration operations: erythromycin recovery from Saccharopolyspora erythraea fermentation broths. Willey and Sons Inc. 2000,64(4): 429-439,指導(dǎo)思想：分析有機(jī)氮源、無機(jī)氮源對粘度的貢獻(xiàn)， 盡量降低黃豆餅粉的濃度,2.無機(jī)氮磷調(diào)控降低發(fā)酵液粘度和葡萄糖消耗,發(fā)酵液平均粘度降低18.6%。發(fā)酵過程補(bǔ)糖總量降低61.6%。紅霉素A產(chǎn)量為7926U/ml，相當(dāng)于對照（8069U/ml）。,A.氮源與粘度關(guān)系考察及多尺度相關(guān)性分析,硫酸銨敏感參數(shù),培養(yǎng)基設(shè)計(jì)表,銨離子抑制蛋白酶活性，使菌體利用無機(jī)銨而非黃豆餅粉。銨離子的利用導(dǎo)致補(bǔ)糖速率降低。黃豆餅粉中有機(jī)磷的釋放限制了菌體OUR水平。磷限制了銨離子的利用，避免了高濃度銨離子的阻遏作用。,初始培養(yǎng)基高酵母粉培養(yǎng)基高硫酸銨培養(yǎng)基,初始培養(yǎng)基高酵母粉培養(yǎng)基高硫酸銨培養(yǎng)基,初始培養(yǎng)基高酵母粉培養(yǎng)基高硫酸銨培養(yǎng)基,初始培養(yǎng)基高酵母粉培養(yǎng)基高硫酸銨培養(yǎng)基,A.氮源與粘度關(guān)系考察及多參數(shù)相關(guān)性分析,高硫酸銨培養(yǎng)基,Strategy 1,Strategy 2,Strategy 3,添加0.2g/L磷酸二氫鉀,降低豆粉濃度30g/L20g/L,降低硫酸銨8g/L6g/L,降低粘度、降低糖耗,B.氮磷調(diào)節(jié)實(shí)現(xiàn)低粘度低糖耗的紅霉素發(fā)酵新工藝及代謝機(jī)理考察,論文發(fā)表：Chen Y. et al. Bioresource Technology (2013),紅霉素A:策略1提高5.9%，策略2提高10.6%,策略3提高9.6%。策略1、2、3下的葡萄糖消耗速率大幅降低。策略1的粘度略有增加，策略2粘度降低至2084cp，策略3下的粘度為1598cp。,培養(yǎng)基調(diào)整后的紅霉素A、葡萄糖消耗、粘度比較,B.氮磷調(diào)節(jié)實(shí)現(xiàn)低粘度低糖耗的紅霉素發(fā)酵新工藝及代謝機(jī)理考察,添加磷酸鹽后，氨基氮消耗速率增加，減豆粉后氨基氮消耗速率更低，表明磷酸鹽和減豆粉增加了銨離子的消耗。氨基氮與葡萄糖消耗速率間的關(guān)系表明，銨離子降至低水平時(shí)，由銨離子引起的pH降低的效果減弱，同時(shí)較多的黃豆餅粉被利用使pH升高。葡萄糖不是發(fā)酵液粘度高的直接原因。,高硫酸銨培養(yǎng)基策略1策略2策略3,B.氮磷調(diào)節(jié)實(shí)現(xiàn)低粘度低糖耗的紅霉素發(fā)酵新工藝及代謝機(jī)理考察,添加無機(jī)磷后增加了發(fā)酵后期黃豆餅粉的水解速率，特別是銨離子降低到較低水平階段。氨基酸脫氨基后生成紅霉素合成前體，因而氨基酸濃度影響紅霉素的合成。發(fā)酵后期充足的紅霉素前體氨基酸庫是紅霉素產(chǎn)量提高的重要因素,發(fā)酵液中氨基酸濃度表,氨基酸代謝與紅霉素合成,B.氮磷調(diào)節(jié)實(shí)現(xiàn)低粘度低糖耗的紅霉素發(fā)酵新工藝及代謝機(jī)理考察,丙酸濃度的增加可理解為較低補(bǔ)糖速率下正丙醇利用速率增加，正丙醇通過甲基丙二酰-CoA和琥珀酰-CoA生成了琥珀酸或通過甲基檸檬酸途徑生成琥珀酸?？梢赃m當(dāng)控制葡萄糖補(bǔ)加速率來降低乙酸的生成。,發(fā)酵液中有機(jī)酸濃度比較,丙酸、琥珀酸和乙酸的關(guān)系,B.氮磷調(diào)節(jié)實(shí)現(xiàn)低粘度低糖耗的紅霉素發(fā)酵新工藝及代謝機(jī)理考察,綜合調(diào)節(jié)無機(jī)銨鹽、無機(jī)磷、有機(jī)氮源的濃度，成功實(shí)現(xiàn)了降低發(fā)酵液粘度和葡萄糖消耗速率，同時(shí)提升了紅霉素A的水平。,葡萄糖不是紅霉素合成的直接限制因素。葡萄糖補(bǔ)加速率低的原因：銨離子抑制了黃豆餅粉的利用和銨離子消耗伴隨氫離子的生成。磷限制條件下，黃豆餅粉中有機(jī)磷的逐漸釋放使銨離子利用速率較低，避免硫酸銨阻遏作用。,發(fā)酵后期充足的前體氨基酸庫有利于維持較高的紅霉素合成速率。,2 小節(jié),問題：黃豆餅粉中有機(jī)磷的釋放使發(fā)酵后期溶磷較高，引起 粘度高,解決方案：尋找低磷含量有機(jī)氮源，替換高磷含量有機(jī)氮源， 控制發(fā)酵中后期的溶磷水平。 在發(fā)酵初期補(bǔ)加無機(jī)磷，增加發(fā)酵前期的菌體生長,關(guān)于磷酸鹽對紅霉素發(fā)酵的影響的報(bào)道多為化學(xué)合成培養(yǎng)基，且表明較高的無機(jī)磷阻遏紅霉素的合成。,L.M.Reeve, S.Baumberg. Physiological controls of erythromycin production by Saccharopolyspora erythraea are exerted at least in part at the level of transcriptionJ. Biotechnology Letters, 1998, 20(6):585-589.,由于工業(yè)復(fù)合培養(yǎng)基中，復(fù)合有機(jī)氮源中含有一定量的磷，所以很少有人研究有機(jī)氮源磷含量對發(fā)酵過程的影響。,指導(dǎo)思想：保證總氮大體不變的條件下，降低發(fā)酵后期溶 磷的釋放 通過流加無機(jī)磷，增加發(fā)酵初期磷的利用速率,3.不同磷含量氮源組合及無機(jī)磷補(bǔ)加調(diào)控發(fā)酵過程磷水平,玉米蛋白粉的磷含量為黃豆餅粉的53%酵母粉中的磷含量高達(dá)0.87%。有機(jī)氮源較高的磷含量使發(fā)酵后期的溶磷水平較高。,不同氮源的磷含量測定結(jié)果,A 不同氮源的磷含量測定結(jié)果,粘度降低、溶磷降低、效價(jià)相當(dāng)。,采用玉米蛋白粉替代黃豆餅粉,B 降低有機(jī)氮源磷含量控制發(fā)酵后期溶磷水平,培養(yǎng)基調(diào)整后的發(fā)酵過程參數(shù)比較,對照培養(yǎng)基1培養(yǎng)基2,對照培養(yǎng)基1培養(yǎng)基2,對照培養(yǎng)基1培養(yǎng)基2,對照培養(yǎng)基1培養(yǎng)基2,采用玉米蛋白粉替代酵母粉,培養(yǎng)基2紅霉素效價(jià)11513 U/ml紅霉素、A組分為8697U/ml。,培養(yǎng)基調(diào)整后的發(fā)酵過程參數(shù)比較,降低有機(jī)氮源磷含量控制發(fā)酵后期溶磷水平,對照培養(yǎng)基紅霉素效價(jià)10974U/ml，A組分8312U/ml。,培養(yǎng)基1下的紅霉素效價(jià)為9691 U/ml、A組分為7676 U/ml。,無機(jī)磷替代速效氮源酵母粉,6g/L酵母粉時(shí)，流加磷酸鹽紅霉素效價(jià)高達(dá)13273 U/ml，比初始對照提高了20.9%,B. 降低速效氮源酵母粉結(jié)合無機(jī)磷流加,培養(yǎng)基調(diào)整后的發(fā)酵過程參數(shù)比較,采用玉米蛋白粉和黃豆餅粉組合后，粘度峰降低、溶氧增加，轉(zhuǎn)速由630r/min降至498r/min。紅霉素效價(jià)A組分提高9.4%，雜質(zhì)組分降低。降低原因?yàn)閭髻|(zhì)的改善。,C. 低磷含量有機(jī)氮源在生產(chǎn)菌發(fā)酵的應(yīng)用,發(fā)酵液中紅霉素組份濃度比較,采用高、低磷含量氮源組合及流加無機(jī)磷的策略，提升了紅霉素的產(chǎn)量，降低了發(fā)酵液的粘度。,采用高、低磷含量氮源組合降低了生產(chǎn)菌發(fā)酵液的粘度，同時(shí)維持與對照相當(dāng)?shù)募t霉素效價(jià)。,紅霉素產(chǎn)量高達(dá)13273 U/ml，比未補(bǔ)加磷酸鹽時(shí)的效價(jià)提高了20.9%。并在500L規(guī)模罐成功放大。,揭示了無機(jī)磷和有機(jī)氮源中的磷在紅霉素發(fā)酵過程的重要作用。,3. 小節(jié),總結(jié),采用多尺度多參數(shù)相關(guān)性分析獲得的碳氮磷利用規(guī)律為進(jìn)一步紅霉素工藝改進(jìn)提供指導(dǎo)作用，同時(shí)為其它相關(guān)抗生素發(fā)酵提供參考。這些實(shí)驗(yàn)結(jié)果為進(jìn)一步在分子、酶學(xué)等水平深入研究代謝機(jī)理提供了新的切入點(diǎn)。,輔酶Q10氮源限制與合成代謝之間關(guān)系上的應(yīng)用,基于N源調(diào)控的其他發(fā)酵產(chǎn)品案例,氮源-代謝,不同稀釋倍數(shù)氮源濃度對發(fā)酵影響,輔酶Q10氮源限制與合成代謝之間關(guān)系上的應(yīng)用,調(diào)整氮源補(bǔ)加量,輔酶Q10氮源限制與合成代謝之間關(guān)系上的應(yīng)用,不同氮源的合理搭配利用速效氮源：氨基態(tài)氮和玉米漿，促進(jìn)菌體生長，但對部分產(chǎn)物，特別是次級產(chǎn)物合成有抑制作用。緩慢氮源：延長產(chǎn)物合成期。,工業(yè)糖化酶發(fā)酵補(bǔ)料培養(yǎng)基優(yōu)化,棉籽蛋白和糖蜜對酶活差值的交互作用的響應(yīng)面圖和等高線圖,工業(yè)糖化酶發(fā)酵補(bǔ)料培養(yǎng)基優(yōu)化,糖蜜和硫酸銅對酶活差值的交互作用的響應(yīng)面圖和等高線圖,工業(yè)糖化酶發(fā)酵補(bǔ)料培養(yǎng)基優(yōu)化,棉籽蛋白和硫酸銅對酶活差值的交互作用的響應(yīng)面圖和等高線圖,工業(yè)糖化酶發(fā)酵補(bǔ)料培養(yǎng)基優(yōu)化,優(yōu)化后的補(bǔ)料培養(yǎng)基配方：新型有機(jī)氮源4.19g/L，糖蜜9.01g/L，硫酸銅0.015g/L。最終，優(yōu)化補(bǔ)料罐的酶活達(dá)到18327.5 AGI/mL，比對照罐（16460 AGI/mL）增加了11.35 %。,氮源利用與產(chǎn)品質(zhì)量控制,1. 大腸桿菌表達(dá)海藻糖合成酶,表1. 培養(yǎng)基組成,對照組為OXOID 氮源，實(shí)驗(yàn)組為安琪酵母浸粉（FM405、FM802、FM803、FM808、FM888、FM906，共六種）和蛋白胨（FP103、FP318、FP803，共3種），進(jìn)行完全替代,不同氮源情況下的菌濃,不同氮源情況下的酶轉(zhuǎn)化率,2. 莫西菌素發(fā)酵,表1. 氮源等量替換,不同氮源情況下的總效價(jià)和PMV,表2. 氮源含量（LM902）優(yōu)化實(shí)驗(yàn),不同LM902含量下的的總效價(jià)和PMV,表3. 安琪酵母膏與國藥酵母膏成本分析（單罐）,3. 頭孢菌素C發(fā)酵,不同氮源對頭C發(fā)酵的影響,4. 土霉素發(fā)酵,不同氮源對土霉素發(fā)酵的影響,土霉素發(fā)酵前期補(bǔ)2-3次酵母粉，放罐單位比對照高1500u/ml。青霉素發(fā)酵47小時(shí)開始加尿素，每6小時(shí)補(bǔ)加一次，結(jié)合補(bǔ)加乳糖，發(fā)酵單位可達(dá)40000u/ml以上。赤霉素生產(chǎn)補(bǔ)加的氮源是花生粉，配16的花生粉液體，當(dāng)菌生長到粘度大于15秒時(shí)，說明氮源被消耗很多，就開始補(bǔ)加花生粉。對于含氮產(chǎn)物的生產(chǎn)特別需要補(bǔ)氮。,四、用于考察N源的專用設(shè)備及應(yīng)用,用于考察N源的專用設(shè)備及應(yīng)用,Scale up,Scale down,微型化,高通量,標(biāo)準(zhǔn)化,多尺度菌種表型研究,在線顯微儀研制,申請PCT專利（美國PCT/CN2008/071348 ）,HEK293細(xì)胞,微載體細(xì)胞,用于考察N源的專用設(shè)備及應(yīng)用,在線顯微鏡在放線菌和酵母培養(yǎng)過程中形態(tài)變化的采集,活細(xì)胞傳感器與在線參數(shù)采集整合,活細(xì)胞傳感儀測定分析,總體目標(biāo),利用高通量技術(shù)培養(yǎng)，建立紅曲霉的微型化培養(yǎng)及批量檢測方法,高通量培養(yǎng)和篩選技術(shù),改良菌種,改善發(fā)酵條件,液態(tài)發(fā)酵,用于考察N源的專用設(shè)備及應(yīng)用,高通量培養(yǎng)技術(shù),裝液量：500 2000 ul,24孔,48孔,96孔,固體培養(yǎng)和菌種保藏,用于考察N源的專用設(shè)備及應(yīng)用,可滅菌、重復(fù)使用壽命長、成本低、易清洗、能統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)、防交叉污染、透氣性好、防止水分蒸發(fā),孔板蓋,用于考察N源的專用設(shè)備及應(yīng)用,微孔板固定架,板數(shù)：882128,孔數(shù)：128243072 128486144 1289612288,用于考察N源的專用設(shè)備及應(yīng)用,84h,50 L,Shake flaskfor 48h,Experimental design,Oxygen supply,Shear force,Preliminary exploration in shake flask,用于平行研究用的八聯(lián)罐系統(tǒng),Shear force,400rpm,500rpm,600rpm,700rpm,26,27,29,30,Primary cultivation in 50L bioreactor for 80h,Transfer,Continued cultivation in 8 joint fermenters fo