生物安全柜的正確使用和維護(hù)PPT課件.ppt

生物安全柜的正確使用和維護(hù)浙江省疾病預(yù)防控制中心翁景清 1 第一節(jié)選型原則 1 根據(jù)工作性質(zhì)病原微生物危害程度有無毒揮發(fā)性氣體是否涉及放射性物質(zhì)2 具備醫(yī)療器械注冊(cè)證3 產(chǎn)品質(zhì)量與品牌 2 醫(yī)療器械分類 3 醫(yī)療器械注冊(cè)證 4 BIBASE生物安全柜 B2型 5 前言 生物安全柜 BiosafetyCabinet BSC 在生物因子操作過程中用來保護(hù)操作人員 環(huán)境和 或 實(shí)驗(yàn)物品 防止其暴露于實(shí)驗(yàn)中 可能 產(chǎn)生的危險(xiǎn)性或潛在危險(xiǎn)性生物氣溶膠或?yàn)R出物的負(fù)壓通風(fēng)裝置 是微生物實(shí)驗(yàn)室的重要設(shè)備 保護(hù)操作者和環(huán)境 有些保護(hù)物品 屬一級(jí)安全隔離屏障 關(guān)系人體生命安全 要求非常嚴(yán)格 在SARS后 大量使用安全柜 6 安全柜標(biāo)準(zhǔn) EN12469 2000Biotechnology Performancecriteriaformicrobiologicalsafetycabinets 生物技術(shù)微生物安全柜性能標(biāo)準(zhǔn) NSF ANSI49 2004Class laminarflow biosafetycabinetry 級(jí) 層流 生物安全柜 制定我國(guó)的標(biāo)準(zhǔn) 國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局發(fā)布的 生物安全柜 YY0569 2005 行業(yè)標(biāo)準(zhǔn) 發(fā)布 2005 07 18實(shí)施 2006 06 01生物安全柜 170 2005 中華人民共和國(guó)建設(shè)部發(fā)布 建筑工業(yè)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn) 2006 06 01實(shí)施 7 第二節(jié)中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)和歐美標(biāo)準(zhǔn)比較 2006年6月1日 中國(guó)醫(yī)藥行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)YY0569 2005正式實(shí)施了 這是國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局 SFDA 于2005年7月18日發(fā)布的醫(yī)藥行業(yè)關(guān)于生物安全柜的強(qiáng)制性標(biāo)準(zhǔn) 據(jù)行業(yè)人士認(rèn)為 這個(gè)標(biāo)準(zhǔn)的實(shí)施將會(huì)引發(fā)中國(guó)生物安全柜行業(yè)的重新洗牌 8 標(biāo)準(zhǔn)YY0569 2005正式實(shí)施 是國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局 SFDA 于2005年7月18日發(fā)布的醫(yī)藥行業(yè)關(guān)于生物安全柜的強(qiáng)制性標(biāo)準(zhǔn) 不同于2005年6月1日實(shí)施的由建設(shè)部編制的 生物安全柜 JG170 2005的建設(shè)工業(yè)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn) 醫(yī)藥行業(yè)的YY0569 2005標(biāo)準(zhǔn)的編制是參照歐洲標(biāo)準(zhǔn)化委員會(huì) CEN 頒布的生物安全柜歐洲標(biāo)準(zhǔn)EN12469 2000和由美國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)學(xué)會(huì) AmericanNationalStandardInstitute ANSI 官方認(rèn)可的美國(guó)NSF49生物安全柜標(biāo)準(zhǔn) 9 YY0569 2005的行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)積極吸收采納了EN12469和NSF49這兩個(gè)生物安全柜標(biāo)準(zhǔn)中的重要部分 并將這兩個(gè)標(biāo)準(zhǔn)中相對(duì)薄弱的部分作出了提高修改 使中國(guó)的YY0569 2005標(biāo)準(zhǔn)成為世界上生物安全柜領(lǐng)域最權(quán)威的標(biāo)準(zhǔn) 10 一 安全柜型號(hào)方面 中國(guó)YY0569 2005采取了和美國(guó)NSF49 2002相同的規(guī)定 將二級(jí)安全柜細(xì)分成四個(gè)型號(hào)首先 這三個(gè)標(biāo)準(zhǔn)對(duì)生物安全柜的大分類以及性能要求方面都有相同的規(guī)定 對(duì)于二級(jí)生物安全柜的分類標(biāo)準(zhǔn)方面 中國(guó)YY0569 2005標(biāo)準(zhǔn)和美國(guó)NSF49標(biāo)準(zhǔn)一樣 不同于歐洲EN12469標(biāo)準(zhǔn) 11 從最基本的方面來說 三種類型安全柜都可以提供對(duì)操作人員 試驗(yàn)品和工作環(huán)境的保護(hù) 工作原理也相同 最大的區(qū)別是EN12469只對(duì) 二級(jí)生物安全柜 有一個(gè)基本的定義 而YY0569同NSF49一樣 將二級(jí)生物安全柜依照前窗操作口流入氣流風(fēng)速 排氣方式和循環(huán)方式等分為4個(gè)類型 A1型 A2型 原B3型 B1型和B2型 12 二 對(duì)于安全柜的柜體結(jié)構(gòu) 性能和測(cè)試方面 中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)充分吸收了歐美標(biāo)準(zhǔn)的優(yōu)點(diǎn) 采用的是兩者中最嚴(yán)格的測(cè)試標(biāo)準(zhǔn) 13 對(duì)于柜體結(jié)構(gòu) EN12469和NSF49都是以規(guī)范性能為基礎(chǔ) 不是通過細(xì)節(jié)規(guī)格要求去規(guī)定生產(chǎn)商如何制作安全柜 相反 生產(chǎn)商擁有很大的自由去設(shè)計(jì)自己的安全柜 只要能符合性能測(cè)試標(biāo)準(zhǔn)就可以 14 而中國(guó)的YY0569則明確規(guī)定了安全柜的柜體結(jié)構(gòu)的設(shè)計(jì)標(biāo)準(zhǔn) II級(jí)A2 B1 B2型安全柜的工作區(qū)均應(yīng)該采用四面 左右兩面 后部 底部 雙層結(jié)構(gòu) 三個(gè)類型安全柜的所有污染部位均應(yīng)處于負(fù)壓狀態(tài)或被負(fù)壓通道和負(fù)壓通風(fēng)系統(tǒng)包圍 II III級(jí)安全柜裸露工作區(qū)內(nèi)三面?zhèn)缺诎鍛?yīng)為一體成型結(jié)構(gòu) 內(nèi)表面的拼接處必須做密封處理等等 可以看出中國(guó)的YY0569標(biāo)準(zhǔn)相比歐美的標(biāo)準(zhǔn)更加明確規(guī)范了安全柜的柜體結(jié)構(gòu)設(shè)計(jì) 更符合現(xiàn)在生物 化學(xué)等方面的實(shí)驗(yàn)要求 15 三 物理性能測(cè)試和合格標(biāo)準(zhǔn)YY0569 EN12469和NSF49都詳細(xì)規(guī)定了安全柜的各項(xiàng)測(cè)試方法和合格標(biāo)準(zhǔn) 三者的區(qū)別和聯(lián)系介紹如下 16 1 人員 試驗(yàn)品和環(huán)境保護(hù)的微生物挑戰(zhàn)測(cè)試在對(duì)人員 產(chǎn)品和環(huán)境以及產(chǎn)品的防交叉污染保護(hù)項(xiàng)目測(cè)試中 三個(gè)標(biāo)準(zhǔn)的測(cè)試方法 合格標(biāo)準(zhǔn)基本相同 即用微生物挑戰(zhàn)法來測(cè)試 但在人員保護(hù)測(cè)試中 中國(guó)的YY0569標(biāo)準(zhǔn)采用了同歐洲EN12469標(biāo)準(zhǔn)一樣的 被認(rèn)為是常規(guī)微生物挑戰(zhàn)測(cè)試基礎(chǔ)上更為方便快捷的物理測(cè)試方案 KI Discus測(cè)試 17 這種測(cè)試方法可以在1分鐘內(nèi)完成檢測(cè)結(jié)果 遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于微生物法的48小時(shí)以上的培養(yǎng)所需要的時(shí)間 這就使得安全柜的生產(chǎn)廠家對(duì)出廠前的每臺(tái)安全柜都進(jìn)行檢測(cè)變成了可能 保證了每臺(tái)出廠產(chǎn)品的安全性 遠(yuǎn)遠(yuǎn)優(yōu)于采用微生物挑戰(zhàn)法對(duì)產(chǎn)品抽檢的廠家 18 2 下降氣流流速測(cè)試下降氣流流速對(duì)安全柜試驗(yàn)樣品保護(hù)和交叉感染防護(hù)性能起到重要的影響 例如氣流流速太小將導(dǎo)致試驗(yàn)樣品失去保護(hù) YY0569和EN12469都規(guī)定了二級(jí)安全柜下降氣流流速的許可范圍為0 25 0 5m s 而NSF49沒有給出任何下降氣流速率要求 19 在下降氣流流速的測(cè)試方法上 YY0569則采用了和NSF49相似的方法 原理是一致的 YY0569和NSF49都規(guī)定了多個(gè)測(cè)試點(diǎn) 這代表更高的測(cè)量精度要求 其中YY0569使用的的熱式風(fēng)速儀 NSF49使用的是溫差式風(fēng)速儀 而EN12469則沒有對(duì)測(cè)量?jī)x器的準(zhǔn)確度和類型進(jìn)行規(guī)定 20 同時(shí) YY0569和NSF49都通過規(guī)范有關(guān)測(cè)試儀器的精度和型號(hào)來提高測(cè)試的精度 并且YY0569還把安全柜的下降氣流分為更細(xì)的均勻下降和非均勻下降兩種模式 比NSF49的要求又提高一步 這說明在氣流流速側(cè)測(cè)試方面YY0569要優(yōu)于美國(guó)的NSF49 更優(yōu)于歐洲的EN12469標(biāo)準(zhǔn) 21 3 流入氣流流速測(cè)試在流入氣流測(cè)試方面 YY0569采用的標(biāo)準(zhǔn)同歐標(biāo)EN12469一樣 通過外排氣流估算流入氣流流速 美國(guó)標(biāo)準(zhǔn)采用的是直接流入氣流流速測(cè)試方法 這兩種方法測(cè)試的原理雖然不同但結(jié)果一樣 同時(shí)YY0569 EN12469和NSF49都對(duì)最低流入氣流流速有規(guī)定 在這里我們比較A2型二級(jí)生物安全柜和歐洲 普通型 二級(jí)生物安全柜的要求 YY0569和NSF49對(duì)A2型二級(jí)生物安全柜的最低流入氣流速率的要求是0 5m s 而EN12469對(duì)二級(jí)安全柜的要求是0 4m s 22 4 工作舒適度有關(guān)標(biāo)準(zhǔn) 噪音 光強(qiáng)和震動(dòng)測(cè)試在這幾個(gè)方面測(cè)試上YY0569 NSF49和EN12469有類似的測(cè)試方法 這里就不再討論 23 5 高效過濾器完整性測(cè)試YY0569 2005和NSF49都規(guī)定過濾器完整性測(cè)試中使用的是氣溶膠噴發(fā)劑 例如DOP PAO等 歐洲EN12469標(biāo)準(zhǔn) 使用一樣的測(cè)試方法 使用另一種自然氣溶膠 自然空氣 的測(cè)試方法 大量的研究表明使用自然氣溶膠測(cè)試方法不能確保檢測(cè)到所有漏隙 因?yàn)槭褂脷馊苣z發(fā)生器噴發(fā)產(chǎn)生的氣溶膠顆粒 在發(fā)生器壓力的作用下能很容易的抵達(dá)和擴(kuò)散到安全柜內(nèi)任何規(guī)定的位置 并且能使氣溶膠均勻分布在柜內(nèi)規(guī)定的位置 特別是能完全覆蓋到高效過濾器和柜體結(jié)合的部位 24 而靠自然空氣使氣溶膠在柜內(nèi)擴(kuò)散的方法 由于柜內(nèi)自然空氣比較穩(wěn)定 流動(dòng)性和動(dòng)力很差 所以氣溶膠不會(huì)很均勻的擴(kuò)散到柜內(nèi)規(guī)定的部位 從而就可能有過濾器和柜體結(jié)合的部位沒有被氣溶膠完全覆蓋的可能導(dǎo)致測(cè)試結(jié)果不精確 25 6 柜體泄漏的測(cè)試方法在柜體泄漏的測(cè)試方法上 YY0569采用了不同于歐美兩個(gè)標(biāo)準(zhǔn)的壓力衰減法 這個(gè)方法用到了壓力計(jì)或壓力傳感器系統(tǒng)來顯示柜內(nèi)壓力 可以定量的檢測(cè)安全柜柜體的密閉性 非常具有說服力 而NSF49規(guī)定用簡(jiǎn)單的皂泡法泄漏測(cè)試為生產(chǎn)商對(duì)所有安全柜的例行檢測(cè) EN12469規(guī)定為獨(dú)立的認(rèn)證實(shí)驗(yàn)室的檢測(cè)項(xiàng)目 而不是要求廠家在出廠時(shí)進(jìn)行檢測(cè) 26 7 其他各類測(cè)試在其他各個(gè)類型性能測(cè)試上 這三個(gè)標(biāo)準(zhǔn)基本采用了相同的測(cè)試方法 如馬達(dá)和風(fēng)機(jī)性能測(cè)試 工作區(qū)溫升測(cè)試 柜體穩(wěn)定性測(cè)試 包括柜體抗翻倒 柜體抗變形 工作臺(tái)面抗變形 柜體抗向前傾倒 等 這里就不在過多的描述 27 結(jié)論盡管這三種標(biāo)準(zhǔn)的實(shí)施時(shí)間和內(nèi)容不盡相同 但是在大體上擁有很大的相似性 在一些關(guān)鍵測(cè)試方法上 中國(guó)的標(biāo)準(zhǔn)在吸收了歐美標(biāo)準(zhǔn)中最佳方法的基礎(chǔ)上 又開發(fā)了更精確嚴(yán)密的測(cè)試方法 所以說中國(guó)安全柜檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)是目前世界上最嚴(yán)格的標(biāo)準(zhǔn) 正確的選擇生物安全柜 并且按照操作守則正確使用 維護(hù)安全柜是確保實(shí)驗(yàn)室生物安全的基本原則 28 第三節(jié)凈化工作臺(tái)和生物安全柜的差別 是兩個(gè)不同的概念不能以凈化工作臺(tái)代替生物安全柜 反之則可 保護(hù)對(duì)象不同 29 凈化工作臺(tái)類型 水平層流垂直層流 30 水平層流的 潔凈臺(tái) 原理圖 31 一 水平層流的 潔凈臺(tái) 水平層流的潔凈臺(tái)不是生物安全柜 他們通過工作表面排放HEPA高效過濾的空氣并直接吹向操作者 這些設(shè)備僅僅提供產(chǎn)品保護(hù) 他們可以用于某些潔凈的工作 諸如無菌設(shè)備或電子設(shè)備的無塵組裝 當(dāng)處理細(xì)胞培養(yǎng)材料或藥物合成時(shí)或當(dāng)操作可能傳染的材料時(shí) 這些潔凈臺(tái)是絕對(duì)不能使用的 操作人員在使用潔凈臺(tái)操作這些材料時(shí) 包括蛋白抗原 可能暴露于這些材料中 它可能導(dǎo)致過敏 水平層流的潔凈臺(tái)決不能代替生物安全柜用在生物醫(yī)學(xué)或獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室 32 垂直層流 潔凈臺(tái) 原理圖 33 二 垂直層流 潔凈臺(tái) 垂直層流的潔凈臺(tái)同樣不是生物安全柜 微生物實(shí)驗(yàn)室中使用 例如細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)的無菌操作需要一個(gè)潔凈的區(qū)域 由于這些設(shè)備一般有一個(gè)觀察窗 空氣通常從觀察窗下排放到房間 它和水平層流的潔凈臺(tái)一樣會(huì)導(dǎo)致同樣的潛在危險(xiǎn) 34 三 生物安全柜 BSCs 提供人員 環(huán)境和產(chǎn)品的保護(hù) 35 HEPA高效空氣過濾器關(guān)鍵 HEPA過濾器清除粒子等于和大于0 3um粒子 這個(gè)粒徑基本上包括了所有的細(xì)菌 孢子和病毒 的效率為99 999 典型的HEPA過濾器的介質(zhì)是單層的硼硅酸鹽纖維 摺皺的濾材又用鋁蓋板分開 濾材被粘合到木頭 金屬或塑料框架上 粗心的處理濾器 例如 不合適的儲(chǔ)藏或摔落 能損壞粘接的濾材 或者造成漏洞或破裂導(dǎo)致破漏這就是安全柜在初次安裝和重新移位后必須進(jìn)行濾器整體檢驗(yàn)的原因 36 一 生物安全柜的分型 ClassI級(jí)生物安全柜ClassII級(jí)生物安全柜 其又具體分為 1 ClassIITypeA1型生物安全柜2 ClassIITypeA2型生物安全柜3 ClassIITypeB1型生物安全柜4 ClassIITypeB2型生物安全柜ClassIII級(jí)生物安全柜 37 生物安全柜的選擇及適用性表1通過危害評(píng)估選擇生物安全柜 38 I級(jí)生物安全柜 樣品沒有得到保護(hù)操作者得到保護(hù)操作環(huán)境得到保護(hù)經(jīng)過樣品區(qū)的空氣 經(jīng)過高效過濾器的過濾之后 100 地排放到實(shí)驗(yàn)室環(huán)境中用途 在許多情況下 I級(jí)生物安全柜被用作特殊的密封設(shè)備 例如 離心 收獲設(shè)備或小的發(fā)酵設(shè)備 或可能產(chǎn)生氣溶膠的操作過程 例如倒籠子的垃圾 通氣培養(yǎng)或組織攪拌 相當(dāng)于安全通風(fēng)柜 39 A前窗操作口B觀察窗C排氣過濾器D負(fù)壓排氣系統(tǒng) 腔體產(chǎn)生亂流 圖1 級(jí)安全柜結(jié)構(gòu)和氣流模式示意圖 40 I級(jí)生物安全柜改進(jìn)型 反向的水平層流氣體流速 0 4m sYY0569 2005 0 7 1 0m s 41 有前窗操作口的安全柜 操作者可以通過前窗操作口在安全柜內(nèi)進(jìn)行操作 操作口流入氣流保護(hù)人員高效過濾器過濾的下降氣流保護(hù)產(chǎn)品被污染氣流經(jīng)高效過濾器過濾后排出保護(hù)環(huán)境 級(jí)安全柜 42 級(jí)安全柜的分類 級(jí)安全柜根據(jù)結(jié)構(gòu)特點(diǎn)和氣流模式的不同分為A1 A2 B1 B2四種類型 43 級(jí)A1型安全柜 前窗操作口流入氣流的最低速率為 0 40m s 下降氣流為安全柜的部分流入氣流和部分下降氣流的混合氣體 經(jīng)過高效過濾器過濾后送至工作區(qū) 70 氣體循環(huán)使用 30 排到室內(nèi)或室外 44 級(jí)A1型安全柜 污染氣流經(jīng)過高效過濾器過濾后可以排到實(shí)驗(yàn)室或經(jīng)安全柜的外排接口通過排風(fēng)管道 軟連接 排到大氣中 安全柜內(nèi)的污染部位可以處于正壓狀態(tài) 且這些正壓區(qū)域可以沒有負(fù)壓區(qū)域包圍 A1型安全柜不能用于揮發(fā)性有毒化學(xué)品和揮發(fā)性放射性核素的實(shí)驗(yàn) 45 A前窗操作口B觀察窗C排氣過濾器D下降氣流過濾器E壓力排氣系統(tǒng)F風(fēng)機(jī)圖2 級(jí)A1型安全柜結(jié)構(gòu)和氣流模式示意圖 側(cè)視圖 46 級(jí)A2型安全柜 操作口流入氣流的最低速率為 0 50m s 下降氣流為部分流入氣流和部分下降氣流的混合 經(jīng)過高效過濾器過濾后送至工作區(qū) 污染氣流經(jīng)過高效過濾器過濾后可以排到實(shí)驗(yàn)室或經(jīng)安全柜的外排接口通過排風(fēng)管道 軟連接 排到大氣中 氣流70 循環(huán)使用 30 外排 47 級(jí)A2型安全柜 安全柜內(nèi)所有污染部位均處于負(fù)壓狀態(tài)或者被負(fù)壓通道和負(fù)壓通風(fēng)系統(tǒng)環(huán)繞 安全柜用于進(jìn)行以微量揮發(fā)性有毒化學(xué)品和痕量放射性核素為輔助劑的微生物實(shí)驗(yàn)時(shí) 必須連接功能合適的排氣罩 48 A前窗操作口B觀察窗C排氣過濾器D下降氣流過濾器E壓力排氣系統(tǒng)F風(fēng)機(jī)圖3 級(jí)A2型安全柜結(jié)構(gòu)和氣流模式示意圖 49 級(jí)B1型安全柜 操作口流入氣流的最低平均速率為 0 5氣流循環(huán)提供 經(jīng)過高效過濾器過濾后送至工作區(qū) 大部分被污染的下降氣流經(jīng)過高效過濾器過濾后通過專用的排氣管道 硬連接 排入大氣中 70 氣流經(jīng)過濾后外排 要求排到室外 需要70 外界空氣補(bǔ)充30 氣流經(jīng)過濾后循環(huán)使用 50 級(jí)B1型安全柜 安全柜內(nèi)所有被污染部位均處于負(fù)壓狀態(tài)或者被負(fù)壓通道和負(fù)壓通風(fēng)系統(tǒng)包圍 如果揮發(fā)性有毒化學(xué)品或放射性核素隨空氣循環(huán)不影響實(shí)驗(yàn)操作或?qū)嶒?yàn)在安全柜的直接排氣區(qū)域進(jìn)行 B1型安全柜可以用于以微量揮發(fā)性有毒化學(xué)品和痕量放射性核素為輔助劑的微生物實(shí)驗(yàn) 51 B觀察窗C排氣過濾器D下降氣流過濾器E負(fù)壓排氣系統(tǒng)F風(fēng)機(jī)G下降氣流過濾器圖4 級(jí)B1型安全柜結(jié)構(gòu)和氣流模式示意圖 52 級(jí)B2型安全柜 全排式 前窗操作口流入氣流的最低平均速率為 0 50m s 下降氣流來自經(jīng)過高效過濾器過濾的實(shí)驗(yàn)室或室外空氣 即安全柜排出的氣體不再循環(huán)使用 流入氣流和下降氣流經(jīng)過高效過濾器過濾后通過專用排氣管道 硬連接 排到大氣中 不允許回到安全柜和實(shí)驗(yàn)室中 100 氣流經(jīng)過濾后外排進(jìn)入環(huán)境100 外界空氣補(bǔ)充無循環(huán)使用的氣流 53 級(jí)B2型安全柜 所有污染部位均處于負(fù)壓狀態(tài)或者被直接排氣 不在工作區(qū)循環(huán) 的負(fù)壓通道和負(fù)壓通風(fēng)系統(tǒng)包圍 B2型安全柜可以用于以揮發(fā)性有毒化學(xué)品和放射性核素為輔助劑的微生物實(shí)驗(yàn) 適用于生物安全危害程度1 2 3級(jí)的樣品 54 A前窗操作口B觀察窗C排氣過濾器D下降氣流過濾器E負(fù)壓排氣系統(tǒng)F風(fēng)機(jī)G散流氣圖5 級(jí)B2型安全柜結(jié)構(gòu)和氣流模式示意圖 55 ClassII級(jí)生物安全柜 A B3型 樣品得到保護(hù)操作者得到保護(hù)操作環(huán)境得到保護(hù)氣流經(jīng)過過濾 從操作區(qū)頂部 由上往下 垂直地流向操作臺(tái)面單向氣流減少工作區(qū)內(nèi)氣流的擾動(dòng)并且使交叉污染的可能性降到最小 30 氣流經(jīng)過濾后外排進(jìn)入環(huán)境30 外界空氣補(bǔ)充70 氣流經(jīng)過濾后循環(huán)使用允許有微量揮發(fā)性有毒化學(xué)物質(zhì)及痕量的揮發(fā)性放射核素適用于生物安全1 2 3級(jí)樣品 56 III級(jí)生物安全柜 全排封閉式 樣品得到保護(hù)操作者得到保護(hù) 操作時(shí)戴全密封手套 操作環(huán)境得到保護(hù)氣流經(jīng)過過濾 從操作區(qū)頂部 由上往下 垂直地流向操作臺(tái)面100 氣流經(jīng)過濾后外排進(jìn)入環(huán)境100 外界空氣補(bǔ)充無循環(huán)使用的氣流風(fēng)速 0 7m s 57 III級(jí)生物安全柜 III級(jí)生物安全柜是為操作4級(jí)生物安全水平的微生物病原體而設(shè)計(jì)的 對(duì)環(huán)境和操作者提供最大的保護(hù) 它是一個(gè)沒有開放式觀察窗的氣密性的結(jié)構(gòu) 長(zhǎng)臂耐磨的橡膠手套以一種氣密性的方式安裝到安全柜的袖套孔上 可以在與內(nèi)部隔離的條件下對(duì)柜內(nèi)的材料進(jìn)行操作 防止操作者與這些危險(xiǎn)的材料直接接觸 III級(jí)安全柜通常只是在最高圍護(hù)功能的實(shí)驗(yàn)室內(nèi)安裝 這些實(shí)驗(yàn)室具有控制出入和特殊通風(fēng)要求或其它支持系統(tǒng) 例如高壓蒸汽 58 第四節(jié)生物安全柜的使用 59 一 操作程序 60 一 II級(jí)生物安全柜內(nèi)的準(zhǔn)備工作 在開始工作之前 準(zhǔn)備一張?zhí)貏e的活動(dòng)所需的材料檢查清單 在生物安全柜內(nèi)的放置必要的材料 因?yàn)榘踩竦臍饽环雷o(hù)屏障是很脆弱的 做好充分的準(zhǔn)備是為了在正式工作時(shí)減少手臂穿越氣幕的運(yùn)動(dòng)次數(shù) 操作者手臂橫向快速地進(jìn)出安全柜會(huì)干擾氣幕 并損害安全柜所提供的局部防護(hù)屏障 手臂垂直于安全柜的操作口 進(jìn)出時(shí)緩慢的移動(dòng) 將減少這種危險(xiǎn) 房間其他人員的活動(dòng) 例如 迅速運(yùn)動(dòng) 開 關(guān)房間門等 也同樣可以干擾安全柜的空氣保護(hù)屏障 61 在開始工作之前 操作者應(yīng)該調(diào)整凳子高度 使自己的臉在前操作口之上 在手臂放進(jìn)安全柜內(nèi)大約一分鐘之后 才能進(jìn)行實(shí)驗(yàn)操作 這樣可以使安全柜穩(wěn)定 并且能讓氣流 清掃 掉手和臂表面的微生物污染物 當(dāng)操作者的胳膊橫放在前面的格柵上的時(shí)候 房間空氣可能直接流動(dòng)到安全柜的工作區(qū)域 而不是通過前面的格柵進(jìn)風(fēng) 輕微地提高胳膊會(huì)緩和這個(gè)問題 前面的格柵絕對(duì)不能讓研究記錄 廢棄的塑料包裝和吸液裝置等阻擋 所有的操作應(yīng)該在距離前面的格柵4英寸里面的工作面上進(jìn)行 62 二 工作前的凈化 在開始工作之前要讓安全柜的風(fēng)機(jī)至少運(yùn)行3 5分鐘使安全柜內(nèi)的空氣進(jìn)行凈化 安全柜的工作臺(tái)面 內(nèi)壁 不包括送風(fēng)濾器擴(kuò)散板 和觀察窗的內(nèi)表面用消毒劑擦拭 再用無菌蒸餾水進(jìn)行擦拭以清除殘余的消毒劑 放到安全柜的容器和材料的表面應(yīng)該以70 的乙醇擦拭 以減少將環(huán)境的雜菌帶到安全柜內(nèi) 定期的對(duì)孵箱和冰箱進(jìn)行消毒 63 三 生物安全柜內(nèi)部材料的放置 在安全柜的工作臺(tái)面上可以放一塊塑料襯底的能吸水的毛巾 所有的材料應(yīng)該放在離安全柜前面的格柵和后面工作臺(tái)面的邊緣盡可能遠(yuǎn)的位置 圖11 容易產(chǎn)生氣溶膠的設(shè)備 例如 旋轉(zhuǎn)攪拌器 臺(tái)式離心機(jī) 應(yīng)該靠近安全柜的后部放置 操作時(shí)的動(dòng)作應(yīng)該從工作臺(tái)面的清潔區(qū)到污染區(qū) 64 65 安全柜內(nèi)材料的放置 潔凈培養(yǎng)物 左邊 可以進(jìn)行接種 中心 用過的污染吸管放在淺的平底盤里 而其它污染的材料可以放在生物危害包 右邊 中 這安排對(duì)于習(xí)慣于左手操作的人要顛倒過來 潔凈 污染 66 四 II級(jí)生物安全柜內(nèi)的操作 在生物安全柜內(nèi)所進(jìn)行的許多普通過程可能產(chǎn)生噴濺或氣溶膠 應(yīng)該始終采用良好的微生物學(xué)技術(shù) 減少噴濺和氣溶膠產(chǎn)生 II級(jí)生物安全柜的設(shè)計(jì)可以使水平方向噴出的孢子在14英寸的傳播距離以內(nèi)被安全柜向下流動(dòng)的氣流所俘獲 因此 保持干凈的材料離開產(chǎn)生氣溶膠的活動(dòng)至少1英尺以外將會(huì)減少交叉污染的可能性 67 68 69 70 五 消毒 表面消毒工作完成時(shí) 所有的容器和設(shè)備應(yīng)該進(jìn)行表面消毒并拿出安全柜 在每天工作結(jié)束時(shí) 應(yīng)該對(duì)安全柜進(jìn)行最后的表面消毒 包括工作臺(tái)面 安全柜的邊壁 后壁和觀察窗玻璃內(nèi)部的擦拭 如果必要 安全柜也應(yīng)該進(jìn)行放射性檢測(cè)并進(jìn)行必要的消毒 作為安全的微生物學(xué)操作的最后步驟 操作者應(yīng)該摘下手套 脫下工作服并且洗手 71 72 六 發(fā)生少量的噴灑時(shí)的消毒 在生物安全柜內(nèi)發(fā)生少量的噴灑時(shí) 應(yīng)該用污染清除吸收紙巾立即進(jìn)行處理 并將使用過的紙巾放到這個(gè)生物危害包里 對(duì)安全柜內(nèi)的所有物品和安全柜內(nèi)部 用浸滿消毒液的毛巾立即進(jìn)行擦洗 73 74 七 發(fā)生大量的溢出 當(dāng)發(fā)生大量的溢出時(shí) 液體會(huì)通過前面或后部的格柵流到下面去 這時(shí)要求更廣泛的消毒 安全柜內(nèi)的所有的物品應(yīng)該進(jìn)行表面消毒并拿出安全柜 應(yīng)該使消毒液維持20 30分鐘的適當(dāng)接觸時(shí)間如果溢出的液體含有放射性材料 可采取類似的程序 并應(yīng)該與輻射安全人員聯(lián)系 尋求特殊的指導(dǎo) 75 八 氣體消毒 在更換HEPA過濾器或進(jìn)行內(nèi)部維修之前 要對(duì)生物安全柜必須進(jìn)行消毒 76 第五節(jié)生物安全柜檢測(cè) 根據(jù)中華人民共和國(guó)衛(wèi)生行業(yè)標(biāo)準(zhǔn) WS233 2002 微生物和生物醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室生物安全通用準(zhǔn)則的相關(guān)規(guī)定 有下列情況之一時(shí) 必須對(duì) 級(jí)生物安全柜進(jìn)行現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè) 1 實(shí)驗(yàn)室施工時(shí) 級(jí)生物安全柜搬放到指定位置后 2 級(jí)生物安全柜被移動(dòng)位置后 3 對(duì) 級(jí)生物安全柜進(jìn)行檢修后 4 級(jí)生物安全柜更換高效過濾器后 5 級(jí)生物安全柜一年一度的常規(guī)現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè) 77 一 現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)的必測(cè)項(xiàng)目和方法 垂直氣流速度斷面測(cè)定儀器 準(zhǔn)確度為讀數(shù) 3 的熱風(fēng)速計(jì) 方法 測(cè)點(diǎn)位于柜內(nèi)送風(fēng)口下方0 15m處 為均勻測(cè)點(diǎn) 測(cè)點(diǎn)間距不大于0 15m 測(cè)點(diǎn)布置不少于三行 靠?jī)?nèi)壁的行距柜內(nèi)壁0 15m 每行不少于7個(gè)測(cè)點(diǎn) 判定 垂直氣流均勻區(qū)所測(cè)平均風(fēng)速與生產(chǎn)廠給定值之差小于 0 025m s 且單點(diǎn)風(fēng)速與所測(cè)平均風(fēng)速之差不大于20 為合格 78 二 工作窗口進(jìn)風(fēng)風(fēng)速測(cè)定 方法 首先測(cè)定工作窗口進(jìn)風(fēng)風(fēng)量 再除以生物安全柜工作窗口面積計(jì)算出進(jìn)風(fēng)風(fēng)速 工作窗口進(jìn)風(fēng)風(fēng)量通過測(cè)定生物安全柜的排風(fēng)風(fēng)量而求出 對(duì)于僅從工作窗口進(jìn)風(fēng)的生物安全柜 生物安全柜的排風(fēng)風(fēng)量就等于工作窗口進(jìn)風(fēng)風(fēng)量 對(duì)于除從工作窗口進(jìn)風(fēng)外 還有單獨(dú)的進(jìn)風(fēng)管的生物安全柜 則從排風(fēng)管的總排風(fēng)量扣除進(jìn)風(fēng)管進(jìn)風(fēng)風(fēng)量即為工作窗口進(jìn)風(fēng)風(fēng)量 采用JGJ7l 1990中所規(guī)定方法測(cè)定生物安全柜的 進(jìn) 排風(fēng)管風(fēng)量 判定 所測(cè)進(jìn)風(fēng)風(fēng)速與生產(chǎn)廠給定值之差小于 0 025m s為合格 79 三 煙霧試驗(yàn) 使用發(fā)煙物作直觀判斷 在工作表面中線上方高于工作窗口上沿0 15m處從側(cè)板一端到另一端發(fā)煙 應(yīng)為垂直流線 不得有死