論文08級(jí)論文范文

論文08級(jí)論文范文 學(xué)號(hào)xx24230120HEBEI UNITEDUNIVERSITY畢業(yè)論文GRADUATE THESIS設(shè)計(jì)題目蝴蝶蘭組培快繁技術(shù)及褐變控制研究學(xué)生姓名張長坤專業(yè)班級(jí)08藥學(xué)一班學(xué)院冀唐學(xué)院指導(dǎo)教師翟麗教授xx年05月29日摘要-I-摘要本研究以健康成株的蝴蝶蘭花梗腋芽為外植體，采用單因素、二因素完全隨機(jī)試驗(yàn)設(shè)計(jì)獲得蝴蝶蘭無菌苗，篩選出叢生芽途徑進(jìn)行組織培養(yǎng)的各階段的最適培養(yǎng)基；并且對(duì)外植體的褐變控制進(jìn)行研究。 研究結(jié)果如下 1、蝴蝶蘭誘導(dǎo)叢生芽快繁途徑各階段最適培養(yǎng)基 （1）中部腋芽為最佳部位，萌芽率為80%。 （2）花梗腋芽誘導(dǎo)叢生芽的最適培養(yǎng)基為1/2MS+6-BA3.0mg/L+NAA0.2mg/L，誘導(dǎo)率達(dá)80%，褐變率低。 2、對(duì)蝴蝶蘭的褐變控制進(jìn)行研究，結(jié)果如下 （1）對(duì)花梗腋芽進(jìn)行10d黑暗預(yù)處理，褐變率降至為40%。 （2）添加不同種類和濃度的抗褐變劑，均可降低褐變率，以添加2g/L AC效果最好，褐變率降至30%，且不影響叢生芽的誘導(dǎo)。 關(guān)鍵詞蝴蝶蘭；花梗腋芽；叢生芽；褐變；組培快繁Abstract-II-Abstract Inthis study,Phalaenopsis culturing-plants inducedby peduncle buds asexplants fromhealthy andadulting plantswere getin singleand doublefactorsrandomized absolutelyexperiment designs,the bestculture mediumsin differentstages wereselected.The researchwhich wason thepedunclebudscontrol-browning weretaken.The mainresults wereas follows: 1、The betterculture mediumsof inducingtufty budsin differentstages are: （1）The budswhich isin themiddle arethe bestexplants，germination rate is80%. （2）The bestculture mediumwhich inducestufty budsis1/2MS+6-BA3.0mg/L+NAA0.2mg/L，the inducingrate is80%，the browning rateislower. 2、The resultsof control-browning areas follows: （1）The darkingpretreatment aslong as10days canreduce browningrate to40%. 由于其花在形態(tài)和結(jié)構(gòu)上均與眾不同，花外形具有娥蝶般的美麗，故以拉丁字Phalaina(蛾蝶)和opsis(模樣)組合成蝴蝶蘭屬(Phalanopsis)的學(xué)名，意指其花外形似蛾蝶1。 蝴蝶蘭迄今已發(fā)現(xiàn)70多個(gè)原生種2（如P.amabilis、P.corningiana、P.cornu-cervi、P.equestris等等），中國產(chǎn)4種，大多數(shù)分布在潮濕的亞洲地區(qū)，自然分布于阿隆姆、緬甸、印度洋各島、南洋群島、菲律賓以至臺(tái)灣。 蝴蝶蘭花姿婀娜，花色高雅，在世界各國廣為栽培。 蝴蝶蘭為附生蘭，但并非寄生植物，其附生物只不過是它的立足點(diǎn)，它們依靠吸取空氣中的水分、有機(jī)物以及樹皮裂隙中的腐殖質(zhì)生長。 蝴蝶蘭為單軸類蘭花，莖短而肥厚，被大片的橢圓形葉所遮蓋，幾乎無法明顯的看出來。 無假鱗莖，頂點(diǎn)為生長點(diǎn)，在生長時(shí)期從頂部長出新葉片，下部老葉逐漸變枯黃脫落，葉綠色或間以深綠色斑紋，肉質(zhì)肥厚，疊套互生于短莖上；白色粗大的氣生根從莖節(jié)處長出，圓柱形或扁圓形，肉質(zhì)，其根除了有吸收功能外，還具有伸長生長和光合作用的能力。 蝴蝶蘭的花由三枚萼片、兩枚花瓣、一枚唇瓣和一個(gè)蕊柱組成。 花瓣位于花的左右，是花朵中觀賞價(jià)值最高的部分，其次是三枚萼片，大部分的唇瓣會(huì)裂成兩條觸角般的短須，從遠(yuǎn)處看，就像一群展翅飛翔的蝴蝶（見圖1-1）。 圖1-1蝴蝶蘭花朵結(jié)構(gòu)河北聯(lián)合大學(xué)冀唐學(xué)院-2-花箭由葉腋間抽出，花朵由下至上依次開放，花色豐富，有純白、粉紅、紫紅、黃、綠、黃色帶赤斑紋、白色紅唇、白色紅條紋等，不少品種還兼?zhèn)潆p色或三色，有的好像繡上圖案的條紋，有的又猶如噴了均勻的彩點(diǎn)。 每枝開花七八朵，多的 十二、三朵，可連續(xù)觀賞六七十天，因此很能抓住人們的目光，向來是花群中的主角與耀眼明星，它與卡特蘭、萬代蘭、石斛蘭并稱為四大觀賞蘭3，素有“蘭花皇后”之美稱4。 蝴蝶蘭雜交品種很多，經(jīng)過官方認(rèn)證的品種已達(dá)10多萬個(gè)5，在生產(chǎn)中廣泛使用。 蝴蝶蘭可以進(jìn)行有性繁殖，但由于其種子細(xì)小，不含有為種子萌發(fā)提供營養(yǎng)的胚乳或其他組織，在自然條件下很難萌發(fā)6，且必須依賴于共生細(xì)菌7。 利用組織培養(yǎng)的方法，采用花梗腋芽作為外植體，在適宜的培養(yǎng)基上，可誘導(dǎo)出叢生芽8。 叢生芽在適宜的培養(yǎng)基上經(jīng)過誘導(dǎo)、分化，也可以分化出葉，形成小苗即分生苗。 分生苗變異率低，穩(wěn)定遺傳了母株的特征特性，繁殖速度快，滿足市場的需求。 1.2蝴蝶蘭產(chǎn)業(yè)的發(fā)展我國臺(tái)灣地區(qū)地處亞熱帶，是蝴蝶蘭野生種分布的最北界線，年均溫22.5，屬高溫多濕氣候，冷涼的冬季溫度有利于花芽分化、抽梗、開花，比其它熱帶或寒帶國家，節(jié)省許多費(fèi)用，降低成本，在環(huán)境地利上可說得天獨(dú)厚，形成臺(tái)灣春天蝴蝶蘭滿園盛開的特有景觀，李建華稱臺(tái)灣是“蝴蝶蘭的故鄉(xiāng)”9。 80年代末，臺(tái)灣有關(guān)人士就意識(shí)到，臺(tái)灣具有豐富的蝴蝶蘭資源及良好的生長環(huán)境，90年代初，蝴蝶蘭的高經(jīng)濟(jì)價(jià)值促使臺(tái)灣將蝴蝶蘭列為多元化發(fā)展的一個(gè)重要項(xiàng)目。 此后，無菌播種、工廠化組培苗移栽、溫室管理的自動(dòng)化等技術(shù)的發(fā)展和完善，使蝴蝶蘭在20世紀(jì)末的最后10年，發(fā)展成了大面積企業(yè)栽培的產(chǎn)業(yè)。 蝴蝶蘭也是目前臺(tái)灣蘭花類中產(chǎn)量最多、價(jià)格最高的花卉項(xiàng)目。 全世界約有70多個(gè)原生種，兩個(gè)原生種分布在臺(tái)灣，即分布于恒春9半島、臺(tái)東和蘭嶼的白花蝴蝶蘭和分布在小蘭嶼的桃紅花姬蝴蝶蘭，之后臺(tái)灣又收錄了43個(gè)原生種，所以臺(tái)灣有著豐富的蝴蝶蘭種原。 臺(tái)灣產(chǎn)的蝴蝶蘭主要外銷市場在日本、歐美、韓國、中國大陸及東南亞等地。 1997年臺(tái)灣出口蝴蝶蘭苗1290噸，成株約243噸，切花近6噸，創(chuàng)收約11億新臺(tái)幣9；1998年，生產(chǎn)蝴蝶蘭組培苗達(dá)到7000萬株，其中較大批量的企業(yè)是臺(tái)灣最大的蝴蝶蘭企業(yè)臺(tái)灣糖業(yè)股份有限公司，電腦自動(dòng)化控制溫室面積就達(dá)10萬m2，全年度的外銷以日本為主要出口國，外銷量為46%，美國市場約占28%，韓國市場占12%，我國大陸市場占10%，其它市場占4%10，臺(tái)灣用20年的第1章引言-3-時(shí)間，已成為國際蝴蝶蘭市場的龍頭老大，基本占據(jù)了蝴蝶蘭市場。 上世紀(jì)80年代，大陸不少研究單位就已經(jīng)引進(jìn)熱帶蘭進(jìn)行深入研究，并取得一定成果。 但是因產(chǎn)量有限，售價(jià)很高，在中國年宵花卉市場上市量只有5萬盆，沒有推廣開來。 90年代，隨著國際經(jīng)濟(jì)的復(fù)蘇，許多經(jīng)濟(jì)活動(dòng)逐漸熱絡(luò)，韓國、日本以及臺(tái)灣地區(qū)的外資企業(yè)進(jìn)入大陸，為我國帶來了信息、品種、技術(shù)等資訊，商品化生產(chǎn)才得以形成。 大陸本土的蘭花企業(yè)也逐漸建立起自己的生產(chǎn)基地，范圍相當(dāng)廣泛，北至吉林長春，南到海南島?？?，東至山東煙臺(tái)，西至甘肅蘭州，以經(jīng)濟(jì)強(qiáng)省為主，以發(fā)達(dá)城市為依托，蝴蝶蘭產(chǎn)業(yè)迅速發(fā)展，被認(rèn)定為農(nóng)業(yè)生物技術(shù)之明星產(chǎn)業(yè)。 蝴蝶蘭產(chǎn)業(yè)在中國的興起不過十年，但是作為花卉業(yè)中的一個(gè)新興類別，蝴蝶蘭一直受到中國花卉市場的喜愛。 目前盡管蝴蝶蘭的價(jià)格有所下降，但在農(nóng)業(yè)項(xiàng)目中，與其他花卉相比，利潤還是比較可觀的，蝴蝶蘭市場仍然比較樂觀。 1.3研究的目的和意義當(dāng)前生產(chǎn)中采用的蝴蝶蘭品種大多為雜交種，利用種子繁殖子代的性狀分離十分嚴(yán)重，不能建立規(guī)格一致的商品苗；蝴蝶蘭又是單莖性氣生蘭，植株上很少發(fā)育側(cè)枝，比其它種類的蘭花更難進(jìn)行常規(guī)無性繁殖。 植物組織培養(yǎng)是建立蝴蝶蘭快速繁殖無性系的重要手段。 相對(duì)于蝴蝶蘭的利潤，蝴蝶蘭的投資不大。 如建設(shè)一個(gè)200m2的大棚，可投放4000盆蝴蝶蘭，按85%的成活率，每盆售價(jià)30元計(jì)算，毛收入可達(dá)10.2萬元，扣除種苗、建設(shè)大棚及化肥、農(nóng)藥、人工等費(fèi)用（約7萬元），則純收入可達(dá)3萬多元11，用組織培養(yǎng)技術(shù)繁殖蝴蝶蘭具有速度快、成本低，能在短期內(nèi)繁殖大量種苗并能同時(shí)完成脫毒等優(yōu)點(diǎn)，對(duì)合理開發(fā)利用這一資源，滿足消費(fèi)市場對(duì)蝴蝶蘭的大量需求，發(fā)展河北省花卉經(jīng)濟(jì)具有重要的現(xiàn)實(shí)意義，所以蝴蝶蘭是一項(xiàng)高回報(bào)的產(chǎn)業(yè)。 唐山依靠豐富的礦產(chǎn)資源，GDP在全國排名第18位，在河北省排第1位，收入水平較高。 而且唐山市通過創(chuàng)建文明城市活動(dòng)，人們的生活水平和消費(fèi)水平得到了進(jìn)一步的提高，除了對(duì)衣食住行提出了更高的要求，對(duì)花卉的要求也趨向于高檔化、精品化，所以蝴蝶蘭在唐山具有廣闊的消費(fèi)空間。 基于國內(nèi)外研究存在著不同甚至相互矛盾的結(jié)論、蝴蝶蘭因品種、外植體不同對(duì)培養(yǎng)基的要求不同、蝴蝶蘭在我省尤其是唐山市具有很大的發(fā)展?jié)摿Φ仍?，本課題在前人研究的基礎(chǔ)上，研究基本培養(yǎng)基、取材部位、激素濃度及組合對(duì)蝴蝶蘭誘導(dǎo)叢生芽的影響，篩選出適宜的培養(yǎng)基，為蝴蝶蘭的組培快繁技術(shù)提供理論依據(jù)和技術(shù)指導(dǎo)。 河北聯(lián)合大學(xué)冀唐學(xué)院-4-第2章材料與方法2.1材料試驗(yàn)選用市場上流行的蝴蝶蘭品種“熊貓”為實(shí)驗(yàn)材料2.2花梗腋芽誘導(dǎo)叢生芽的研究方法2.2.1獲取外植體從市場上購買生長狀況良好、未開花的成株，用干凈的剪刀剪下花梗，分段，每段中間位置留一個(gè)腋芽，芽上下各留3cm長的節(jié)段，用洗衣粉水浸泡2030min，清洗后放置于自來水下沖洗2030min，然后進(jìn)行滅菌處理。 2.2.2外植體的消毒將沖洗好的花梗腋芽放置于燒杯中，拿到超凈臺(tái)上，用75%的酒精進(jìn)行表面消毒30s，無菌水沖洗3次，再用0.1%HgCl2溶液浸泡15min，期間不斷地用玻璃棒攪動(dòng)，使其消毒徹底，然后用無菌水沖洗56次。 用鑷子將花梗芽夾到鋪有濾紙的培養(yǎng)皿中，剝掉苞葉，并將花梗段的兩端各切去0.5cm，使其長度為2cm左右，花?；考舫尚泵?，接種到固體培養(yǎng)基中。 2.2.3培養(yǎng)基及培養(yǎng)條件 1、MS培養(yǎng)基（附加蔗糖20g/L，瓊脂10g/L，活性炭2g/L，PH=5.6，以下同） 2、1/2MS培養(yǎng)基（MS大量元素減半） 3、1/4MS培養(yǎng)基（MS大量元素減為1/4） 4、VW培養(yǎng)基培養(yǎng)基按常規(guī)方法配置12，分裝到100ml的培養(yǎng)瓶中（預(yù)先在121飽和蒸汽壓下滅菌40min），每瓶30ml左右，所有培養(yǎng)基均在115飽和蒸汽壓下滅菌15min。 待高壓滅菌鍋壓力歸零后，拿出培養(yǎng)基，輕輕搖晃，使活性炭混合均勻，冷卻后備用。 培養(yǎng)環(huán)境溫度維持在251，光照1500lx2000lx，濕度80%左右，每日光照16h。 2.2.4取材部位對(duì)腋芽萌發(fā)的影響取材部位設(shè)3個(gè)處理第2章材料與方法-5-A1花梗上部腋芽；A2花梗中部腋芽；A3:花梗下部腋芽花梗按上、中、下部位接種于誘導(dǎo)花梗腋芽的培養(yǎng)基上，每瓶接2段，每處理接種5瓶，共10個(gè)腋芽，3次重復(fù)。 分別在15d、30d、45d觀察誘導(dǎo)情況，再對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，從不同取材部位的外植體對(duì)花梗腋芽誘導(dǎo)培養(yǎng)的差異中篩選出較優(yōu)外植體。 2.2.5基本培養(yǎng)基對(duì)腋芽萌發(fā)的影響將中部腋芽接種于培養(yǎng)基上。 基本培養(yǎng)基設(shè)3個(gè)處理B1MS培養(yǎng)基B21/2MS培養(yǎng)基B31/4MS培養(yǎng)基B4VW培養(yǎng)基分別附加6-BA3.0mg/L，蔗糖20g/L，瓊脂10g/L，活性炭2g/L，每瓶接2段，每處理接種5瓶，共10個(gè)腋芽，3次重復(fù)。 分別在接種后15d、30d、45d統(tǒng)計(jì)花梗誘導(dǎo)率，再對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，從不同基本培養(yǎng)基對(duì)花梗腋芽誘導(dǎo)培養(yǎng)的差異中篩選出較優(yōu)基本培養(yǎng)基。 2.2.6植物生長調(diào)節(jié)劑濃度和組合對(duì)腋芽誘導(dǎo)的影響將消過毒的中部腋芽在超凈工作臺(tái)上接種于培養(yǎng)基上，采用1/2MS+蔗糖20g/L+瓊脂10g/L+活性炭2g/L+植物生長調(diào)節(jié)劑組合。 采用兩因素完全隨機(jī)試驗(yàn)設(shè)計(jì)，2個(gè)因素分別是6-BA、NAA，6-BA設(shè)5個(gè)濃度，依次為 0、1. 0、3. 0、5. 0、7.0mg/L，NAA有2個(gè)濃度，為 0、0.2mg/L；6-BA濃度為3.0mg/L，研究NAA的最佳濃度，采用單因素完全隨機(jī)試驗(yàn)設(shè)計(jì)，NAA設(shè)四個(gè)濃度，依次為0. 1、0. 2、0. 3、0.4mg/L。 每瓶2個(gè)，每個(gè)處理接種5瓶，共10個(gè)腋芽，3次重復(fù)。 50d后統(tǒng)計(jì)花梗誘導(dǎo)率，再對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，從植物生長調(diào)節(jié)劑濃度及組合對(duì)花梗腋芽誘導(dǎo)培養(yǎng)的差異中篩選出較優(yōu)濃度及組合。 表2-1植物生長調(diào)節(jié)劑濃度及組合對(duì)花梗腋芽誘導(dǎo)的影響處理6-BA（mg/L）NAA(mg/L)接種數(shù)（個(gè)）活性炭（g/L）C100102C21.00102C33.00102C45.00102C57.00102河北聯(lián)合大學(xué)冀唐學(xué)院-6-C600.2102C71.00.2102C83.00.2102C95.00.2102C107.00.2102表2-2NAA對(duì)花梗腋芽誘導(dǎo)的影響處理6-BA（mg/L）NAA(mg/L)接種數(shù)（個(gè)）活性炭（g/L）C3.00.1102C3.00.2102C3.00.3102C3.00.41022.2.7統(tǒng)計(jì)與分析統(tǒng)計(jì)方法萌芽率=（萌芽的花梗腋芽數(shù)/接入花梗腋芽數(shù)）100%誘導(dǎo)率=（誘導(dǎo)出叢生芽的花梗數(shù)量/接入花梗腋芽數(shù)）100%平均出芽數(shù)=（誘導(dǎo)出的叢生芽數(shù)/接入花梗腋芽數(shù)）100%2.3蝴蝶蘭外植體褐變控制的研究2.3.1光學(xué)顯微鏡觀察取蝴蝶蘭新鮮花梗和培養(yǎng)15d已經(jīng)褐化的外植體，用鋒利的刀片薄薄的切一小段，立即放于載玻片上，用光學(xué)顯微鏡進(jìn)行結(jié)構(gòu)觀察，記錄并拍照。 2.3.2黑暗預(yù)處理對(duì)褐變率的影響將剛接種完畢的花梗腋芽進(jìn)行黑暗預(yù)處理，預(yù)處理設(shè)置4個(gè)處理5d黑暗預(yù)處理、10d黑暗預(yù)處理、15d黑暗預(yù)處理和CK（無黑暗預(yù)處理）。 4個(gè)處理均在人工智能培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)，溫度為251，濕度80%左右，CK光照為1800Lx，每天光照12h。 30d后統(tǒng)計(jì)褐變率，再對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，從不同時(shí)間黑暗預(yù)處理對(duì)褐變率的影響差異中篩選出較優(yōu)暗處理時(shí)間。 第2章材料與方法-7-2.3.3抗褐變劑對(duì)褐變率的影響在培養(yǎng)基中加入抗褐變劑，活性炭（AC）和聚乙烯吡咯烷酮（PVP），試驗(yàn)設(shè)計(jì)見表2-3，30d后統(tǒng)計(jì)褐變率，再對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，從不同抗褐變劑對(duì)褐變率的影響差異中篩選出較優(yōu)抗褐化劑。 表2-3抗褐變劑對(duì)褐變的影響的試驗(yàn)設(shè)計(jì)處理抗褐變率種類濃度A1AC1.0A2AC2.0A3AC3.0B1PVP1.0B2PVP2.0B3PVP3.02.3.4統(tǒng)計(jì)方法褐變率=（發(fā)生褐變的外植體數(shù)/接種總外植體數(shù)）100%河北聯(lián)合大學(xué)冀唐學(xué)院-8-第3章結(jié)果與分析3.1花梗腋芽誘導(dǎo)叢生芽的研究3.1.1取材部位對(duì)花梗腋芽萌發(fā)的影響由表3-1可知，不同取材部位對(duì)花梗腋芽萌芽率影響很大。 培養(yǎng)15d時(shí)，中部腋芽的萌芽率略高于上部腋芽，未達(dá)到顯著差異，但顯著高于下部腋芽萌芽率，上部腋芽萌芽率略高于下部腋芽，未達(dá)到顯著差異；培養(yǎng)30d后，中部腋芽萌芽率顯著高于其它兩個(gè)部位的萌芽率，上部腋芽萌芽顯著高于下部腋芽，均達(dá)到顯著差異。 從表3-1可以看出，中部腋芽萌芽時(shí)啟動(dòng)最快，并且一直遙遙領(lǐng)先，45d后萌芽率也最高，為80%。 從總體上看，不同部位的萌芽率比較中部腋芽上部腋芽下部腋芽。 這也許與不同部位的腋芽生長發(fā)育情況有關(guān)，未開花花梗下部生長勢(shì)最弱，萌發(fā)率低，上部腋芽雖然由于頂端優(yōu)勢(shì)，營養(yǎng)較豐富，但發(fā)育未成熟，萌發(fā)率居中；中部腋芽分化較為成熟，生長勢(shì)強(qiáng)，萌發(fā)率最高。 表3-1取材部位對(duì)花梗腋芽萌芽的影響處理萌芽率15d30d45d A1上部腋芽30%40%60%A2中部腋芽40%60%80%A3下部腋芽20%30%40%3.1.2基本培養(yǎng)基對(duì)花梗腋芽誘導(dǎo)的影響許多植物的花梗腋芽是休眠的花芽，將帶有腋芽的花梗莖段接種在適宜的人工培養(yǎng)基上，在外源激素的誘導(dǎo)下可以轉(zhuǎn)化為營養(yǎng)芽，進(jìn)一步發(fā)育成為一個(gè)新的小植株13。 第3章結(jié)果與分析-9-表3-2基本培養(yǎng)基對(duì)花梗腋芽誘導(dǎo)的影響不同的培養(yǎng)基所含鹽分種類和濃度不同。 B 1、B 2、B33種培養(yǎng)基鹽分種類相同，濃度依次減半，VW培養(yǎng)基與MS培養(yǎng)基相比，鹽分種類和濃度均不同。 將花梗置于不同的培養(yǎng)基后，發(fā)現(xiàn)B2處理花梗腋芽啟動(dòng)快，15d時(shí)變可看到腋芽膨大，在B2培養(yǎng)基上培養(yǎng)，誘導(dǎo)率最高，為80%，叢生芽生長情況良好。 其次為B3，花梗腋芽啟動(dòng)較快，誘導(dǎo)率較高，為60%，叢生芽生長狀況一般。 培養(yǎng)15d時(shí)，花梗在B1培養(yǎng)基上誘導(dǎo)率略高于B4，培養(yǎng)45d后，B1上的誘導(dǎo)率明顯高于B4，叢生芽在兩種培養(yǎng)基上的生長狀況均不良好。 結(jié)果表明，蝴蝶蘭花梗腋芽誘導(dǎo)的較優(yōu)基本培養(yǎng)基為B2培養(yǎng)基即1/2MS培養(yǎng)基，長勢(shì)良好。 3.1.3植物生長調(diào)節(jié)劑濃度及組合對(duì)花梗腋芽誘導(dǎo)率的影響本試驗(yàn)觀察結(jié)果表明，植物生長調(diào)節(jié)劑濃度及組合對(duì)蝴蝶蘭的花梗腋芽誘導(dǎo)培養(yǎng)有很大的影響。 由表3-3知，C8誘導(dǎo)率均顯著的高于其它各個(gè)處理，誘導(dǎo)率為80%，其次為C9處理，高于C 3、C 4、C7，但并未達(dá)到顯著水平。 表3-3植物生長調(diào)節(jié)劑濃度及組合對(duì)花梗芽誘導(dǎo)的影響處理接種數(shù)誘導(dǎo)率C1:1/2MS1010%C2:1/2MS+6-BA1.0mg/L1030%C3:1/2MS+6-BA3.0mg/L1060%C4:1/2MS+6-BA5.0mg/L1040%C5:1/2MS+6-BA7.0mg/L1020%C6:1/2MS+NAA0.2mg/L1010%處理接種數(shù)誘導(dǎo)率叢生芽生長狀況15d30d45d B11020%40%50%花梗褐變嚴(yán)重，誘導(dǎo)率低B21040%60%80%腋芽啟動(dòng)早，誘導(dǎo)率高B31030%50%60%誘導(dǎo)率一般，生長一般B41010%20%30%誘導(dǎo)率低，腋芽小河北聯(lián)合大學(xué)冀唐學(xué)院-10-C7:1/2MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.2mg/L1040%C8:1/2MS+6-BA3.0mg/L+NAA0.2mg/L1080%C9:1/2MS+6-BA5.0mg/L+NAA0.2mg/L1070%C10:1/2MS+6-BA7.0mg/L+NAA0.2mg/L1030%表3-4NAA對(duì)花梗腋芽誘導(dǎo)的影響處理接種數(shù)（個(gè)）誘導(dǎo)率C:1/2MS+6-BA3.0mg/L+NAA0.1mg/L1060%C:1/2MS+6-BA3.0mg/L+NAA0.2mg/L1080%C:1/2MS+6-BA3.0mg/L+NAA0.3mg/L1070%C:1/2MS+6-BA3.0mg/L+NAA0.4mg/L1050%由表3-4知，誘導(dǎo)率隨著NAA濃度的增加先升高后降低，處理C誘導(dǎo)率最高，與C、達(dá)到顯著差異；處理誘導(dǎo)率次之，雖未顯著低于C，但從誘導(dǎo)率考慮，處理C即C8處理6-BA3.0mg/L+NAA0.2mg/L的植物生長調(diào)節(jié)劑組合為最佳組合，誘導(dǎo)率最高，為80%。 3.2蝴蝶蘭外植體褐變控制的研究3.2.1細(xì)胞顯微結(jié)構(gòu)對(duì)蝴蝶蘭新鮮的和褐變的外植體進(jìn)行了細(xì)胞結(jié)構(gòu)的觀察，通過光學(xué)顯微鏡觀察外植體在褐變前后發(fā)生的變化。 從圖3-5可以看出，新鮮外植體（圖3-5）的細(xì)胞結(jié)構(gòu)完整，細(xì)胞飽滿，胞內(nèi)無有毒物質(zhì)的積累，而且細(xì)胞顏色為綠色；而發(fā)生褐變的外植體（圖3-5-2）細(xì)胞結(jié)構(gòu)被破壞，細(xì)胞壁有明顯的皺縮，有的地方斷裂比較明顯，細(xì)胞中有大量的黑色顆粒狀物質(zhì)，而且細(xì)胞明顯失綠，呈現(xiàn)黃色。 第3章結(jié)果與分析-11-圖3-5新鮮外植體和褐變外植體顯微結(jié)構(gòu)1新鮮外植體的顯微結(jié)構(gòu)2褐變外植體的顯微結(jié)構(gòu)3.2.2黑暗預(yù)處理對(duì)褐變率的影響由表3-6可以很明顯的看出，進(jìn)行黑暗預(yù)處理，可以有效的降低外植體的褐變率，15d黑暗預(yù)處理培養(yǎng)褐變率最低，為40%，15d黑暗預(yù)處理培養(yǎng)褐變率次之，為50%，所以，黑暗預(yù)處理10d為最佳時(shí)間。 表3-6黑暗預(yù)處理對(duì)褐變率的影響處理接種數(shù)（個(gè)）褐變率CK1070%5d1060%10d1040%15d1050%3.2.3抗褐變劑對(duì)褐變率的影響培養(yǎng)基中添加一定量的AC、PVP抗褐變劑能比較明顯地抑制褐變，降低褐變率，對(duì)外植體褐變率影響極顯著（見表3-7）。 抗褐變劑種類不同，其效果也不同。 在本試驗(yàn)中，AC對(duì)于防止外植體褐變效果最好，能推遲分泌物出現(xiàn)的時(shí)間，培養(yǎng)基變色部分的直徑也變小，最終降低了外植體的褐變率。 添加2mg/L時(shí)褐變率最低，為30%。 河北聯(lián)合大學(xué)冀唐學(xué)院-12-表3-7抗褐變劑對(duì)褐變率的影響處理接種數(shù)（個(gè)）褐變率A11060%A21030%A31040%B11060%B21050%第4章討論-13-第4章討論4.1花梗腋芽誘導(dǎo)叢生芽的研究蝴蝶蘭只有1個(gè)莖尖，如直接從開花植株取得莖尖或莖段，就會(huì)犧牲植株，以花梗側(cè)芽為外植體，不會(huì)犧牲母株，消毒容易，是較合適的部位，比莖尖、根尖等更具有應(yīng)用價(jià)值。 4.2不同部位的外植體對(duì)花梗腋芽萌發(fā)的影響蝴蝶蘭的花梗通常有45個(gè)腋芽，在進(jìn)行離體培養(yǎng)時(shí)不同位置的腋芽培養(yǎng)結(jié)果有較大的差異，據(jù)資料顯示，上部腋芽萌發(fā)率中部腋芽萌發(fā)率下部腋芽萌發(fā)率，具有明顯的頂端優(yōu)勢(shì)。 劉翠蘭14等人認(rèn)為，除最基部第一節(jié)外，都是花梗腋芽組織培養(yǎng)的好材料，而邵雙、關(guān)麗杰15認(rèn)為花梗第 一、二節(jié)為營養(yǎng)芽，第 三、四節(jié)為花芽，營養(yǎng)芽的誘導(dǎo)率大于花芽的誘導(dǎo)率。 本試驗(yàn)結(jié)果為中部側(cè)芽萌發(fā)率上部側(cè)芽萌發(fā)率下部萌發(fā)率。 這可能與花梗不同位置側(cè)芽的發(fā)育程度有關(guān)，下部腋芽可能與其處于休眠狀態(tài)有關(guān)，上部腋芽可能因?yàn)榘l(fā)育較早，已經(jīng)或部分實(shí)現(xiàn)了花芽分化。 而且用肉眼觀察花?；總?cè)芽的體積明顯比中、上部小，進(jìn)一步進(jìn)行花梗側(cè)芽形態(tài)學(xué)的觀察可能有助于解釋這種現(xiàn)象。 4.3基本培養(yǎng)基對(duì)花梗腋芽誘導(dǎo)的影響在離體培養(yǎng)條件下，不同植物的組織或器官對(duì)營養(yǎng)的要求不同，甚至同一種植物的不同部位組織、同一部位不同生長階段對(duì)營養(yǎng)的要求也不相同，只有滿足它們各自的特殊要求，才能正常生長。 李浚明16指出在建立一個(gè)新的實(shí)驗(yàn)材料體系時(shí)，為了能夠研制出一種適合的培養(yǎng)基，最好先由一種已被采用的基本培養(yǎng)基作為試驗(yàn)培養(yǎng)基開始。 當(dāng)通過一系列的實(shí)驗(yàn)，對(duì)這種培養(yǎng)基做了某些定性和定量的小變動(dòng)之后，即有可能得到一種能滿足實(shí)驗(yàn)需要的新培養(yǎng)基。 程廣有17也認(rèn)為要想對(duì)基本培養(yǎng)基加以改進(jìn)的話，最好首先降低MS培養(yǎng)基的各元素用量，其次，可以選擇在配料成分上與MS培養(yǎng)基有顯著不同的其他培養(yǎng)基加以試用對(duì)比。 MS培養(yǎng)基所含營養(yǎng)成分較全面，但濃度較高，花梗腋芽在此培養(yǎng)基上褐變較嚴(yán)重；在1/4MS上培養(yǎng)時(shí)，前期誘導(dǎo)率僅次于1/2MS，居第二；但在后期時(shí)，誘導(dǎo)率低于1/2MS大約20個(gè)百分點(diǎn)。 這可能是由于后期培養(yǎng)過程中，1/4MS培養(yǎng)基營養(yǎng)成分用盡無法滿足花梗腋芽的誘導(dǎo)導(dǎo)致誘導(dǎo)率偏低。 VW培養(yǎng)基顯著不同于MS培養(yǎng)基，不適于花梗腋芽的誘導(dǎo)。 河北聯(lián)合大學(xué)冀唐學(xué)院-14-4.4植物生長調(diào)節(jié)劑對(duì)花梗腋芽誘導(dǎo)率的影響基本培養(yǎng)基只能保證培養(yǎng)物的生存與最低生理活動(dòng)，只有配合使用適當(dāng)?shù)募に夭拍芨玫恼T導(dǎo)細(xì)胞分裂、愈傷組織生長、根、芽、莖的分化等。 植物生長調(diào)節(jié)劑是指一些對(duì)植物生長發(fā)育及生理活動(dòng)有特殊作用的生理活性物質(zhì)。 這類物質(zhì)極少量存在就對(duì)植物生命活動(dòng)起到調(diào)節(jié)作用，主要有生長素和分裂素。 生長素的作用主要是誘導(dǎo)愈傷組織的形成和根的形成，促進(jìn)細(xì)胞脫分化，常用的有NAA（萘乙酸）、IAA（吲哚乙酸）、IBA（吲哚丁酸）等。 細(xì)胞分裂素的作用主要是打破頂端優(yōu)勢(shì)，促進(jìn)叢生芽的形成和增殖，抑制根的生長，常用的有6-BA、玉米素等。 在植物的組織培養(yǎng)中，只有當(dāng)植物生長調(diào)節(jié)劑的種類、濃度合適時(shí)，才能誘導(dǎo)出最佳效果。 魯雪華等人18認(rèn)為花梗腋芽使用6-BA3.05.0mg/L+NAA0.10.3mg/L濃度及組合誘導(dǎo)效果最佳，秦凡，周吉源19認(rèn)為蝴蝶蘭花梗芽萌發(fā)梗在6-BA濃度為3.0mg/L時(shí)效果最好，誘導(dǎo)率達(dá)到79.20%，本試驗(yàn)研究結(jié)果與此相同，誘導(dǎo)率為80%。 4.5蝴蝶蘭外植體褐變控制的研究針對(duì)植物組織培養(yǎng)過程中普遍發(fā)生的褐變現(xiàn)象，人們利用不同植物材料從不同角度進(jìn)行了大量的研究2021，以探明褐變發(fā)生的機(jī)理，為控制褐變奠定理論基礎(chǔ)。 同時(shí)，以此為基礎(chǔ)，在尋求切實(shí)有效的抗褐變方法的道路上進(jìn)行著不懈的努力，并取得一定的成果。 本試驗(yàn)在前人的基礎(chǔ)上結(jié)合實(shí)際情況，研究出了控制蝴蝶蘭葉片褐變的方法。 光能提高酶的活性，促進(jìn)多種植物組培中酚的氧化。 對(duì)于易褐變的蝴蝶蘭葉片，初期培養(yǎng)時(shí)在黑暗下培養(yǎng)10d，并保持較低的溫度，可以降低酶的活性，防止酚類物質(zhì)氧化，進(jìn)而減輕褐變的產(chǎn)生。 培養(yǎng)基中加入抗褐變劑可以有效的防止褐變，這一觀點(diǎn)已被大多數(shù)人認(rèn)同2223，它們抗褐化機(jī)理各有不同。 吸附劑的主要作用在于通過氫鍵、范德華力等吸附力把有毒物質(zhì)從外植體周圍吸附掉。 活性炭是一種吸附性較強(qiáng)的無機(jī)吸附劑，但是活性炭的吸附?jīng)]有選擇性，吸附毒酚類物質(zhì)的同時(shí)也吸附培養(yǎng)基中的生長調(diào)節(jié)劑，卜學(xué)賢等24研究表明每毫克AC大約能吸附100g左右的生長調(diào)節(jié)物質(zhì)。 試驗(yàn)中在3g/L的活性炭中生長的外植體長勢(shì)變?nèi)?，大概就是因?yàn)榛钚蕴课搅舜罅康臓I養(yǎng)物質(zhì)所致，門福義25認(rèn)為活性炭的吸附能力是由其表面積決定，而不是由它在培養(yǎng)基中的含量第4章討論-15-決定，李琳也認(rèn)為26活性炭的吸附作用情況較復(fù)雜，活性炭的吸附原理還待于進(jìn)一步研究。 PVP是酚類物質(zhì)的專一吸附劑，生化分離制備中常用作酚類物質(zhì)和細(xì)胞器的保護(hù)劑，被許多學(xué)者用于防止褐變2728。 然而，有的學(xué)者通過試驗(yàn)證明PVP沒有普遍防止褐變的效果，因?yàn)橹参矬w內(nèi)存在著不同的酚類物質(zhì)，PVP也存在著不同分子量的類型29。 在本試驗(yàn)中，PVP沒有達(dá)到預(yù)想的抗褐變效果，也許是因?yàn)楹m種類不同，產(chǎn)生的酚類物質(zhì)也不同。 在植物組織培養(yǎng)中，抗褐變劑并沒有統(tǒng)一的規(guī)定，常因外植體不同，所選用的抗褐變劑種類和濃度不同，應(yīng)根據(jù)實(shí)際情況而定。 以上這些處理措施，都是治標(biāo)而非治本。 應(yīng)該對(duì)蝴蝶蘭褐變產(chǎn)生的原因、生理生化方面以及遺傳等方面進(jìn)行更廣泛的研究，才能從根本上根除蝴蝶蘭組織培養(yǎng)中產(chǎn)生的褐變有毒物。 此外，不論采取什么措施，都應(yīng)該既要保證預(yù)防褐變發(fā)生的效果良好，又要考慮經(jīng)濟(jì)實(shí)用性，還不能與外植體生長相矛盾，否則，褐變的控制就失去了意義。 參考文獻(xiàn)-16-參考文獻(xiàn)1胡松華熱帶蘭花Mxx，3 （1）中國林業(yè)出版社452胡松華蝴蝶蘭品種栽培鑒賞M廣州:廣東科技出版社，19963黃勝琴，郭建軍，葉慶生，等溫度對(duì)蝴蝶蘭成花誘導(dǎo)的研究初探J中山大學(xué)學(xué)報(bào)（自然科學(xué)版），xx，42 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