分離土壤中分解尿酸的細(xì)菌 實(shí)驗報告

分離土壤中分解尿素的細(xì)菌和計數(shù) 制作：鄒霖1.實(shí)驗?zāi)康模簭耐寥乐蟹蛛x出能夠分解尿素的細(xì)菌，計數(shù)2.實(shí)驗原理：A.培養(yǎng)基中加入唯一氮源-尿素，能分解尿素的細(xì)菌自身能夠合成脲酶，能夠分解利用尿素中的氮元素，從而能夠生存繁殖；不能分解尿素的細(xì)菌的繁殖受到抑制，從而達(dá)到分離出土壤中能分解尿素的細(xì)菌的作用。B.使用酚紅鑒定尿素是否被分解.CO(NH2)2分解產(chǎn)生NH3使溶液顯堿性.如果尿素被分解，則酚紅會顯紅色，C.分解原理.CO(NH2)2+H2O=脲酶=CO2+NH3 D.稀釋涂布平板法. 將菌液進(jìn)行一系列的梯度稀釋，然后將不同稀釋濃度的菌液分別涂布到瓊脂固體培養(yǎng)基的表面，進(jìn)行培養(yǎng)，在稀釋度足夠高的菌液里，聚集在一起的微生物被分散成單個細(xì)胞，從而能在培養(yǎng)基表面形成單個的菌落。E.計數(shù)菌落，一個或幾個細(xì)菌可以繁殖為一個肉眼可見的菌落（計數(shù)結(jié)果低于實(shí)際細(xì)菌數(shù)）3.提出問題：尿素分解后NH3的產(chǎn)生是否會影響實(shí)驗？4.做出假設(shè)：尿素分解后NH3的產(chǎn)生會影響實(shí)驗。5.實(shí)驗材料用具：超凈工作臺、取樣鏟、試管、錐形瓶、恒溫培養(yǎng)箱、培養(yǎng)皿、高壓蒸汽滅菌鍋、酒精燈、酒精、無菌水、地面以下3-8CM處的土壤、培養(yǎng)基A（磷酸二氫化鉀 1.4g 磷酸氫化二鈉 2.1g 七水合硫酸鎂 0.2g 葡萄糖10g 尿素1g 瓊脂 15g）培養(yǎng)基B（牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基） 涂布器、干熱滅菌箱、燒杯、膠頭滴管6.實(shí)驗步驟： 1.對實(shí)驗用具消毒滅菌；按配方稱取上述物質(zhì)，將上述物質(zhì)溶解后，用蒸餾水定容到1000ml。 2.配置好培養(yǎng)基后，將培養(yǎng)基A.B倒置都放入恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)1d，取出后觀察是否產(chǎn)生了菌落，若無，則繼續(xù)下一步實(shí)驗。若有，重做(_) 3.系列稀釋：將分別盛有9ml水的5只試管和90ml水的1個錐形瓶滅菌，并按1010的順序編號 錐形瓶編號10。將10g符合條件的土壤放入錐形瓶中，震蕩錐形瓶，用移液管吸取1ml菌液，注入標(biāo)有10的試管中，用手輕壓移液管上的橡皮頭，吹吸三次，使菌液與水充分混勻。以此類推，直到完成最后一只試管的稀釋。（注意：移液管需要經(jīng)過滅菌，操作時，試管口和移液管應(yīng)在離火焰12cm處） 4.涂布平板：將涂布器浸在盛有酒精的燒杯中，分別取10. 10 . 10中的少量菌液，分別各滴加到3個培養(yǎng)基A（總計9個）的表面，注明培養(yǎng)基種類，培養(yǎng)日期以及平板上培養(yǎng)樣品的稀釋程度，取少量無菌水滴加到1個培養(yǎng)基中作為空白對照組，取少量菌液滴加到培養(yǎng)基B中（判斷選擇培養(yǎng)基是否起到了選擇作用），將沾有少量酒精的涂布器在火焰上引燃，待酒精燃盡后，冷卻8-10S。用涂布器將菌液均勻的涂布在每個培養(yǎng)基表面（每次涂布前都必須用酒精燈灼燒）涂布時可轉(zhuǎn)動培養(yǎng)皿，使菌液分布均勻。 5.將培養(yǎng)基倒置并放入恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)1-2d 6.相同稀釋程度的3個培養(yǎng)基統(tǒng)計其菌落數(shù)（30-300） 取平均值。 7. 實(shí)驗結(jié)果：1.空白對照組無菌落。 2.培養(yǎng)基B上的菌落數(shù)目