免疫學(xué)技術(shù)在科研中的應(yīng)用ppt課件

免疫學(xué)技術(shù)在科研中的應(yīng)用 1 免疫新技術(shù)在科研中的應(yīng)用 廈門大學(xué)醫(yī)學(xué)院高豐光 免疫學(xué)技術(shù)在科研中的應(yīng)用 2 抗原或抗體的檢測(cè) 抗原抗體反應(yīng)的特點(diǎn)抗原抗體反應(yīng)的影響因素常用的抗原抗體反應(yīng) 免疫學(xué)技術(shù)在科研中的應(yīng)用 3 抗原抗體反應(yīng)的特點(diǎn) 高度的特異性可逆性抗原抗體結(jié)合除了空間構(gòu)象互補(bǔ)外 主要以氫鍵 靜電引力 范德華力和疏水鍵等分子表面的化學(xué)基團(tuán)之間的非共價(jià)方式結(jié)合 這種非共價(jià)鍵不如共價(jià)鍵結(jié)合穩(wěn)定 極易受溫度 酸堿度和離子強(qiáng)度的影響而解離 抗原抗體比例影響免疫復(fù)合物的大小抗原抗體反應(yīng)的兩個(gè)階段 免疫學(xué)技術(shù)在科研中的應(yīng)用 4 抗原抗體反應(yīng)的影響因素 抗原抗體濃度與比例電解質(zhì)抗原抗體特異性結(jié)合后 親水性降低 易受電解質(zhì)的影響而使表面失去較多的負(fù)電荷 溫度適當(dāng)?shù)臏囟瓤稍黾涌乖c抗體分子的碰撞機(jī)會(huì) 加速抗原抗體復(fù)合物的形成 酸堿度抗原抗體反應(yīng)的最適pH在6 8之間 pH過高或過低 即過堿或過酸 均可影響抗原 抗體的理化性質(zhì) 免疫學(xué)技術(shù)在科研中的應(yīng)用 5 常用的抗原抗體反應(yīng) 凝集反應(yīng)沉淀反應(yīng)免疫標(biāo)記技術(shù) 免疫學(xué)技術(shù)在科研中的應(yīng)用 6 凝集反應(yīng) 直接凝集反應(yīng)血型鑒定肥大反應(yīng)間接凝集反應(yīng)間接凝集抑制試驗(yàn)微粒捕獲酶免疫分析技術(shù) 免疫學(xué)技術(shù)在科研中的應(yīng)用 7 間接凝集反應(yīng) 將可溶性抗原或抗體吸附在與免疫無關(guān)的顆粒載體上 形成致敏顆粒 再與相應(yīng)抗體或抗原進(jìn)行反應(yīng)產(chǎn)生的凝集反應(yīng) 稱為間接凝集反應(yīng) 顆粒載體有紅細(xì)胞 聚苯乙烯乳膠顆粒 活性炭顆粒 而相應(yīng)的凝集現(xiàn)象分別稱為間接血球凝集 間接乳膠凝集 間接炭粒凝集反應(yīng) 免疫學(xué)技術(shù)在科研中的應(yīng)用 8 免疫學(xué)技術(shù)在科研中的應(yīng)用 9 微粒捕獲酶免疫分析技術(shù) 將已知特異性抗體致敏的免疫微粒與生物素 親和素 酶放大系統(tǒng)相結(jié)合 最后酶作用于熒光底物 使之發(fā)熒光 通過檢測(cè)熒光強(qiáng)度判斷待測(cè)抗原的含量 檢測(cè)腫瘤標(biāo)記物CAl99 CEA CAl25 AFP 性激素 甲狀腺素T T 葉酸 HIV抗體 HCG等微量可溶性抗原 免疫學(xué)技術(shù)在科研中的應(yīng)用 10 免疫學(xué)技術(shù)在科研中的應(yīng)用 11 沉淀反應(yīng) 速率散射比濁法 免疫比濁法瓊脂擴(kuò)散法單向瓊脂擴(kuò)散雙向瓊脂擴(kuò)散火箭電泳對(duì)流免疫電泳免疫印跡技術(shù) 免疫學(xué)技術(shù)在科研中的應(yīng)用 12 速率散射比濁法 免疫比濁法 將已知抗體與相應(yīng)抗原在液相中按一定比例混合形成可溶性免疫復(fù)合物 這些復(fù)合物微小粒子對(duì)一定波長(zhǎng)的光照射發(fā)生散射 可通過三個(gè)光路系統(tǒng)測(cè)定光散射 OD值 抗體含量固定并處于抗體過剩時(shí) 免疫復(fù)合物的多少直接取決于抗原的濃度 抗原的終濃度通過標(biāo)準(zhǔn)品繪出的標(biāo)準(zhǔn)曲線查出 提高了靈敏度 通過自動(dòng)化 可同時(shí)檢測(cè)多個(gè)樣品并進(jìn)行精確的定量分析 檢測(cè)前白蛋白 酸性蛋白酶 巨球蛋白 轉(zhuǎn)鐵蛋白 尿微量蛋白及IgG IgM IgA及補(bǔ)體 藥物含量分析 免疫學(xué)技術(shù)在科研中的應(yīng)用 13 免疫學(xué)技術(shù)在科研中的應(yīng)用 14 免疫學(xué)技術(shù)在科研中的應(yīng)用 15 免疫印跡技術(shù) 將用SDS 聚丙烯酰胺凝膠電泳PAGE分離得到的按分子量大小排列的非標(biāo)記蛋白轉(zhuǎn)移到固相載體膜上 再用標(biāo)記的特異性的抗血清或單克隆抗體對(duì)蛋白質(zhì)進(jìn)行定性及定量分析的技術(shù) 其鑒定蛋白質(zhì)的敏感性為1 5ng 檢測(cè)可溶性抗原 細(xì)胞成分的鑒定與分析 檢測(cè)與自身變性細(xì)胞核成分結(jié)合的抗體 抗核抗體 HIV的明確診斷 免疫學(xué)技術(shù)在科研中的應(yīng)用 16 免疫印跡法的基本步驟 電泳分離蛋白抗原 SDS是一種陰離子去污劑 與蛋白質(zhì)牢固結(jié)合 十二烷基磺酸根帶負(fù)電荷 使樣品中各種蛋白質(zhì)與SDS形成SDS 蛋白質(zhì)復(fù)合物 由于蛋白質(zhì)表面均帶有相同密度的負(fù)電荷 使分子構(gòu)型幾乎相同 線性 因此SDS PAGE中 SDS多肽復(fù)合物的電泳遷移率只與其分子質(zhì)量有關(guān) 而不受所帶電荷及分子形態(tài)的影響 將SDS PAGE分離到的蛋白條帶轉(zhuǎn)移至固相的硝酸纖維素膜上 蛋白條帶可用酶 同位素標(biāo)記的一抗或二抗進(jìn)行特異性反應(yīng) 加入顯色底物或放射自顯影以顯示結(jié)果 免疫學(xué)技術(shù)在科研中的應(yīng)用 17 免疫學(xué)技術(shù)在科研中的應(yīng)用 18 免疫標(biāo)記技術(shù) 免疫酶測(cè)定法免疫熒光技術(shù)放射免疫測(cè)定法免疫膠體金技術(shù) 免疫學(xué)技術(shù)在科研中的應(yīng)用 19 免疫酶測(cè)定法 是一種用酶標(biāo)記一抗或二抗檢測(cè)特異性抗原或抗體的方法 將抗原 抗體反應(yīng)的高度特異性與酶對(duì)底物的高效催化作用有效地結(jié)合起來 通過酶分解底物產(chǎn)生有色物質(zhì) 也可作用于熒光底物 產(chǎn)生熒光 肉眼觀察顏色深淺或酶標(biāo)儀測(cè)定光密度值 OD 以反映抗原或抗體的含量 本法靈敏度高 檢測(cè)可溶性抗原或抗體 組織或細(xì)胞表面特異性抗原 免疫學(xué)技術(shù)在科研中的應(yīng)用 20 免疫學(xué)技術(shù)在科研中的應(yīng)用 21 ELISA 雙抗體夾心法 sandwichassay 檢測(cè)血清 腦脊液 胸 腹水等各種液相中的可溶性抗原間接法測(cè)定細(xì)胞及組織表面抗原 免疫學(xué)技術(shù)在科研中的應(yīng)用 22 免疫學(xué)技術(shù)在科研中的應(yīng)用 23 酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)試驗(yàn) enzyme linkedimmunospotassay ELISPOT 用已知細(xì)胞因子的抗體包被固相載體 加入待檢效應(yīng)細(xì)胞 溫育一定時(shí)間后洗去細(xì)胞 如待檢效應(yīng)細(xì)胞產(chǎn)生相應(yīng)細(xì)胞因子 則與已包被的抗體結(jié)合 再加入酶標(biāo)記抗該細(xì)胞因子抗體 加底物顯色 一般選擇硝酸纖維素膜 NC 或聚偏二氟乙烯 PVDF 膜覆蓋微量反應(yīng)板作為固相 在分泌相應(yīng)細(xì)胞因子的細(xì)胞所在局部呈現(xiàn)有色斑點(diǎn) 一個(gè)斑點(diǎn)表示一個(gè)分泌相應(yīng)細(xì)胞因子的細(xì)胞 通過計(jì)數(shù)可推算出分泌某種細(xì)胞因子細(xì)胞的頻率 免疫學(xué)技術(shù)在科研中的應(yīng)用 24 免疫學(xué)技術(shù)在科研中的應(yīng)用 25 免疫學(xué)技術(shù)在科研中的應(yīng)用 26 免疫熒光技術(shù) 用熒光素標(biāo)記一抗或二抗 檢測(cè)特異性抗原或抗體的方法 常用的熒光素有異硫氰酸熒光素 nuoresceinisothiocyanate FITC 藻紅蛋白 phycoerythrin PE 等 在激發(fā)光的作用下 可直接發(fā)射熒光 前者發(fā)黃綠色熒光 后者發(fā)紅色熒光 免疫學(xué)技術(shù)在科研中的應(yīng)用 27 ImmunofluorescentstainofimmunoglobulinG IgG showinglinearpatterninGoodpasture ssyndrome 免疫學(xué)技術(shù)在科研中的應(yīng)用 28 天皰瘡免疫熒光染色 免疫學(xué)技術(shù)在科研中的應(yīng)用 29 放射免疫測(cè)定法 用放射性同位素標(biāo)記抗原或抗體進(jìn)行的免疫測(cè)定 既有同位素的敏感性又有抗原抗體結(jié)合的特異性 同時(shí)具有重復(fù)性好 準(zhǔn)確性高 標(biāo)本用量少等優(yōu)點(diǎn) 廣泛應(yīng)用于激素 藥物等微量物質(zhì)的檢測(cè) 免疫學(xué)技術(shù)在科研中的應(yīng)用 30 免疫膠體金技術(shù) 氯金酸 HAuCl 在還原劑作用下 產(chǎn)生分散狀態(tài)的膠體金顆粒 堿性條件下 金顆粒表面帶負(fù)電荷 與蛋白質(zhì)正電荷基團(tuán)結(jié)合 膠體金可標(biāo)記白蛋白 免疫球蛋白 糖蛋白 激素 脂蛋白 植物血凝素 卵白素等 大分子以單層形式吸附在金顆粒表面 不同還原劑作用于氯金酸 產(chǎn)生的膠體金粒徑大小不相同 5 50nm 小粒徑的膠體金由于穿透性好 電子密度高 常被用于免疫電鏡技術(shù) 這些小粒徑的金顆粒 經(jīng)銀顯影液處理后 金粒子還原銀離子生成銀顆粒而吸附在金顆粒周圍呈黑褐色 從而放大了金顆粒的顯色效果 又稱免疫金銀法 膠體金顏色隨顆粒大小而變化 大于20nm的金顆粒在光鏡下呈現(xiàn)磚紅色 可在光鏡水平行免疫分析 也可用銀顯影劑增強(qiáng) 進(jìn)一步提高靈敏度 當(dāng)膠體金的粒徑較大 濃度密集時(shí)肉眼水平即可觀察 即膠體金斑點(diǎn)滲濾試驗(yàn)和膠體金斑點(diǎn)免疫層析試驗(yàn) 免疫學(xué)技術(shù)在科研中的應(yīng)用 31 免疫學(xué)技術(shù)在科研中的應(yīng)用 32 免疫細(xì)胞的檢測(cè) 免疫細(xì)胞的分離磁珠分離法fluorescence activatedcellsorter FACS免疫細(xì)胞功能的測(cè)定T細(xì)胞B細(xì)胞 免疫學(xué)技術(shù)在科研中的應(yīng)用 33 磁珠分離法 特異性分離所需淋巴細(xì)胞的方法 將特異性抗體 如抗CD3 抗CD4 抗CD8等 吸附在鐵顆粒 磁珠 上 加至細(xì)胞懸液中 具有相應(yīng)抗原的細(xì)胞與磁珠上的特異性抗體結(jié)合 反應(yīng)管置于磁場(chǎng)中 鐵顆粒受磁場(chǎng)的吸引 攜帶有相應(yīng)細(xì)胞的磁球吸附于靠近磁鐵的管壁上 棄細(xì)胞懸液 重新解離細(xì)胞與磁珠 免疫學(xué)技術(shù)在科研中的應(yīng)用 34 免疫學(xué)技術(shù)在科研中的應(yīng)用 35 fluorescence activatedcellsorter FACS 免疫學(xué)技術(shù)在科研中的應(yīng)用 36 免疫學(xué)技術(shù)在科研中的應(yīng)用 37 免疫學(xué)技術(shù)在科研中的應(yīng)用 38 T細(xì)胞鑒定及功能測(cè)定 使用酶 免疫熒光標(biāo)記單抗進(jìn)行鑒定淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化試驗(yàn)E花環(huán)形成試驗(yàn)混合淋巴細(xì)胞培養(yǎng)CTL介導(dǎo)的細(xì)胞毒試驗(yàn) 免疫學(xué)技術(shù)在科研中的應(yīng)用 39 抗原肽 MHC分子四聚體技術(shù)tetramer 用生物素化的抗原肽 MHC分子復(fù)合物與熒光標(biāo)記的親合素結(jié)合 由于1個(gè)熒光素標(biāo)記的親合素可結(jié)合4個(gè)生物素分子 能使4個(gè)MHC 抗原肽復(fù)合物形成一個(gè)復(fù)合體 將該復(fù)合體標(biāo)記熒光素后 即成抗原特異性四聚體 抗原特異性四聚體能與樣品中的特異性T細(xì)胞的TCR結(jié)合 由于四聚體能同時(shí)結(jié)合一個(gè)T細(xì)胞表面的4個(gè)TCR 親和力大大提高 用流式細(xì)胞術(shù)即可確定待檢標(biāo)本中抗原特異性CTL細(xì)胞的頻率 MHC分子可為工類或 類分子 與抗原肽形成的四聚體復(fù)合物 可分別鑒定表達(dá)特異性TCR的CD8 T細(xì)胞及CD4 T細(xì)胞的頻率 免疫學(xué)技術(shù)在科研中的應(yīng)用 40 免疫學(xué)技術(shù)在科研中的應(yīng)用 41 B細(xì)胞的鑒定及功能測(cè)定 檢測(cè)B細(xì)胞分化抗原測(cè)定B細(xì)胞產(chǎn)生抗體的能力溶血空斑試驗(yàn)ELISPOT 免疫學(xué)技術(shù)在科研中的應(yīng)用 42 細(xì)胞因子的檢測(cè) 生物活性檢測(cè)細(xì)胞增生或增生抑制法細(xì)胞病變抑制法趨化作用測(cè)定法免疫學(xué)檢測(cè)法分子生物學(xué)技術(shù) 免疫學(xué)技術(shù)在科研中的應(yīng)用 43 基因敲除技術(shù)和轉(zhuǎn)基因動(dòng)物 應(yīng)用基因同源重組 將外源有功能基因 基因組中原先不存在 或已失活的基因 轉(zhuǎn)入細(xì)胞與基因組中的同源序列進(jìn)行同源重組 插人到基因組中 在細(xì)胞內(nèi)獲得表達(dá) 通過同源重組產(chǎn)生目標(biāo)基因缺失或失活的轉(zhuǎn)基因動(dòng)物可以確定被敲除的基因在體內(nèi)代謝過程中的作用 還可確定被敲除基因在分化 發(fā)育 生存等過程中的作用和必要性 轉(zhuǎn)基因動(dòng)物可以作為疾病模型 可以用于藥物篩選的動(dòng)物模型 轉(zhuǎn)基因動(dòng)物可作為 生物反應(yīng)器 生產(chǎn)藥物 免疫學(xué)技術(shù)在科研中的應(yīng)用 44 Th細(xì)胞在mCTL介導(dǎo)的腫瘤保護(hù)中作用的研究 免疫學(xué)技術(shù)在科研中的應(yīng)用 45 相關(guān)說明 OT 1mice 表達(dá)SIINFEKL特異性TCROVA 雞卵白蛋白OVACTLepitope SIINFEKLOVAThepitope ISQAVHAAHAEI NEAGROVA OVT RAG 1KOmice C57BL 6mice IFA CFA KLHEG7celllineEL4cellline 免疫學(xué)技術(shù)在科研中的應(yīng)用 46 相關(guān)步驟 mCTLandeCTLgenerationOT 1細(xì)胞轉(zhuǎn)輸RAG 1 基因敲除小鼠 2天后以O(shè)T 1TCR特異性表位多肽SIINFEKL免疫 specificThgenerationOVA特異性和非特異性Th表位多肽免疫C57BL 6小鼠以產(chǎn)生特異性和非特異性Th細(xì)胞 mCTLtransfer記憶性CTL轉(zhuǎn)輸已產(chǎn)生特異性和非特異性Th的C57BL 6小鼠 tumorchallenge接種表達(dá)OVA抗原的腫瘤細(xì)胞EG7 免疫學(xué)技術(shù)在科研中的應(yīng)用 47 GenerationofOvalbumin specificMemoryCD8TCells OT 1lymphnodescellsweretransferredtoRAG micethroughtailveininjection andmicewereimmunizedwith50ugofSIINFEKLpeptideinCFA1daylater Atday7 14 21 miceweresacrificed andsplenocytesorlymphnodescellswereisolatedandanalyzed ThepercentageofCD44high SIINFEKL specificCD8Tcellswasassessedbythree colorFACSstainingwithSIINFEKLMHCclassItetramerandantibodiestoCD8andCD44 PlotsshownaregatedontheSIINFEKLtetramerpositivelymphocytes valuesaremeanpercentagesofCD44cellswithintheSIINFEKLtetramer positivepopulation 免疫學(xué)技術(shù)在科研中的應(yīng)用 48 免疫學(xué)技術(shù)在科研中的應(yīng)用 49 免疫學(xué)技術(shù)在科研中的應(yīng)用 50 免疫學(xué)技術(shù)在科研中的應(yīng)用 51 免疫學(xué)技術(shù)在科研中的應(yīng)用 52 CD8 MemoryTCellsNeedAntigen specificCD4 T helperCellstoAchieveTumorProtection OvalbuminCTLepitope SIINFEKL specificTcellswereparkedinRag micefor42daystogeneratemCTLandthenadoptivelytransferredtoC57BL 6mice TwogroupsofrecipientC57BL 6Jmicewereimmunized8dayspriorwith50ugofOVTinincompleteFreund sadjuvantor20ugkeyholelimpethemocyanin KLH proteinascontrolinincompleteFreund sadjuvant Micewerechallengedwithovalbumin expressingtumorcells EG7 inthescruffoftheneck1dayafteradoptivetransfer NormalC57BL 6controlmicewerechallengedwithEG7withoutanytreatment 免疫學(xué)技術(shù)在科研中的應(yīng)用 53 免疫學(xué)技術(shù)在科研中的應(yīng)用 54 Absenceoftumorprotectioninmicewithoutantigen specificT helpercellsisnotbecauseoflowerlevelsoftumorantigen SIINFEKL specificCD8 Tcells mCTLsweretransferredtogroupsofC57BL 6micewithorwithoutimmunization8dayspriorwith50ugofOVTorwith20ugofKLHproteincontrol C57BL 6controlgroupwasgivennotreatment IFN Elispotassayswereperformedusingthesplenocytesofthesemice whichwerechallengedinvitrowith A 1ug mlSIINFEKLpeptideor B 8ug mlOVAT helperpeptidetodeterminethepresenceofovalbumin specificCD8 CTLsandCD4 T helpercells 免疫學(xué)技術(shù)在科研中的應(yīng)用 55 免疫學(xué)技術(shù)在科研中的應(yīng)用 56 IncontrasttomCTLs eCTLsdonotneedThelptokilltumor eCTLsgeneratedfromRAG miceweretransferredat A day7or B day14toC57BL 6micethathadbeenimmunized8daysearlierwith50ugofOVTorascontrol20ugofKLH C57BL 6micewithoutanytreatmentwereusedascontrols EG7andEL4controls Ovalbumin expressingtumorcells EG7 wereinjectedunderscruffoftheneckofsomegroupsofmiceat A day7or B day14 TheparenttumorcelllineEL4thatdoesnotcontainovalbumingenewasinjectedintoothergroupsofmiceatday7 A asnonspecifictumorcontrol 免疫學(xué)技術(shù)在科研中的應(yīng)用 57 免疫學(xué)技術(shù)在科研中的應(yīng)用 58 Studyofthelong livedmemoryCD8 TcellsgeneratedinC57BL 6Jmice OvalbuminCTLepitope SIINFEKL specificOT 1cellswereadoptivelytransferredtosyngeneicC57BL 6mice micewereimmunizedwithSIINFEKL CFAtoactivateovalbumin specificCD8 Tcells andthemicewerekeptfor100daystoensurethatalltransferredOT 1areoflong livedmemoryphenotypebeforechallengingwithtumor Eightdaysbeforetumorchallenge twogroupsofmicewereimmunizedwith50ugofOVTinincompleteFreund sadjuvant UntreatedC57BL 6micewerealsochallengedwithtumorasnegativecontrol Micewerechallengedunderscruffoftheneckwithovalbumin expressingtumorcellline EG7 orwiththeparenttumorline EL4 ascontrol 免疫學(xué)技術(shù)在科研中的應(yīng)用 59 免疫學(xué)技術(shù)在科研中的應(yīng)用 60 免疫學(xué)技術(shù)在科研中的應(yīng)用 61 免疫學(xué)技術(shù)在科研中的應(yīng)用 62 1 RoweHM LopesL IkedaY etal ImmunizationwithalentiviralvectorstimulatesbothCD4andCD8TcellresponsestoanovalbumintransgeneMOLECULARTHERAPY13 2 310 319FEB2006TimesCited 02 ThompsonJA DissanayakeSK KsanderBR etal TumorcellstransducedwiththeMHCclassIItransactivatorandCD80activatetumor specificCD4 TcellswhetherornottheyaresilencedforinvariantchainCANCERRESEARCH66 2 1147 1154JAN152006TimesCited 03 SalucciV MennuniC CalvarusoF etal CD8 T celltolerancecanbebrokenbyanadenoviralvaccinewhileCD4 T celltoleranceisbrokenbyadditionalco administrationofaToll likereceptorligandSCANDINAVIANJOURNALOFIMMUNOLOGY63 1 35 41JAN2006TimesCited 04 RadfordKJ VariF HartDNJVaccinestrategiestotreatlymphoproliferativedisordersPATHOLOGY37 6 534 550DEC2005TimesCited 15 HuDE KettunenMI BrindleKMMonitoringT lymphocytetraffickingintumorsundergoingimmunerejectionMAGNETICRESONANCEINMEDICINE54 6 1473 1479DEC2005TimesCited 06 VanMeirvenneS DullaersM HeirmanC etal InvivodepletionofCD4 CD25 regulatoryTcellsenhancestheantigen specificprimaryandmemoryCTLresponseelicitedbymaturemRNA electroporateddendriticcellsMOLECULARTHERAPY12 5 922 932NOV2005TimesCited 27 MiyazakiM NakatsuraT YokomineK etal DNAvaccinationofHSP105leadstotumorrejectionofcolorectalcancerandmelanomainmicethroughactivationofbothCD4 TcellsandCD8 TcellsCANCERSCIENCE96 10 695 705OCT2005TimesCited 18 KumaraguruU BanerjeeK RouseBTInvivorescueofdefectivememoryCD8 TcellsbycognatehelperTcellsJOURNALOFLEUKOCYTEBIOLOGY78 4 879 887OCT2005TimesCited 0 9 Ostrand RosenbergSCD4 Tlymphocytes AcriticalcomponentofantitumorimmunityCANCERINVESTIGATION23 5 413 4192005TimesCited 210 KnutsonKL DisisMLTumorantigen specificThelpercellsincancerimmunityandimmunotherapyCANCERIMMUNOLOGYIMMUNOTHERAPY54 8 721 728AUG2005TimesCited 411 KutzlerMA RobinsonTM ChattergoonMA etal CoimmunizationwithanoptimizedIL 15plasmidresultsinenhancedfunctionandlongevityofCD8TcellsthatarepartiallyindependentofCD4TcellhelpJOURNALOFIMMUNOLOGY175 1 112 123JUL12005TimesCited 212 Meyer WentrupF RichterG BurdachSIdentificationofanimmunogenicEWS FLI1 derivedHLA DR restrictedThelpercellepitopePEDIATRICHEMATOLOGYANDONCOLOGY22 4 297 308JUN2005TimesCited 013 TimarJ LadanyiA Forster HorvathC etal NeoadjuvantimmunotherapyoforalsquamouscellcarcinomamodulatesintratumoralCD4 CD8ratioandtumormicroenvironment AmulticenterphaseIIclinicaltrialJOURNALOFCLINICALONCOLOGY23 15 3421 3432MAY202005TimesCited 114 TscharkeDC SuhrbierAFrommicetohumansmurineintelligenceforhumanCD8 TcellvaccinedesignEXPERTOPINIONONBIOLOGICALTHERAPY5 2 263 271FEB2005TimesCited 115 VilladaIB BarraccoMM ZiolM etal Spontaneousregressionofgrade3vulvarintraepithelialneoplasiaassociatedwithhumanpapillomavirus 16 specificCD4 andCD8 T cellresponsesCANCERRESEARCH64 23 8761 8766DEC12004TimesCited 316 AltinJG vanBroekhovenCL ParishCRTargetingdendriticcellswithantigen containingliposomes antitumourimmunityEXPERTOPINIONONBIOLOGICALTHERAPY4 11 1735 1747NOV2004TimesCited 117 LeggattGR NarayanS FernandoGJP etal Changestopeptidestructure notconcentration contributetoexpansionofthelowestaviditycytotoxicTlymphocytesJOURNALOFLEUKOCYTEBIOLOGY76 4 787 795OCT2004TimesCited 0 18 HsuehEC FarnatigaE ShuS etal PeripheralbloodCD4 T cellresponsebeforepostoperativeactiveimmunotherapycorrelateswithclinicaloutcomeinmetastaticmelanomaANNALSOFSURGICALONCOLOGY11 10 892 899OCT2004TimesCited 019 HiraokaK YamamotoS OtsuruS etal Enhancedtumor specificlong termimmunityofhemaggluttinatingvirusofJapan mediateddendriticcell tumorfusedcellvaccination bycoadministrationwithCpGoligodeoxynucleotidesJOURNALOFIMMUNOLOGY173 7 4297 4307OCT12004TimesCited 120 ChiangEY StroynowskiIAnonclassicalMHCclassImoleculerestrictsCTL mediatedrejectionofasyngeneicmelanomatumorJOURNALOFIMMUNOLOGY173 7 4394 4401OCT12004TimesCited 321 WongR LauR ChangJ etal ImmuneresponsestoaclassIIhelperpeptideepitopeinpatientswithstageIII IVresectedmelanomaCLINICALCANCERRESEARCH10 15 5004 5013AUG12004TimesCited 622 SunJB ErikssonK LiBL etal VaccinationwithdendriticcellspulsedinvitrowithtumorantigenconjugatedtocholeratoxinefficientlyinducesspecificturnoricidalCD8 cytotoxiclymphocytesdependentoncyclicAMPactivationofdendriticcellsCLINICALIMMUNOLOGY112 1 35 44JUL2004TimesCited 323 ZollerMImmunotherapyofcancerfortheelderlypatient doesallogeneicbonemarrowtransplantationafternonmyeloablativeconditioningprovideanewoption CANCERIMMUNOLOGYIMMUNOTHERAPY53 8 659 676AUG2004TimesCited 124 ChenQY JacksonH ParenteP etal ImmunodominantCD4 responsesidentifiedinapatientvaccinatedwithfull lengthNY ESO 1formulatedwithISCOMATRIXadjuvantPROCEEDINGSOFTHENATIONALACADEMYOFSCIENCESOFTHEUNITEDSTATESOFAMERICA101 25 9363 9368JUN222004TimesCited 1225 NichollM LodgeA BrownI etal RestoredimmuneresponsetoanMHC II restrictedantigenintumor bearinghostsaftereliminationofregulatoryTcellsJOURNALOFPEDIATRICSURGERY39 6 941 946JUN2004TimesCited 3 26 ShenL SchroersR HammerJ e