皮膚科實驗室檢查技術(shù)操作常規(guī).doc

常見皮膚科實驗室檢查技術(shù)操作常規(guī)一真菌（癬菌）直接鏡檢【方法】1取材部位：臨床醫(yī)師采取頭癬，體癬，股癬，足癬，甲癬標(biāo)本。2操作方法：將標(biāo)本置于載玻片上，加一滴5-10%KOH，加蓋玻片，在酒精燈火焰上過三次以消化角質(zhì)蛋白，普通光學(xué)顯微鏡下檢查?！窘Y(jié)果判斷】可見真菌菌絲和/或孢子，可判斷為陽性。二毛囊蟲（蠕螨）的檢查【方法】臨床醫(yī)師采取，在擴張的毛囊口擠壓出一點皮脂或用刀片刮出些皮脂，在載玻片加一滴液體石蠟或甘油，加蓋片輕壓使皮脂變薄，普通光學(xué)顯微鏡下檢查。【結(jié)果判斷】低倍鏡下發(fā)現(xiàn)活的毛囊蟲，可判斷為陽性。三疥螨蟲鏡檢【方法】1取材部位：臨床醫(yī)師采取標(biāo)本。 2操作方法：將標(biāo)本置于載玻片上，加一滴5-10%KOH（或加NS），加蓋玻片，在酒精燈火焰上過三次以消化角質(zhì)蛋白，普通光學(xué)顯微鏡下檢查?！窘Y(jié)果判斷】見到以下任何一項均可判斷為陽性。1成蟲：低倍鏡下看到完整或破碎的成蟲。如用NS，有可能發(fā)現(xiàn)活動的成蟲。2蟲卵：可以見到蟲體的同時見到成堆或散在的蟲卵。四頭，體，陰虱檢查【方法】1取材部位：臨床醫(yī)師夾取標(biāo)本。 2操作方法：將標(biāo)本置于載玻片上，加一滴NS，加蓋玻片，普通光學(xué)顯微鏡下檢查。【結(jié)果判斷】見到以下任何一項均可判斷為陽性。1成蟲：低倍鏡下看到完整或破碎的成蟲。如用NS，有可能發(fā)現(xiàn)活動的成蟲。2蟲卵：可以見到蟲體的同時見到成堆或散在的蟲卵。五陰道毛滴蟲直接鏡檢【方法】在載玻片上加一滴溫NS，用不涂潤滑油的陰道窺器暴露子宮頸，在后穹隆，子宮頸等部位拭取分泌物混入溫鹽水中，立即在低倍鏡下鏡檢。或用棉拭子蘸取陰道分泌娶后置于2ml溫鹽水小瓶中，混勻后取一滴在玻片上鏡檢。 也可取男性尿道分泌物，前列腺液或尿沉渣同法鏡檢?！窘Y(jié)果判斷】及鏡下見到呈波狀移動的毛滴蟲為陽性。有時可見到毛滴蟲周圍的白細胞被推移。六念珠菌涂片檢查【方法】根據(jù)病變部位的不同收集不同的標(biāo)本。如果檢查體液標(biāo)本（如尿液或腦脊液）應(yīng)在離心后去沉淀物。其他固體標(biāo)本或分泌物標(biāo)本可以直接涂片。 如為分泌物或體液沉渣，可將受檢標(biāo)本放置在載玻片上，加一滴無菌NS，加蓋玻片后直接鏡檢。如果為固體標(biāo)本（皮霄，甲霄），可加一滴10%KOH，加蓋片后輕微加熱，然后鏡檢。 必要時可以進行革蘭染色或剛果紅染色檢查念珠菌孢子與菌絲，提高陽性率?！窘Y(jié)果判斷】鏡下見到成群卵圓形孢子和由芽孢延伸成的假菌絲可判斷為陽性。如果見到大量菌絲說明念珠菌處于致病狀態(tài)。七細菌性陰道病(BV)檢查（一）細菌性陰道病線索細檢查【原理】患此病時，陰道正常菌群發(fā)生變化,桿菌減少或消失，而陰道加特納菌、厭氧菌等生長。此外，加特納菌和厭氧菌吸附在陰道鱗狀上皮細胞表面，使細胞邊緣模糊不清呈鋸齒狀，有特殊外觀的線索細胞。對陰道分泌物作濕片涂片革蘭染色，在顯微鏡下可觀察線索細胞以及陰道菌群的變化?！痉椒ā繚衿ǎ涸谝惠d玻片上加一滴生理鹽水，將陰道分泌物與生理鹽水混合成懸液，加上蓋玻片后，在高倍（400倍）鏡下檢查。 革蘭染色：取陰道分泌物，涂片，作革蘭染色，油鏡（1000倍）下檢查。【結(jié)果】線索細胞為陰道鱗狀上皮細胞表面覆蓋著許多球桿菌（主要是加特納菌，有時合并有厭氧菌），使細胞呈斑點狀、顆粒外觀，細胞邊緣模糊不清呈鋸齒狀?！九R床意義】當(dāng)線索細胞占全部上皮細胞的20%以上時，一般認為可診斷BV。濕片法診斷BV的敏感性在80%以上，特異性在90% 以上。革蘭染色鏡檢觀察陰道上皮細胞中線索細胞的敏感和特異性高于濕片法，分別89%和93%。（二）細菌性陰道炎病快速檢測（脯氨酸氨基肽酶試驗）該試驗間接檢測細菌性陰道炎相關(guān)的病原體產(chǎn)生的化學(xué)物質(zhì)，國內(nèi)有商品化試劑。陰道加特納菌和游動鉤菌屬能產(chǎn)生脯氨酸氨基肽酶，而乳酸菌不產(chǎn)生該酶。將陰道分泌物與底物35.5相互作用4小時，加入指示劑后，觀察顏色變化。呈現(xiàn)紅色或者產(chǎn)生粉紅色為陽性反應(yīng)，黃色或者橘黃色為陰性。該試驗的敏感性和特異性均為93%。八梅毒實驗室診斷（一）梅毒螺旋體暗視野檢查（一期梅毒硬下疳和二期梅毒扁平疣）（二）快速血漿反應(yīng)素環(huán)狀卡片試驗（RPR）（主要用于初篩和二期梅毒患者或治療后隨訪，進行定量實驗）（三）不需要加熱血清反應(yīng)素試驗（USR）（二期梅毒患者或治療后隨訪，應(yīng)進行定量實驗）（四）梅毒螺旋體血凝試驗（TPHA） （主要用于確證試驗）（五）梅毒螺旋體明膠凝集試驗（TPPA） （主要用于確證試驗，分定性與定量試驗）九淋球菌檢查（一）淋球菌直接鏡檢（淋涂）【方法】1男性患者：先用NS拭盡尿道口，手指擠出尿道內(nèi)膿液，用無菌棉拭子沾取膿液涂在載物玻片上。2女性患者取宮頸口膿液，用無菌棉拭子沾取膿液涂在載物玻片上。3自然干燥后，革蘭染色或美蘭染色待檢?！窘Y(jié)果判斷】涂片中見大量多形核白細胞，細胞內(nèi)有革蘭氏陰性球菌，呈卵圓形或圓形，成對排列。為陽性結(jié)果。（二）淋球菌培養(yǎng)（淋培）【方法】臨床取材后，立即接種于培養(yǎng)基中，不得冷藏后再接種。在5-10% CO2，37度培養(yǎng)24-48小時后觀察結(jié)果。（市場上可見試劑盒）【結(jié)果判斷】在血平皿可見圓形，平滑，透明或灰白色菌落，直徑0.5-1.0mm，革蘭氏染色陰性。必要時，做生化檢查確定菌種。十衣原體檢查（一）免疫熒光法【方法】臨床取材后，立即涂片，無水乙醇室溫固定15分鐘，室溫涼干，加熒光抗體標(biāo)記的抗衣原體單克隆抗體，37度溫育30分后，PBS洗滌三次。封片后在熒光顯微鏡下觀察。【結(jié)果判斷】陽性標(biāo)本可以見到亮綠色包涵體。敏感性可達70-90%。（二）細胞培養(yǎng)法（三）快速酶分析法【方法】臨床取材。市場上有沙眼衣原體快速試劑盒供應(yīng)?！窘Y(jié)果判斷】顯色帶肉眼觀察。簡便，快速，不足之處在于敏感性較低。十一支原體檢查（一）培養(yǎng)檢查法【方法】臨床取材后，取材后立即放到1ml支原體肉湯培養(yǎng)基中。37孵箱培養(yǎng)18小時后觀察結(jié)果。陰性結(jié)果者連續(xù)觀察七天?！窘Y(jié)果判斷】解脲支原體陽性：肉湯培養(yǎng)基由淡紅變?yōu)榧t色（與接種管對比），但無明顯渾濁現(xiàn)象。（二）支原體抗體（IgM,IgG）【方法】臨床取材后，用快檢卡方法檢?，F(xiàn)有三種支原體可致非淋病性尿道炎。即解脲，人型，生殖支原體。市場上有單一的或三合一的試劑盒。 【結(jié)果判斷】顯色帶肉眼觀察。簡便，快速。 (三) 支原體藥敏試驗十二愛滋病抗體檢測十三尖銳濕疣（CA）檢查 【概述】 尖銳濕疣又稱尖圭濕疣、生殖器疣（genital warts,GW）、性病疣（venereal warts,VW）。由人乳頭瘤病毒（HPV）感染引起，主要是HPV6、HPV11、HPV16、HPV18型與本病有關(guān)。HPV通過皮膚粘膜的微小糜爛面進入人體，感染人體后，可潛伏在上皮基底細胞間，在表皮細胞層復(fù)制，然后HPV侵入細