皮膚科實驗室檢查技術(shù)操作常規(guī).doc

常見皮膚科實驗室檢查技術(shù)操作常規(guī)一真菌（癬菌）直接鏡檢【方法】1取材部位：臨床醫(yī)師采取頭癬，體癬，股癬，足癬，甲癬標(biāo)本。2操作方法：將標(biāo)本置于載玻片上，加一滴5-10%KOH，加蓋玻片，在酒精燈火焰上過三次以消化角質(zhì)蛋白，普通光學(xué)顯微鏡下檢查。【結(jié)果判斷】可見真菌菌絲和/或孢子，可判斷為陽性。二毛囊蟲（蠕螨）的檢查【方法】臨床醫(yī)師采取，在擴張的毛囊口擠壓出一點皮脂或用刀片刮出些皮脂，在載玻片加一滴液體石蠟或甘油，加蓋片輕壓使皮脂變薄，普通光學(xué)顯微鏡下檢查。【結(jié)果判斷】低倍鏡下發(fā)現(xiàn)活的毛囊蟲，可判斷為陽性。三疥螨蟲鏡檢【方法】1取材部位：臨床醫(yī)師采取標(biāo)本。 2操作方法：將標(biāo)本置于載玻片上，加一滴5-10%KOH（或加NS），加蓋玻片，在酒精燈火焰上過三次以消化角質(zhì)蛋白，普通光學(xué)顯微鏡下檢查?！窘Y(jié)果判斷】見到以下任何一項均可判斷為陽性。1成蟲：低倍鏡下看到完整或破碎的成蟲。如用NS，有可能發(fā)現(xiàn)活動的成蟲。2蟲卵：可以見到蟲體的同時見到成堆或散在的蟲卵。四頭，體，陰虱檢查【方法】1取材部位：臨床醫(yī)師夾取標(biāo)本。 2操作方法：將標(biāo)本置于載玻片上，加一滴NS，加蓋玻片，普通光學(xué)顯微鏡下檢查。【結(jié)果判斷】見到以下任何一項均可判斷為陽性。1成蟲：低倍鏡下看到完整或破碎的成蟲。如用NS，有可能發(fā)現(xiàn)活動的成蟲。2蟲卵：可以見到蟲體的同時見到成堆或散在的蟲卵。五陰道毛滴蟲直接鏡檢【方法】在載玻片上加一滴溫NS，用不涂潤滑油的陰道窺器暴露子宮頸，在后穹隆，子宮頸等部位拭取分泌物混入溫鹽水中，立即在低倍鏡下鏡檢?；蛴妹奘米诱喝￡幍婪置谌⒑笾糜?ml溫鹽水小瓶中，混勻后取一滴在玻片上鏡檢。 也可取男性尿道分泌物，前列腺液或尿沉渣同法鏡檢?！窘Y(jié)果判斷】及鏡下見到呈波狀移動的毛滴蟲為陽性。有時可見到毛滴蟲周圍的白細(xì)胞被推移。六念珠菌涂片檢查【方法】根據(jù)病變部位的不同收集不同的標(biāo)本。如果檢查體液標(biāo)本（如尿液或腦脊液）應(yīng)在離心后去沉淀物。其他固體標(biāo)本或分泌物標(biāo)本可以直接涂片。 如為分泌物或體液沉渣，可將受檢標(biāo)本放置在載玻片上，加一滴無菌NS，加蓋玻片后直接鏡檢。如果為固體標(biāo)本（皮霄，甲霄），可加一滴10%KOH，加蓋片后輕微加熱，然后鏡檢。 必要時可以進(jìn)行革蘭染色或剛果紅染色檢查念珠菌孢子與菌絲，提高陽性率。【結(jié)果判斷】鏡下見到成群卵圓形孢子和由芽孢延伸成的假菌絲可判斷為陽性。如果見到大量菌絲說明念珠菌處于致病狀態(tài)。七細(xì)菌性陰道病(BV)檢查（一）細(xì)菌性陰道病線索細(xì)檢查【原理】患此病時，陰道正常菌群發(fā)生變化,桿菌減少或消失，而陰道加特納菌、厭氧菌等生長。此外，加特納菌和厭氧菌吸附在陰道鱗狀上皮細(xì)胞表面，使細(xì)胞邊緣模糊不清呈鋸齒狀，有特殊外觀的線索細(xì)胞。對陰道分泌物作濕片涂片革蘭染色，在顯微鏡下可觀察線索細(xì)胞以及陰道菌群的變化?！痉椒ā繚衿ǎ涸谝惠d玻片上加一滴生理鹽水，將陰道分泌物與生理鹽水混合成懸液，加上蓋玻片后，在高倍（400倍）鏡下檢查。 革蘭染色：取陰道分泌物，涂片，作革蘭染色，油鏡（1000倍）下檢查?！窘Y(jié)果】線索細(xì)胞為陰道鱗狀上皮細(xì)胞表面覆蓋著許多球桿菌（主要是加特納菌，有時合并有厭氧菌），使細(xì)胞呈斑點狀、顆粒外觀，細(xì)胞邊緣模糊不清呈鋸齒狀。【臨床意義】當(dāng)線索細(xì)胞占全部上皮細(xì)胞的20%以上時，一般認(rèn)為可診斷BV。濕片法診斷BV的敏感性在80%以上，特異性在90% 以上。革蘭染色鏡檢觀察陰道上皮細(xì)胞中線索細(xì)胞的敏感和特異性高于濕片法，分別89%和93%。（二）細(xì)菌性陰道炎病快速檢測（脯氨酸氨基肽酶試驗）該試驗間接檢測細(xì)菌性陰道炎相關(guān)的病原體產(chǎn)生的化學(xué)物質(zhì)，國內(nèi)有商品化試劑。陰道加特納菌和游動鉤菌屬能產(chǎn)生脯氨酸氨基肽酶，而乳酸菌不產(chǎn)生該酶。將陰道分泌物與底物35.5相互作用4小時，加入指示劑后，觀察顏色變化。呈現(xiàn)紅色或者產(chǎn)生粉紅色為陽性反應(yīng)，黃色或者橘黃色為陰性。該試驗的敏感性和特異性均為93%。八梅毒實驗室診斷（一）梅毒螺旋體暗視野檢查（一期梅毒硬下疳和二期梅毒扁平疣）（二）快速血漿反應(yīng)素環(huán)狀卡片試驗（RPR）（主要用于初篩和二期梅毒患者或治療后隨訪，進(jìn)行定量實驗）（三）不需要加熱血清反應(yīng)素試驗（USR）（二期梅毒患者或治療后隨訪，應(yīng)進(jìn)行定量實驗）（四）梅毒螺旋體血凝試驗（TPHA） （主要用于確證試驗）（五）梅毒螺旋體明膠凝集試驗（TPPA） （主要用于確證試驗，分定性與定量試驗）九淋球菌檢查（一）淋球菌直接鏡檢（淋涂）【方法】1男性患者：先用NS拭盡尿道口，手指擠出尿道內(nèi)膿液，用無菌棉拭子沾取膿液涂在載物玻片上。2女性患者取宮頸口膿液，用無菌棉拭子沾取膿液涂在載物玻片上。3自然干燥后，革蘭染色或美蘭染色待檢。【結(jié)果判斷】涂片中見大量多形核白細(xì)胞，細(xì)胞內(nèi)有革蘭氏陰性球菌，呈卵圓形或圓形，成對排列。為陽性結(jié)果。（二）淋球菌培養(yǎng)（淋培）【方法】臨床取材后，立即接種于培養(yǎng)基中，不得冷藏后再接種。在5-10% CO2，37度培養(yǎng)24-48小時后觀察結(jié)果。（市場上可見試劑盒）【結(jié)果判斷】在血平皿可見圓形，平滑，透明或灰白色菌落，直徑0.5-1.0mm，革蘭氏染色陰性。必要時，做生化檢查確定菌種。十衣原體檢查（一）免疫熒光法【方法】臨床取材后，立即涂片，無水乙醇室溫固定15分鐘，室溫涼干，加熒光抗體標(biāo)記的抗衣原體單克隆抗體，37度溫育30分后，PBS洗滌三次。封片后在熒光顯微鏡下觀察?！窘Y(jié)果判斷】陽性標(biāo)本可以見到亮綠色包涵體。敏感性可達(dá)70-90%。（二）細(xì)胞培養(yǎng)法（三）快速酶分析法【方法】臨床取材。市場上有沙眼衣原體快速試劑盒供應(yīng)。【結(jié)果判斷】顯色帶肉眼觀察。簡便，快速，不足之處在于敏感性較低。十一支原體檢查（一）培養(yǎng)檢查法【方法】臨床取材后，取材后立即放到1ml支原體肉湯培養(yǎng)基中。37孵箱培養(yǎng)18小時后觀察結(jié)果。陰性結(jié)果者連續(xù)觀察七天?！窘Y(jié)果判斷】解脲支原體陽性：肉湯培養(yǎng)基由淡紅變?yōu)榧t色（與接種管對比），但無明顯渾濁現(xiàn)象。（二）支原體抗體（IgM,IgG）【方法】臨床取材后，用快檢卡方法檢。現(xiàn)有三種支原體可致非淋病性尿道炎。即解脲，人型，生殖支原體。市場上有單一的或三合一的試劑盒。 【結(jié)果判斷】顯色帶肉眼觀察。簡便，快速。 (三) 支原體藥敏試驗十二愛滋病抗體檢測十三尖銳濕疣（CA）檢查 【概述】 尖銳濕疣又稱尖圭濕疣、生殖器疣（genital warts,GW）、性病疣（venereal warts,VW）。由人乳頭瘤病毒（HPV）感染引起，主要是HPV6、HPV11、HPV16、HPV18型與本病有關(guān)。HPV通過皮膚粘膜的微小糜爛面進(jìn)入人體，感染人體后，可潛伏在上皮基底細(xì)胞間，在表皮細(xì)胞層復(fù)制，然后HPV侵入細(xì)