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實(shí)驗(yàn)性急性腎功能不全武漢大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院病生教研室,急性腎功能不全(AcuteRenalinsufficiency,ARI),各種病因引起雙側(cè)腎臟在短期內(nèi)泌尿功能急劇降低,導(dǎo)致機(jī)體內(nèi)環(huán)境出現(xiàn)嚴(yán)重紊亂的病理生理過程。,了解實(shí)驗(yàn)性腎功能不全動(dòng)物模型復(fù)制方法觀察升汞中毒家兔的一般狀態(tài),尿的變化、血漿尿素氮水平以及腎臟大體形態(tài)改變根據(jù)實(shí)驗(yàn)指標(biāo),分析討論急性腎功能不全的病理生理變化,實(shí)驗(yàn)?zāi)康?實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及模型復(fù)制的原理,原理腎毒物HgCl2引起家兔腎小管變性、壞死,導(dǎo)致嚴(yán)重的腎臟功能不全。,觀察指標(biāo),與對(duì)照家兔做比較:,實(shí)驗(yàn)步驟,1.復(fù)制模型(已完成),實(shí)驗(yàn)組HgCl2肌肉注射1.2ml/Kg24h對(duì)照組NaCl肌肉注射1.2ml/Kg24h,(1)稱重麻醉:腹腔注射20%烏拉坦,5ml/kg,2.手術(shù)及操作,部位:左下腹近腹中線1cm方法:與腹壁呈45進(jìn)針,進(jìn)入腹腔有落空感,回抽無血、腸內(nèi)容物,緩慢推注效果判斷:肌肉松弛,自然臥倒,眼瞼反射遲鈍,鉗夾皮膚無反應(yīng)等,(2)固定備皮:,固定:,備皮:頸部正中:甲狀軟骨-胸骨上緣下腹正中:恥骨聯(lián)合上15cm,(3)膀胱插管收集尿液,下腹部切口,分離組織,暴露膀胱注射器抽膀胱內(nèi)尿3ml(備用)荷包縫合(膀胱無血管區(qū))膀胱插管,C,(4)左頸總動(dòng)脈插管,分離抗凝耳緣靜脈肝素(1ml/kg)插管,左頸總動(dòng)脈插管,3.遠(yuǎn)心端,45剪口,約為管徑的1/2,4.朝心臟方向插管23cm并固定,頸總動(dòng)脈,近心端,心臟,遠(yuǎn)心端,頭部,(5)尿液鏡檢,計(jì)錄管型數(shù)和細(xì)胞數(shù)(10個(gè)視野),管型(低倍鏡),細(xì)胞(高倍鏡),(6)尿蛋白定性檢查,取尿液3ml于試管中酒精燈上加熱至沸騰若混濁,加入5%醋酸3-5滴再煮沸尿變清,尿內(nèi)有尿酸鹽混濁加重,尿中有蛋白,(6)尿蛋白定性檢查,(7)血漿尿素氮測(cè)定,原理:血液中尿素在強(qiáng)酸條件下與二乙酰-肟和氨硫脲(DAM-TSC)共煮沸,生成紅色復(fù)合物,顏色深淺與尿素氮含量成正比例關(guān)系,用分光光度計(jì)測(cè)定OD值,可計(jì)算出尿素氮含量。,方法每組自頸總動(dòng)脈取血10ml到離心管,離心,3000rpm10min,吸出上層血漿置于干凈試管中備用;按下表加入試劑:,各管加好混勻后置沸水鍋中煮沸10min,流水中冷卻3min后測(cè)OD值(520nm波長(zhǎng)),先以空白管調(diào)零,再讀取測(cè)定管值;計(jì)算:,血漿尿素氮(mg%)=,(8)形態(tài)學(xué)觀察,將家兔處死(耳緣靜脈注入空氣510ml),取出腎臟;觀察并比較兩組家兔腎臟的大體形態(tài),如體積大小,表面色澤,皮質(zhì)條紋及色澤等。,實(shí)驗(yàn)流程概括,1.復(fù)制模型(已完成),(1)稱重麻醉:腹腔注射20%烏拉坦,5ml/kg,2.手術(shù)操作及檢測(cè)指標(biāo),(2)固定備皮:,(3)膀胱插管收集尿液,(4)左頸總動(dòng)脈插管,(5)尿液鏡檢,計(jì)錄管型數(shù)和細(xì)胞數(shù)(10個(gè)視野),(6)尿蛋白定性檢查,(7)血漿尿素氮測(cè)定,實(shí)驗(yàn)報(bào)告的書寫,實(shí)驗(yàn)?zāi)康膶?shí)驗(yàn)步驟(簡(jiǎn)
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