凝集反應(yīng)實驗 教育學(xué)習(xí)

凝集反應(yīng),1,高級課件,抗原抗體反應(yīng)的類型,1沉淀反應(yīng)2凝集反應(yīng)3補體參與的反應(yīng)4.中和反應(yīng)5.免疫標記,2,高級課件,凝集反應(yīng),是指顆粒性抗原(紅細胞、細菌等)或可溶性抗原（或抗體）與載體顆粒結(jié)合成致敏顆粒后與相應(yīng)抗體（或抗原）發(fā)生特異性結(jié)合，在適當電解質(zhì)存在下，形成肉眼可見的凝集現(xiàn)象。在免疫學(xué)技術(shù)中，凝集反應(yīng)可分為直接凝集反應(yīng)和間接凝集反應(yīng)兩大類。,3,高級課件,凝集反應(yīng)的類型一、直接凝集反應(yīng)(directagglutination),是指細菌、螺旋體和紅細胞等顆粒性抗原，在適當電解質(zhì)參與下可直接與相應(yīng)抗體結(jié)合出現(xiàn)肉眼可見的凝集。反應(yīng)中的抗原稱為凝集原，參與反應(yīng)的抗體稱為凝集素。,4,高級課件,將已知的可溶性抗原（或抗體）吸附或耦聯(lián)到與免疫無關(guān)的載體顆粒表面,形成致敏顆粒,再與相應(yīng)抗體（或抗原）作用,在適宜的電解質(zhì)存在的條件下，出現(xiàn)肉眼所見的凝集現(xiàn)象，稱之。載體不同可分：紅細胞間接血凝試驗聚苯乙烯乳膠間接乳膠凝集試驗活性炭間接炭凝集試驗。,二、間接凝集反應(yīng),5,高級課件,1、正向間接凝集反應(yīng)用于檢測標本中的抗體,抗體,載體微球,可溶性抗原,免疫微球,免疫微球凝集,+,+,本試驗簡便、快速、敏感性和特異性高、成本低。,6,高級課件,2、反向間接凝集反應(yīng)用于檢測標本中的抗原本法快速、敏感性和特異性高,+,凝集,抗原,載體顆粒,抗體,抗體致敏顆粒,7,高級課件,A、正向：診斷試劑為已知抗原致敏的載體顆粒及相應(yīng)抗體，用于檢測標本中是否存在與致敏抗原相同的抗原。,3、間接凝集抑制反應(yīng)又稱為膠乳凝集抑制試驗,8,高級課件,抗體,待測抗原,免疫微球,免疫微球不凝集,+,（,（,結(jié)果：免疫微球不凝集為陽性,(標本),第一種情況：,9,高級課件,抗體,免疫微球,免疫微球凝集,+,標本中無抗原,結(jié)果：免疫微球凝集為陰性,第二種情況：,10,高級課件,3間接凝集抑制反應(yīng)B、反向：診斷試劑為已知抗體致敏的載體顆粒及相應(yīng)抗原，用于檢測標本中是否存在與致敏抗體相同的抗體。,11,高級課件,間接凝集反應(yīng)的應(yīng)用,間接凝集反應(yīng)具有快速、敏感、操作簡便、無需特殊的實驗設(shè)備等特點，而且能用于抗原或抗體的測定，因此在臨床檢驗中廣為應(yīng)用。,12,高級課件,（一）抗原的檢測,人絨毛膜促性腺激素檢測乙型肝炎表面抗原（HBsAg）的間接血凝試驗。,13,高級課件,（一）抗體的檢測,梅毒抗體類風(fēng)濕因子RF,14,高級課件,一、正向間接凝集試驗,梅毒快速血漿反應(yīng)素試驗RapidPlasmaReagin（RPR）RPR試驗,15,高級課件,感染梅毒后，首先產(chǎn)生IgM型抗梅毒螺旋體抗體，感染梅毒4周左右產(chǎn)生IgG型抗梅毒螺旋體抗體，即使經(jīng)足量抗梅治療，梅毒螺旋體抗原消失后很長時間，IgG抗體仍可通過記憶細胞的作用繼續(xù)產(chǎn)生，甚至終生在血清中可測出,梅毒的免疫性（一）,16,高級課件,梅毒的免疫性（二）,另一種具有抗體性質(zhì)的物質(zhì)叫反應(yīng)素（reagin），是梅毒螺旋體破壞人體組織過程中釋放出的一種抗原性心磷脂刺激機體所產(chǎn)生的抗體。反應(yīng)素一般在感染后57周產(chǎn)生。經(jīng)正規(guī)治療后可逐漸消失。,17,高級課件,梅毒感染的實驗室診斷,（一）非梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗（二）梅毒螺旋體抗原血清試驗（三）梅毒確認試驗,18,高級課件,非梅毒螺旋體血清試驗,這類試驗的抗原分為心磷脂、卵磷脂和膽固醇的混懸液，用來檢測抗心磷脂抗體。由于這些試驗具有相同的標準化抗原，所以敏感性相似?？捎米髋R床篩選，并可作半定量，用于療效觀察。,19,高級課件,非特異性類脂抗體測定,1、性病研究實驗室試驗（VDRL）2、不加熱血清反應(yīng)素試驗（USR）3、快速血漿反應(yīng)素試驗（RPR）4、甲苯胺紅試驗（TRUST）,20,高級課件,梅毒螺旋體抗原血清試驗：用梅毒螺旋體作為抗原檢測血清中的抗螺旋體IgM和/或IgG抗體，其敏感性和特異性均高于非梅毒螺旋體抗原血清試驗，但不能用作療效觀察的指標。1、梅毒螺旋體血球凝集試驗（TPHA）2、梅毒螺旋體明膠凝集試驗（TPPA)3、梅毒螺旋體酶聯(lián)免疫吸附試驗（TP-ELISA）,特異性梅毒血清學(xué)試驗,21,高級課件,梅毒確認試驗（三）,1、熒光梅毒螺旋體抗體吸收試驗（FTA-ABS）2、梅毒螺旋體蛋白印跡試驗（westernblottest）,22,高級課件,一、梅毒快速血漿反應(yīng)素試驗（RPR）,實驗原理梅毒患者血清中存在著能與VDRL(類脂質(zhì))抗原發(fā)生凝集反應(yīng)的反應(yīng)素，本試劑利用這一原理，將VDRL抗原吸附于活性炭顆粒表面，當待測血清中存在反應(yīng)素時，即與其發(fā)生凝集反應(yīng)，出現(xiàn)肉眼可見的黑色凝塊。,23,高級課件,一、梅毒快速血漿反應(yīng)素試驗（RPR）,用途本方法能快速簡單地測定梅毒病人血清中的反應(yīng)素，可用于梅毒診斷和監(jiān)測梅毒病人療效。,24,高級課件,試劑與器材,RPR試劑梅毒陽性對照梅毒陰性對照紙片專用滴管，針頭，橡皮頭,25,高級課件,操作方法,1.分別吸取30微升梅毒陽性對照和陰性對照均勻鋪加在紙卡的兩個圓圈中。2.另吸取30微升待檢血清均勻鋪加在紙卡的另一個圓圈中。3.用專用針頭，滴管吸取RPR試劑，分別垂直滴加30微升于上述血清中。4.用RPR旋轉(zhuǎn)儀水平轉(zhuǎn)動卡8分鐘，100轉(zhuǎn)/分鐘然后3分鐘內(nèi)在光線充足處判斷結(jié)果。,26,高級課件,結(jié)果判斷,1.陰性反應(yīng)（）：可見均勻的抗原顆粒而無凝集物。2.弱陽性反應(yīng)（+）：可見較小的黑色凝集物。3.陽性反應(yīng)（+）：可見中等或較大的黑色凝塊，溶液清亮。,27,高級課件,實驗討論,1.實驗條件：在23c29c度的環(huán)境下進行。2.RPR試劑在使用前應(yīng)充分搖勻。3.血清中加入試劑后充分振蕩使其混勻。4.定性實驗呈弱陽性或陽性者必須做定量實驗才能了解患者血清中的抗體滴度，具體方法如下：將待檢血清用生理鹽水作倍比稀釋（原血清，1：2，1：4，1：8，1：16，1：32）然后對每個稀釋按定性實驗方法再進行測定并判斷結(jié)果。,28,高級課件,實驗討論,5.本實驗只為過篩試驗，實驗呈弱陽性或陽性反應(yīng)者，需結(jié)合臨床進行綜合分析判斷，同時再做特異性密螺旋體實驗加以確診。,29,高級課件,二、間接凝集抑制反應(yīng)又稱為膠乳凝集抑制試驗,妊娠試驗HCG測定,30,高級課件,HCG：,人絨毛膜促性腺激素，胎盤合體滋養(yǎng)層細胞分泌的一種糖蛋白激素妊娠4-10周分泌量最大HCG是一種不隨胎盤重量增加而分泌增長的胎盤激素,31,高級課件,HCG的結(jié)構(gòu),結(jié)構(gòu)中包括與兩個非共價鍵結(jié)合的亞基。亞基與LH，F(xiàn)SH，及TSH的亞基相似，能與這些激素產(chǎn)生交叉免疫反應(yīng)而亞基與這些激素有較大的差異，不存在于其他激素中，決定了生物活性和免疫活性的高特異性。臨床上采用高效的抗HCG亞基現(xiàn)試劑盒為HCG-試劑,32,高級課件,HCG檢測方法,1，ELISA：酶聯(lián)免疫吸附試驗2，單克隆抗體膠體金試驗3，化學(xué)發(fā)光免疫法4，放射免疫技術(shù)5，膠乳凝集抑制實驗6，血凝抑制試驗：載體不同，吸附于RBC上,33,高級課件,膠乳凝集抑制試驗,實驗原理將含有可溶性抗原的待測標本先與已知抗體混合，充分作用后再加入抗原致敏的膠乳顆粒，因抗體已與標本中的可溶性抗原結(jié)合，膠乳顆粒不再出現(xiàn)可見的凝集現(xiàn)象。,34,高級課件,結(jié)果判斷,若試驗出現(xiàn)明顯的凝集為陰性反應(yīng)，即H