甾體激素類藥物分析講座PPT課件

.,1,第十章,甾體激素類藥物的分析AnalysisofSteroidHormonDrugs,基本要求,1掌握甾體結(jié)構(gòu)類藥物的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)與分析方法之間的關(guān)系。2掌握甾體類藥物的鑒別原理與方法。3掌握甾體類藥物的含量測定原理與方法。4熟悉甾體類藥物雜質(zhì)檢查的方法。,基本結(jié)構(gòu)：環(huán)戊烷駢多氫菲,概述,甾體激素類藥物的母核是由A、B、C、D四個(gè)環(huán)組成的。環(huán)上碳原子編號(hào)：117。D環(huán)：環(huán)戊烷結(jié)構(gòu)A、B、C環(huán)：全氫化菲（菲烷),菲,所以甾體激素類藥物的母核叫環(huán)戊烷駢多氫菲。,分類：,甾體激素,腎上腺皮質(zhì)激素,性激素,雄性激素及蛋白同化激素,孕激素,雌激素,.,5,雌二醇,黃體酮,睪丸素,皮質(zhì)酮,腎上腺皮質(zhì)激素,天然的皮質(zhì)激素氫化可的松,腎上腺皮質(zhì)激素,醋酸地塞米松,腎上腺皮質(zhì)激素,曲安息龍,腎上腺皮質(zhì)激素,地塞米松磷酸鈉,雄性激素,甲睪酮,雄性激素,丙酸睪酮,蛋白同化激素,苯丙酸諾龍,孕激素,黃體酮,孕激素,醋酸甲地孕酮,雌性激素,雌二醇,雌性激素,炔雌醇,炔諾酮,此外,炔諾孕酮,一、結(jié)構(gòu)與性質(zhì),1.腎上腺皮質(zhì)激素,.,20,此反應(yīng)首先是N-H鍵斷裂和與羰基加成，然后再脫去一分子水生成肟或腙。,.,21,醛、酮與2，4-二硝基苯肼作用生成的2，4-二硝基苯腙是黃色結(jié)晶，具有一定的熔點(diǎn)，反應(yīng)也很明顯，便于觀察，所以常被用來鑒別醛、酮。其它反應(yīng)的產(chǎn)物肟、腙大都也是具有一定熔點(diǎn)的晶體，亦可用來鑒別醛、酮。因此，把這些氨的衍生物稱為羰基試劑（即檢驗(yàn)羰基的試劑）。,2.雄性激素及蛋白同化激素,3.孕激素,4.雌性激素,.,25,香,.,26,特臭,特臭,二、鑒別試驗(yàn),（一）與強(qiáng)酸的呈色反應(yīng),甾體激素類藥物,呈色,H2SO4H3PO4HClO4HCl,（母核）,與硫酸顯色反應(yīng),藥品名稱顯色熒光加水稀釋后,潑尼松龍深紅紅色消失灰色絮狀,潑尼松橙色黃藍(lán)綠,炔雌醚橙紅黃綠紅色,炔雌醇橙紅黃綠絮狀玫紅,醋酸可的松黃或微褪色并澄清帶橙色,(二)官能團(tuán)的反應(yīng),腎上腺皮質(zhì)激素藥物,呈色,四氮唑鹽OH,1、C17醇酮基,還原性,呈色反應(yīng),此外還有與斐林試液、多倫試液的沉淀反應(yīng),甾酮類激素藥物,呈色,羰基試劑,2.C3酮基和C20酮基,常用的羰基試劑：2,4-二硝基苯肼、異煙肼、硫酸苯肼,.,31,異煙腙（黃色）,睪酮,Forexample：,.,32,黃體酮,異煙雙腙（黃色）,具有甲酮基或活潑亞甲基的甾體激素類藥物,呈色,亞硝基鐵氰化納間二硝基酚芳香醛,3.甲酮基,黃體酮,藍(lán)紫色,亞硝基鐵氰化納,其他甾體,淡橙色不顯色,.,35,藍(lán)紫色,有機(jī)氟,F,有機(jī)破壞,有機(jī)氯,Cl,4.有機(jī)鹵素,茜素氟藍(lán)硝酸亞鈰,硝酸硝酸銀,AgCl,呈色,.,37,茜素氟藍(lán),藍(lán)紫色,F-,雌激素類藥物,紅色偶氮染料,重氮苯磺酸,5.酚羥基,含炔基的甾體激素,銀鹽沉淀,硝酸銀,6.乙炔基的沉淀反應(yīng),.,40,炔雌醇,白,(三)制備衍生物測定m.p.,鹽酸氨基脲4ml，30min,苯丙酸諾龍50mg,縮氨基脲衍生物,縮氨基脲的生成,m.p.約182,甲醇2ml溶解,水浴上濃縮，冷卻，濾過,沉淀用甲醇洗，水洗，105干燥,-3-酮、苯環(huán)、其他共軛結(jié)構(gòu),（四）UV法,1.結(jié)構(gòu)依據(jù),240nm左右,280nm左右,.,43,2.應(yīng)用示例,曲安西龍,丙酸倍氯米松,溶劑,甲醇,乙醇,20g/ml,濃度,20g/ml,結(jié)果判斷,在238nm處有最大吸收,在239nm處有最大吸收，A為0.570.60，在239nm與263nm處的吸收度比值為2.252.45,結(jié)構(gòu)特征：酚羥基、C17OHC17乙炔基,炔雌醇,（五）IR法,1505cm-1,3505cm-1,3300cm-1,1590cm-1,3610cm-1,酚羥基,醇羥基,1615cm-1,苯環(huán)的骨架振動(dòng),炔基伸縮振動(dòng),亞甲基、角甲基吸收帶,黃體酮,結(jié)構(gòu)特征：-3-酮、C17-酮基,1700cm-1,C=O,20位酮基,1665cm-1,3位酮基,1615cm-1,870cm-1,C-H,雙鍵,（七）TLC法,主要用于甾體激素類藥物制劑的鑒別,方法：對照品法要求供試品溶液所顯主斑點(diǎn)的顏色和位置與對照品溶液的主斑點(diǎn)相同。,.,50,1、溶液的配制,Forexample:醋酸潑尼松片的鑒別,樣品液,對照液,2、色譜條件薄層板：硅膠G點(diǎn)樣：樣品液和對照液各5l展開劑：二氯甲烷-乙醚-甲醇-水（38560152）顯色劑：堿性四氮唑藍(lán)試液3、判斷樣品液主斑點(diǎn)的顏色及位置應(yīng)該與對照液主斑點(diǎn)相同。,.,51,Anotherexample:丙酸睪酮注射液的鑒別,1、溶液的配制,樣品液,對照液,2、色譜條件薄層板：硅膠GF254點(diǎn)樣：樣品液和對照液各10l展開劑：二氯甲烷-甲醇（190.5）檢測：在254nm的紫外燈下檢視3、判斷：以Rf值定性。,（八）HPLC法：主要用于甾體激素類藥物制劑的鑒別（如：醋酸曲安奈德軟膏、醋酸氟輕松軟膏）,方法：對照品法要求在含量測定項(xiàng)下記錄的色譜圖中，供試品峰的tR與對照品峰的tR一致。,用“標(biāo)樣”的保留值定出被測組份的位置,三、特殊雜質(zhì)檢查,（一）其他甾體的檢查,1、定義：與標(biāo)示藥物結(jié)構(gòu)不同的甾體化合物都稱為“其他甾體”2來源：原料、中間體、異構(gòu)體、降解產(chǎn)物3、特點(diǎn)：（1）可能存在多個(gè)甾體雜質(zhì)（2）結(jié)構(gòu)類似,檢查方法：TLC法（高低濃度對比法）HPLC法（類似高低濃度對比法）,（1）TLC法（高低濃度對比法）,判定方法：規(guī)定雜質(zhì)斑點(diǎn)數(shù)目規(guī)定雜質(zhì)斑點(diǎn)顏色,例：氫化可的松中其他甾體的檢查供試液：本品+氯仿-甲醇（9：1）濃度：3.0mg/ml對照液：供試液（3.0mg/ml）+氯仿-甲醇（9：1）60g/ml層析：供試液點(diǎn)樣、展開、斑點(diǎn)檢出。對照液判斷：供試液如顯雜質(zhì)斑點(diǎn)，不得多于3個(gè)，其顏色與對照液的主斑點(diǎn)比較，不得更深。,.,57,例：醋酸氟輕松中其他甾體的檢查,取本品加氯仿-甲醇（9：1）制成3.0mg/ml作為供試液，精密量取適量，加氯仿-甲醇（9：1）稀釋成0.06mg/ml作為對照液；照薄層色譜法，各取5l，分別點(diǎn)于同一硅膠G板上，以氯仿-甲醇（97:3）為展開劑，展開后晾干，在105干燥10分鐘，放冷，噴以堿性四氮唑藍(lán)試液，立即檢視，供試品溶液如顯雜質(zhì)斑點(diǎn)，不得多于2個(gè)，其顏色與對照液的主斑點(diǎn)比較，不得更深。,（2）HPLC法（主成分自身對照法）,判定方法：規(guī)定雜質(zhì)峰數(shù)目規(guī)定雜質(zhì)峰面積,（二）硒的檢查,來源合成中用二氧化硒(SeO2)脫氫,有毒,方法,藥物,氧瓶燃燒,二氨基萘比色法測定,（三）游離磷酸鹽的檢查,地塞米松磷酸鈉,對照品比色法,供試液+鉬酸銨+1-氨基-2-萘酚-4-磺酸磷鉬酸藍(lán)：740nm對照液：同上,RPHPLC（大多內(nèi)標(biāo)法）,甾體激素類藥物常含有結(jié)構(gòu)相似的其他甾體雜質(zhì)，對利用結(jié)構(gòu)特征設(shè)計(jì)的比色法有干擾,四、含量測定,測定對象：甾體激素類藥物的原料和制劑。,(一)、HPLC法USP、BP、JP均采用,示例：黃體酮的含量測定色譜條件：固定相：ODS，流動(dòng)相甲醇-水（65:35），檢測波長254nm，內(nèi)標(biāo)物己烯雌酚系統(tǒng)適用性試驗(yàn)：N1000，R符合規(guī)定。,（二）UV法,-3-酮240nm（）,腎上腺皮質(zhì)激素雄性激素和蛋白同化激素孕激素、口服避孕藥,苯環(huán)280nm（）,雌激素,示例：醋酸地塞米松片的含量測定（1）配制供試液（2）測定240nm的吸光度（3）按為357計(jì)算,醋酸地塞米松的紫外吸收光譜,.,65,取本品20片，精密稱定，研細(xì)，精密稱取適量（約相當(dāng)于醋酸地塞米松7.5mg），置100ml量瓶中，加乙醇75ml，置5060的水浴中保溫10min，時(shí)時(shí)振搖使溶解，放冷至室溫，加乙醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液20ml，置另一100ml量瓶中，加乙醇至刻度，搖勻，在240nm的波長處測定吸收度，按C24H31FO6的吸收系數(shù)為357計(jì)算，即得。,具體操作及計(jì)算：,腎上腺皮質(zhì)激素、雄性激素和蛋白同化激素、孕激素,C3酮基,（1）原理,異煙腙（黃）,酮基,異煙肼,-,3,C,HCl,（縮合）,（三）比色法,異煙腙（黃色）,（2）方法,對照品法,55,異煙肼,揮去乙醇,對照液,供試液,A,暗45min,（3）討論,A.反應(yīng)專屬性：具有43酮基的甾體激素在室溫不到1h即可定量的與異煙肼反應(yīng)，本法對43酮基具有一定的專屬性。,C3-酮基C20-酮基、C17-酮基C11-酮基不反應(yīng),B.溶劑的選擇,異煙肼鹽酸鹽甲醇、乙醇,C.水分、溫度、O2與光線的影響,含水量腙水解A%,溶劑不揮發(fā)、不吸收水分時(shí)O2與光線無影響,D.酸的種類和濃度,酸與異煙肼摩爾比2：1可獲得最大吸收值,異煙肼0.00365mol/LHCl0.0074mol/LH2SO40.0037mol/L醋酸4.4mol/L,腎上腺皮質(zhì)激素類,C17-醇酮基,（1）原理,2.四氮唑比色法,還原性,藍(lán)四氮唑（BT）,氯化三苯四氮唑（TTC）,三苯甲瓚深紅,氯化三苯四氮唑（TTC）,紅四氮唑（RT）,.,74,藍(lán)四氮唑（BT）,雙甲瓚（暗藍(lán)）,（2）方法：,對照品法,.,76,Forexample：醋酸潑尼松龍軟膏的含量測定對照液：精密稱取醋酸潑尼松龍對照品20mg，置100ml量瓶中，加無水乙醇振搖使溶解，并稀釋至刻度，搖勻，即得。供試液：精密稱取本品4g（約相當(dāng)于醋酸潑尼松龍20mg），置燒杯中，加無水乙醇約30ml，置水浴上加熱，充分?jǐn)嚢?，使醋酸潑尼松龍溶解，再置冰浴中冷卻，濾過，濾液置100ml量瓶中，同法提取三次，濾液并入量瓶中，加無水乙醇稀釋至刻度，搖勻，即得。,.,77,測定法：精密量取上述溶液各1ml，分別置干燥具塞試管中，各精密加無水乙醇9ml與氯化三苯四氮唑試液2ml，搖勻，再各精密加氫氧化四甲基銨試液1ml，搖勻，在25暗處放置4050分鐘，照分光光度法，在485nm的波長處分別測定吸收度，計(jì)算，即得。,（3）討論,A.基團(tuán)對反應(yīng)速度的影響,C11=OC11OH,C21OHC21-酯,B.溶劑、水分的影響,含水量大時(shí)使呈色速度減慢，當(dāng)含水量不超過5%時(shí)，對結(jié)果幾無影響。故以無醛乙醇為溶劑。,D、堿的種類及加入順序：以氫氧化四甲基銨的結(jié)果最佳，加入順序：,E.溫度與時(shí)間：25暗處反應(yīng)40-45min。,C.O2與光線的影響：避光，隔絕空氣or充N2,（1）原理,max=465,雌激素,3.Kober反應(yīng)比色法,雌二醇-3-甲醚,max=465,max=515,練習(xí)與思考,A型題,1.醋酸地塞米松的鑒別方法是A.三氯化鐵反應(yīng)B.水解反應(yīng)C.柯柏反應(yīng)D.與堿性酒石酸銅試液反應(yīng)E.雙縮脲反應(yīng)2.丙酸睪酮中國藥典規(guī)定的含量測定方法為A.非水溶液滴定法B.溴酸鉀法C.HPLC法D.紫外分光法E.旋光法,.,83,112甾體激素類藥物的結(jié)構(gòu)中能和四氮唑鹽發(fā)生顯色反應(yīng)的基團(tuán)A.酚羥基B.活潑次甲基C.甲酮基D.C17-醇酮基E.酮基,.,84,能與亞硝基鐵氰化鈉反應(yīng)生成蘭紫色的藥物是A雌二醇B黃體酮C醋酸可的松D苯丙酸諾龍E以上都不對,.,85,113異煙肼比色法測定甾體激素類藥物時(shí)，藥物的呈色基團(tuán)是A.酮基B.酚羥基C.活潑次甲基D.炔基E.甾體母核,.,86,四氮唑比色法可用于下列哪個(gè)藥物的含量測定A.可的松B.睪丸素C.雌二醇D.炔雌醇E.黃體酮,.,87,用異煙肼比色法測定甾體激素藥物含量時(shí)，其溶液的環(huán)境是：A強(qiáng)酸性B中性C強(qiáng)堿性D弱堿性E以上都不對,.,88,可與重氮苯磺酸作用生成紅色偶氮染料的甾體激素類藥物是A.醋酸可的松B.睪酮C.黃體酮D.雌二醇E.炔諾酮,.,89,紅外吸收光譜圖中，羥基的伸縮振動(dòng)范圍約為：A.3600-3300cm-1B.3300-3000cm-1C.3000-2700cm-1D.2400-2100cm-1E.1900-1650cm-1,.,90,紅外吸收光譜圖中，羰基的伸縮振動(dòng)波數(shù)為A.3600-3300cm-1B.3300-3000cm-1C.3000-2700cm-1D.2400-2100cm-1E.1900-1650cm-1,.,91,用四氮唑比色法測定皮質(zhì)激素類藥物，是利用C17醇酮基的何種性質(zhì)A氧化性B還原性C可加成性D酸性E堿性,.,92,問題3135A維生素B1B醋酸地塞米松C兩者皆是D兩者皆不是31.異煙肼比色法32.硫色素反應(yīng)33.紫外分光光度法34.羥肟酸鐵反應(yīng)35.綠奎寧（Thaciaquin）反應(yīng),B,A,C,D,D,.,93,Kober反應(yīng)是A.雌性激素與硫酸乙醇共熱呈色B.皮質(zhì)激素與硫酸一乙醇共熱呈色C.雌性激素與硫酸乙醇共熱呈色，用水或稀硫酸稀釋后加熱顏色改變D.維生素A與無水三氯化銻的無醇氯仿溶液呈色E.異丙嗪于酸性條件下與鈀離子呈色,B型題,A.亞硝基鐵氰化鈉反應(yīng)B.Vitali反應(yīng)C.Kedde反應(yīng)D.綠奎寧(thalleiaqllin)反應(yīng)E.堿試酒石酸銅試液的反應(yīng)1.黃體酮2.醋酸地塞米松3.地高辛4.硫酸奎寧,A,E,C,