3.微生物計數(shù)培養(yǎng)基適用性檢查驗證方案

1.概述:培養(yǎng)基是微生物試驗的基礎(chǔ)，直接影響微生物試驗結(jié)果。適宜的培養(yǎng)基制備方法、貯藏條件和質(zhì)量控制是提供優(yōu)質(zhì)培養(yǎng)基的保證。供試品微生物限度檢查中所使用的培養(yǎng)基應(yīng)進(jìn)行適用性檢查。2.驗證目的：本次驗證的目的是確認(rèn)需氧菌總數(shù)、霉菌及酵母菌總數(shù)檢查用的胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基、胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基、沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基的質(zhì)量，以及其制備程序、保存條件等是否滿足微生物限度檢查用要求。3.驗證依據(jù)：中國藥典2015年版四部“非無菌產(chǎn)品微生物限度檢查：微生物計數(shù)法”、“9203 藥品微生物實驗室質(zhì)量管理指導(dǎo)原則”。4.驗證項目：胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基、胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基、沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基的適用性檢查。5.適用范圍：成品培養(yǎng)基、由脫水培養(yǎng)基或按處方配制的培養(yǎng)基均應(yīng)進(jìn)行培養(yǎng)基適用性檢查。6.驗證周期：除另有規(guī)定外，在實驗室中，若采用已驗證的配制和滅菌程序制備培養(yǎng)基且過程受控，那么同一批脫水培養(yǎng)基的適用性檢查試驗可以只進(jìn)行一次。如果培養(yǎng)基的制備過程未經(jīng)驗證，那么每一滅菌批培養(yǎng)基均要進(jìn)行適用性檢查試驗。7.驗證小組人員及職責(zé)：小組人員職務(wù)姓 名簽字所在部門職 務(wù)組 長質(zhì)量部質(zhì)量總監(jiān)組 員質(zhì)量控制實驗室QC主任組 員質(zhì)量控制實驗室微生物QC 7.1驗證小組人員:7.2驗證人員職責(zé)及要求7.2.1按驗證方案及相關(guān)文件實施驗證。7.2.2認(rèn)真觀察并做好驗證原始記錄。7.2.3對實施驗證的結(jié)果負(fù)責(zé)。7.3驗證中各部門的職責(zé)7.3.1驗證領(lǐng)導(dǎo)組職責(zé)7.3.1.1制訂驗證總計劃，負(fù)責(zé)全公司驗證工作的管理。7.3.1.2確定驗證項目及驗證項目負(fù)責(zé)人。7.3.1.3負(fù)責(zé)驗證方案的批準(zhǔn)工作。7.3.1.4負(fù)責(zé)驗證資料及結(jié)果的審核工作。7.3.1.5負(fù)責(zé)驗證報告的批準(zhǔn)工作。7.3.2驗證項目小組職責(zé)7.3.2.1負(fù)責(zé)驗證方案的起草工作。7.3.2.2參與驗證方案的討論、確認(rèn)工作。7.3.2.3負(fù)責(zé)驗證方案的實施。7.3.2.4負(fù)責(zé)驗證結(jié)果的分析、統(tǒng)計、報告工作。7.3.2.5參與驗證結(jié)果的評價工作。7.3.3質(zhì)量部職責(zé)7.3.3.1負(fù)責(zé)公司驗證日常管理工作。7.3.3.2負(fù)責(zé)驗證方案的審核工作。7.3.3.3負(fù)責(zé)驗證過程中儀器、儀表、計量器具的校驗工作。7.3.3.4負(fù)責(zé)檢驗儀器及檢驗方法的驗證。7.3.3.5負(fù)責(zé)驗證中各項檢測工作，提供驗證的檢驗記錄、檢驗報告，對驗證過程中的各項檢驗工作負(fù)責(zé)。7.3.3.6負(fù)責(zé)對驗證人員的培訓(xùn)、考核工作。7.3.3.7負(fù)責(zé)驗證資料和報告的審核工作。7.3.3.8負(fù)責(zé)驗證文件回收、歸檔管理工作。 8.合格標(biāo)準(zhǔn)：8.1被檢固體培養(yǎng)基上的菌落平均數(shù)與對照培養(yǎng)基上的菌落平均數(shù)的比值應(yīng)在0.5-2范圍內(nèi)，且菌落形態(tài)大小應(yīng)與對照培養(yǎng)基上的菌落一致；8.2被檢液體培養(yǎng)基管與對照培養(yǎng)基管比較，試驗菌應(yīng)生長良好。9.驗證實施條件9.1驗證方案培訓(xùn)：在驗證實施前，應(yīng)對參與驗證的人員進(jìn)行驗證方案以及與驗證相關(guān)的文件進(jìn)行培訓(xùn)，確保相關(guān)人員掌握了驗證的相關(guān)要求與知識。9.2微生物限度檢測室：檢驗所使用的檢測室應(yīng)經(jīng)過HVAC系統(tǒng)確認(rèn)，并符合要求。9.3檢驗用水：驗證過程使用的純化水其制備系統(tǒng)應(yīng)經(jīng)過確認(rèn)并符合要求，純化水質(zhì)量應(yīng)經(jīng)過檢驗并符合中國藥典2015年版二部的要求。9.4檢驗儀器設(shè)備：驗證涉及的檢驗儀器（設(shè)備）與檢驗方法，應(yīng)經(jīng)過技術(shù)監(jiān)督局校驗合格或者公司確認(rèn)/驗證合格。9.5驗證菌種：驗證所使用的菌種，其種類與傳代次數(shù)應(yīng)符合中國藥典的相關(guān)要求。菌種情況見附件2:菌種確認(rèn)。 10.驗證過程10.1菌液制備10.1.1取經(jīng)30-35培養(yǎng)18-24h的銅綠假單胞菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌的新鮮培養(yǎng)物1ml加入9ml0.9%無菌氯化鈉溶液中，10倍遞增稀釋至10-6-10-8，約為100cfu/ml的菌懸液備用。10.1.2取經(jīng)20-25培養(yǎng)2-3天的白色念珠菌、黑曲霉的液體培養(yǎng)物1ml, 加入9ml0.9%無菌氯化鈉溶液中，10倍遞增稀釋至10-5-10-8，約為100cfu/ml的菌懸液備用。10.2實驗操作10.2.1胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基：取11個無菌平皿，分別接種上述銅綠假單胞菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌、白色念珠菌、黑曲霉各2皿，每皿接種1ml菌液（接種量100cfu），另1平皿不接種菌作為空白對照，傾注對照胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基，混勻，凝固后于3035倒置培養(yǎng)，培養(yǎng)時間不超過3天（白色念珠菌、黑曲霉培養(yǎng)時間不超過5天），計數(shù)；被檢培養(yǎng)基同法操作。10.2.2胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基：新鮮配制10ml/支的對照胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基7支，121滅菌15min，備用。取6支，分別接種上述銅綠假單胞菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌各2支，每支接種1ml菌液（接種量100cfu），另1支不接種菌作為空白對照；被檢培養(yǎng)基同法操作。置3035培養(yǎng)，培養(yǎng)時間不超過3天，分別觀察結(jié)果。10.2.3沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基：取5個無菌平皿，分別接種上述白色念珠菌、黑曲霉各2皿，每皿接種1ml菌液（接種量100cfu），另1平皿不接種菌作為空白對照，傾注對照沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基，混勻，凝固后于2025倒置培養(yǎng)培養(yǎng)，培養(yǎng)時間不超過5天，計數(shù)；被檢培養(yǎng)基同法操作。10.3.檢查結(jié)果：見附件5：計數(shù)用培養(yǎng)基適用性檢查結(jié)果11.異常情況與偏差處理：當(dāng)出現(xiàn)偏差時，應(yīng)按偏差處理管理規(guī)程進(jìn)行處理。12.驗證結(jié)果評定、結(jié)論與建議驗證小組組長負(fù)責(zé)收集各項驗證、試驗記錄，根據(jù)驗證、試驗結(jié)果對驗證效果進(jìn)行綜合評審，起草驗證報告、做出驗證結(jié)論。對驗證結(jié)果的評審應(yīng)包括以下內(nèi)容：12.1驗證試驗是否有遺漏？12.2驗證實施過程中對驗證方案有無修改？修改原因、依據(jù)以及是否經(jīng)過批準(zhǔn)？12.3驗證記錄是否完整？12.4驗證試驗結(jié)果是否符合標(biāo)準(zhǔn)要求？偏差及對偏差的說明是否合理？是否需要進(jìn)一步補充試驗？13.附件13.1 附件1:驗證實施條件確認(rèn)13.2 附件2:培養(yǎng)基確認(rèn)13.3 附件3:菌種確認(rèn)13.4 附件4:菌液濃度確定13.5 附件5:計數(shù)用培養(yǎng)基適用性檢查結(jié)果13.6 附件6:驗證結(jié)果審批表附件1： 設(shè)施設(shè)備驗證確認(rèn)設(shè)施設(shè)備名稱驗證報告編號驗證結(jié)果實驗室HVAC系統(tǒng)純化水系統(tǒng)LDZX-40A型立式自控電熱壓力蒸汽滅菌器PSH-500A型生化培養(yǎng)箱303AS-2型電熱恒溫隔水式培養(yǎng)箱SW-CJ-1C型雙人凈化工作臺確認(rèn)結(jié)論： 確認(rèn)人： 確認(rèn)日期：附件2： 培養(yǎng)基確認(rèn)培養(yǎng)基名稱來源批號有效期至胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基胰酪大豆胨瓊脂對照培養(yǎng)基胰酪大豆胨液體對照培養(yǎng)基沙氏葡萄糖瓊脂對照培養(yǎng)基確認(rèn)結(jié)論： 確認(rèn)人： 確認(rèn)日期：附件3： 菌種確認(rèn)培養(yǎng)基名稱來源批號枯草芽孢桿菌CMCC(B) 63 501 銅綠假單胞菌 CMCC(B)10 104金黃色葡萄球菌 CMCC(B) 26 003白色念珠菌 CMCC(F) 98 001黑曲霉CMCC(F) 98 003確認(rèn)結(jié)論： 確認(rèn)人： 確認(rèn)日期：附件4：菌液濃度確定10-310-410-510-610-7銅綠假單胞菌皿1皿2金黃色葡萄球菌皿1皿2大腸埃希菌皿1皿2枯草芽孢桿菌皿1皿2白色念珠菌皿1皿2白色念珠菌（沙氏）皿1皿2黑曲霉皿1皿2黑曲霉（沙氏）皿1皿2結(jié)論： 根據(jù)要求，菌數(shù)要控制在每1ml中含菌數(shù)在100cfu，因此，我們確定菌液制備：銅綠假單胞菌： 稀釋 金黃色葡萄球菌: 稀釋 大腸埃希菌： 稀釋 枯草芽孢桿菌: 稀釋 白色念珠菌（胰酪）: 稀釋 白色念珠菌（沙氏）: 稀釋黑曲霉（胰酪）：稀釋 黑曲霉（沙氏）： 稀釋 檢驗人檢驗時間 年 月 日- 年 月 日復(fù)核人復(fù)核時間 年 月 日附件5：計數(shù)用培養(yǎng)基適用性檢查結(jié)果培養(yǎng)基驗證菌株皿號被檢培養(yǎng)基cfu/ml對照培養(yǎng)基cfu/ml比值0.5-2菌落形態(tài)大小生長情況胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基（3035，3天）*白色念珠菌、黑曲霉5天銅綠假單胞菌12平均金黃色葡萄球12平均枯草芽孢桿菌12平均白色念珠菌12平均黑曲霉12平均空白1胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基（3035，3天）銅綠假單胞菌12金黃色葡萄球12枯草芽孢桿菌12空白1沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基（2328，72h）白色念珠菌12平均黑曲霉12平均空白1檢驗人檢驗時間 年 月 日- 年 月 日復(fù)核人復(fù)核時間 年 月 日表6:驗證結(jié)果審批表驗證對象驗證開始日期驗證