尋常型銀屑病患者外周血th22細胞及相關因子il-22表達的研究（可編輯）

學校代碼號學尋常型銀屑病患者外周血細胞及相關因子表達的研究一醫(yī)學學科門類皮膚病號陛病學學科、專業(yè)銀屑病研究方向二級年級辛甜甜研究生姓名陳永鋒教授導師姓名起止日期廣東醫(yī)學院皮膚病研究所二一三年五月型學位論文獨創(chuàng)性聲明掣本人呈交的學位論文系在導師指導下所取得的研究成果。除了文中特別加以標注和致謝的地方外,論文中不包含其他人已經發(fā)表或撰寫的研究成果,也不包含為獲得廣東醫(yī)學院或其他教育機構的學位或證書所使用過的材料。日期塑互篁作者簽名礱型型學位論文知識產權聲明本人在就讀研究生期間所完成的學位論文及其相關成果,知識產權歸屬學校。本人在畢業(yè)離校前會將有關的研究資料和結果全部上交導師,離校后發(fā)表或使用學位論文或與該論文直接相關的學術論文或成果時,署名單位仍然為廣東醫(yī)學院。學校可以將學位論文的全部或部分內容編入有關數據庫進行檢索,可以采用影印、縮印或掃描等復制手段保存、匯編學位論文,可以公布包括刊登論文的全部或部分內容。導師享有發(fā)表學位論文、申請成果和專利的權利。注保密的學位論文在解密后適用本聲明。作者簽名芻型型日期型蘭導師簽名礁羔蟬日期目錄中文摘要英文摘要前言研究背景研究目的研究內容材料與方法實驗材料實驗方法統(tǒng)計分析結果討論小結參考文獻綜述綜述參考文獻致謝附錄一縮寫詞中英文對照附錄二評分表附錄三在讀碩士期間的科研情況一表尋常型銀屑病患者外周血細胞及相關因子達的研究中文摘要【目的】檢測尋常型銀屑病患者和正常人外周血中細胞及血清中含目里了解尋常型銀屑病患者外周血細胞中分泌的、細胞比例。分析細胞和水平與銀屑病嚴重程度及病程的相關性?！痉椒ā砍槿±龑こＰ豌y屑病患者和例正常對照者外周血,采用五色法流式細胞術檢測細胞中細胞及可分泌的細胞、細胞所占比例,并用法檢測血清中含量,分析細胞及表達與疾病嚴重程度及病程的相關性?！窘Y果】尋常型銀屑病患者外周血細胞比例高于正常對照組,差異有顯著性尸。尋常型銀屑病患者血清含量士/高于正常對照組/,差異有顯著性。尋常型銀屑病患者外周血細胞中可分泌的三型細胞所占比例分別為、,細胞明顯高于及細胞。尋常型銀屑病患者外周血細胞表達與評分呈顯著正相關,血清一水平與評分呈顯著正相關,但兩者與病程無相關細胞,。細胞與之間呈正相關,【結論】細胞及在尋常型銀屑病有高表達,提示參與銀屑病的發(fā)病機制。細胞中、三型細胞均可分泌,其中細胞為主。細胞數及水平均與疾病嚴重程度相關,可作為判斷疾病嚴重程度的免疫學指標。【關鍵詞】尋常型銀屑病細胞細胞一【】一一,【】,一,【】,一士/,一士,土,一,嚴,胗嚴,氣【】,【】前言研究背景銀屑病是一種以紅斑鱗屑為特征的慢性復發(fā)性炎癥性皮膚病,本病影響美觀、反復發(fā)作,嚴重影響患者生活質量。不同地區(qū)、不同人種的患病率差異較大,世晃范圍內平均發(fā)病率【。我國于年行全國流行病學調查發(fā)現(xiàn)人群患病率約【截止至年又進行一項省流行病學調查發(fā)現(xiàn)患病率為,有明顯上升趨勢。因該病頑固難治,仍被列為當今世界皮膚科領域的重要研究課題。目前銀屑病的發(fā)病機制尚不清楚,遺傳、環(huán)境以及免疫失衡均參與其中,其中自身免疫系統(tǒng)失衡占據了重要位置。細胞介導的免疫系統(tǒng)參與銀屑病發(fā)病概況既往研究認為銀屑病是角質形成細胞功能紊亂所導致的疾病,隨著等】于年發(fā)現(xiàn)免疫抑制劑環(huán)孢素可有效改善銀屑病癥狀,使得人們認識到免疫系統(tǒng)在銀屑病的發(fā)病中發(fā)揮至關重要的作用。迄今已有大量臨床和實驗研究發(fā)現(xiàn)銀屑病是一種器官特異性細胞介導的炎癥性疾病【,】,其中細胞亞群中細胞及被視為參與銀屑病發(fā)病的主要細胞。細胞主要通過分泌干擾素,吖,等細胞因子參與細胞免疫,目前已有大量實驗證實銀屑病患者外周血及皮損中細胞及其相關因子吖水平升高【,提示其參與銀屑病發(fā)病。細胞是一群以特征性分泌而命名的新型細胞亞群【】,目前研究認為細胞主要通過/軸途徑參與銀屑病,通過促進抗菌肽生成,上調促炎趨化因子趨化記憶性細胞和樹突狀細胞以及中性粒細胞遷移入銀屑病皮損中發(fā)揮作用【,此外其亦可分泌通過調節(jié)角質形成細胞的終末分化來產生銀屑病特征性的皮損】。然而,最近研究發(fā)現(xiàn)了一群分泌、而不產生、和的細胞亞群,已被證實獨立于已知、及細胞,為一新型輔助性細胞,即所謂的細胞【。目前已有研究發(fā)現(xiàn)細胞及相關因子在銀屑病外周血及皮損中均有不同程度升高,提示其與銀屑病發(fā)病相關。細胞的發(fā)現(xiàn),進一步完善了免疫體系,深入了解細胞及其細胞因子在銀屑病中作用方式及功能,可為治療銀屑病提供更多的思路。細胞及參與銀屑病發(fā)病機理細胞是一群表達、和,分泌、而不產生、和丫的新型記憶性細胞亞群,因其表達皮膚歸巢受體及,故認為與皮膚的病理生理及穩(wěn)態(tài)有密不可分的聯(lián)系。不同于及,調節(jié)細胞分化的關鍵轉錄因子為芳香烴受體,一個感知環(huán)境毒素和內生性代謝產物的配體依賴性轉錄因子,其直接作用于編碼誘導性細胞色素酶,促進細胞的分化。此、以及真皮樹突狀細胞、表皮朗格漢斯細胞、漿細胞樣樹突狀細胞均可以誘導人初始細胞向細胞分化而、在細胞分化中起抑制作用【們。細胞主要浸潤于炎性上皮,通過其分泌的細胞因子如、或誘導產生相關因子作用于角質形成細胞發(fā)揮其獨特的作用?？杀磉_一些基因編碼蛋白如成纖維細胞生長因子一、一、一等參與組織修復表達參與組織纖維化表達、參與血管生成表達趨化因子、及從而招募細胞表現(xiàn)出抗微生物活性但其參與銀屑病發(fā)病主要是通過工一發(fā)揮作用。是年等【以刺激、鼠淋巴瘤細胞發(fā)現(xiàn)的一個細胞因子,為細胞因子家族成員之一,主要通過作用于與構成的異源二聚體發(fā)揮作用,因受體表達廣泛,故由表達決定的靶細胞。雖然目前認為主要由免疫性細胞產生,但并不表達于免疫細胞表面,故無論是靜止還是活化的免疫細胞均不受的調節(jié),多見于皮膚、胃腸道及呼吸系統(tǒng)細胞等屏障體系,在皮膚各種組織細胞中,角質形成細胞、黑色素細胞、真皮成纖維細胞、內皮細胞等均有受體表達,但角質形成細胞為作用的主要靶細胞【。等年首次報道發(fā)現(xiàn)參與銀屑病發(fā)病,檢測到銀屑病患者皮損水平明顯升高。隨后大量研究發(fā)現(xiàn)銀屑病患者皮損及血清中均可見升高,且水平與疾病嚴重程度相關】,進一步證實參與銀屑病發(fā)病。結合目前文獻資料,主要通過作用于角質形成細胞發(fā)揮作用,推測可能通過以下幾個方面參與銀屑病的發(fā)病通過與角質形成細胞上的受體結合,誘導的磷酸化,從而促進角質形成細胞過度增殖上調角質形成細胞表達、及基質金屬蛋白酶等,參與炎癥的調節(jié)下調與角質形成細胞分化相關基因的表達,如中間絲相關蛋白,外皮蛋白,兜甲蛋白,熱休克蛋白,鈣調蛋白相關蛋白和血紅素加氧酶和角蛋白等,抑制角質形成細胞的正常分化可進一步誘導角質形成細胞產生,發(fā)揮類似于的功能,產生一個繼發(fā)放大效應機制,在銀屑病后期發(fā)揮作用。圖作為特征性因子,在銀屑病中發(fā)揮至關重要的作用,但在細胞發(fā)現(xiàn)之前,一直被視為主要由細胞所產生,此外細胞亦發(fā)現(xiàn)可分泌】,其他細胞如細胞、細胞、淋巴組織誘,使得我們對導細胞及細胞等在特定條件下亦可不同程度地分泌【。于的歸屬產生疑惑,參與銀屑病發(fā)病的細胞中發(fā)揮作用的到底是由哪種細胞所產生,/在銀屑病中發(fā)揮多大的作用,都是我們值得探討的問題。所以明確中各細胞所分泌的含量比例及與的相關性分析有助于進一步解釋各細胞發(fā)揮作用的影響因素,進一步了解獨特的作用,以及有助于深入理解銀屑病免疫調節(jié)機制。目前關于細胞在銀屑病中的表達情況國外已有報道,在皮損和外周血中均可見不同程度升高,但尚未見與疾病病程的相關分析研究,國內簡瑜【】等檢測銀屑病和正常人外周血“細胞”表達情況,發(fā)現(xiàn)兩者未見差異,但此研究所定義的細胞其實為細胞,此細胞中還包括可表達的和細胞,并非真正的細胞。故國內目前尚未有關銀屑病與的相關實驗研究。本實驗我們采用流式細胞術和方法來比較銀屑病患者和正常人外周血細胞在細胞所占比例以及血清中含量水平,以明確及在銀屑病的作用,同時比較可分泌的及細胞在細胞中所占比例,以明確細胞中三型細胞通過分泌對銀屑病發(fā)病機制的影響程度,進一步通過分析與的相關性,闡明/在銀屑病發(fā)病獨特的作用,以期尋求新的治療作用靶點。哇囊勰嗣囊繃圩憾嗣一一。一罄幕,一艘裟端靠蝴材。燾熱囊鼉,黲纛麓謄譬羆。纛譬菱爭霎霪。萋攀器黲蘩籬攀潭藕黎一“二三。謦參纛鬻辮。霉、乏,二。乙”最玉三。霹最毒。鰳盟警警苫占南,舶腳慷璺中扎刪秀善驀。德筋一一一”慕毽國怕奄圖及相關細胞因子在銀屑病皮損中的作用,研究目的檢測尋常型銀屑病患者外周血細胞中細胞及血清中含量。了解尋常型銀屑病患者外周血細胞中分泌的、細胞比例。分析細胞和一水平與銀屑病嚴重程度及病程的相關性。研究內容用流式細胞術檢測外周血細胞及細胞中可分泌的和所占比例。用雙抗體夾心法檢測血清中的表達。分析細胞及與評分及病程的相關性。材料與方法圇實驗材料研究對象研究組入選病例為年月至年月在廣東省皮膚病醫(yī)院門診及住院部確診的尋常型銀屑病以下簡稱銀屑病患者例。其中男性例,女性例年齡歲,病程個月年,評分之間。所選病例均符合臨床皮膚病學第三版診斷標準。所有患者近個月內未系統(tǒng)使用糖皮質激素及免疫抑制劑個月內未外用糖皮質激素或其他制劑或接受紫外線等治療、無合并先天或獲得性自身免疫性疾病及其它免疫相關性或炎癥性、真菌感染疾病。所有患者均進行評分,評分細則如下,是一套國銀屑病面積和嚴重指數際通行的評價銀屑病皮損面積及嚴重程度的客觀方法【。把人體分成四部分頭頸部、軀干、上肢及下肢,各占總體表面積的、和。分別計算各處皮損面積分,皮損面積分根據其所占百分比判為一分表。表銀屑病患者皮損面積評分標準依據皮損嚴重程度及不同類型定義脫屑,、浸潤,及紅斑,三項分值,將不同部位的、數值相加乘上各自相應的系數,相加四部分的得分即為總分。、數值判定根據其嚴重程度不同可分為個級別級無皮損級輕度級中度級重度級極重度表。具體的計算公式如下分數頭部面積分頭部嚴重程度分、之和上肢面積分上肢嚴重程度分、之和軀干面積分軀干嚴重程度分、之和下肢面積分下肢嚴重程度分、之和表銀屑病患者皮損嚴重程度評分表對照組入選健康體檢者例,其中男性例,女性例年齡歲。觀察前個月內無細菌、真菌、病毒感染,既往無銀屑病等免疫相關皮膚疾病。研究組及對照組的性別及年齡差異無統(tǒng)計學意義表。表銀屑病患者組及健康對照組入組時的一般情況注兩組的性別、年齡差異無統(tǒng)計學意義尸主要試劑美國公司美國公司美國公司美國公司美國公司美國公司美國公司美國公司美國公司美國公司美國公司廣州蕊特生物制品有限公司胎牛血清美國公司培養(yǎng)液聯(lián)科生物科技有限公司一“量鬟豢銷、潮赫、髓二淼朋惴刪廠疊氮鈉、氯化鉀、的甲醛、二甲基亞砜美國公司試劑盒聯(lián)科生物科技有限公司主要試劑的配制緩沖液,溶解后,雙層濾紙過濾后,高壓滅菌,疊氮鈉,雙蒸水加至保存。培養(yǎng)液取干粉一包,稱取和,取一次性抽濾一起溶于純水中,調整值至后定容至,器,用的濾膜過濾除菌,保存取配制好的培養(yǎng)液加入小牛血清,充分混勻后保存待用。佛波酯肉豆蔻酸乙酸鹽一,貯存液,濃度溶于/,分份分裝,。保存工作液貯存液稀于液中,此時為/工作濃度/細胞培養(yǎng)每反應體系加工作液。,離子霉素貯存液離子霉素溶于濃度/,分份分裝,保存工作液貯存液稀釋于液中,此時為/工作濃度/細胞培養(yǎng)每反應體系加工作液。貯存液溶于,濃度為/,分份分裝,。保存工作液貯存液稀釋于液中,此時為/工作濃度反應體系加工作液。/細胞培養(yǎng)每主要實驗儀器型流式細胞儀美國公司低溫冰箱中國三星公司水浴缸美國公司德國恒溫培養(yǎng)箱生物安全柜德國公司高速低溫離心機意大利水平離心機中國上海醫(yī)用分析儀器廠型漩渦混勻器上海醫(yī)科大學儀器廠電子分析天枰德國公司微量加樣器德國公司肝素鈉抗凝管武漢致遠醫(yī)療科技有限公司一次性抽濾器武漢致遠醫(yī)療科技有限公司洗板儀美國公司酶標儀鄭州博賽生物工程有限責任公司實驗方法標本收集分別抽取例銀屑病患者和例正常對照者靜脈血一份分離血清后置保存待檢另一份以肝素鈉抗凝,內行流式細胞術檢測。實驗步驟流式細胞術檢測外周血細胞取試管一只,加入細胞培養(yǎng)液和抗凝血各。加入/離子霉素工作液、/工作液、/的。取出試管,混勻分為工作液,混勻,置。、培養(yǎng)箱培養(yǎng)管,管為實驗管,管為同型管兩管均加入、各固定“,室溫避光孵育。兩管分別加入中的液。兩管均加,室溫避光孵育,離心棄掉上清用剩余的些許輕震蕩以重懸細胞,以免后續(xù)步驟重懸細胞困難。兩管均加入中的破膜和溶血液皿,靜置后,管中加入、各,管中加入。兩管、各此,室溫避光孵育均加,棄上清。,離心重懸細胞,上機檢測。上機檢測以/設門,收集個淋巴細胞,圈定淋巴細胞群為,在以/設門,圈定淋巴細胞為,在門內以/表達的散點圖中圈定/的淋巴細胞為,在門內收集表達。/的細胞,即為細胞群通常以佛波酯、離子霉素刺激后的表達會降低,以熒光觀測比較困難,而刺激后表達降低不明顯,因此我們用/來代表/細胞,再分別以和設門,得到的。的淋巴細胞群即為細胞,以熒光抗體染色陽性細胞的百分率記錄結果。法檢測血清準備工作提前從冰箱取出試劑盒及血清樣本,以平衡至室溫濃縮洗滌液用雙蒸水按稀釋,剩余放回。冰箱保存標準品加入標本稀釋液至凍干標準品中,靜置,充分溶解后,輕輕混勻此時濃度為/,進行稀釋,標準曲線使用以下濃度、以生物素化/生物素化抗體工作液使用前抗體稀釋液按稀釋濃縮生物素化抗體成為工作液,當日使用酶結合物工作液使用前以酶結合物稀釋液稀釋濃縮酶結合物成工作液,當日使用。從己平衡至室溫的密封袋中取出酶標板,。洗液洗板次,浸泡,棄掉洗液,吸水紙拍干微孔板。每孔加入樣本稀釋液,依次加入不同濃度標準品、標本/孑?？瞻卓准訕吮鞠♂屢?。此過程在內完成。每孔加入檢測抗體。用封板膜封板,轉/分鐘振蕩,室溫。孵育。棄液,洗板機清洗次洗滌液為,注入與吸出間隔每孔加入辣根過氧化物酶標記的鏈酶親和素,用新的封板膜封板,轉/分鐘振蕩,室溫孵育。重復步驟。每孔加入顯色底物,避光,室溫孵育。每孔加入終止液混勻。內測量值,繪制標準曲線,計算其濃度。統(tǒng)計學方法本實驗數據的整理和分析使用軟件完成,主要用到的統(tǒng)計學方法有描述性統(tǒng)計分析方法,檢驗和相關分析,檢驗水準為。結果銀屬病患者與正常對照組外周血細胞表達流式細胞術檢測顯示銀屑病患者外周血細胞比例較健康對照者顯著升高砌圖、表。避”、。焉?？?。墨”圖外周血細胞流式細胞術分析散點圖左圖為銀屑病患者,右圖為正常對照者表銀屑病患者與正常對照組外周血細胞中細胞所占比例,。分組例數百分比,值值銀屑病組士對照組銀屑病患者外周血中可分泌的細胞中、及所占比例銀屑病患者外周血中細胞中、均可分泌工一,其中細胞較其它兩型細胞明顯升高。圖、表。叫緗胞寡泌心的細肇圖銀屑病患者外周血中產生的細胞比例表銀屑病患者外周血細胞中產生的、及比例,注木和分別與做檢驗,尸值均,差異具有顯著統(tǒng)計學意義。銀屑病患者與正常對照血清中表達銀屑病患者血清中表達水平顯著高于正常對照組表。表銀屑病患者和正常人血清中一含量/銀屑病患者外周血細胞、與評分及病程的相關性分析相關分析顯示細胞、表達水平與評分之間均呈正相關分別、,但與病程之間無相關性尸。細胞與表達呈正相關尸表,圖表銀屑病患者外周血細胞、與評分、病程之間的相關分析值注表示相關分析圖從析圖。細胞與兒相關分討論銀屑病是一種主要由細胞介導的免疫性疾病,其中、均已被證實在銀屑病發(fā)病中發(fā)揮重要作用,兩者主要通過分泌自身特征性因子分泌、分泌,通過各自獨特的作用方式參與銀屑病的發(fā)生發(fā)展。新近發(fā)現(xiàn)的以分泌為主的細胞,在銀屑病皮損及外周血均可見升高,亦提示參與銀屑病的發(fā)病。但目前研究發(fā)現(xiàn),、亦可分泌,所以不能與和一樣,可依據所產生的特征性細胞因子的功能來推測細胞本身的作用,所以本實驗通過檢測外周血細胞中細胞所占比例,同時比較可產生的、比例,從而進一步闡明的主要來源,進一步明確的作用。另外目前尚未見銀屑病患者外周血細胞及血清與病程相關關系的研究報道,本實驗進一步予以補充完善。我們采用五色流式細胞術檢測銀屑病患者和正常人外周血細胞中細胞比例,依據參考文獻將此類細胞定義為丫。細胞,檢測發(fā)現(xiàn)銀屑病患者外周血中細胞較正常人升高見表,提示細胞參與銀屑病發(fā)病。與目前國外研究相一致。雖然研究認為主要定位于皮損【,外周血較之少,但與正常人相比仍有統(tǒng)計學意義,提示外周血的細胞亦可作為觀察銀屑病的指標,但需要注意的是,白色念珠菌可誘導細胞的產生,所以選擇樣本要注意剔除合并真菌感染者以免影響實驗結果【】。同時本實驗發(fā)現(xiàn)在銀屑病患者外周血細胞中除了細胞外,可見丫及細胞見圖,即分別為分泌的和細胞,此三型細胞在細胞中所占比例以細胞最高,其次為,次之見表,提示細胞等發(fā)現(xiàn)在銀屑病患者皮損,為的主要產生者。國外細胞亞群中可產生的細胞約占、占,而比例最高達,證實細胞為的主要來源?！尽康妊芯堪l(fā)現(xiàn)銀屑病患者外周血及皮損中細胞均升高,其中在所有可產生的細胞中包括、細胞等,細胞為的主要來源,且和在細胞中各占約/比例。可見無論是銀屑病患者外周血還是皮損,細胞表達均升高,且細胞較之及為的主要產生者,進一步提示在銀屑病發(fā)病及進程中發(fā)揮作用的與的關系密切。本實驗通過檢測血清中含量,發(fā)現(xiàn)銀屑病患者血清中顯著高于正常對照組見表,提示參與在銀屑病發(fā)病。等發(fā)現(xiàn)銀屑病特征性皮損的形成主要是所導致,主要通過作用于角質形成細胞表面的受體,下調角質形成細胞分化相關基因及上調促炎因子或趨化因子從而引發(fā)銀屑病特征性皮損,而及并無此效應,進一步驗證了參與銀屑病的獨特作用。國外大量研究發(fā)現(xiàn)皮損及外周血中均較正常人明顯升高,且通過阻斷治療可有效減輕銀屑病癥狀,進一步提示在銀屑病中的關鍵作用。而作為的主要產生者,可通過研究針對/的通路,阻斷其作用途徑,或許可以成為治療介導的炎癥性皮膚病的一新靶點。本研究將細胞及其相關因子表達水平與評分、病程作相關性分析發(fā)現(xiàn),細胞與呈正相關,提示在銀屑病發(fā)病中所起作用與細胞密切相關細胞、與評分成正相關,提示細胞、細胞因子可反映疾病的嚴重程度,或許可在后續(xù)治療中通過監(jiān)測細胞及水平的變化來評價療效。細胞、與病程無相關性,或許是基于及主要參與銀屑病皮損形成及發(fā)展,當疾病緩解皮疹消退時細胞數量即降低,并非隨病程遷延而長期存在,具體機制還有待于進一步探討。以上研究結果提示,細胞及相關因子與銀屑病發(fā)病密切相關,并可能作為判斷疾病進展和評價療效的免疫學指標。這為進一步深入研究銀屑病發(fā)病機理以及銀屑病的免疫治療方案提供理論基礎。目前,細胞的研究已漸成為醫(yī)學及分子生物學研究的熱點,針對細胞因子及其受體的靶向藥物抗體己在研發(fā)】。目前針對的人源化單克隆抗體用于治療中重度銀屑病的安全性和耐受性的期試驗即將發(fā)表【。但目前這些研發(fā)還處于初始階段,隨著研究的深入,研發(fā)針對細胞的相關生物制劑以阻斷/通路的靶向藥物,將是銀屑病免疫治療的一個方向。小結細胞及在尋常型銀屑病有高表達,提示參與銀屑病的發(fā)病機制。細胞中、三型細胞均可分泌,其中細胞為主。細胞及水平均與疾病嚴重程度相關,可作為判斷疾病嚴重程度的免疫學指標。參考文獻,】,全國銀屑病流行調查組全國年銀屑病流行調查報告中華皮膚科雜志,丁曉嵐,王婷琳,沈佚葳,等中國六省市銀屑病流行病學調查中國皮膚性病學雜志,十,吖,/,一一,一“”【一,】,【】,【,】一一,一,一,】,飛【,一,】,【一,【,簡瑜,董萍云,任占芬,等尋常性銀屑病患者外周血細胞及血清中的水平中國皮膚性病學雜志,趙辨臨床皮膚病學第版南京江蘇科技出版社,】張長宋,趙天恩,陳樹民銀屑病病情嚴重程度評判指標的研究現(xiàn)狀國外醫(yī)學皮膚性病學分冊,【,【。,】,綜述及其細胞因子在銀屑病發(fā)病機制中的作用銀屑病以慢性紅斑鱗屑反復發(fā)作為特征,主要為細胞介導的一種自身免疫失衡性疾病。既往認為銀屑病主要為介導發(fā)生,隨著細胞新成員、的不斷發(fā)現(xiàn)且被證實在銀屑病中有不同程度升高,使得對參與銀屑病的免疫機制有待于進一步探討,同時對于既往所認為主要為、所分泌的觀點,隨著的進一步發(fā)現(xiàn)亦有待于進一步明確,作為一個新生物,通過闡明其可能的發(fā)病機制,或許可以成為一個治療銀屑病的靶點。故本文對近幾年有關及其相關因子與銀屑病之間的相互關系的研究進行簡單的綜述。細胞的發(fā)現(xiàn)、分化調節(jié)及生物學功能細胞是年等等采用流式細胞術發(fā)現(xiàn)的一群表達,分泌一、而不產生、一和,獨立于己矢、及細胞的記憶性細胞亞群。同年做了類似的研究,隨后等證實細胞為亞群,且在細胞、細胞、細胞或細胞誘導環(huán)境下,皮膚來源的記。憶細胞克隆不會失去分泌一的能力,也不會分泌其他細胞亞群的特征細胞因子?；谄淇寺》€(wěn)定性,選擇性的表達特異性轉錄因子等,由此確定細胞是一個終末分化及獨立穩(wěn)定的細胞譜系。和均可以誘導人初始細胞向細胞分化,和同時刺激則效應更強。除細胞因子外,皮膚樹突狀細胞如真皮樹突狀細胞和表皮朗格漢斯細胞均可誘導細胞分化,而朗格漢斯細胞的作用更甚。另發(fā)現(xiàn)在某些病理情況下出現(xiàn)的第三類樹突狀細胞一一漿細胞樣樹突狀細胞在誘導細胞的分化方面較之傳統(tǒng)的樹突狀細胞更強。除此之外,發(fā)現(xiàn)了一個調節(jié)細胞分化的關鍵轉錄因子芳香烴受體,一個感知環(huán)境毒素和內生性的代謝產物的配體依賴性轉錄因子,最近的實驗證實在人初始細胞處于細胞極化,可以促進細胞的條件下,激動劑萘黃酮分化,但抑細胞分化乜。而、在細胞分化中均起抑制作用。細胞表達皮膚歸巢受體口,故認為與皮膚的病理生理及穩(wěn)態(tài)有密不可的聯(lián)系。細胞分泌的成纖維細胞生長因子如、一、等對疾病的發(fā)展、形態(tài)學改變、血管生成起重要作用此外,上清液可加強上皮傷口愈合。細胞分泌的主要細胞因子是年等瞄以束激小鼠淋巴瘤細胞發(fā)現(xiàn)的一個細胞因子,其氨基酸與有的同源性,故歸為細胞因子家族成員之一。一的受體是以與工一構成的異源二聚體,廣泛表達于各免疫細胞細胞、細胞、細胞,而一表達于多種非免疫組織如皮膚、肝、小腸、結腸、腎、胰腺中,免疫細胞表面則缺少一的表達嘲。最初認為是細胞相關因子,因在的極化條件下,的產生明顯增高盯,后發(fā)現(xiàn)細胞除了產生外亦可產生一,并曾一度認為為此種細胞因子的主要來源隨。除此之外,細胞陋、細胞陽,淋巴組織誘導細胞,叫及丫細胞亦發(fā)現(xiàn)可產生一。隨著新型細胞的發(fā)現(xiàn),且發(fā)現(xiàn)其以特征性地分泌一為主,使得對的認識進一步加深。一的產生可受多種因素的調節(jié)和影響,一或一均可直接誘導鼠和人初始細胞產生一,則抑制其產生陋在小鼠,調控細胞分化的丫矛可同時影響一和的產生,但是將轉導入人初始免疫細胞中并不會導致工一的產生,體現(xiàn)了種屬差異。諸多研究已表明一在先天免疫,慢性炎癥性疾病,感染性疾病、組織修復中均發(fā)揮重要作用。僅作為一個多效能的細胞因子可為體內許多細胞分泌,既往研究認為單核細胞系如巨噬細胞、朗格漢斯細胞及小角質細胞等是其主要產生者。近來等口對皮膚來源的細胞克隆發(fā)現(xiàn)、及等亦可有數量不等的分泌。主要通過與受體結合從而對細胞關鍵功能包括增殖、存活、。分化和凋亡進行調控的作用除在體內外可殺傷腫瘤細胞外,其亦是機體炎癥與免疫應答的重要調節(jié)因子。此外,細胞尚可分泌少量、等細胞因子。細胞及其因子與銀屑病之間的關系相關因子參與銀屑病發(fā)病的機制研究因受體可分布于皮膚尤其是角質形成細胞,故一些研究針對作用于表皮來分析其可能的發(fā)病機制。等以工一束激培養(yǎng)的正常上皮角質形成細胞,可觀察到、及基質金屬蛋白酶等增高,這些因子在正常皮膚或未分化的角質形成細胞中檢測不到,而在異常分化的銀屑病角質形成細胞中呈高表達另外在重建人表皮中,予以一露激,可見全層增厚,同時可觀察到顆粒層透明角質顆粒消失,這些均類似于銀屑病的病理表現(xiàn),而這種效應是通過抑制角質形成細胞分化相關基因如中間絲相關蛋白,外皮蛋白,兜甲蛋白,一熱休克蛋白,鈣調蛋白相關蛋白、血紅素加氧酶及角蛋白等因子而發(fā)揮作用的。等副亦通過建立小鼠模型,予以一束激發(fā)現(xiàn)可產生棘層肥厚和顆粒層消失的銀屑病樣損害,且證實這種作用是一直接作用于角質形成細胞抑制其終末分化產生的,同時亦觀察至一對一作用的一個協(xié)同效應。剛等給予建立銀屑病樣皮損的小鼠以工一中和抗體,發(fā)現(xiàn)棘層肥厚有緩解以及炎癥細胞或因子減少。此外除了在皮損中觀察至一增多外,亦有不少實驗檢測銀屑病患者血漿一水平較正常人顯著升高口,且與銀屑病的嚴重程度相關,這些均表一在銀屑病中發(fā)揮重要作用。而這種作用主要體現(xiàn)于其作用于角質形成細胞,促進表皮增生及促炎因子的生成以及抑制影響上皮分化的相關蛋白。對于目前國內外已有一些研究發(fā)現(xiàn)鏈的在銀屑病皮損中過度表達,且銀屑病皮損中工一的表達亦明顯高于正常人,此外國內外亦有一些研究發(fā)現(xiàn)外周血中表達增多,近來等盟叫使用基因分型平臺對名關節(jié)型銀屑病,矛名尋常型銀屑病,患者位于基因中的兩個單核苷酸多態(tài)性,和進行基因分型發(fā)現(xiàn),這兩基因均與高度相關,而并未發(fā)現(xiàn)與有顯著相關的,證實可作為關節(jié)型銀屑病患者的一個特異性危險因素,且可據此從尋常型銀屑病病人中篩選出可能發(fā)展為關節(jié)型銀屑病的患者。等乜。采用的檢測方法參與銀屑病發(fā)病亦有不少研究,發(fā)現(xiàn)主要是通過刺激角質形成細胞,從而誘導角質形成細胞產生一些促炎因子如、等,這些促炎因子己被證實在銀屑病發(fā)病機制有重要作用,且研究同時發(fā)現(xiàn)協(xié)同一一起刺激,可使這種效應加倍。等在角質形成細胞培養(yǎng)中分別加入一、和二者結合體,發(fā)現(xiàn)兩者聯(lián)合刺激角質形成細胞及相關因子的生成是單獨刺激效應的倍,但具體機制不詳。在銀屑病發(fā)病中的研究目前關于細胞的研究較少,國外多采用流式細胞術檢測銀屑病患者血液和皮損中的數量,發(fā)現(xiàn)其在外周血中較少,而在銀屑病患者皮損中相對較多。等口通過對過敏性接觸性皮炎、特異性濕疹和銀屑病患者炎癥部位皮損體外短期培養(yǎng),檢測發(fā)現(xiàn)皮損處細胞數量遠高于外周血,可見細胞主要富集于炎癥皮損部位,且在同一實驗中經過分離過敏性接觸性皮炎和特異性濕疹患者真表皮層,分別檢測表皮與真皮層中產工一細胞發(fā)現(xiàn)表皮層分布居多,此項研究未在銀屑病患者中進行檢測,但有一定的參考價值。等瞳在研究特異性皮炎與銀屑病中相關因子表達差別研究中亦發(fā)現(xiàn)細胞在銀屑病皮損中有增多,且發(fā)現(xiàn)銀屑病患者中一主要由禾產生,而在特異性皮炎中口細胞雖細胞產生的工一則為一的主要來源。體現(xiàn)了不同疾病一來源的差異性。等踟通過多重標準重新定義、和,采用流式細胞術檢測銀屑病患者和正常人外周血中各型細胞數量,銀屑病患者外周血數量明顯高于正常人,其中較之、升高更為明顯。同時發(fā)現(xiàn)通過阻斷可有效阻斷工一、等的產生,