尋常型銀屑病患者外周血th22細(xì)胞及相關(guān)因子il-22表達(dá)的研究（可編輯）

學(xué)校代碼號(hào)學(xué)尋常型銀屑病患者外周血細(xì)胞及相關(guān)因子表達(dá)的研究一醫(yī)學(xué)學(xué)科門類皮膚病號(hào)陛病學(xué)學(xué)科、專業(yè)銀屑病研究方向二級(jí)年級(jí)辛甜甜研究生姓名陳永鋒教授導(dǎo)師姓名起止日期廣東醫(yī)學(xué)院皮膚病研究所二一三年五月型學(xué)位論文獨(dú)創(chuàng)性聲明掣本人呈交的學(xué)位論文系在導(dǎo)師指導(dǎo)下所取得的研究成果。除了文中特別加以標(biāo)注和致謝的地方外,論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫的研究成果,也不包含為獲得廣東醫(yī)學(xué)院或其他教育機(jī)構(gòu)的學(xué)位或證書所使用過的材料。日期塑互篁作者簽名礱型型學(xué)位論文知識(shí)產(chǎn)權(quán)聲明本人在就讀研究生期間所完成的學(xué)位論文及其相關(guān)成果,知識(shí)產(chǎn)權(quán)歸屬學(xué)校。本人在畢業(yè)離校前會(huì)將有關(guān)的研究資料和結(jié)果全部上交導(dǎo)師,離校后發(fā)表或使用學(xué)位論文或與該論文直接相關(guān)的學(xué)術(shù)論文或成果時(shí),署名單位仍然為廣東醫(yī)學(xué)院。學(xué)校可以將學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫進(jìn)行檢索,可以采用影印、縮印或掃描等復(fù)制手段保存、匯編學(xué)位論文,可以公布包括刊登論文的全部或部分內(nèi)容。導(dǎo)師享有發(fā)表學(xué)位論文、申請(qǐng)成果和專利的權(quán)利。注保密的學(xué)位論文在解密后適用本聲明。作者簽名芻型型日期型蘭導(dǎo)師簽名礁羔蟬日期目錄中文摘要英文摘要前言研究背景研究目的研究內(nèi)容材料與方法實(shí)驗(yàn)材料實(shí)驗(yàn)方法統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果討論小結(jié)參考文獻(xiàn)綜述綜述參考文獻(xiàn)致謝附錄一縮寫詞中英文對(duì)照附錄二評(píng)分表附錄三在讀碩士期間的科研情況一表尋常型銀屑病患者外周血細(xì)胞及相關(guān)因子達(dá)的研究中文摘要【目的】檢測尋常型銀屑病患者和正常人外周血中細(xì)胞及血清中含目里了解尋常型銀屑病患者外周血細(xì)胞中分泌的、細(xì)胞比例。分析細(xì)胞和水平與銀屑病嚴(yán)重程度及病程的相關(guān)性?！痉椒ā砍槿±龑こＰ豌y屑病患者和例正常對(duì)照者外周血,采用五色法流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞中細(xì)胞及可分泌的細(xì)胞、細(xì)胞所占比例,并用法檢測血清中含量,分析細(xì)胞及表達(dá)與疾病嚴(yán)重程度及病程的相關(guān)性。【結(jié)果】尋常型銀屑病患者外周血細(xì)胞比例高于正常對(duì)照組,差異有顯著性尸。尋常型銀屑病患者血清含量士/高于正常對(duì)照組/,差異有顯著性。尋常型銀屑病患者外周血細(xì)胞中可分泌的三型細(xì)胞所占比例分別為、,細(xì)胞明顯高于及細(xì)胞。尋常型銀屑病患者外周血細(xì)胞表達(dá)與評(píng)分呈顯著正相關(guān),血清一水平與評(píng)分呈顯著正相關(guān),但兩者與病程無相關(guān)細(xì)胞,。細(xì)胞與之間呈正相關(guān),【結(jié)論】細(xì)胞及在尋常型銀屑病有高表達(dá),提示參與銀屑病的發(fā)病機(jī)制。細(xì)胞中、三型細(xì)胞均可分泌,其中細(xì)胞為主。細(xì)胞數(shù)及水平均與疾病嚴(yán)重程度相關(guān),可作為判斷疾病嚴(yán)重程度的免疫學(xué)指標(biāo)。【關(guān)鍵詞】尋常型銀屑病細(xì)胞細(xì)胞一【】一一,【】,一,【】,一士/,一士,土,一,嚴(yán),胗嚴(yán),氣【】,【】前言研究背景銀屑病是一種以紅斑鱗屑為特征的慢性復(fù)發(fā)性炎癥性皮膚病,本病影響美觀、反復(fù)發(fā)作,嚴(yán)重影響患者生活質(zhì)量。不同地區(qū)、不同人種的患病率差異較大,世晃范圍內(nèi)平均發(fā)病率【。我國于年行全國流行病學(xué)調(diào)查發(fā)現(xiàn)人群患病率約【截止至年又進(jìn)行一項(xiàng)省流行病學(xué)調(diào)查發(fā)現(xiàn)患病率為,有明顯上升趨勢(shì)。因該病頑固難治,仍被列為當(dāng)今世界皮膚科領(lǐng)域的重要研究課題。目前銀屑病的發(fā)病機(jī)制尚不清楚,遺傳、環(huán)境以及免疫失衡均參與其中,其中自身免疫系統(tǒng)失衡占據(jù)了重要位置。細(xì)胞介導(dǎo)的免疫系統(tǒng)參與銀屑病發(fā)病概況既往研究認(rèn)為銀屑病是角質(zhì)形成細(xì)胞功能紊亂所導(dǎo)致的疾病,隨著等】于年發(fā)現(xiàn)免疫抑制劑環(huán)孢素可有效改善銀屑病癥狀,使得人們認(rèn)識(shí)到免疫系統(tǒng)在銀屑病的發(fā)病中發(fā)揮至關(guān)重要的作用。迄今已有大量臨床和實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)銀屑病是一種器官特異性細(xì)胞介導(dǎo)的炎癥性疾病【,】,其中細(xì)胞亞群中細(xì)胞及被視為參與銀屑病發(fā)病的主要細(xì)胞。細(xì)胞主要通過分泌干擾素,吖,等細(xì)胞因子參與細(xì)胞免疫,目前已有大量實(shí)驗(yàn)證實(shí)銀屑病患者外周血及皮損中細(xì)胞及其相關(guān)因子吖水平升高【,提示其參與銀屑病發(fā)病。細(xì)胞是一群以特征性分泌而命名的新型細(xì)胞亞群【】,目前研究認(rèn)為細(xì)胞主要通過/軸途徑參與銀屑病,通過促進(jìn)抗菌肽生成,上調(diào)促炎趨化因子趨化記憶性細(xì)胞和樹突狀細(xì)胞以及中性粒細(xì)胞遷移入銀屑病皮損中發(fā)揮作用【,此外其亦可分泌通過調(diào)節(jié)角質(zhì)形成細(xì)胞的終末分化來產(chǎn)生銀屑病特征性的皮損】。然而,最近研究發(fā)現(xiàn)了一群分泌、而不產(chǎn)生、和的細(xì)胞亞群,已被證實(shí)獨(dú)立于已知、及細(xì)胞,為一新型輔助性細(xì)胞,即所謂的細(xì)胞【。目前已有研究發(fā)現(xiàn)細(xì)胞及相關(guān)因子在銀屑病外周血及皮損中均有不同程度升高,提示其與銀屑病發(fā)病相關(guān)。細(xì)胞的發(fā)現(xiàn),進(jìn)一步完善了免疫體系,深入了解細(xì)胞及其細(xì)胞因子在銀屑病中作用方式及功能,可為治療銀屑病提供更多的思路。細(xì)胞及參與銀屑病發(fā)病機(jī)理細(xì)胞是一群表達(dá)、和,分泌、而不產(chǎn)生、和丫的新型記憶性細(xì)胞亞群,因其表達(dá)皮膚歸巢受體及,故認(rèn)為與皮膚的病理生理及穩(wěn)態(tài)有密不可分的聯(lián)系。不同于及,調(diào)節(jié)細(xì)胞分化的關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄因子為芳香烴受體,一個(gè)感知環(huán)境毒素和內(nèi)生性代謝產(chǎn)物的配體依賴性轉(zhuǎn)錄因子,其直接作用于編碼誘導(dǎo)性細(xì)胞色素酶,促進(jìn)細(xì)胞的分化。此、以及真皮樹突狀細(xì)胞、表皮朗格漢斯細(xì)胞、漿細(xì)胞樣樹突狀細(xì)胞均可以誘導(dǎo)人初始細(xì)胞向細(xì)胞分化而、在細(xì)胞分化中起抑制作用【們。細(xì)胞主要浸潤于炎性上皮,通過其分泌的細(xì)胞因子如、或誘導(dǎo)產(chǎn)生相關(guān)因子作用于角質(zhì)形成細(xì)胞發(fā)揮其獨(dú)特的作用?？杀磉_(dá)一些基因編碼蛋白如成纖維細(xì)胞生長因子一、一、一等參與組織修復(fù)表達(dá)參與組織纖維化表達(dá)、參與血管生成表達(dá)趨化因子、及從而招募細(xì)胞表現(xiàn)出抗微生物活性但其參與銀屑病發(fā)病主要是通過工一發(fā)揮作用。是年等【以刺激、鼠淋巴瘤細(xì)胞發(fā)現(xiàn)的一個(gè)細(xì)胞因子,為細(xì)胞因子家族成員之一,主要通過作用于與構(gòu)成的異源二聚體發(fā)揮作用,因受體表達(dá)廣泛,故由表達(dá)決定的靶細(xì)胞。雖然目前認(rèn)為主要由免疫性細(xì)胞產(chǎn)生,但并不表達(dá)于免疫細(xì)胞表面,故無論是靜止還是活化的免疫細(xì)胞均不受的調(diào)節(jié),多見于皮膚、胃腸道及呼吸系統(tǒng)細(xì)胞等屏障體系,在皮膚各種組織細(xì)胞中,角質(zhì)形成細(xì)胞、黑色素細(xì)胞、真皮成纖維細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞等均有受體表達(dá),但角質(zhì)形成細(xì)胞為作用的主要靶細(xì)胞【。等年首次報(bào)道發(fā)現(xiàn)參與銀屑病發(fā)病,檢測到銀屑病患者皮損水平明顯升高。隨后大量研究發(fā)現(xiàn)銀屑病患者皮損及血清中均可見升高,且水平與疾病嚴(yán)重程度相關(guān)】,進(jìn)一步證實(shí)參與銀屑病發(fā)病。結(jié)合目前文獻(xiàn)資料,主要通過作用于角質(zhì)形成細(xì)胞發(fā)揮作用,推測可能通過以下幾個(gè)方面參與銀屑病的發(fā)病通過與角質(zhì)形成細(xì)胞上的受體結(jié)合,誘導(dǎo)的磷酸化,從而促進(jìn)角質(zhì)形成細(xì)胞過度增殖上調(diào)角質(zhì)形成細(xì)胞表達(dá)、及基質(zhì)金屬蛋白酶等,參與炎癥的調(diào)節(jié)下調(diào)與角質(zhì)形成細(xì)胞分化相關(guān)基因的表達(dá),如中間絲相關(guān)蛋白,外皮蛋白,兜甲蛋白,熱休克蛋白,鈣調(diào)蛋白相關(guān)蛋白和血紅素加氧酶和角蛋白等,抑制角質(zhì)形成細(xì)胞的正常分化可進(jìn)一步誘導(dǎo)角質(zhì)形成細(xì)胞產(chǎn)生,發(fā)揮類似于的功能,產(chǎn)生一個(gè)繼發(fā)放大效應(yīng)機(jī)制,在銀屑病后期發(fā)揮作用。圖作為特征性因子,在銀屑病中發(fā)揮至關(guān)重要的作用,但在細(xì)胞發(fā)現(xiàn)之前,一直被視為主要由細(xì)胞所產(chǎn)生,此外細(xì)胞亦發(fā)現(xiàn)可分泌】,其他細(xì)胞如細(xì)胞、細(xì)胞、淋巴組織誘,使得我們對(duì)導(dǎo)細(xì)胞及細(xì)胞等在特定條件下亦可不同程度地分泌【。于的歸屬產(chǎn)生疑惑,參與銀屑病發(fā)病的細(xì)胞中發(fā)揮作用的到底是由哪種細(xì)胞所產(chǎn)生,/在銀屑病中發(fā)揮多大的作用,都是我們值得探討的問題。所以明確中各細(xì)胞所分泌的含量比例及與的相關(guān)性分析有助于進(jìn)一步解釋各細(xì)胞發(fā)揮作用的影響因素,進(jìn)一步了解獨(dú)特的作用,以及有助于深入理解銀屑病免疫調(diào)節(jié)機(jī)制。目前關(guān)于細(xì)胞在銀屑病中的表達(dá)情況國外已有報(bào)道,在皮損和外周血中均可見不同程度升高,但尚未見與疾病病程的相關(guān)分析研究,國內(nèi)簡瑜【】等檢測銀屑病和正常人外周血“細(xì)胞”表達(dá)情況,發(fā)現(xiàn)兩者未見差異,但此研究所定義的細(xì)胞其實(shí)為細(xì)胞,此細(xì)胞中還包括可表達(dá)的和細(xì)胞,并非真正的細(xì)胞。故國內(nèi)目前尚未有關(guān)銀屑病與的相關(guān)實(shí)驗(yàn)研究。本實(shí)驗(yàn)我們采用流式細(xì)胞術(shù)和方法來比較銀屑病患者和正常人外周血細(xì)胞在細(xì)胞所占比例以及血清中含量水平,以明確及在銀屑病的作用,同時(shí)比較可分泌的及細(xì)胞在細(xì)胞中所占比例,以明確細(xì)胞中三型細(xì)胞通過分泌對(duì)銀屑病發(fā)病機(jī)制的影響程度,進(jìn)一步通過分析與的相關(guān)性,闡明/在銀屑病發(fā)病獨(dú)特的作用,以期尋求新的治療作用靶點(diǎn)。哇囊勰嗣囊繃圩憾嗣一一。一罄幕,一艘裟端靠蝴材。燾熱囊鼉,黲纛麓謄譬羆。纛譬菱爭霎霪。萋攀器黲蘩籬攀潭藕黎一“二三。謦參纛鬻辮。霉、乏,二。乙”最玉三。霹最毒。鰳盟警警苫占南,舶腳慷璺中扎刪秀善驀。德筋一一一”慕毽國怕奄圖及相關(guān)細(xì)胞因子在銀屑病皮損中的作用,研究目的檢測尋常型銀屑病患者外周血細(xì)胞中細(xì)胞及血清中含量。了解尋常型銀屑病患者外周血細(xì)胞中分泌的、細(xì)胞比例。分析細(xì)胞和一水平與銀屑病嚴(yán)重程度及病程的相關(guān)性。研究內(nèi)容用流式細(xì)胞術(shù)檢測外周血細(xì)胞及細(xì)胞中可分泌的和所占比例。用雙抗體夾心法檢測血清中的表達(dá)。分析細(xì)胞及與評(píng)分及病程的相關(guān)性。材料與方法圇實(shí)驗(yàn)材料研究對(duì)象研究組入選病例為年月至年月在廣東省皮膚病醫(yī)院門診及住院部確診的尋常型銀屑病以下簡稱銀屑病患者例。其中男性例,女性例年齡歲,病程個(gè)月年,評(píng)分之間。所選病例均符合臨床皮膚病學(xué)第三版診斷標(biāo)準(zhǔn)。所有患者近個(gè)月內(nèi)未系統(tǒng)使用糖皮質(zhì)激素及免疫抑制劑個(gè)月內(nèi)未外用糖皮質(zhì)激素或其他制劑或接受紫外線等治療、無合并先天或獲得性自身免疫性疾病及其它免疫相關(guān)性或炎癥性、真菌感染疾病。所有患者均進(jìn)行評(píng)分,評(píng)分細(xì)則如下,是一套國銀屑病面積和嚴(yán)重指數(shù)際通行的評(píng)價(jià)銀屑病皮損面積及嚴(yán)重程度的客觀方法【。把人體分成四部分頭頸部、軀干、上肢及下肢,各占總體表面積的、和。分別計(jì)算各處皮損面積分,皮損面積分根據(jù)其所占百分比判為一分表。表銀屑病患者皮損面積評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)依據(jù)皮損嚴(yán)重程度及不同類型定義脫屑,、浸潤,及紅斑,三項(xiàng)分值,將不同部位的、數(shù)值相加乘上各自相應(yīng)的系數(shù),相加四部分的得分即為總分。、數(shù)值判定根據(jù)其嚴(yán)重程度不同可分為個(gè)級(jí)別級(jí)無皮損級(jí)輕度級(jí)中度級(jí)重度級(jí)極重度表。具體的計(jì)算公式如下分?jǐn)?shù)頭部面積分頭部嚴(yán)重程度分、之和上肢面積分上肢嚴(yán)重程度分、之和軀干面積分軀干嚴(yán)重程度分、之和下肢面積分下肢嚴(yán)重程度分、之和表銀屑病患者皮損嚴(yán)重程度評(píng)分表對(duì)照組入選健康體檢者例,其中男性例,女性例年齡歲。觀察前個(gè)月內(nèi)無細(xì)菌、真菌、病毒感染,既往無銀屑病等免疫相關(guān)皮膚疾病。研究組及對(duì)照組的性別及年齡差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義表。表銀屑病患者組及健康對(duì)照組入組時(shí)的一般情況注兩組的性別、年齡差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義尸主要試劑美國公司美國公司美國公司美國公司美國公司美國公司美國公司美國公司美國公司美國公司美國公司廣州蕊特生物制品有限公司胎牛血清美國公司培養(yǎng)液聯(lián)科生物科技有限公司一“量鬟豢銷、潮赫、髓二淼朋惴刪廠疊氮鈉、氯化鉀、的甲醛、二甲基亞砜美國公司試劑盒聯(lián)科生物科技有限公司主要試劑的配制緩沖液,溶解后,雙層濾紙過濾后,高壓滅菌,疊氮鈉,雙蒸水加至保存。培養(yǎng)液取干粉一包,稱取和,取一次性抽濾一起溶于純水中,調(diào)整值至后定容至,器,用的濾膜過濾除菌,保存取配制好的培養(yǎng)液加入小牛血清,充分混勻后保存待用。佛波酯肉豆蔻酸乙酸鹽一,貯存液,濃度溶于/,分份分裝,。保存工作液貯存液稀于液中,此時(shí)為/工作濃度/細(xì)胞培養(yǎng)每反應(yīng)體系加工作液。,離子霉素貯存液離子霉素溶于濃度/,分份分裝,保存工作液貯存液稀釋于液中,此時(shí)為/工作濃度/細(xì)胞培養(yǎng)每反應(yīng)體系加工作液。貯存液溶于,濃度為/,分份分裝,。保存工作液貯存液稀釋于液中,此時(shí)為/工作濃度反應(yīng)體系加工作液。/細(xì)胞培養(yǎng)每主要實(shí)驗(yàn)儀器型流式細(xì)胞儀美國公司低溫冰箱中國三星公司水浴缸美國公司德國恒溫培養(yǎng)箱生物安全柜德國公司高速低溫離心機(jī)意大利水平離心機(jī)中國上海醫(yī)用分析儀器廠型漩渦混勻器上海醫(yī)科大學(xué)儀器廠電子分析天枰德國公司微量加樣器德國公司肝素鈉抗凝管武漢致遠(yuǎn)醫(yī)療科技有限公司一次性抽濾器武漢致遠(yuǎn)醫(yī)療科技有限公司洗板儀美國公司酶標(biāo)儀鄭州博賽生物工程有限責(zé)任公司實(shí)驗(yàn)方法標(biāo)本收集分別抽取例銀屑病患者和例正常對(duì)照者靜脈血一份分離血清后置保存待檢另一份以肝素鈉抗凝,內(nèi)行流式細(xì)胞術(shù)檢測。實(shí)驗(yàn)步驟流式細(xì)胞術(shù)檢測外周血細(xì)胞取試管一只,加入細(xì)胞培養(yǎng)液和抗凝血各。加入/離子霉素工作液、/工作液、/的。取出試管,混勻分為工作液,混勻,置。、培養(yǎng)箱培養(yǎng)管,管為實(shí)驗(yàn)管,管為同型管兩管均加入、各固定“,室溫避光孵育。兩管分別加入中的液。兩管均加,室溫避光孵育,離心棄掉上清用剩余的些許輕震蕩以重懸細(xì)胞,以免后續(xù)步驟重懸細(xì)胞困難。兩管均加入中的破膜和溶血液皿,靜置后,管中加入、各,管中加入。兩管、各此,室溫避光孵育均加,棄上清。,離心重懸細(xì)胞,上機(jī)檢測。上機(jī)檢測以/設(shè)門,收集個(gè)淋巴細(xì)胞,圈定淋巴細(xì)胞群為,在以/設(shè)門,圈定淋巴細(xì)胞為,在門內(nèi)以/表達(dá)的散點(diǎn)圖中圈定/的淋巴細(xì)胞為,在門內(nèi)收集表達(dá)。/的細(xì)胞,即為細(xì)胞群通常以佛波酯、離子霉素刺激后的表達(dá)會(huì)降低,以熒光觀測比較困難,而刺激后表達(dá)降低不明顯,因此我們用/來代表/細(xì)胞,再分別以和設(shè)門,得到的。的淋巴細(xì)胞群即為細(xì)胞,以熒光抗體染色陽性細(xì)胞的百分率記錄結(jié)果。法檢測血清準(zhǔn)備工作提前從冰箱取出試劑盒及血清樣本,以平衡至室溫濃縮洗滌液用雙蒸水按稀釋,剩余放回。冰箱保存標(biāo)準(zhǔn)品加入標(biāo)本稀釋液至凍干標(biāo)準(zhǔn)品中,靜置,充分溶解后,輕輕混勻此時(shí)濃度為/,進(jìn)行稀釋,標(biāo)準(zhǔn)曲線使用以下濃度、以生物素化/生物素化抗體工作液使用前抗體稀釋液按稀釋濃縮生物素化抗體成為工作液,當(dāng)日使用酶結(jié)合物工作液使用前以酶結(jié)合物稀釋液稀釋濃縮酶結(jié)合物成工作液,當(dāng)日使用。從己平衡至室溫的密封袋中取出酶標(biāo)板,。洗液洗板次,浸泡,棄掉洗液,吸水紙拍干微孔板。每孔加入樣本稀釋液,依次加入不同濃度標(biāo)準(zhǔn)品、標(biāo)本/孑?？瞻卓准訕?biāo)本稀釋液。此過程在內(nèi)完成。每孔加入檢測抗體。用封板膜封板,轉(zhuǎn)/分鐘振蕩,室溫。孵育。棄液,洗板機(jī)清洗次洗滌液為,注入與吸出間隔每孔加入辣根過氧化物酶標(biāo)記的鏈酶親和素,用新的封板膜封板,轉(zhuǎn)/分鐘振蕩,室溫孵育。重復(fù)步驟。每孔加入顯色底物,避光,室溫孵育。每孔加入終止液混勻。內(nèi)測量值,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,計(jì)算其濃度。統(tǒng)計(jì)學(xué)方法本實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的整理和分析使用軟件完成,主要用到的統(tǒng)計(jì)學(xué)方法有描述性統(tǒng)計(jì)分析方法,檢驗(yàn)和相關(guān)分析,檢驗(yàn)水準(zhǔn)為。結(jié)果銀屬病患者與正常對(duì)照組外周血細(xì)胞表達(dá)流式細(xì)胞術(shù)檢測顯示銀屑病患者外周血細(xì)胞比例較健康對(duì)照者顯著升高砌圖、表。避”、。焉?？?。墨”圖外周血細(xì)胞流式細(xì)胞術(shù)分析散點(diǎn)圖左圖為銀屑病患者,右圖為正常對(duì)照者表銀屑病患者與正常對(duì)照組外周血細(xì)胞中細(xì)胞所占比例,。分組例數(shù)百分比,值值銀屑病組士對(duì)照組銀屑病患者外周血中可分泌的細(xì)胞中、及所占比例銀屑病患者外周血中細(xì)胞中、均可分泌工一,其中細(xì)胞較其它兩型細(xì)胞明顯升高。圖、表。叫緗胞寡泌心的細(xì)肇圖銀屑病患者外周血中產(chǎn)生的細(xì)胞比例表銀屑病患者外周血細(xì)胞中產(chǎn)生的、及比例,注木和分別與做檢驗(yàn),尸值均,差異具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。銀屑病患者與正常對(duì)照血清中表達(dá)銀屑病患者血清中表達(dá)水平顯著高于正常對(duì)照組表。表銀屑病患者和正常人血清中一含量/銀屑病患者外周血細(xì)胞、與評(píng)分及病程的相關(guān)性分析相關(guān)分析顯示細(xì)胞、表達(dá)水平與評(píng)分之間均呈正相關(guān)分別、,但與病程之間無相關(guān)性尸。細(xì)胞與表達(dá)呈正相關(guān)尸表,圖表銀屑病患者外周血細(xì)胞、與評(píng)分、病程之間的相關(guān)分析值注表示相關(guān)分析圖從析圖。細(xì)胞與兒相關(guān)分討論銀屑病是一種主要由細(xì)胞介導(dǎo)的免疫性疾病,其中、均已被證實(shí)在銀屑病發(fā)病中發(fā)揮重要作用,兩者主要通過分泌自身特征性因子分泌、分泌,通過各自獨(dú)特的作用方式參與銀屑病的發(fā)生發(fā)展。新近發(fā)現(xiàn)的以分泌為主的細(xì)胞,在銀屑病皮損及外周血均可見升高,亦提示參與銀屑病的發(fā)病。但目前研究發(fā)現(xiàn),、亦可分泌,所以不能與和一樣,可依據(jù)所產(chǎn)生的特征性細(xì)胞因子的功能來推測細(xì)胞本身的作用,所以本實(shí)驗(yàn)通過檢測外周血細(xì)胞中細(xì)胞所占比例,同時(shí)比較可產(chǎn)生的、比例,從而進(jìn)一步闡明的主要來源,進(jìn)一步明確的作用。另外目前尚未見銀屑病患者外周血細(xì)胞及血清與病程相關(guān)關(guān)系的研究報(bào)道,本實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步予以補(bǔ)充完善。我們采用五色流式細(xì)胞術(shù)檢測銀屑病患者和正常人外周血細(xì)胞中細(xì)胞比例,依據(jù)參考文獻(xiàn)將此類細(xì)胞定義為丫。細(xì)胞,檢測發(fā)現(xiàn)銀屑病患者外周血中細(xì)胞較正常人升高見表,提示細(xì)胞參與銀屑病發(fā)病。與目前國外研究相一致。雖然研究認(rèn)為主要定位于皮損【,外周血較之少,但與正常人相比仍有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,提示外周血的細(xì)胞亦可作為觀察銀屑病的指標(biāo),但需要注意的是,白色念珠菌可誘導(dǎo)細(xì)胞的產(chǎn)生,所以選擇樣本要注意剔除合并真菌感染者以免影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果【】。同時(shí)本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)在銀屑病患者外周血細(xì)胞中除了細(xì)胞外,可見丫及細(xì)胞見圖,即分別為分泌的和細(xì)胞,此三型細(xì)胞在細(xì)胞中所占比例以細(xì)胞最高,其次為,次之見表,提示細(xì)胞等發(fā)現(xiàn)在銀屑病患者皮損,為的主要產(chǎn)生者。國外細(xì)胞亞群中可產(chǎn)生的細(xì)胞約占、占,而比例最高達(dá),證實(shí)細(xì)胞為的主要來源?！尽康妊芯堪l(fā)現(xiàn)銀屑病患者外周血及皮損中細(xì)胞均升高,其中在所有可產(chǎn)生的細(xì)胞中包括、細(xì)胞等,細(xì)胞為的主要來源,且和在細(xì)胞中各占約/比例?？梢姛o論是銀屑病患者外周血還是皮損,細(xì)胞表達(dá)均升高,且細(xì)胞較之及為的主要產(chǎn)生者,進(jìn)一步提示在銀屑病發(fā)病及進(jìn)程中發(fā)揮作用的與的關(guān)系密切。本實(shí)驗(yàn)通過檢測血清中含量,發(fā)現(xiàn)銀屑病患者血清中顯著高于正常對(duì)照組見表,提示參與在銀屑病發(fā)病。等發(fā)現(xiàn)銀屑病特征性皮損的形成主要是所導(dǎo)致,主要通過作用于角質(zhì)形成細(xì)胞表面的受體,下調(diào)角質(zhì)形成細(xì)胞分化相關(guān)基因及上調(diào)促炎因子或趨化因子從而引發(fā)銀屑病特征性皮損,而及并無此效應(yīng),進(jìn)一步驗(yàn)證了參與銀屑病的獨(dú)特作用。國外大量研究發(fā)現(xiàn)皮損及外周血中均較正常人明顯升高,且通過阻斷治療可有效減輕銀屑病癥狀,進(jìn)一步提示在銀屑病中的關(guān)鍵作用。而作為的主要產(chǎn)生者,可通過研究針對(duì)/的通路,阻斷其作用途徑,或許可以成為治療介導(dǎo)的炎癥性皮膚病的一新靶點(diǎn)。本研究將細(xì)胞及其相關(guān)因子表達(dá)水平與評(píng)分、病程作相關(guān)性分析發(fā)現(xiàn),細(xì)胞與呈正相關(guān),提示在銀屑病發(fā)病中所起作用與細(xì)胞密切相關(guān)細(xì)胞、與評(píng)分成正相關(guān),提示細(xì)胞、細(xì)胞因子可反映疾病的嚴(yán)重程度,或許可在后續(xù)治療中通過監(jiān)測細(xì)胞及水平的變化來評(píng)價(jià)療效。細(xì)胞、與病程無相關(guān)性,或許是基于及主要參與銀屑病皮損形成及發(fā)展,當(dāng)疾病緩解皮疹消退時(shí)細(xì)胞數(shù)量即降低,并非隨病程遷延而長期存在,具體機(jī)制還有待于進(jìn)一步探討。以上研究結(jié)果提示,細(xì)胞及相關(guān)因子與銀屑病發(fā)病密切相關(guān),并可能作為判斷疾病進(jìn)展和評(píng)價(jià)療效的免疫學(xué)指標(biāo)。這為進(jìn)一步深入研究銀屑病發(fā)病機(jī)理以及銀屑病的免疫治療方案提供理論基礎(chǔ)。目前,細(xì)胞的研究已漸成為醫(yī)學(xué)及分子生物學(xué)研究的熱點(diǎn),針對(duì)細(xì)胞因子及其受體的靶向藥物抗體己在研發(fā)】。目前針對(duì)的人源化單克隆抗體用于治療中重度銀屑病的安全性和耐受性的期試驗(yàn)即將發(fā)表【。但目前這些研發(fā)還處于初始階段,隨著研究的深入,研發(fā)針對(duì)細(xì)胞的相關(guān)生物制劑以阻斷/通路的靶向藥物,將是銀屑病免疫治療的一個(gè)方向。小結(jié)細(xì)胞及在尋常型銀屑病有高表達(dá),提示參與銀屑病的發(fā)病機(jī)制。細(xì)胞中、三型細(xì)胞均可分泌,其中細(xì)胞為主。細(xì)胞及水平均與疾病嚴(yán)重程度相關(guān),可作為判斷疾病嚴(yán)重程度的免疫學(xué)指標(biāo)。參考文獻(xiàn),】,全國銀屑病流行調(diào)查組全國年銀屑病流行調(diào)查報(bào)告中華皮膚科雜志,丁曉嵐,王婷琳,沈佚葳,等中國六省市銀屑病流行病學(xué)調(diào)查中國皮膚性病學(xué)雜志,十,吖,/,一一,一“”【一,】,【】,【,】一一,一,一,】,飛【,一,】,【一,【,簡瑜,董萍云,任占芬,等尋常性銀屑病患者外周血細(xì)胞及血清中的水平中國皮膚性病學(xué)雜志,趙辨臨床皮膚病學(xué)第版南京江蘇科技出版社,】張長宋,趙天恩,陳樹民銀屑病病情嚴(yán)重程度評(píng)判指標(biāo)的研究現(xiàn)狀國外醫(yī)學(xué)皮膚性病學(xué)分冊(cè),【,【。,】,綜述及其細(xì)胞因子在銀屑病發(fā)病機(jī)制中的作用銀屑病以慢性紅斑鱗屑反復(fù)發(fā)作為特征,主要為細(xì)胞介導(dǎo)的一種自身免疫失衡性疾病。既往認(rèn)為銀屑病主要為介導(dǎo)發(fā)生,隨著細(xì)胞新成員、的不斷發(fā)現(xiàn)且被證實(shí)在銀屑病中有不同程度升高,使得對(duì)參與銀屑病的免疫機(jī)制有待于進(jìn)一步探討,同時(shí)對(duì)于既往所認(rèn)為主要為、所分泌的觀點(diǎn),隨著的進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)亦有待于進(jìn)一步明確,作為一個(gè)新生物,通過闡明其可能的發(fā)病機(jī)制,或許可以成為一個(gè)治療銀屑病的靶點(diǎn)。故本文對(duì)近幾年有關(guān)及其相關(guān)因子與銀屑病之間的相互關(guān)系的研究進(jìn)行簡單的綜述。細(xì)胞的發(fā)現(xiàn)、分化調(diào)節(jié)及生物學(xué)功能細(xì)胞是年等等采用流式細(xì)胞術(shù)發(fā)現(xiàn)的一群表達(dá),分泌一、而不產(chǎn)生、一和,獨(dú)立于己矢、及細(xì)胞的記憶性細(xì)胞亞群。同年做了類似的研究,隨后等證實(shí)細(xì)胞為亞群,且在細(xì)胞、細(xì)胞、細(xì)胞或細(xì)胞誘導(dǎo)環(huán)境下,皮膚來源的記。憶細(xì)胞克隆不會(huì)失去分泌一的能力,也不會(huì)分泌其他細(xì)胞亞群的特征細(xì)胞因子?；谄淇寺》€(wěn)定性,選擇性的表達(dá)特異性轉(zhuǎn)錄因子等,由此確定細(xì)胞是一個(gè)終末分化及獨(dú)立穩(wěn)定的細(xì)胞譜系。和均可以誘導(dǎo)人初始細(xì)胞向細(xì)胞分化,和同時(shí)刺激則效應(yīng)更強(qiáng)。除細(xì)胞因子外,皮膚樹突狀細(xì)胞如真皮樹突狀細(xì)胞和表皮朗格漢斯細(xì)胞均可誘導(dǎo)細(xì)胞分化,而朗格漢斯細(xì)胞的作用更甚。另發(fā)現(xiàn)在某些病理情況下出現(xiàn)的第三類樹突狀細(xì)胞一一漿細(xì)胞樣樹突狀細(xì)胞在誘導(dǎo)細(xì)胞的分化方面較之傳統(tǒng)的樹突狀細(xì)胞更強(qiáng)。除此之外,發(fā)現(xiàn)了一個(gè)調(diào)節(jié)細(xì)胞分化的關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄因子芳香烴受體,一個(gè)感知環(huán)境毒素和內(nèi)生性的代謝產(chǎn)物的配體依賴性轉(zhuǎn)錄因子,最近的實(shí)驗(yàn)證實(shí)在人初始細(xì)胞處于細(xì)胞極化,可以促進(jìn)細(xì)胞的條件下,激動(dòng)劑萘黃酮分化,但抑細(xì)胞分化乜。而、在細(xì)胞分化中均起抑制作用。細(xì)胞表達(dá)皮膚歸巢受體口,故認(rèn)為與皮膚的病理生理及穩(wěn)態(tài)有密不可的聯(lián)系。細(xì)胞分泌的成纖維細(xì)胞生長因子如、一、等對(duì)疾病的發(fā)展、形態(tài)學(xué)改變、血管生成起重要作用此外,上清液可加強(qiáng)上皮傷口愈合。細(xì)胞分泌的主要細(xì)胞因子是年等瞄以束激小鼠淋巴瘤細(xì)胞發(fā)現(xiàn)的一個(gè)細(xì)胞因子,其氨基酸與有的同源性,故歸為細(xì)胞因子家族成員之一。一的受體是以與工一構(gòu)成的異源二聚體,廣泛表達(dá)于各免疫細(xì)胞細(xì)胞、細(xì)胞、細(xì)胞,而一表達(dá)于多種非免疫組織如皮膚、肝、小腸、結(jié)腸、腎、胰腺中,免疫細(xì)胞表面則缺少一的表達(dá)嘲。最初認(rèn)為是細(xì)胞相關(guān)因子,因在的極化條件下,的產(chǎn)生明顯增高盯,后發(fā)現(xiàn)細(xì)胞除了產(chǎn)生外亦可產(chǎn)生一,并曾一度認(rèn)為為此種細(xì)胞因子的主要來源隨。除此之外,細(xì)胞陋、細(xì)胞陽,淋巴組織誘導(dǎo)細(xì)胞,叫及丫細(xì)胞亦發(fā)現(xiàn)可產(chǎn)生一。隨著新型細(xì)胞的發(fā)現(xiàn),且發(fā)現(xiàn)其以特征性地分泌一為主,使得對(duì)的認(rèn)識(shí)進(jìn)一步加深。一的產(chǎn)生可受多種因素的調(diào)節(jié)和影響,一或一均可直接誘導(dǎo)鼠和人初始細(xì)胞產(chǎn)生一,則抑制其產(chǎn)生陋在小鼠,調(diào)控細(xì)胞分化的丫矛可同時(shí)影響一和的產(chǎn)生,但是將轉(zhuǎn)導(dǎo)入人初始免疫細(xì)胞中并不會(huì)導(dǎo)致工一的產(chǎn)生,體現(xiàn)了種屬差異。諸多研究已表明一在先天免疫,慢性炎癥性疾病,感染性疾病、組織修復(fù)中均發(fā)揮重要作用。僅作為一個(gè)多效能的細(xì)胞因子可為體內(nèi)許多細(xì)胞分泌,既往研究認(rèn)為單核細(xì)胞系如巨噬細(xì)胞、朗格漢斯細(xì)胞及小角質(zhì)細(xì)胞等是其主要產(chǎn)生者。近來等口對(duì)皮膚來源的細(xì)胞克隆發(fā)現(xiàn)、及等亦可有數(shù)量不等的分泌。主要通過與受體結(jié)合從而對(duì)細(xì)胞關(guān)鍵功能包括增殖、存活、。分化和凋亡進(jìn)行調(diào)控的作用除在體內(nèi)外可殺傷腫瘤細(xì)胞外,其亦是機(jī)體炎癥與免疫應(yīng)答的重要調(diào)節(jié)因子。此外,細(xì)胞尚可分泌少量、等細(xì)胞因子。細(xì)胞及其因子與銀屑病之間的關(guān)系相關(guān)因子參與銀屑病發(fā)病的機(jī)制研究因受體可分布于皮膚尤其是角質(zhì)形成細(xì)胞,故一些研究針對(duì)作用于表皮來分析其可能的發(fā)病機(jī)制。等以工一束激培養(yǎng)的正常上皮角質(zhì)形成細(xì)胞,可觀察到、及基質(zhì)金屬蛋白酶等增高,這些因子在正常皮膚或未分化的角質(zhì)形成細(xì)胞中檢測不到,而在異常分化的銀屑病角質(zhì)形成細(xì)胞中呈高表達(dá)另外在重建人表皮中,予以一露激,可見全層增厚,同時(shí)可觀察到顆粒層透明角質(zhì)顆粒消失,這些均類似于銀屑病的病理表現(xiàn),而這種效應(yīng)是通過抑制角質(zhì)形成細(xì)胞分化相關(guān)基因如中間絲相關(guān)蛋白,外皮蛋白,兜甲蛋白,一熱休克蛋白,鈣調(diào)蛋白相關(guān)蛋白、血紅素加氧酶及角蛋白等因子而發(fā)揮作用的。等副亦通過建立小鼠模型,予以一束激發(fā)現(xiàn)可產(chǎn)生棘層肥厚和顆粒層消失的銀屑病樣損害,且證實(shí)這種作用是一直接作用于角質(zhì)形成細(xì)胞抑制其終末分化產(chǎn)生的,同時(shí)亦觀察至一對(duì)一作用的一個(gè)協(xié)同效應(yīng)。剛等給予建立銀屑病樣皮損的小鼠以工一中和抗體,發(fā)現(xiàn)棘層肥厚有緩解以及炎癥細(xì)胞或因子減少。此外除了在皮損中觀察至一增多外,亦有不少實(shí)驗(yàn)檢測銀屑病患者血漿一水平較正常人顯著升高口,且與銀屑病的嚴(yán)重程度相關(guān),這些均表一在銀屑病中發(fā)揮重要作用。而這種作用主要體現(xiàn)于其作用于角質(zhì)形成細(xì)胞,促進(jìn)表皮增生及促炎因子的生成以及抑制影響上皮分化的相關(guān)蛋白。對(duì)于目前國內(nèi)外已有一些研究發(fā)現(xiàn)鏈的在銀屑病皮損中過度表達(dá),且銀屑病皮損中工一的表達(dá)亦明顯高于正常人,此外國內(nèi)外亦有一些研究發(fā)現(xiàn)外周血中表達(dá)增多,近來等盟叫使用基因分型平臺(tái)對(duì)名關(guān)節(jié)型銀屑病,矛名尋常型銀屑病,患者位于基因中的兩個(gè)單核苷酸多態(tài)性,和進(jìn)行基因分型發(fā)現(xiàn),這兩基因均與高度相關(guān),而并未發(fā)現(xiàn)與有顯著相關(guān)的,證實(shí)可作為關(guān)節(jié)型銀屑病患者的一個(gè)特異性危險(xiǎn)因素,且可據(jù)此從尋常型銀屑病病人中篩選出可能發(fā)展為關(guān)節(jié)型銀屑病的患者。等乜。采用的檢測方法參與銀屑病發(fā)病亦有不少研究,發(fā)現(xiàn)主要是通過刺激角質(zhì)形成細(xì)胞,從而誘導(dǎo)角質(zhì)形成細(xì)胞產(chǎn)生一些促炎因子如、等,這些促炎因子己被證實(shí)在銀屑病發(fā)病機(jī)制有重要作用,且研究同時(shí)發(fā)現(xiàn)協(xié)同一一起刺激,可使這種效應(yīng)加倍。等在角質(zhì)形成細(xì)胞培養(yǎng)中分別加入一、和二者結(jié)合體,發(fā)現(xiàn)兩者聯(lián)合刺激角質(zhì)形成細(xì)胞及相關(guān)因子的生成是單獨(dú)刺激效應(yīng)的倍,但具體機(jī)制不詳。在銀屑病發(fā)病中的研究目前關(guān)于細(xì)胞的研究較少,國外多采用流式細(xì)胞術(shù)檢測銀屑病患者血液和皮損中的數(shù)量,發(fā)現(xiàn)其在外周血中較少,而在銀屑病患者皮損中相對(duì)較多。等口通過對(duì)過敏性接觸性皮炎、特異性濕疹和銀屑病患者炎癥部位皮損體外短期培養(yǎng),檢測發(fā)現(xiàn)皮損處細(xì)胞數(shù)量遠(yuǎn)高于外周血,可見細(xì)胞主要富集于炎癥皮損部位,且在同一實(shí)驗(yàn)中經(jīng)過分離過敏性接觸性皮炎和特異性濕疹患者真表皮層,分別檢測表皮與真皮層中產(chǎn)工一細(xì)胞發(fā)現(xiàn)表皮層分布居多,此項(xiàng)研究未在銀屑病患者中進(jìn)行檢測,但有一定的參考價(jià)值。等瞳在研究特異性皮炎與銀屑病中相關(guān)因子表達(dá)差別研究中亦發(fā)現(xiàn)細(xì)胞在銀屑病皮損中有增多,且發(fā)現(xiàn)銀屑病患者中一主要由禾產(chǎn)生,而在特異性皮炎中口細(xì)胞雖細(xì)胞產(chǎn)生的工一則為一的主要來源。體現(xiàn)了不同疾病一來源的差異性。等踟通過多重標(biāo)準(zhǔn)重新定義、和,采用流式細(xì)胞術(shù)檢測銀屑病患者和正常人外周血中各型細(xì)胞數(shù)量,銀屑病患者外周血數(shù)量明顯高于正常人,其中較之、升高更為明顯。同時(shí)發(fā)現(xiàn)通過阻斷可有效阻斷工一、等的產(chǎn)生,