腎消通絡(luò)方對糖尿病腎病的防治作用及作用機(jī)制研究

河北醫(yī)科大學(xué)學(xué)位論文使用授權(quán)及知識(shí)產(chǎn)權(quán)歸屬承諾本學(xué)位論文在導(dǎo)師或指導(dǎo)小組的指導(dǎo)下,由本人獨(dú)立完成。本學(xué)位論文研究所獲得的研究成果,其知識(shí)產(chǎn)權(quán)歸河北醫(yī)科大學(xué)所有。河北醫(yī)科大學(xué)有權(quán)對本學(xué)位論文進(jìn)行交流、公開和使用。凡發(fā)表與學(xué)位論文主要內(nèi)容相關(guān)的論文,第一署名單位為河北醫(yī)科大學(xué),試驗(yàn)材料、原始數(shù)據(jù)、申報(bào)的專利等知識(shí)產(chǎn)權(quán)均歸河北醫(yī)科大學(xué)所有。否則,承擔(dān)相應(yīng)的法律責(zé)任肇。、,堿螻轢姒嘭翩褲砂驀君尹鬻尹。河北醫(yī)科大學(xué)研究生學(xué)位論文獨(dú)創(chuàng)性聲明本論文是在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及取得的研究成果,除了文中特別加以標(biāo)注等內(nèi)容外,文中不包含其他人已發(fā)表或撰寫的研究成果,指導(dǎo)教師對此進(jìn)行了審定。本論文由本人獨(dú)立撰寫,文責(zé)自負(fù)。研究生簽名赳潑嘶夕弓年薌月工/日導(dǎo)師霧瓠目錄中文摘要英文摘要研究論文。腎消通絡(luò)方對糖尿病腎病的防治作用及作用機(jī)制的研究前言刖吾材料與方法結(jié)果多日二附圖附表討論結(jié)論參考文獻(xiàn)綜述糖尿病腎病發(fā)病相關(guān)細(xì)胞因子的研究進(jìn)展致謝個(gè)人簡歷中文摘要腎消通絡(luò)方對糖尿病腎病的防治作用及作用機(jī)制的研究摘要目的觀察腎消通絡(luò)方對糖尿病腎病大鼠的防治作用,以/信號(hào)通路為核心研究腎消通絡(luò)方的作用機(jī)制。方法選用清潔級、雄性大鼠只,體重,適應(yīng)性飼養(yǎng)周,隨機(jī)選取只為對照組組,只為造模組。采用次性腹腔注射鏈脲佐菌素方法制作糖尿病模型,后,尾靜脈取血測定造模組大鼠空腹血糖,高于/者為成功糖尿病模型。對成功造模的大鼠進(jìn)行完全隨機(jī)分組模型組組、厄貝沙坦組組、中藥組組。次日起開始灌服給藥,中藥按生藥/,厄貝沙坦按/,模型組和對照組灌服等量蒸餾水,次/天,給藥共周,自由飲食。周末,尾靜脈取血測定大鼠空腹血糖使用代謝籠留取尿,測定尿微量白蛋白含量腹腔注射水合氯醛麻醉動(dòng)物,腹主動(dòng)脈取血,離心,留取血清標(biāo)本,保存,檢測血肌酐、尿素氮、膽固醇、甘油三酯左側(cè)腎組織,多聚甲醛溶液固定,行、染色,觀察腎臟病理改變,采用免疫組織化學(xué)法檢測轉(zhuǎn)化生長因子、血管細(xì)胞黏附分子的表達(dá)右側(cè)腎組織皮質(zhì)部切取組織固定于電鏡液,電鏡觀察腎臟超微結(jié)構(gòu)改變右側(cè)腎組織其的表達(dá),采余部分液氮保存,采用測定腎組織中一用測定腎組織中/、結(jié)締組織生長因子、纖維粘連蛋白的表達(dá)。結(jié)果腎消通絡(luò)方對大鼠血糖的影響對照組血糖處于正常范圍內(nèi),模型組、厄貝沙坦組、中藥組血糖水平較對照組明顯升高,中藥組血糖水平有下降趨勢,但較模型組、厄貝沙坦組之間無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義胗。腎消通絡(luò)方對大鼠的影響模型組、厄貝沙坦組、中藥組水平較對照組明顯升高尸中文摘要,模型組較厄貝沙坦組、中藥組水平明顯升高氏,厄貝沙坦組、中藥組之間水平差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。腎消通絡(luò)方對大鼠腎功能的影響模型組、厄貝沙坦組、中藥組、水平較對照組明顯升高氏,模型組較厄貝沙坦組、中藥組、水平明顯升高,厄貝沙坦組、中藥組之間、水平差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義尸。腎消通絡(luò)方對大鼠腎血脂的影響模型組、厄貝沙坦組、中藥組水平較對照組明顯升高尸,模型組較厄貝沙坦組、中藥組水平明顯升高,厄貝沙坦組、中藥組之間水平差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義尸。各組之間水平差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,但中藥組水平有下降趨勢。腎組織病理形態(tài)學(xué)觀察染色對照組腎小球、腎小管形體結(jié)構(gòu)基本正常模型組腎臟病理改變明顯,腎小球基底膜明顯增厚,細(xì)胞外基質(zhì)積聚,系膜細(xì)胞增生厄貝沙坦組和中藥組較模型組病理改變減輕,兩組間差異不明顯。染色對照組腎小球形體結(jié)構(gòu)基本正常,陽性物質(zhì)無明顯增多模型組腎臟病理改變明顯,系膜區(qū)陽性物質(zhì)增多,紅染明顯,腎小球基底膜明顯增厚,細(xì)胞外基質(zhì)積聚厄貝沙坦組和中藥組病理改變較模型組減輕,陽性物質(zhì)較模型組有所減少。電鏡觀察對照組腎小球基底膜結(jié)構(gòu)基本正常,厚度均勻,足突結(jié)構(gòu)正常,足細(xì)胞無調(diào)亡、脫落模型組腎小球基底膜廣泛增厚,部分節(jié)段明顯,大量足突融合和缺失,部分足細(xì)胞丟失厄貝沙坦組和中藥組病理改變較模型組減輕,腎小球基底膜增厚不明顯,足突融合較少。腎消通絡(luò)方對大鼠腎臟、表達(dá)的影響對照組、在腎小球,腎小管處均有少量表達(dá)模型組、厄貝沙坦組、中藥組、一的表達(dá)水平較對照組明顯升高,模型組在腎小球內(nèi)可見、大量表達(dá),在內(nèi)皮細(xì)胞、系膜細(xì)胞處均呈現(xiàn)表達(dá)增高,在細(xì)胞外基質(zhì)也有散在陽性表達(dá)厄貝沙坦組和中藥組、的表達(dá)水平較模型組有所降低,部分腎小球出現(xiàn)表達(dá)增高,整體水平較模型組呈現(xiàn)下調(diào),厄貝沙坦組和中藥組之間差異不明顯。腎消通絡(luò)方對大鼠腎臟表達(dá)的影響中文摘要模型組、厄貝沙坦組、中藥組水平較對照組明顯升水平明顯升高高,模型組較厄貝沙坦組、中藥組水平差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意,厄貝沙坦組、中藥組之間義。腎消通絡(luò)方對大鼠腎臟/、表達(dá)的影響模型組/水平較對照組、厄貝沙坦組、中藥組明顯升高,對照組、厄貝沙坦組、中藥組之間/水平差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義尸。厄貝沙坦組、中藥組水平較對照組、模型組明顯升高氏,中藥組水平較厄貝沙坦組明顯升高,對照組、模型組之間水平差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。模型組、厄貝沙坦組、中藥組、水平較對照組明顯升高,模型組、中藥組、水平較厄貝沙坦組明顯升高,模型組、水平較中藥組明顯升高。結(jié)論腎消通絡(luò)方可以減少,降低、水平,具有保護(hù)腎功能的作用。腎消通絡(luò)方可使水平降低,血糖、水平呈下降趨勢。腎消通絡(luò)方能夠減輕腎臟病理損傷,對腎臟組織具有保護(hù)作用。腎消通絡(luò)方能夠下調(diào)腎臟及的水平,降低/信號(hào)通路的抑制/的水平,提高的水平,對作用可能是其作用機(jī)制之一。腎消通絡(luò)方能夠降低腎組織中、的水平,減少細(xì)胞外基質(zhì)積聚,減輕腎臟纖維化,發(fā)揮腎臟保護(hù)作用。腎消通絡(luò)方與厄貝沙坦的腎臟保護(hù)作用效果相近,此外還具有一定的調(diào)節(jié)血脂、血糖的作用,可以改善血液環(huán)境。關(guān)鍵詞糖尿病。腎病腎消通絡(luò)方/英文摘要一/,/,/,/,一/,英文摘要。,氏,戶,氏,胗,尸,護(hù),尸,尸尸,英文摘要,筍,一即,尸,尸,尸/,/,氏,胗英文摘要,氏,尸,尸,尸,氏,/,/,一/研究論文腎消通絡(luò)方對糖尿病腎病的防治作用及作用機(jī)制的研究一刖吾,糖尿病腎病,是糖尿病的常見并發(fā)癥之一,屬于微血管病變,臨床表現(xiàn)為蛋白尿,高血壓,水腫,漸進(jìn)性。腎功能損害,最終導(dǎo)致腎功能衰竭,是患者的主要死亡原因之一。的腎臟病理改變主要是腎小球基底膜增厚、系膜擴(kuò)張和細(xì)胞外基質(zhì)積聚,最終導(dǎo)致腎小球硬化。如何有效的預(yù)防和治療,延緩的發(fā)展,保護(hù)腎功能,提高患者生存質(zhì)量,是醫(yī)學(xué)界共同關(guān)注的問題。祖國傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)在的臨床治療中有著較好療效和特色優(yōu)勢,有減少蛋白尿、保護(hù)腎功能等作用,可延緩的進(jìn)展,改善和提高患者生存質(zhì)量,的中西醫(yī)結(jié)合治療效果較好,值得臨床推廣應(yīng)用。的發(fā)病機(jī)理尚未完全闡明,其發(fā)生和發(fā)展與多種因素相關(guān)。多種細(xì)胞因子與的發(fā)生和發(fā)展有密切關(guān)系,各種細(xì)胞因子之間構(gòu)成復(fù)雜的網(wǎng)絡(luò)關(guān)系,通過多種途徑相互影響,進(jìn)而影響的發(fā)生和發(fā)展。是發(fā)病過程中的重要,一細(xì)胞因子之一,是多種致病因素作用的核心因子,一具有誘導(dǎo)腎小球及腎小管細(xì)胞肥大,促進(jìn)細(xì)胞外基質(zhì)積聚,抑制細(xì)胞外基質(zhì)降解等作用。目前認(rèn)為,在介導(dǎo)的多信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)中,/信號(hào)通路是重要的作用途徑,家族蛋白是參與在細(xì)胞內(nèi)信號(hào)傳導(dǎo)的一族蛋白質(zhì),在介導(dǎo)細(xì)胞外基質(zhì)代謝異常,促進(jìn)發(fā)病中起著,重要的作用。血管細(xì)胞粘附分子、結(jié)締組織生長因子,、纖維粘連蛋白,與一之間形成復(fù)雜的相互作用,共同參與的發(fā)生和發(fā)展。本研究采用腹腔注射鏈脲佐菌素,復(fù)制大鼠/模型,通過對大鼠血糖、血脂、腎功能和腎臟病理的觀察,以一信號(hào)通路為核心,結(jié)合、表達(dá)的變化,研究腎消通絡(luò)方對的防治作用及作用機(jī)制,為臨床提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。研究論文材料與方法材料實(shí)驗(yàn)動(dòng)物雄性大鼠,清潔級,只,體重,購自河北醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心普通飼料,購自河北醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。于河北醫(yī)科大學(xué)西校區(qū)科研樓動(dòng)物室飼養(yǎng)。實(shí)驗(yàn)藥材腎消通絡(luò)方黃芪、黃連、元參、丹參、紅曲、蟬蛻、地龍、烏梢蛇、地錦草、鬼箭羽、金雀根,購自國藥河北樂仁堂醫(yī)藥連鎖有限公司。厄貝沙坦批號(hào),規(guī)格/片,由賽諾菲杭州制藥有限公司生產(chǎn)。主要試劑血糖試紙美國強(qiáng)生公司鏈脲佐菌素美國公司抗體美國公司美國公司抗體/抗體美國公司抗體美國公司抗體美國公司抗體美國公司肌酐測定試劑盒長春匯力生物技術(shù)有限公司尿素測定試劑盒保定長城臨床試劑有限公司甘油三酯測定試劑盒中生北控生物科技股份有限公司總膽固醇測定試劑盒中生北控生物科技股份有限公司主要儀器型擴(kuò)增儀美國公司穩(wěn)豪型血糖儀美國強(qiáng)生公司型切片機(jī)德國公司型制冰機(jī)日本公司研究論文型顯微鏡日本奧林巴斯公司日立型透射電子顯微鏡日本公司型恒溫水浴箱上海一恒科技有限公司型冰箱青島海爾股份有限公司型超低溫保存箱青島海爾股份有限公司型紫外可見分光光度計(jì)上海精密科學(xué)儀器有限公司型高速冷凍離心機(jī)上海力申科學(xué)儀器有限公司型超純水機(jī)力康生物醫(yī)療科技控股有限公司型電子天平北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司型計(jì)方法試劑和藥物配制配制/檸檬酸一檸檬酸鈉緩沖液液檸檬酸分子量稱取,加超純水,即/檸檬酸溶液液檸檬酸鈉分子量稱取,加超純水,即檸檬酸鈉溶液。緩沖液按配置,取液和液混合,調(diào)定至。每次取溶于緩沖液,即時(shí)使用。多聚甲醛固定液磷酸二氫鈉分子量稱取稱取,磷酸氫二鈉分子量,加/蒸餾水,配制成加入多聚甲醛,加熱溶解至透明。戊二醛固定液/磷酸氫二鈉、/磷酸二氫鈉、戊二醛,加雙蒸水至。中藥每付藥物共,浸泡后共煎,煎煮次,每次,將兩次煎出藥液混合,濃縮至約,約為含生藥/。厄貝沙坦/片,研碎,溶于羧甲基纖維素納液,片/,濃度為/。動(dòng)物模型的制備大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)周,隨機(jī)抽取只為對照組組,其余只為造模組。造模組按空腹體重,次性腹腔注射/制作模型,對照組注射等量緩沖液。后,尾靜脈取血測定造模組研究論文空腹血糖,高于/者為成功模型。造模期間動(dòng)物死亡只,造模失敗只。分組及給藥對模型大鼠進(jìn)行隨機(jī)分組模型組組、厄貝沙坦組組、中藥組組,每組各只。次日起開始灌服給藥,每日給藥,次/天,給藥共周。中藥組按生藥/厄貝沙坦組按/模型組和對照組給予等量蒸餾水,自由飲食。實(shí)驗(yàn)期間模型組死亡只,厄貝沙坦組死亡只,中藥組死亡只。標(biāo)本采集給藥周末,尾靜脈取血測定空腹血糖腎臟取材前,使用代謝籠留取尿,記錄尿量,。離心,留取標(biāo)本,保存腹腔注射水合氯醛麻醉動(dòng)物,腹主動(dòng)脈取血,。離心,留取血清標(biāo)本,。保存多聚甲醛固定左側(cè)腎組織右側(cè)腎組織皮質(zhì)部切取組織固定于電鏡液,其余部分液氮保存。觀察指標(biāo)與方法血糖測定采用強(qiáng)生穩(wěn)豪型血糖儀測定大鼠尾靜脈血糖。測定采用全自動(dòng)生化分析儀測定大鼠濃度,根據(jù)尿量,計(jì)算的排出量。血生化指標(biāo)測定采用分光光度計(jì),測定大鼠血生化指標(biāo),血肌酐采用苦味酸法、尿素氮采用法、膽固醇采用法、甘油三酯采用法,按試劑盒使用說明書進(jìn)行檢測。組織學(xué)檢查左側(cè)腎組織,多聚甲醛溶液固定,將組織切成厚,按步驟脫水酒精,酒精,酒精,酒精,無水酒精,二甲苯透明,浸臘,石蠟包埋,制成厚的切片,行、染色,光學(xué)顯微鏡下觀察腎臟病理改變。染色研究論文將組織切片烤箱,按順序進(jìn)行染色二甲苯,無水酒精,酒精,酒精,水沈,蘇木精染色,水沈,鹽酸酒精分化,水洗,氨水,伊紅染色,水沈,酒精,酒精,酒精,無水酒精,二甲苯,中性樹膠封片,待干。染色結(jié)果細(xì)胞核呈藍(lán)色,胞質(zhì)、膠原纖維和紅細(xì)胞呈深淺不一的紅色。使用型顯微鏡和軟件采集圖像。染色將組織切片烤箱,按順序進(jìn)行染色二甲苯,無水酒精,酒精,酒精,水洗,過碘酸酒精液,水沈,氏液,水沈,哈瑞蘇木精,水洗,酒精,無水酒精,二甲苯,中性樹膠封片,待干。染色結(jié)果陽性為紅色,細(xì)胞核藍(lán)色,糖原呈紫紅顆粒,粘蛋白淡到深紫色。使用型顯微鏡和軟件采集圖像。電鏡觀察電鏡液固定腎組織,。保存,沖洗次,鋨酸固定,去離子水沖洗脫水丙酮,丙酮,丙酮,丙酮,包埋,超薄切片,醋酸鈾及枸櫞酸鉛雙重染色。采用日立一型透射電子顯微鏡,倍率觀察、采集圖像。、表達(dá)的測定法免疫組織化學(xué)步驟腎組織經(jīng)多聚甲醛固定,常規(guī)石蠟包埋切片,制成厚度切片,切片脫蠟至水,浸沈,去離子水室溫孵育,沖洗維持,冷卻至室溫,枸櫞酸緩沖液沖洗,滴加封閉液,恒溫水浴箱孵育,吸去液體,滴加一抗,。過夜,沖洗。滴加生物素化二抗工作液,恒溫水浴箱孵育,沖洗,滴加辣根酶標(biāo)記鏈酶卵白素工作液,恒溫水浴箱。孵育,沖洗,顯色,自來水沖洗,蘇木素復(fù)染,水洗,含的酒精溶液,自來水清洗,酒精,無水酒精,二甲苯,中性樹膠封片,待干。使用型顯微鏡和軟件采集圖像。研究論文免疫組織化學(xué)染色結(jié)果免疫組織化學(xué)染色陽性為棕黃色,陰性呈無色至淡黃色,細(xì)胞核藍(lán)色。的表達(dá)測定步驟總的提取,用勻漿器勻漿至透明狀,取腎皮質(zhì)組織左右,加入轉(zhuǎn)移至另一離心管,室溫靜置離心,取上清液至另一離心管,加入氯仿,震蕩混勻,室溫靜置離一,取上層水相至另一離心管,加入異丙醇,充分混勻,室溫靜置離心,離心管的底部及側(cè)面可見在白色的小團(tuán)沉淀,棄上清,加入酒精,棄上清,漂沈沉淀次。無菌工作臺(tái)中,沉淀干燥,加入雙蒸水處理,充分溶,稀釋,使用紫外分光光度計(jì),讀取解。取和處值,/,即可使用,總濃度稀釋倍數(shù)肛/,用時(shí)調(diào)整為“肛。逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)取總,肛,加入反應(yīng)體系管中,反應(yīng)體系,等。加入雙蒸水,處理至,震蕩混勻,離心,儀加入礦物油,合成,逆轉(zhuǎn)錄酶失活,。保存?zhèn)溆谩７磻?yīng)擴(kuò)增引物退火溫度為一上游引物下游引物擴(kuò)增片段為退火溫度為上游引物下游引物擴(kuò)增片段為研究論文反應(yīng)體系聚合酶,上樣染料,穩(wěn)定劑,優(yōu)化劑,反應(yīng)體系反應(yīng)緩沖液,逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)產(chǎn)物,上下游引物等。震蕩混勻,短暫離心,儀加入少許礦物油,擴(kuò)增。反應(yīng)條件變性。,各自的退火溫度,個(gè)循環(huán)延伸。個(gè)循環(huán),一結(jié)果分析每個(gè)標(biāo)本的擴(kuò)增產(chǎn)物取肛,瓊脂糖凝膠含核酸染料電泳,以為標(biāo)準(zhǔn)片段標(biāo)記,采用紫外透射儀觀察電泳結(jié)果,凝膠軟件分析目的電泳條帶,以電數(shù)碼相機(jī)照相,泳條帶為參照,待測條帶與進(jìn)行對比,表示相對表達(dá)水平。/、的表達(dá)測定。步驟樣品處理取大約組織加提取液溶解于裂解液中勻漿提取,離心,取上清,分裝保存。配制不含二硫蘇糖醇的凝膠上樣緩沖液/、電泳液、溴酚藍(lán)、甘油,室溫保存,用時(shí)取/按比例加入緩沖液中。取樣品加上樣緩沖液混勻,一保存。聚丙烯酰胺凝膠電泳準(zhǔn)備清潔的玻璃板,用甘氨酸瓊脂糖將玻璃板下端封住。配制電泳分離膠。一甘氨酸聚丙烯酰胺凝膠、丙、過硫酸烯酰胺、/、酰胺、,共。玻璃板間隙倒入分離膠,加水覆蓋頂層,聚合、丙烯酰后,吸干水,倒入成層膠、胺、/、過硫酸胺溶液、,共,插入梳子。待成層膠凝聚后,拔出梳子。加入樣本,加入電泳緩沖液,甘氨酸,。走成層膠,走分離膠。蒸餾水溶解,定容至,溶解研究論文膜轉(zhuǎn)移采用水浴式電印跡。配制水浴式電印跡用緩沖液,甘氨酸,蒸餾水溶解,定容至后,加甲醇,。冷卻。轉(zhuǎn)移按順序放置海綿、三層濾紙、轉(zhuǎn)移膜、膠、三層濾紙、海綿。轉(zhuǎn)移膜在正極,膠在負(fù)極,。免疫反應(yīng)將膜置于封閉液牛血清白蛋白中靜止過夜。加入封閉液稀釋的第一抗體,室溫緩慢搖動(dòng),用洗膜次,每次振蕩后,加入封閉液稀釋的第二抗體,室溫緩慢搖動(dòng),。用沈膜次,每次振蕩顯色將膜浸入顯色液/加入二氨基聯(lián)苯胺,溶解后過濾,加入,室溫充分顯色后,立即用蒸餾水洗膜,將膜轉(zhuǎn)入中觀察、照相。結(jié)果分析照相分析,使用凝膠分析軟件,測定各條帶的平均光密度值值,待測蛋白質(zhì)表達(dá)量與表達(dá)量比值,表示蛋白質(zhì)的相對表達(dá)水平。統(tǒng)計(jì)學(xué)處理使用統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)資料分析。數(shù)值變量以均數(shù)加減標(biāo)準(zhǔn)差元虹表示。數(shù)據(jù)采用單因素方差分析,組間比較采用檢驗(yàn),所有假設(shè)檢驗(yàn)方法顯著性水準(zhǔn)以為準(zhǔn)。結(jié)果。腎消通絡(luò)方對大鼠血糖的影響見對照組血糖處于正常范圍內(nèi),模型組、厄貝沙坦組、中藥組血糖水平較對照組明顯升高,中藥組血糖水平有下降趨勢,但較模型組、厄貝沙坦組之間無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義胗。腎消通絡(luò)方對大鼠的影響見模型組、厄貝沙坦組、中藥組水平較對照組明顯升高,模型組較厄貝沙坦組、中藥組水平明顯升高,研究論文厄貝沙坦組、中藥組之間水平差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義胗。、腎消通絡(luò)方對大鼠腎功能的影響見、模型組、厄貝沙坦組、中藥組、水平較對照組明顯升高尸,模型組較厄貝沙坦組、中藥組、水平明顯升高氏,厄貝沙坦組、中藥組之間、水平差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。、腎消通絡(luò)方對大鼠腎血脂的影響見、模型組、厄貝沙坦組、中藥組水平較對照組明顯升高,模型組較厄貝沙坦組、中藥組水平明顯升高,厄貝沙坦組、中藥組之間水平差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。各組之間水平差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,但中藥組水平有下降趨勢。腎組織病理形態(tài)學(xué)觀察見、染色對照組腎小球、腎小管形體結(jié)構(gòu)基本正常模型組腎臟病理改變明顯,腎小球基底膜明顯增厚,細(xì)胞外基質(zhì)積聚,系膜細(xì)胞增生厄貝沙坦組和中藥組較模型組病理改變減輕,兩組間差異不明顯。染色對照組腎小球形體結(jié)構(gòu)基本正常,陽性物質(zhì)無明顯增多模型組腎臟病理改變明顯,系膜區(qū)陽性物質(zhì)增多,紅染明顯,腎小球基底膜明顯增厚,細(xì)胞外基質(zhì)積聚厄貝沙坦組和中藥組病理改變較模型組減輕,陽性物質(zhì)較模型組有所減少。電鏡觀察對照組腎小球基底膜結(jié)構(gòu)基本正常,厚度均勻,足突結(jié)構(gòu)正常,足細(xì)胞無調(diào)亡、脫落模型組腎小球基底膜廣泛增厚,部分節(jié)段明顯,大量足突融合和缺失,部分足細(xì)胞丟失厄貝沙坦組和中藥組病理改變較模型組減輕,腎小球基底膜增厚不明顯,足突融合較少。腎消通絡(luò)方對大鼠腎臟、表達(dá)的影響見、對照組、在腎小球,腎小管處均有少量表達(dá)模型組、厄貝沙坦組、中藥組、一的表達(dá)水平較對照組明顯升高,模型組在腎小球內(nèi)可見、一大量表達(dá),在內(nèi)皮細(xì)胞、系膜細(xì)胞處均呈現(xiàn)表達(dá)增高,在細(xì)胞外基質(zhì)也有散在陽性表達(dá)厄貝沙坦組和中藥組、。的表達(dá)水平較模型組有所降低,部分腎小球出現(xiàn)表達(dá)增高,整體水平較模型組呈現(xiàn)下調(diào),厄貝沙坦組和中藥組之間差異不明顯。腎消通絡(luò)方對大鼠腎臟表達(dá)的影響見、研究論文】水平較對照組明顯升高模型組、厄貝沙坦組、中藥組一水平明顯升高,模型組較厄貝沙坦組、中藥組水平差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意,厄貝沙坦組、中藥組之間義。腎消通絡(luò)方對大鼠腎臟/、表達(dá)的、影響見、模型組/水平較對照組、厄貝沙坦組、中藥組明顯升高,對照組、厄貝沙坦組、中藥組之間/水平差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義護(hù)。厄貝沙坦組、中藥組水平較對照組、模型組明顯升高尸,中藥組水平較厄貝沙坦組明顯升高,對照組、模型組之間水平差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。模型組、厄貝沙坦組、中藥組、水平較對照組明顯升高,模型組、中藥組、水平較厄貝沙坦組明顯升高尸,模型組、水平較中藥組明顯升高。研究論文附圖/。廠。弱巧加/廠研究論文/研究論文/研究論文衄、析一/研究論文研究論文。、譬囂鎣。研究論文蘧函組灞溺弱唆麟遴,。、父,惑、。磅。巴。二。,二籬簧七主曼挈,鬻冬每爻。母挈一棒。二。,一,一,二。基名套扛/一,蠢毋。乙阜蠕一、于警,、,、,。/,曦,。摹。,。氣每/、穸紫、,如,每臻一一一。奄,。氣一一。蕞茹一研究論文一“”叫礴囊蟄毫幽一一吣、一螄。一,二一一/,研究論文附表如婦尸婦研究論文氏姆氏元婦研究論文丈婦尸/婦如/欠研究論文虹火尸元如尸研究論文討論立題依據(jù)是的并發(fā)癥之一,屬微血管病變,是導(dǎo)致終末期腎病的主要原因,是患者致死、致殘的重要原因。我國的患病率呈明顯上升趨勢,的發(fā)生也在增加,患者高血壓、總膽固醇升高、白蛋白降低都是的危險(xiǎn)因素【】。的臨床表現(xiàn)為蛋白尿,高血壓,水腫,漸進(jìn)性腎功能損害,最后發(fā)展為?！吭缙诘奶攸c(diǎn)是腎小球?yàn)V過率增加、腎小球和腎小管肥大、腎臟增大,出現(xiàn)尿微量白蛋白增加,隨進(jìn)展,蛋白尿增加,腎小球?yàn)V過率下降,腎小球和腎小管基底膜增厚,系膜細(xì)胞增生,細(xì)胞外基質(zhì)增加,最后到達(dá),出現(xiàn)腎小球硬化。如何有效的預(yù)防、治療,延緩的發(fā)展,保護(hù)腎功能,提高患者生存質(zhì)量,是醫(yī)學(xué)界共同關(guān)注的問題。的發(fā)病機(jī)理尚未完全闡明,其發(fā)生和發(fā)展與多種因素相關(guān)。多種細(xì)胞因子參與的發(fā)生和發(fā)展,并且相互之間構(gòu)成了復(fù)雜的網(wǎng)絡(luò)關(guān)系。是復(fù)雜細(xì)胞因子網(wǎng)絡(luò)中的核心因子,/信號(hào)通路在介導(dǎo)細(xì)胞外基質(zhì)代謝異常,促進(jìn)發(fā)病中起著重要的作用。、與一之間形成復(fù)雜的相互作用,共同參與的發(fā)病和發(fā)展。祖國傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)】在的臨床治療中有著較好療效和特色優(yōu)勢,有減少蛋白尿、保護(hù)腎功能等作用,可延緩的進(jìn)展,還可以改善和提高患者生存質(zhì)量,的中西醫(yī)結(jié)合治療【效果較好,值得臨床推廣應(yīng)用。川腎消通絡(luò)方”是在趙玉庸教授多年經(jīng)驗(yàn)方“腎絡(luò)通”基礎(chǔ)【】上優(yōu)化而來,有著較好臨床療效,臨床證實(shí)腎消通絡(luò)方具有減少蛋白尿、改善腎功能、延緩腎臟進(jìn)展等作用,為進(jìn)一步探討其作用機(jī)制,進(jìn)行了此項(xiàng)研究,期望為中醫(yī)防治提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。動(dòng)物模型的復(fù)制實(shí)驗(yàn)性動(dòng)物模型有多種類型,采用化學(xué)藥物誘導(dǎo)的模型較為廣泛。常用的有鏈脲佐菌素和四氧嘧啶。制備動(dòng)物模型的成模率高,死亡率低,損傷較輕。的主要作用方式是可以選擇性的破壞胰島細(xì)胞,造成胰島素分泌低下,此外還可通過淋巴細(xì)胞介導(dǎo)的自身免疫作用使細(xì)胞不斷破壞。本實(shí)驗(yàn)選擇采用大鼠研究論文腹腔注射方法,成功誘導(dǎo)模型。在實(shí)驗(yàn)期間,造模動(dòng)物血糖水平顯著升高,模型組動(dòng)物出現(xiàn)尿微量白蛋白增高,腎功能下降,腎臟出現(xiàn)病理改變。的中醫(yī)理論認(rèn)識(shí)祖國傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)沒有的名稱,依據(jù)中醫(yī)理論辯證論治的思想,的臨床表現(xiàn),可以參考中醫(yī)消渴病相關(guān)文獻(xiàn),可歸屬與消渴病相關(guān)的“水腫”、“腎消”、“尿濁”、“關(guān)格”等范疇,多數(shù)學(xué)者認(rèn)為為“本虛標(biāo)實(shí)”之證【】【,“本虛”以氣虛證、陰虛證為主,“標(biāo)實(shí)常以痰濕、血瘀貫穿疾病的整個(gè)發(fā)展過程。隨著中醫(yī)絡(luò)病學(xué)的發(fā)展,的從絡(luò)論治【】己成趨勢,課題組基于趙玉庸教授“腎絡(luò)瘀阻”病機(jī)學(xué)說,形成了從絡(luò)論治的病機(jī)理論的發(fā)生是消渴病久病不愈,熱傷氣陰【,熱結(jié)、氣滯、痰濕、瘀血相互膠結(jié),混處絡(luò)脈,腎絡(luò)瘀阻,在腎之絡(luò)脈形成“微型疲瘕”【,致。腎體受損,腎用失司,發(fā)生。方藥解析腎消通絡(luò)方是基于“熱傷氣陰,腎絡(luò)瘀阻”基本病機(jī),以“益氣養(yǎng)陰,化瘀通絡(luò)”為治法組方而成。方中黃芪益氣健脾,利水消腫,元參下養(yǎng)腎陰兼清上焦之熱,黃連、地錦草清熱瀉火解毒,金雀根破血活血,丹參血活血,化瘀通絡(luò),鬼箭羽軟堅(jiān)散結(jié),紅曲可藥食兩用,健脾化痰,活血化瘀,方中蟲類藥有多種,蟬蛻、地龍、烏梢蛇化瘀通絡(luò)。腎消通絡(luò)方對大鼠血生化和腎功能的作用腎消通絡(luò)方對大鼠血糖的影玎向時(shí)高血糖狀態(tài)是的重要始動(dòng)因素。實(shí)驗(yàn)期間對照組血糖穩(wěn)定在正常范圍內(nèi)【,模型組,厄貝沙坦組,中藥組大鼠血糖水平持續(xù)保持在高位。實(shí)驗(yàn)造模期間,動(dòng)物死亡較多?？赡芘c短期血糖過高有關(guān),實(shí)驗(yàn)期間,動(dòng)物死亡較少,死亡時(shí)間不規(guī)律。從結(jié)果看,中藥組血糖水平略有下降,但不明顯,可能是因?yàn)閯?dòng)物模型胰島細(xì)胞損傷過于嚴(yán)重,非降糖藥物難以恢復(fù)正常血糖。實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn),降壓藥物【】【厄貝沙坦對具有保護(hù)作用,但其對血糖無顯著影響。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果同樣顯示,厄貝沙坦對血糖無顯著影響。腎消通絡(luò)方對大鼠的影響指尿中排出量超出正常上限,但尚未達(dá)臨床蛋白尿水平的中研究論文間階段。是誘發(fā)腎小球微血管病變最早期的客觀指標(biāo)之一,對的早期診斷有重要意義?；颊叱霈F(xiàn)尿時(shí),在病理組織學(xué)上可看到系膜的擴(kuò)張或有少數(shù)結(jié)節(jié)性病變,在分期上屬于早期,及時(shí)進(jìn)行治療和控制血糖水平,此期腎損傷是可逆的。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,模型組大鼠的水平顯著升高,說明實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ偷膹?fù)制成功。與模型組相比,腎消通絡(luò)方可顯著降低大鼠的水平,厄貝沙坦同樣具有一定的作用。腎消通絡(luò)方對大鼠腎功能的影響、是臨床上判定腎功能常用的指標(biāo)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示模型組,厄貝沙坦組、中藥組大鼠、水平較對照組均有不同程度升高,對照組的腎功能正?！?說明發(fā)生和發(fā)展時(shí)對腎功能產(chǎn)生損害。腎消通絡(luò)方可明顯降低、水平,改善腎功能。腎消通絡(luò)方對大鼠血脂的影響、是常用的血脂指標(biāo),高糖高脂環(huán)境是發(fā)病的重要因素。本實(shí)驗(yàn)選用普通飼料喂養(yǎng),實(shí)驗(yàn)動(dòng)物血脂略有變化。所有實(shí)驗(yàn)動(dòng)物水平未出現(xiàn)明顯升高,屬正常水平。模型組大鼠水平出現(xiàn)明顯升高,略超出正常水平厄貝沙坦組和中藥組水平較對照組略有升高,但仍屬正常范圍。實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示隨著時(shí)間延長,脂代謝出現(xiàn)紊亂,血脂有升高趨勢,腎消通絡(luò)方具有一定的降脂作用,改善血液環(huán)境。腎消通絡(luò)方對大鼠腎組織形態(tài)學(xué)的影響的病理改變主要是腎小球和腎小管肥大、腎臟增大,隨進(jìn)展出現(xiàn)腎小球和腎小管基底膜增厚,系膜細(xì)胞增生,細(xì)胞外基質(zhì)增加,最終導(dǎo)致腎臟纖維化,出現(xiàn)腎小球硬化。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果,染色對照組腎小球、腎小管形體結(jié)構(gòu)基本正常模型組腎臟病理改變明顯,腎小球基底膜明顯增厚,細(xì)胞外基質(zhì)積聚,系膜細(xì)胞增生厄貝沙坦組和中藥組較模型組病理改變減輕,兩組間差異不明顯。染色對照組腎小球形體結(jié)構(gòu)基本正常,陽性物質(zhì)無明顯增多模型組腎臟病理改變明顯,系膜區(qū)陽性物質(zhì)增多,紅染明顯,腎小球基底膜明顯增厚,細(xì)胞外基質(zhì)積聚厄貝沙坦組和中藥組病理改變較模型組減輕,陽性物質(zhì)較模型組有所減少。電鏡觀察對照組。腎小球基底膜結(jié)構(gòu)基本正常,厚度均勻,足突結(jié)構(gòu)正常,足細(xì)胞無調(diào)亡、脫落模型組腎小球基底膜廣泛增厚,部分節(jié)段研究論文明顯,大量足突融合和缺失,部分足細(xì)胞丟失厄貝沙坦組和中藥組病理改變較模型組減輕,腎小球基底膜增厚不明顯,足突融合較少。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示腎消通絡(luò)能夠減輕腎臟病理損害,保護(hù)腎臟的基本形態(tài)結(jié)構(gòu)。腎消通絡(luò)方對作用機(jī)制的分析腎消通絡(luò)方對及一的影響是發(fā)病過程中的重要細(xì)胞因子,是目前公認(rèn)的致纖維化的細(xì)胞因子,在的發(fā)生和發(fā)展的起到重要作用。共有五種類型,在哺乳動(dòng)物中只有、,在腎臟中主要表達(dá)。腎小球系膜細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、腎小管上皮細(xì)胞、間質(zhì)成纖維細(xì)胞均能表達(dá)并合成。正常情況下,以無活性的前體形式存在。高血糖、,參與的整個(gè)病理過程,其是的重要致病介質(zhì)【、機(jī)制之一是可使轉(zhuǎn)為有活性的成分,而且可以促進(jìn)】能誘導(dǎo)系膜細(xì)胞及一的表達(dá)。者處于高糖狀態(tài)下,高糖表達(dá),含量增高,導(dǎo)致細(xì)胞外基質(zhì)過度積聚,同時(shí),增加系膜細(xì)胞對葡萄糖的可誘導(dǎo)系膜細(xì)胞表達(dá)攝取,葡萄糖的攝取增加又促使表達(dá),兩者之間形成惡性循環(huán),使病變過程大大加快。在介導(dǎo)細(xì)胞外基質(zhì)代謝異常,促進(jìn)發(fā)病中起著重要的作用。在生理情況下【】,細(xì)胞外基質(zhì)的形成和降解維持在一個(gè)動(dòng)態(tài)平衡的水平,發(fā)生和發(fā)展中多種因素導(dǎo)致細(xì)胞外基質(zhì)的合成和降解失衡,最終導(dǎo)致腎小球硬化?？赏ㄟ^白分泌與旁分泌途徑,促進(jìn)細(xì)胞外基質(zhì)積聚,其作用途徑包括促進(jìn)細(xì)胞外基質(zhì)成分合成,如型膠原、促進(jìn)蛋白酶抑制因子的表達(dá),如纖溶酶原激活物抑制因子、金屬蛋白酶組織抑制因子,抑制組織細(xì)胞蛋白水解酶信使的表達(dá)等。在多種的模型中,如誘導(dǎo)的大鼠、自發(fā)性大鼠、自發(fā)性小鼠的腎臟,及表達(dá)均明顯升高,同時(shí)伴有腎臟肥大和細(xì)胞外基質(zhì)增多?；颊叩氖滓委熓墙档脱撬?血糖水平對的發(fā)生和發(fā)展【有重要意義,降糖藥物【】可減少一在腎小球和腎小管的表達(dá),減輕腎臟病理改變臨床顯示患者尿一水平與血壓控制有一定關(guān)系,降壓可使尿減少,這表明腎臟表達(dá)水平的下調(diào),研究論文對的表達(dá)抑制是降壓藥物發(fā)揮防治作用的重要途徑。和患者的血液環(huán)境對腎臟有重要影響,高糖高脂可加速的發(fā)展,降低血脂水平同樣可對的表達(dá)產(chǎn)生抑制作用,他汀類藥物【可降低患者血清水平,在的治療中可以延緩其進(jìn)展,改善腎功能。及表達(dá)明顯升高本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示模型組大鼠,其含量與腎臟病理損傷程度明顯相關(guān),表明參與了的發(fā)生和進(jìn)展。腎消通絡(luò)方可顯著降低及表達(dá)明顯升高,提示可能是腎消通絡(luò)方的重要作用靶點(diǎn),進(jìn)而減輕腎臟病理損傷程度,保護(hù)腎功能。腎消通絡(luò)方對/信號(hào)通路影響介導(dǎo)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)是多信號(hào)轉(zhuǎn)到,目前認(rèn)為,/途徑是其主要的作用途徑。大多數(shù)細(xì)胞都存在受體【,主要有、型,、型受體胞質(zhì)內(nèi)有絲蘇氨酸激酶活性,是信號(hào)轉(zhuǎn)到通路必須的受體。家族蛋白是參與一在細(xì)胞內(nèi)信號(hào)傳導(dǎo)的一族蛋白質(zhì)。家族蛋白分為類受體激活型,包括、共同通路型,抑制型,包括、。參與一信號(hào)傳導(dǎo)的蛋白主要包括、。與受體結(jié)合后可使、磷酸化激活,激活后的、與形成復(fù)合物進(jìn)入細(xì)胞核,作用于目標(biāo)基因,完成對基因的調(diào)控可與一的型受體結(jié)合,但不能被活化,從而阻斷、的激活及后續(xù)作用。在正常生理?xiàng)l件下,/信號(hào)通路被負(fù)性調(diào)節(jié)嚴(yán)格控制,除可在受體段起抑制作用,核轉(zhuǎn)錄共抑制因子也參與負(fù)性調(diào)節(jié)機(jī)制,、剛、等可與/、/、/復(fù)合體結(jié)合,抑制信號(hào)激活基因轉(zhuǎn)錄。對/信號(hào)通路的負(fù)性調(diào)節(jié)減弱,可能是/信號(hào)通路在的作用機(jī)制之一。研究發(fā)現(xiàn)【,大鼠腎組織的表達(dá)顯著增加,的表達(dá)減少經(jīng)胰島素控制血糖后,的表達(dá)減少,顯著上調(diào),大鼠腎纖維化病變明顯改善。研究顯示】在的發(fā)生和發(fā)展中,出現(xiàn)蛋白減少,使用抗抗體、反義寡核苷酸或基因敲除,可以預(yù)防或逆轉(zhuǎn)狀態(tài)小鼠腎臟纖維研究論文化。在中藥組方對的治療,/信號(hào)通路是重要作用機(jī)制之一。實(shí)驗(yàn)【】【】表明中藥可通過影響/信號(hào)通路,下調(diào)、/,上調(diào)的表達(dá),減輕的腎臟的病理改變。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示模型組大鼠/表達(dá)水平明顯升高,表達(dá)水平較低,表明/信號(hào)通路是發(fā)生的關(guān)鍵機(jī)制。腎消通絡(luò)方可抑制及的表達(dá),同時(shí)可降低/表達(dá)/信號(hào)通路的干預(yù)可能水平,提高表達(dá)水平,提示對是腎消通絡(luò)方