GB 29686-2013 食品安全國家標準 豬可食性組織中阿維拉霉素殘留量的測定 液相色譜-串聯(lián)質譜法

G 中華人民共和國 國 家標準 9686 2013 食品安全國家標準 豬可食性組織中阿維拉霉素殘留 量的測定液相色譜 in of （電子版本僅供參考，以標準正式出版物為準） 2013布 2014施 中華人民共和國農業(yè)部 中華人民共和國國家衛(wèi)生和計劃生育委員會 發(fā)布 I 目 次 目 次 . I 前 言 . 可食性組織中阿維拉霉素殘留量的測定 液相色譜 . 1 范圍 . 2 規(guī)范性引用文件 . 3 原理 . 4 試劑和材料 . 5 儀器和設備 . 6 試料的制備與保存 . 料的制備 . 料的保存 . 7 測定步驟 . 取 . 化 . 準曲線的制備 . 定 . 白試驗 . 8 結果計算與表述 . 9 檢測方法靈敏度、準確度、精密度 . 敏度 . 確度 . 密度 . 附錄 A . 言 本標 準的附錄 A 為資料性附錄。 本標準系國內首次發(fā)布的國家標準。 豬可食性組織中阿維拉霉素殘留量的測定 液相色譜 1 范圍 本標準規(guī)定了豬 可食性 組織中阿維拉霉素殘留 量 檢測的 制樣和 液相色譜 法 。 本標準適用于豬 的 肌肉 、 脂肪 /皮 、 肝臟 和 腎臟中 阿維拉霉素 殘留量的檢測。 2 規(guī)范性引用文件 下列文件中的條款通過本標準的引用而成為本標準的條款。凡是注日期的引用文件， 其 隨后所有的修改單（不包括勘誤的內容）或修訂版均不適用于本標準，然而，鼓勵根據(jù)本標準達成協(xié)議的各方研究是否可使用 這些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本適用于本標準。 準化工作導則 第 1 部分：標準的結構和編寫規(guī)則 6682 分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法 3 原理 試料中殘留的阿維拉霉素， 用 丙酮提取，氫氧化鈉溶液水解， 再用 乙酸乙酯提取， 氧化鋁 固相萃取柱凈化 ，以二氯甲氧苯酸為內標物， 液相色譜 定 ，內標法定量。 4 試劑和材料 以下所用的試劑，除特別注明外均為 分析 純試劑，水為符合 6682 規(guī)定的一級水。 阿維拉霉素 、 阿維拉霉素殘留標示物 準品： 含量 98。 內標物： 二氯甲氧苯酸 標準品 ：含量 98。 甲醇 ： 色譜純 。 正己烷 乙睛 ：色譜純 。 乙酸乙酯 丙酮 甲酸 氫氧化鈉 磷酸 中性氧化鋁 固相萃取 柱： 1 000 相當者 。 1 氫氧化鈉溶液 ： 取氫氧化鈉 4 g，用水溶解 并 稀釋至 100 洗脫液 ： 取 甲酸 5 乙腈 溶解并稀釋至 100 1 mg/維拉 霉素 和阿維拉霉素殘留標示物 準貯備液： 精密稱取 阿維拉霉素 和阿維拉霉素殘留標示物 0 別于 10 甲醇 溶解并稀釋至刻度，配制成濃度為 1 mg/維拉霉素 和阿維拉霉素殘留標示物 準貯備液。 2 4 保存 ，有效期 1 個月 。 10 g/維拉霉素 和阿維拉霉素殘留標示物 準工作液： 精密量取 1 mg/維拉霉素和阿維拉霉素殘留標示物 準貯備液 各 1.0 別于 100 瓶中，用 甲醇 溶解并稀釋至刻度，配制成濃度為 10 g/ 阿維拉霉 素和阿維拉霉素殘留標示物 準 工作液。 2保存 ，有效期 1 個月。 1 mg/標物 二氯甲氧苯酸 標準貯備液 ： 精密稱取 二氯甲氧苯酸 10 10 瓶中， 用 甲醇 溶解并稀釋至刻度，配制成濃度為 1 mg/ 二氯甲氧苯酸 標準貯備液。 2 4 保存 ，有效期1 個月 。 2 g/標物 二氯甲氧苯酸 標準工作液： 精密量取 1 mg/氯甲氧苯酸 標準貯備液 200 L，于 100 瓶中，用 甲醇 溶解并稀釋至刻度，配制成濃度為 2 g/ 二氯甲氧苯酸 標準 工作液。2保存 ，有效期 1 個月。 5 儀器和設備 效液相色譜 配 大氣壓化學電離源（ 。 析天平 ： 感量 1 g。 平 ： 感量 g。 凍高速離心機 蕩器 渦混合器 質機 吹儀 轉蒸發(fā)儀 相萃取裝置 底燒瓶： 50 心管： 15 50 6 試料的制備與保存 料 的制備 取新鮮或冷凍空白或供試組織， 絞碎， 并使均質。 取 均質后的 供試樣品 ，作為 供試 試料 。 取均質 后的 空白樣品，作為空白 試料 。 取 均質后的空白樣品 ， 添加適宜濃度 的 標準 工作 液 ， 作為空白添加試料。 料 的保存 以下 保存。 7 測定步驟 取 稱取 肌肉 或 脂肪 試料 （ 2g 、 肝臟 或 腎臟 試料 （ 1g ， 于 15 心管中，加丙酮 4 旋 5 6 000 r/心 10取 上清 液 ， 于 50 底燒瓶中 。殘渣中 加 丙酮 4 復 提取 兩次，合并 3 次上清液， 于 60 旋轉 蒸發(fā)至 干， 用 1 氫氧化鈉 溶液 4 解殘 余物 ，轉 至 50 心管中， 于 70 水浴 2 h，取出，用 85磷酸調 乙酸乙酯 4 混勻，于 6 000 r/心 10 取 上清液 于 另一離心管中， 重復兩次，合并 3 次 上清液 ，加 2 g/氯甲氧苯酸內標 0.5 空白 試料 除外 ） ，混勻備用。 化 氧化鋁 萃取柱 用乙酸乙酯 10 化 ， 取 備用液 過柱 ， 分別用正己烷 5 酸乙酯 5 甲醇 5 洗， 用 洗脫 液洗脫兩次 ，每 次 7收集洗脫液， 于 50 旋轉 蒸發(fā)至干 ， 用 甲醇 1.0 解 殘余物 ， 渦旋 混勻 ， 供 液相色 譜 準曲線的制備 精密量取 10 g/維拉霉素殘留標示物 準工作液 適 量 ，用甲醇 稀釋， 配 制成濃度為 5、50、 100、 200、 400 和 800 g/L 的 系列 標準 溶 液， 供液相色譜 以特征離子質量色譜峰面積為縱坐標，標準溶液濃度為橫坐標，繪制標準曲線 。 求回歸方程和相關系數(shù)。 定 相 色譜條件 色譜柱： 150 .6 徑 5 m） ，或相當者； 流動相：甲醇 +水（ 50+50， v/v） ； 流速： 0.6 mL/樣量： 10 g/L； 柱溫： 40 ； 譜 條件 離子源： 掃描方式：負離子掃描； 檢測方式：選擇反應監(jiān)測； 蒸發(fā)溫度： 400 ； 離子傳輸管溫度： 275 ； 鞘氣壓力： 25 輔助氣壓力： 5 選擇反應監(jiān)測的優(yōu)化參數(shù)見表 1。 表 1 阿維拉霉素選擇反應監(jiān)測的優(yōu)化參數(shù) 藥物名稱 相對保留時間 離子質量數(shù) 定性離子及碰撞能量v 定量離子及碰撞能量v 阿維拉霉素殘留標示物 49 249189（ 23） 249205（ 16） 249205（ 16） 二氯 甲氧苯酸 19 219159（ 18） 219145（ 15） 219175（ 8） 定法 性測定 通過 試樣 色譜圖的保留時間與 相應標準品 的保留時間、各色譜峰的特征離子與相應濃度 標準溶液 各色譜峰的特征離子相對照定性。 試樣 與標準 品 保留時間的相對偏差不大于 5； 試樣 特征離子的相對豐度 與濃度相當混合標準溶液的相對豐度一致，相對豐度偏差不超過表 2 的規(guī)定，則可判斷 試樣 中存在相應的被測物 。 表 2 定性測定時相對離子豐度的最大允許偏差 相對離子豐度 50% 20%至 50% 10%至 20% 10% 允許的相對偏差 20% 25% 30% 50% 將供試試樣和標準溶液的定量離子面積之比作單點校正定量。 量測定 取試樣溶液和 標準溶液 ，按外標法 ，以峰面積 定量，標準 溶 液及試樣 溶 液中的 阿維拉霉素 響應值均應在儀器檢測的線性范圍內。在上述色譜 阿維拉霉素 標準溶液和 空白 添加 試樣溶液 中特征離子質量色譜圖 見附錄 A。 白試驗 除不加試料外，采用完全相同的步驟進行平行操作。 8 結果計算與表述 試料中阿維拉霉素殘留標示物（ 殘留量（ g/按下式計算 殘留量， g/ 濃度， ng/ 色譜峰面積； 色譜峰面積； 液 中內標物的濃度， ng/ ng/ 量， g。 注：計算結果需扣除空白值，測定結果用平行測定的算術平均值表示，保留 三 位有效數(shù)字。 9 檢測方法靈敏度、準確度、精密度 敏度 本方法 在肌肉 和 脂肪 組織 中的 檢測限為 10 g/定量限 為 20 g/在肝臟 和 腎臟 組織 中的 檢測限為 20 g/定量限為 50 g/ 確度 本方法在 20 600