第七章 黃酮類化合物(2).ppt

1、第七章 黃酮類化合物(2),Flavonoids,-黃酮類的提取和分離,2,第七章 黃酮類化合物,概 述,1,黃酮類化合物的結(jié)構(gòu)和分類,2,黃酮類化合物的理化性質(zhì),3,黃酮類化合物的提取和分離,4,黃酮類化合物的檢識(shí)和結(jié)構(gòu)鑒定,5,3,黃酮類化合物的提取和分離,原理：黃酮類化合物的溶解性和酸性 相似相溶與酸堿理論 提?。?苷元：極性小的溶劑，如氯仿、乙醚、乙酸乙酯等 回流提取 苷及極性大的苷元： 用丙酮、乙酸乙酯、乙醇、甲醇、醇-水加熱提取 極性稍大的甙元一般指：羥基黃酮、雙黃酮、 橙酮、查爾酮 多糖苷類：一般用沸水提取,提取,4,黃酮類化合物的提取和分離,溶劑萃取法（系統(tǒng)分離法） 堿提酸沉法

2、 炭粉吸附法,粗分,5,黃酮類化合物的提取和分離,藥 材,水或醇-水，加熱提取,提取液,濃縮，加3-4倍醇,醇水液,沉淀（水雜）,濃縮，回收醇，加水,水 液,依次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇萃取,石油醚層,氯仿層,乙酸乙酯層,正丁醇層,水層,葉綠素等脂 溶性成分,黃酮苷元,大極性苷元 小極性的苷,黃酮苷,多糖 蛋白質(zhì),原理： 利用黃酮類與其它雜質(zhì)極性 不同，選不同溶劑進(jìn)行萃取,溶劑萃取法,6,黃酮類化合物的提取和分離,原理：酚羥基與堿成鹽，溶于水；加酸后析出 堿： 常用Ca(OH)2，即石灰乳(石灰水) 優(yōu)點(diǎn) A：使含酚羥基化合物成鹽溶解 B：使含羧基雜質(zhì)（果膠、粘液質(zhì)、蛋白質(zhì)等） 形成沉

3、淀 注意 a：提取時(shí)，堿液濃度不宜過(guò)高。 b：加酸酸化時(shí)，酸性也不宜過(guò)強(qiáng)。 應(yīng)用：蘆丁和槲皮素的提取、分離和鑒定,堿提酸沉法,7,黃酮類化合物的提取和分離,原理：活性炭吸附黃酮苷類化合物 用途：主要用于含量較高的黃酮苷類的精制 操作：植物的甲醇提取物中，分次加入活性炭， 攪拌，靜置，定性檢查上清液無(wú)黃酮反應(yīng)時(shí)為止。 過(guò)濾，收集活性炭，依次用沸水、沸甲醇、7%酚/水、 15%酚/醇溶劑進(jìn)行梯度洗脫，對(duì)各部分洗脫液進(jìn)行定 性檢查。 大部分黃酮苷類可以用7%酚/水洗下。,活性炭吸附法,8,黃酮類化合物的提取和分離,極性 氫鍵 分子大小（量） 酸性 特殊結(jié)構(gòu),硅膠 聚酰胺 凝膠 梯度pH萃取法 金屬鹽

4、絡(luò)合法,柱色譜法,分離方法,9,黃酮類化合物的提取和分離,硅膠是一種高活性吸附材料，其化學(xué)分子式為mSiO2nH2O 應(yīng)用范圍： 主要分離小極性和中等極性的化合物，應(yīng)用最為廣泛。 異黃酮、二氫黃酮（醇）、高度甲基化（乙?；┑狞S酮及黃酮醇 多羥基黃酮、黃酮醇及其苷類：硅膠加水去活化 吸附規(guī)律： 極性大吸附能力強(qiáng) e g ： A 苷元 B 二糖苷 C 單糖苷 Rf：A C B,硅膠柱色譜,10,黃酮類化合物的提取和分離,原理：氫鍵吸附（作用） 洗脫規(guī)律：（先后） 母核上羥基增加，洗脫順序遞減 羥基數(shù)目相同時(shí)，有締合羥基 無(wú)締合羥基 苷元相同：三糖苷 雙糖苷 單糖苷 苷元 不同類型黃酮類化合物的洗

5、脫先后順序?yàn)椋?異黃酮二氫黃酮醇黃酮黃酮醇。 分子中芳香程度高、共軛雙鍵多，則聚酰胺對(duì)其的吸附力強(qiáng)，故難于洗脫。 應(yīng)用范圍：適合各種類型的黃酮類化合物，包括苷、苷元、查耳酮及二氫黃酮,聚酰胺柱色譜,11,聚酰胺“雙重色譜”原理,正相色譜 反相色譜,苷與苷元聚酰胺色譜,聚酰胺：極性固定相（極性酰胺基團(tuán)） 非極性固定相（非極性脂肪鏈） 洗脫劑：有機(jī)溶劑（氯仿-甲醇，極性?。?含水溶劑（甲醇-水，極性大） 先洗脫：游離黃酮（苷元，極性?。?苷（極性大）（柱色譜分離） Rf值： 苷元 苷 苷元 苷（TLC色譜鑒別）,12,正相與反相層析,硅膠 固定相（硅醇）極性 流動(dòng)相（醇）極性時(shí)為正相 聚酰胺 固定

6、相（聚酰胺脂肪鏈）極性 流動(dòng)相（醇水）極性時(shí)為反相,槲皮素對(duì)照品,槲皮素,蘆丁,蘆丁對(duì)照品,槲皮素對(duì)照品,槲皮素,蘆丁,蘆丁對(duì)照品,聚酰胺TLC,硅膠TLC,13,黃酮類化合物的提取和分離,常用型號(hào)：Sephadex-G和Sephadex-LH20 原理：吸附作用和分子篩 對(duì)游離黃酮，主要是吸附作用, 吸附程度取決于游離酚羥基的數(shù)目，苷元的羥基數(shù)目越多，越難洗脫。 對(duì)黃酮苷，主要是分子篩原理, 洗脫時(shí)按分子量由大到小先后洗脫下來(lái)。 常用洗脫劑： 堿性水溶液（0.1mol/L NH4OH），鹽水溶液(0.05mol/L NaCl) 醇及含水醇，如甲醇，甲醇-水，乙醇等。 其它溶劑：含水丙酮、甲醇

7、-氯仿(凝膠會(huì)膨脹， 體積變大)。,葡聚糖凝膠柱色譜,14,黃酮類化合物在Sephadex-LH20(甲醇)上的Ve/Vo,15,黃酮類化合物的提取和分離,規(guī)律： 苷元的羥基數(shù)越多，Ve/Vo越大，越難以洗脫。 吸附作用 苷的分子量越大, 其上聯(lián)結(jié)糖的數(shù)目越多,Ve/Vo 越小, 容易洗脫。 分子篩原理 苷比苷元先洗脫。,葡聚糖凝膠柱色譜,16,黃酮類化合物的提取和分離,原理： 黃酮類化合物具有酸性、且不同數(shù)目和不同位置的酚羥基的酸性強(qiáng)弱不同 適用范圍：適用于分離酸性強(qiáng)弱不同的黃酮苷元,酸性：7,4-OH 7-或4-OH 一般酚OH5-OH,梯度pH萃取法,17,黃酮類化合物的提取和分離,乙醚

8、液 （脂雜）,乙醚液,乙醚液,乙醚液,乙醚液,堿液(3或5-OH黃酮),堿液(一般酚OH黃酮),堿液(7,4-二OH黃酮),堿液(7或4-OH黃酮),5% NaHCO3,5% Na2CO3,0.2% NaOH,4% NaOH,梯度pH萃取法,18,黃酮類化合物的提取和分離,原理：利用分子中某些特定官能團(tuán)性質(zhì)進(jìn)行分離 具有鄰二酚羥基的成分，用醋酸鉛沉淀 不具有鄰二酚羥基的成分，用堿式醋酸鉛沉淀 具有鄰二酚羥基的黃酮類化合物還可以與硼酸反應(yīng)形成溶于水的硼酸絡(luò)合物，可以與不具有鄰二酚羥基的其它黃酮類化合物分離,金屬鹽絡(luò)合法,19,從檸檬果皮中分離降血壓有效成分,目的：使要得到的化合物溶解，而使蛋白質(zhì)、黏液質(zhì)等大極性成分形成沉淀除去,水提醇沉法,提取分離實(shí)例1,20,從檸檬果皮中分離降血壓有效成分,溶劑萃取法,鉛鹽沉淀法,凝膠色譜法,硅膠色譜法,目的： 除去Pb