嗜麥芽寡養(yǎng)單胞菌臨床株外排泵SmeDEF誘導(dǎo)表達(dá)的研究

1、嗜麥芽寡養(yǎng)單胞菌臨床株外排泵SmeDEF誘導(dǎo)表達(dá)的研究作者：孫二琳宋詩鐸祁偉王玉寶【摘要】目的了解嗜麥芽寡養(yǎng)單胞菌的臨床株墮H407和A26在抗菌藥物誘導(dǎo)下耐藥翦性和SmeDEF外排泵表達(dá)的變化。方耠法比較有或無環(huán)丙沙星誘導(dǎo)時嗜麥芽寡養(yǎng)淪單胞菌H407和A26的MIC和EO添P值，對在亞抑菌濃度環(huán)丙沙星中培育后匱的菌株smeD基因進(jìn)行RT-PCR擴(kuò)主增，監(jiān)測表達(dá)水平。結(jié)果對抗生素敏感的站H407和A26泵抑制呈陽性或陰性反崧應(yīng)。2株菌經(jīng)環(huán)丙沙星過夜孵育后測得的對氯霉素和環(huán)丙沙星MIC值比正常非誘財導(dǎo)時的MIC值高13個稀釋度；加泵慧抑制劑CCCP后，2個誘導(dǎo)株的MIC型值均有明顯下降。H407

2、和A26經(jīng)環(huán)蘗丙沙星誘導(dǎo)后氯霉素的EOP分別有和近4倍的增長。2株菌在抗菌藥物過夜和指正數(shù)期添加生長時smeD的mRNA明顯醢高于無抗菌藥物培養(yǎng)株。結(jié)論2株嗜麥芽卯寡養(yǎng)單胞菌臨床株在環(huán)丙沙星誘導(dǎo)下對部分抗菌藥物的耐藥性提高，與SmeDEF泵的誘導(dǎo)表達(dá)增加有關(guān)?！娟P(guān)鍵詞】喃嗜麥芽寡養(yǎng)單胞菌；外排泵；耐藥性；街誘導(dǎo)ABSTRACTObjectiveToinvestigatec芽hangesofantibioticresistanceofthecli螋nicalisolatesof,andtherepressionlevelofeffluxpumpSmeDE李Fbytheinductionofa酐n

3、tibiotics.Method龍sToexaminetheresistanceprofileoftheclinicalstrainsbya毿g(shù)ardilutionandthee薤fficiencyofplate(E棗OP)toantimicrobes,andthEirreactionst聶opumpinhibitorCCCP,andtoinvestigatet襠hemRNAlevelofsmeDb笙yRT-PCR,intheprese愀nceornotofciproflo蜷xacin.ResultsTheantibiotic-sensiti別vestrainsH407andA2氘6werep

4、ositiveandne縋gativetopumpinhibitorrespectively.MI囚Csofciprofloxacinandchloramphenicolinducedbyciprofloxa荬cinwithsub-inhibit殲ionlevelwerehigherby13dilutionsthanthosewithoutinduct驀ion.Theincre-asesw藹ereinhibitedbyCCCP.Afterinductionbyciprofloxacin,theEO蛐Ptochloramphenicol豪inH407andA26increasedbyandnea

5、rly4tim躔esrespectively,and痢thelevelofmRNAofsm用eDinthe2antimicrob碾e-inducedstrainsroseaswell.Conclusi流onTheresistanceto卯severalantimicrobe漭sinthetwoisolateso曖fcouldbeinducedbyc崾iprofloxacin.Thepossibleantibioticre沔sistancemechanisms蕻seemedlikelybythem勺volvementoftheincr絹easedtranscription螓levelofsmeD

6、EF.KEYWORDSStenotrophom痃onasmaltophilia;A鄙ntibioticresistanc儇e;Effluxpump;Induction嗜麥芽寡養(yǎng)單胞菌是機(jī)會致病菌，近10年來該菌所致的感染不斷碗上升，已成為醫(yī)院內(nèi)感染的重要的致病菌墩之一，可引起身體多個部位的炎癥及敗血際癥，其中在下呼吸道感染的分離率高。嗜埃麥芽寡養(yǎng)單胞菌耐藥性強(qiáng)，對臨床使用的嶗多數(shù)抗生素都具有耐藥性1，2，對部分抗生素甚至高度耐藥。嗜麥芽寡養(yǎng)單鉸胞菌內(nèi)源性和獲得性多重耐藥機(jī)制可能與茯存在多重外排泵有關(guān)，已發(fā)現(xiàn)的外排泵S刮meDEF對多種毒性物質(zhì)和包括氟喹諾蹬酮類的多種抗生素有外排作用3。研避究顯

7、示SmeDEF的表達(dá)水平與該菌多舟重耐藥程度有關(guān)。了解藥物外排泵及其調(diào)綮控機(jī)制對于該菌多重耐藥本質(zhì)的認(rèn)識和藥次物作用靶位的研究均有重要意義。目前對蘞嗜麥芽寡養(yǎng)單胞菌外排泵SmeDEF表釉達(dá)調(diào)控機(jī)制的研究較少，發(fā)現(xiàn)SmeT蛋樽白對SmeDEF轉(zhuǎn)錄有阻遏作用。已有研究發(fā)現(xiàn)多藥外排泵如大腸埃希菌Acr岬A(chǔ)B泵的表達(dá)能被膽鹽和某些抗菌藥物所劑激發(fā)，可能與感染時大腸埃希菌耐藥表型亳的誘導(dǎo)有關(guān)4，5。外排系統(tǒng)調(diào)控機(jī)勻制復(fù)雜，是否在嗜麥芽寡養(yǎng)單胞菌中也有這樣的誘導(dǎo)機(jī)制？本研究對嗜麥芽寡養(yǎng)單綺胞菌臨床株在抗菌藥物誘導(dǎo)下的表型和藥笳物外排泵SmeDEF表達(dá)進(jìn)行分析，探討這些變化在耐藥中所起作用。1材釀料與方法材

8、料(1)菌株來源嗜啄麥芽寡養(yǎng)單胞菌臨床株H407和A26旗分別來自感染者的痰與氣管吸出物。銅綠假單胞菌ATCC27853和大腸埃希蒴菌ATCC25922作藥敏實(shí)驗(yàn)質(zhì)量控制。(2)抗菌藥物和主要化學(xué)試劑?？咕幬餅槁让顾睾铜h(huán)丙沙星；標(biāo)準(zhǔn)品購予自北京天壇生物制品研究所。泵抑制劑C萃CCP為Sigma公司產(chǎn)品。培養(yǎng)基為似LB肉湯、MH和LB瓊脂，溴化乙啶(熒EB)為Sigma公司產(chǎn)品。SVTo呼talRNAIsolationSys施tem、RT-PCR系統(tǒng)(Cat.#痔1260)和瓊脂糖購自Promega甲公司產(chǎn)品。分子量標(biāo)準(zhǔn)DL-2000購更自TaKaRa公司。方法(1)蟻抗菌藥物誘導(dǎo)和非誘導(dǎo)時的

9、MIC值取LB平皿上過夜生長的單菌落，分別接種哭于含環(huán)丙沙星(濃度為1/3MIC)的鍘LB肉湯，孵育過夜；離心沉淀后重溶，多點(diǎn)接種于含和不含25g/mlCCCP的環(huán)丙沙星和氯霉素的倍比稀釋MH枚A平皿上，濃度105CFU/spot續(xù)，35孵育24h。對照組過夜孵育的哽LB肉湯無抗菌藥物，同樣接種于含和不悴含CCCP的抗菌藥物倍比稀釋平皿上，嫁質(zhì)控和判斷標(biāo)準(zhǔn)均依據(jù)美國臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)繽準(zhǔn)化研究所(CLSI/NCCLS)X星X年頒布的準(zhǔn)則。(2)抗菌藥物誘導(dǎo)熊的菌株耐藥性平皿效率實(shí)驗(yàn)(EOP)魈H407和A26同時進(jìn)行以下兩組實(shí)樵驗(yàn)。一組取LB平皿上過夜孵育的菌落，105CFU/mll涂布于含氯霉素肩

10、(濃度為)的MHA平皿和空白對照平皿。另一組在含環(huán)丙沙星(濃度為1/3MIC)的LB平皿過夜孵育的菌落，稀釋鄣后同樣涂布于含氯霉素的平皿和空白對照腓平皿，35孵育48h。計數(shù)最終的菌睚落數(shù)，EOP為含氯霉素的實(shí)驗(yàn)平皿上的蝴CFU滴度除以空白對照平皿的比值，參照文獻(xiàn)6。(3)檢測誘導(dǎo)前后s貓meD表達(dá)(RT-PCR)菌株H4泖07和A26同時進(jìn)行以下三組實(shí)驗(yàn)。一招組在LB肉湯中，35孵育；一組LB棗中加入環(huán)丙沙星(濃度為1/3MIC)孿后孵育；另一組在對數(shù)生長晚期的菌液加悟入同樣抗菌藥物繼續(xù)培養(yǎng)1h，三組均培繒養(yǎng)20h。細(xì)菌RNA的提取按SVTo糌talRNAIsolationSys踺tem操作

11、說明。用紫外分光光度計測A售260和A280值。定量后取3個稀釋欣度(、和g/l)的RNA溶液進(jìn)行蟊RT-PCR，擴(kuò)增smeD基因5端彭的395bp片段。該反應(yīng)引物D1和D埏2和以下所有引物的一般特征列于表1，塍引物由上海生物工程公司合成。反應(yīng)條件虎參見文獻(xiàn)7。從三組細(xì)菌提取的RN瑚A在3個濃度下擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行瓊脂糖電泳問和亮度對比，了解smeD的表達(dá)情況。以嗜麥芽寡養(yǎng)單胞菌-內(nèi)酰胺酶L2的基因blal2的258bp片段(引物：上游B1，下游B2)作為參照進(jìn)行RT-PCR，RNA約g。2結(jié)果蓑?qū)嶒?yàn)菌株的耐藥特性H407和A欷26對抗菌藥物耐藥表型和一般特性列表撿2。其中H407對諾氟沙星、環(huán)丙沙

12、星餃和氧氟沙星敏感，在使用泵抑制劑后MI痿C無變化；A26對以上幾種藥物也敏感醌，但在加泵抑制劑CCCP后對氯霉素的戲MIC值降至原值的1/4。藥物敏感性熊變化見表3?？咕幬镎T導(dǎo)和非誘導(dǎo)時的MIC值H407和A26與環(huán)丙摧沙星過夜孵育后對氯霉素和環(huán)丙沙星MIC比正常非誘導(dǎo)時MIC高13個稀釋蔚度，其中A26經(jīng)誘導(dǎo)后對環(huán)丙沙星和氯楚霉素的MIC分別增長3和2個稀釋度，姐大于H407的2和1個稀釋度。加泵抑制劑CCCP后，H407和A26誘導(dǎo)株的MIC均有明顯下降，除A26誘導(dǎo)赦株被CCCP抑制后的氯霉表1擴(kuò)增反應(yīng)膘使用引物表2實(shí)驗(yàn)菌株的一般特性表3H蜃407和A26對環(huán)丙沙星誘導(dǎo)和非誘導(dǎo)缸時的

13、素MIC降至無誘導(dǎo)時被抑制的水平(8g/ml)，H407和A26誘省導(dǎo)株加CCCP后的其余MIC均比無誘眇導(dǎo)時加或不加泵抑制劑的MIC值高，提漾示經(jīng)環(huán)丙沙星誘導(dǎo)的菌株在抑制外排作用馨后對環(huán)丙沙星的耐藥性明顯下降，但未恢復(fù)至誘導(dǎo)前被抑制的敏感水平，甚至未達(dá)潢到無誘導(dǎo)時的敏感性?？咕幬镎T導(dǎo)菌株的EOP結(jié)果EOP是更為準(zhǔn)確的趔測量不同菌群中耐藥水平的方法。H407誘導(dǎo)前氯霉素的EOP值為，環(huán)丙沙星廿誘導(dǎo)后的氯霉素EOP為，顯示有近4倍賻的增長。A26無環(huán)丙沙星誘導(dǎo)時氯霉素昃的EOP值為，誘導(dǎo)后的EOP為，顯示麼耐藥性增長了倍(表3)?？咕幬镎T赭導(dǎo)和非誘導(dǎo)株smeD的RT-PCR結(jié)嗖果H407和A

14、26在亞抑菌濃度環(huán)丙速沙星誘導(dǎo)后，smeD的mRNA水平增芽高，在3個RNA濃度下均可見添加抗菌擺藥物的兩組比對照組的RT-PCR條帶奚亮度高，抗菌藥物過夜組與指數(shù)期添加組履的亮度無明顯不同。作為對照的blal唯2mRNA水平誘導(dǎo)前后無明顯改變。圖灌1、2為A26菌株smeD和blal2的RT-PCR電泳結(jié)果。3討論藤外排泵(effluxpump)作為悸一種抗菌藥物耐藥的機(jī)制，首先報道于2蠑0世紀(jì)80年代初。之后，在許多細(xì)A、D、G：指數(shù)期添加組；B、E、忒H：抗菌藥物過夜組；菌中發(fā)現(xiàn)外排泵介煲導(dǎo)的多重抗菌藥物耐藥，例如NorA、保AcrAB、RobA、MexAB以及謎Bmr等811。有證據(jù)表

15、明嗜麥慪芽寡養(yǎng)單胞菌的多重外排泵是其固有和獲得性多重耐藥的最重要原因。SmeDE孺F外排泵是嗜麥芽寡養(yǎng)單胞菌與耐藥有關(guān)鱸的重要的外排泵，SmeDEF的外排底澇物有喹諾酮類、四環(huán)素、氯霉素、大環(huán)內(nèi)真酯類等結(jié)構(gòu)不相關(guān)的抗菌藥物。Li等莎12實(shí)驗(yàn)中野生株ULA511的sm喪eDEF低表達(dá)，野生株SmeDEF的耐藥譜與高表達(dá)smeDEF的MDR突援變株相同。Aloson等13發(fā)現(xiàn)幽僅部分嗜麥芽寡養(yǎng)單胞菌臨床株的sme殿DEF有轉(zhuǎn)錄活性，存在活性SmeF。鶿一般認(rèn)為一些多重外排泵在細(xì)菌的正常生惜長代謝中起作用14，本研究室也證曦實(shí)smeDEF基因廣泛存在于嗜麥芽寡視養(yǎng)單胞菌臨床株中，而且該基因的轉(zhuǎn)錄水砰

16、平與菌株的耐藥程度有關(guān)7。已知鼢決定外排泵活性大小的最常見因素是調(diào)控沾其表達(dá)的一些因子的變化，這些調(diào)控因子箍或作用對象的改變對耐藥性變化的影響不完全一致。包括革蘭陰性菌的多種致病菌首中，多藥外排系統(tǒng)的結(jié)構(gòu)基因常在附近調(diào)鰷控基因編碼蛋白的嚴(yán)謹(jǐn)降調(diào)控下4，1鮞5，外排泵的高表達(dá)常常由于這些調(diào)控墑基因的突變所致。但有些外排泵的調(diào)控機(jī)啤制更為復(fù)雜，如調(diào)節(jié)大腸埃希菌Mar耐帚藥的情況。與泵有關(guān)的耐藥機(jī)制中，可因耐藥調(diào)控有關(guān)的一些編碼/非編碼序列的餼改變16，17，或調(diào)控因子活性變疳化而使外排泵轉(zhuǎn)錄或翻譯升高，而增加菌株的耐藥性。(1)SmeT的實(shí)驗(yàn)研瘍究SmeT是SmeDEF轉(zhuǎn)錄的阻遏子，SmeT蛋白屬

17、于TetR和Acr詡R轉(zhuǎn)錄抑制子家族。SmeT的編碼基因660bp，位于smeD上游223b稽p，SmeT與SmeDEF反方向轉(zhuǎn)錄潼。smeDEF和smeT分別有單啟動獒子PsmeDEF和PsmeT，兩個基蔥因啟動子可能交互影響。Sanchez邐等3的研究中，SmeT在敏感菌株疏D457中低表達(dá)，而在耐藥株D457睦R的表達(dá)水平高，SmeT可能同時降調(diào)預(yù)控SmeT自身轉(zhuǎn)錄。SmeT在敏感菌畹中濃度有限，人為地增加其表達(dá)可進(jìn)一步坑提高菌株敏感性。這可能是野生SmeT頹對SmeDEF外排泵本底表達(dá)的調(diào)控，秭使之在生理?xiàng)l件下起作用。(2)誘導(dǎo)锃機(jī)制的研究嗜麥芽寡養(yǎng)單胞菌外排泵S鄯meDEF的表達(dá)亦受

18、到生長周期的調(diào)控蛉，SmeDEF和SmeT的表達(dá)也可能摶以不同方式對環(huán)境和生理信號起反應(yīng)1桴3。除了生長相調(diào)控，嗜麥芽寡養(yǎng)單胞剞菌有否類似一些外排系統(tǒng)由水楊酸類似物瑋等天然活化信號分子或抗菌藥物底物激發(fā)棧，表達(dá)增加的機(jī)制？此前還未有嗜麥芽寡養(yǎng)單胞菌外排泵可被其底物誘導(dǎo)的報道。通過檢測嗜麥芽寡養(yǎng)單胞菌H407和A26(泵抑制陽性和陰性的敏感菌株)的翰MIC和EOP值，觀察到在亞抑菌濃度梭的環(huán)丙沙星中生長后對抗菌藥物的耐藥性均有所提高，而且這種增加的耐藥性均能駁在泵抑制劑作用下降低，但對泵抑制劑不芍敏感的H407未恢復(fù)至誘導(dǎo)前被抑制的圖敏感水平，甚至未達(dá)到無誘導(dǎo)時菌株的敏感性。所以，外排作用在這樣

19、的耐藥水平眺增加中很重要，而且還有其它機(jī)制參與誘胭導(dǎo)后的耐藥性增加。對mRNA水平監(jiān)測肘發(fā)現(xiàn)環(huán)丙沙星誘導(dǎo)后SmeDEF泵的表喉達(dá)亦有顯著增高，而在指數(shù)期抗菌藥物作用1h已有明顯的提高，說明誘導(dǎo)作用主饗要發(fā)生在轉(zhuǎn)錄調(diào)控方面，關(guān)于其它泵的誘宗導(dǎo)實(shí)驗(yàn)證實(shí)了這一機(jī)制6。這也可能蛺解釋在有的病例中，如環(huán)丙沙星等抗菌藥坪物治療過程中嗜麥芽寡養(yǎng)單胞菌耐藥性增溟加的情況，以及在臨床中發(fā)現(xiàn)的治療與體兼外藥敏實(shí)驗(yàn)結(jié)果不符的部分病例。對誘脘導(dǎo)物和阻遏蛋白的作用，及與基因調(diào)控的叢研究已有很長時間，報道有些外排泵的底蹣物如膽鹽及多種藥物有誘導(dǎo)外排泵表達(dá)的螨作用5，18。研究顯示誘導(dǎo)作用可肺通過底物與外排泵的負(fù)調(diào)控子相互

20、作用而掭實(shí)現(xiàn)6，10，或某些誘導(dǎo)作用通過鯤與正調(diào)控子的作用。金葡菌QacA多重羝外排泵的負(fù)調(diào)控子QacR19，以統(tǒng)及四環(huán)素外排泵TetA的負(fù)調(diào)控子Te淵tR和大腸埃希菌多重外排泵EmrAB暇的EmrR，均直接參與誘導(dǎo)作用10各，11。根據(jù)同族蛋白的變化，推測嗜恙麥芽寡養(yǎng)單胞菌的誘導(dǎo)過程：抗菌藥物進(jìn)祀入細(xì)菌體內(nèi)后，直接或通過中間代謝產(chǎn)物窳，與阻遏蛋白SmeT結(jié)合，不是建立或銣斷裂個體之間的鍵，而是改變蛋白形狀，騅降低其與操作區(qū)的親和力。兩分子的誘導(dǎo)櫬物結(jié)合于四聚體足以解除其抑制作用。誘孚導(dǎo)物的結(jié)合改變了帽相對于核心的方向，拂使得一個二聚體內(nèi)的兩個帽不再能同時結(jié)庚合DNA，消除了多聚的優(yōu)點(diǎn)，降低了

21、對膪操作區(qū)的親和力，從而改變了阻遏蛋白在襦DNA鏈上的分布20。除了環(huán)丙沙蕘星能誘導(dǎo)嗜麥芽寡養(yǎng)單胞菌耐藥性的提高，應(yīng)該還有其它一些外排泵底物或類似物囑可以作為誘導(dǎo)劑調(diào)節(jié)泵的表達(dá)水平。(髑3)其他可能的機(jī)制根據(jù)已知與泵有關(guān)耥的耐藥機(jī)制的結(jié)論和本研究的結(jié)果，嗜麥芽寡養(yǎng)單胞菌臨床株有關(guān)SmeDEF的耐藥性除有誘導(dǎo)機(jī)制，還可能有非編碼基似因序列的變化引起結(jié)構(gòu)基因smeD轉(zhuǎn)錄或翻譯增強(qiáng)，或可能通過阻遏蛋白SmeT作用發(fā)揮所需的序列變化影響。本室前慎期研究發(fā)現(xiàn)耐藥菌SmeT阻遏蛋白序列丶出現(xiàn)Asp218Glu氨基酸替換，以及125、136、138和148位氨基酸多個位點(diǎn)的替換。Sanchez等餳實(shí)驗(yàn)室檢測

22、序列分析證實(shí)SmeT的le絡(luò)u166Gln氨基酸突變導(dǎo)致了嗜麥芽熒寡養(yǎng)單胞菌D457R的蛋白活性下降。菹可能為影響蛋白的穩(wěn)定性，SmeT抑制啷活性降低或失活。不同耐藥機(jī)制單獨(dú)或可能聯(lián)合起作用，增加臨床菌株與多重外排有關(guān)的耐藥性。該菌對喹諾酮等抗菌藥物躦的耐藥性可能還有除了泵的其他機(jī)制，如悱還未得到證實(shí)的可能的靶酶突變20綺。本研究僅就SmeDEF外排泵的底刊物誘導(dǎo)作用作一初步探討，這些發(fā)現(xiàn)在國概內(nèi)、外尚屬首次。嗜麥芽寡養(yǎng)單胞菌Sm螈eDEF外排泵的調(diào)控機(jī)制很復(fù)雜，可能賒有眾多的順式和反式因子對表達(dá)起作用。茁有關(guān)嗜麥芽寡養(yǎng)單胞菌臨床株SmeDEF外排泵的表達(dá)調(diào)控及與耐藥性產(chǎn)生的具播體機(jī)制還有待今

23、后進(jìn)一步明確?！緟⒖嘉墨I(xiàn)】1ValdezateS,嘭VindelA,LozaE,etal.Antimicrobialsusc黑eptibilitiesofuniq叼ueStenotrophomonas帷maltophiliaclinica肽lstrainsJ.Antimi宦crobAgentsChemothe襝r,2001,45(5):1581疆1584.2孫二琳，宋詩鐸.泵鍬抑制劑對嗜麥芽寡養(yǎng)單胞菌臨床株氟喹諾雛酮類敏感性的影響J.中國抗生素雜示志，XX，28(12)：75676因0.3SanchezP,Alo漉nsoA,MartinezJL.Cl芙oningandcharacteri還za

24、tionofsmeT,arepressoroftheStenotro羲phomonasmaltophili踵amultidrugeffluxpumpsmeDEFJ.AntimicrobAgentChemother,2002,46(11):3386虞3393.4MaD,Alber兵tiM,LynchC,etal.ThelocalrepressorAcr兢Rplaysamodulatingr饅oleintheregulation鴨ofacrABgenesofEscherichiacolibyglobalstresssignalsJ.鐒MolMicrobiol,1996,19(1):101112.5

25、毓OkusuH,MaD,Nikaido掠H.AcrABdffluxpumpplaysamajorroleinth寞eantibioticresista耢ncephenotypeofEsch癯erichiacolimultipl錫e-antibiotic-resis以tance(Mar)mutantsJ.JBacteriol,1996咻,178(1):306308.捂6RouquetteC,Harmo楱nJB,ShaferWM.Induc芾tionofthemtrCDE-en番codedeffluxpumpsys藁temofNEisseriagono椒rrhoeaerequiresMtrA,an

26、ArC-likeprotEInJ.MolMicrobiol,1999,33(3):651658喊.7孫二琳，宋詩鐸.嗜麥芽寡養(yǎng)婢單胞菌臨床株的多重耐藥外排泵的研究巋J.中華微生物和免疫學(xué)雜志，XX，耿24(9)：743747.8泔PooleK,TeyroK,Zhao壕Q,etal.Expressiono蠔fmultidrugresistan醢ceoperonmexA-mexB-芎oprMinPseudomonasa氈eruginosamexRencodesaregulatorofoper前onexpressionJ.An林timicrobAgentChemo溪ther,1996,40(9):2

27、0咻212028.9Zagurs芍kayaH,NikaidoH.Mut鋃idrugresistancemec互hanisms:drugeffluxacrosstwomembranesJ.MolMicrobiol,2朕000,37(2):219222.10SmithLD,Bertr愧andKP.Mutationsint錮heTn10tetrepressor仆thatinterferewithi藺nduction.Locationo梁fthetetracycline-b啁indingdomainJ.JM怙olBiol,1988,203(4)主:949959.11Pete氦rsonML,HovdeL

28、B,Wri觜ghtDH,etal.FluoroquinoloneresistanceinBacteroidesfragilisfollowingsparfl窄oxacinexposureJ.夭AntimicrobAgentsCh論emo-ther,1999,43(9):22512255.12Z茆hangL,LiXZ,PooleK.SmeDEFmultidrugeff后luxpumpcontributes崠tointrinsicmultidr佻ugresistanceinSten鸞otrophomonasmaltop垃hiliaJ.Antimicro眸bAgentChemother,20蹴01,

29、45(12):3497350縛3.13AlonsoA,Mar渫tinezJL.Cloningand郎characterizationof鷥smeDEF,anovelmulti腠drugeffluxpumpfrom岌Stenotrophomonasma搶ltophiliaJ.AntimicrobAgentChemother,2000,4(4):30793柢086.14AlosonA,J珧oseML.Expressionof犬multidrugeffluxpum竹pSmeDEFbyclinicalisolatesofStenotrop鳧homonasmaltophilia後J.AntimicrobAgentChemother,2001,45(6):18791881.15耬PaulsenIT,Sliwins梆keMK,SaierMJ.Micro雌bialge