CAR-T細(xì)胞治療質(zhì)量控制淺談

1、CAR-T細(xì)胞治療質(zhì)量控制淺談細(xì)胞治療，將改變?nèi)祟惣膊〉闹委煼妒?，由過去重復(fù)的癥狀控制轉(zhuǎn)為一次性的治愈，是引領(lǐng)生物醫(yī)學(xué)的希望。其中，嵌合抗原受體（CAR）T細(xì)胞療法是近年來發(fā)展非常迅速的一種細(xì)胞治療技術(shù)。目前在全球已有兩款藥物獲得FDA的批準(zhǔn)上市，分別是諾華的Kymriah和凱特的YESCARTA，中國有多家公司產(chǎn)品進(jìn)入臨床申報階段，這種療法已成為更多患者的選擇，CAR-T細(xì)胞制造過程符合全球監(jiān)管要求成為廣泛討論的話題。細(xì)胞治療質(zhì)量控制分析其中細(xì)胞質(zhì)量控制貫穿CAR-T從研發(fā)到臨床的所有步驟，但CAR-T作為“活”的藥物，其很多特性與傳統(tǒng)藥物有很大的差別，下表列舉了與傳統(tǒng)藥物的主要差異點：第一

2、個上市的CAR-T藥物Kymriah的釋放標(biāo)準(zhǔn)涉及到多個方面的指標(biāo)，下圖是小編收集到的Kymriah的釋放指標(biāo)所需要測試的實驗：KITE的YESCARTA的質(zhì)量控制也涉及到非常多的生物學(xué)實驗，篇幅有限，就不一一列舉了，具體指標(biāo)可參考如下的鏈接：/downloads/BiologicsBloodVaccines/CellularGeneTherapyProducts/ApprovedProducts/UCM584335.pdf另一方面CAR-T制造工藝復(fù)雜，下圖列舉了CAR-T的制作流程，其中涉及到病毒轉(zhuǎn)染，外源物質(zhì)的引進(jìn)，長時間培養(yǎng)等因素，這勢必對質(zhì)量控制提

3、出了巨大的挑戰(zhàn)。Molecular Therapy Oncolytics (2016) 16015細(xì)胞治療質(zhì)量控制原則及法規(guī)基于以上原因，CAR-T細(xì)胞質(zhì)量控制特別強(qiáng)調(diào)制備工藝的穩(wěn)定性、多批次驗證、全程質(zhì)控和按照SOP嚴(yán)格操作。要建立穩(wěn)定的質(zhì)量檢驗和放行檢驗標(biāo)準(zhǔn)。美國和歐洲出臺了相應(yīng)的法規(guī)來規(guī)范細(xì)胞治療的質(zhì)量控制，以下是國外針對細(xì)胞治療出臺的相關(guān)政策法規(guī)：（大家如有需要，可至文末掃碼下載）在我國，細(xì)胞治療的國家主管部門是國家衛(wèi)生和計劃生育委員會（NHFPC）和國家食品藥品監(jiān)督管理總局（CFDA），下圖是我國針對細(xì)胞治療出臺的相關(guān)政策法規(guī)：以下以CTL019為例來分析細(xì)胞治療質(zhì)量控制策略，目前細(xì)

4、胞治療產(chǎn)品的質(zhì)量控制分為四個大的方面，分別為安全性（Safety），純度（Purity），潛能性（Potency）以及均一性（Identity），這些質(zhì)量控制會貫穿CAR-T生產(chǎn)的不同階段，下圖列舉了這些檢測會在不同的階段開展。這四個大方面的檢測再進(jìn)行細(xì)分，具體的實驗如下圖：生物學(xué)實驗用于質(zhì)量分析帶來的挑戰(zhàn)在這些實驗中，大部分是生物學(xué)實驗，生物學(xué)實驗因為操作方法，樣本差異等因素會給結(jié)果帶來較大的波動，也給這些方法向GMP轉(zhuǎn)移帶來了挑戰(zhàn)，同時這些實驗結(jié)果的驗收標(biāo)準(zhǔn)和規(guī)范難以制定，以CAR-T的轉(zhuǎn)染效率測定為例，不同的人對流式細(xì)胞儀結(jié)果設(shè)門得到的差異會有較大的差異。細(xì)胞治療質(zhì)量控制的基石實驗-濃度

5、，活率細(xì)胞濃度活率測試方面，其是很多生物學(xué)實驗的基礎(chǔ)，比如細(xì)胞生長速率測定，細(xì)胞因子檢測，細(xì)胞生物學(xué)效應(yīng)檢測方面，細(xì)胞計數(shù)是這些實驗的第一步，這一步如果錯誤，那么結(jié)果波動大是預(yù)料之中的。另外在在細(xì)胞培養(yǎng)過程中，極為重要的一點是優(yōu)化細(xì)胞培養(yǎng)條件。細(xì)胞的濃度，活率，結(jié)團(tuán)率，形態(tài)是了解反應(yīng)器中細(xì)胞培養(yǎng)狀態(tài)的重要指標(biāo)?？偠灾?，CAR-T從細(xì)胞收集開始到最后的產(chǎn)品回輸，濃度活率一直是最關(guān)鍵的指標(biāo)之一。既然濃度活率對于CAR-T整個生產(chǎn)過程這么的重要，小編自作主張的調(diào)研和試用了市場上最暢銷的幾款細(xì)胞計數(shù)儀，尤其衷愛我國自主研發(fā)生產(chǎn)的Countstar Rigel熒光細(xì)胞分析儀。不得不說，這款產(chǎn)品的智能、

6、精準(zhǔn)、合規(guī)滿足了小編對細(xì)胞計數(shù)儀所有的想象。智能作為新時代年輕人，觸屏的使用已經(jīng)深入人心，這款產(chǎn)品的設(shè)計也讓小編有告別傳統(tǒng)PC時代，與科技進(jìn)步共發(fā)展的認(rèn)同感。只需動一動手指，即可全自動獲得細(xì)胞分析結(jié)果和圖像。高質(zhì)量的圖像可通過多點觸控放大或縮小，讓你看得真切，讓小編對結(jié)果的真實性不再懷疑。三分鐘檢測五個樣，用這樣的神器，老板再也不用擔(dān)心我的計數(shù)速度啦。正是這款小小的熒光細(xì)胞分析儀其實具有大智慧。除細(xì)胞濃度活率檢測外，對于CarT細(xì)胞中效應(yīng)細(xì)胞毒性、細(xì)胞凋亡等測試這款儀器也能進(jìn)行很好的分析。精準(zhǔn)小編親測，使用AOPI活率檢測程序測試細(xì)胞濃度和活率，看一遍即會使用，5槽測試結(jié)果CV5%，線性R20

7、.99，多臺儀器間測試結(jié)果一致。多個地區(qū)，多類樣品，多個人開展測試，也不再擔(dān)心數(shù)據(jù)的一致性。Countstar Rigel 的AOPI細(xì)胞活率測試，可用于全血的質(zhì)量評估，PBMC分離效率檢測，T細(xì)胞的培養(yǎng)狀態(tài)，T細(xì)胞的增殖率和活率，產(chǎn)品釋放質(zhì)量控制，在CarT細(xì)胞治療整個質(zhì)量控制過程均可使用。合規(guī)從美國藥典，F(xiàn)DA以及CFDA的法規(guī)來看，對細(xì)胞治療產(chǎn)品用于藥品，符合GMP規(guī)范進(jìn)行管理成為未來的趨勢。所以，小編對儀器最重要最基本的要求就是需要符合GMP/cGMP、數(shù)據(jù)審計追蹤、FDA 21 CFR PART 11。Countstar Rigel從設(shè)計到服務(wù)完全符合這個要求！同時，Countstar Rigel提供標(biāo)準(zhǔn)微珠顆粒、3Q驗證服務(wù)，并且經(jīng)SGS專業(yè)測試驗證，符合ISO14644 Class5（GMP B級）環(huán)境使用要求?？梢栽贕MP B+A級潔凈環(huán)境下放心使用。據(jù)了解，Countstar（IC1000，BioMed）在全球已銷售2000多臺，在細(xì)胞治療行業(yè)有超過200個客戶，有超過10家用戶正在進(jìn)行臨床申請。Countstar 9年只做一件事，努力做最好的熒光細(xì)胞分析儀。Countstar Rigel是值