微生物的純培養(yǎng)和顯微技術(shù)演示課件

1、1,第二章 微生物的純培養(yǎng) 和顯微技術(shù),2,微生物的基本特點(diǎn)：,小,在絕大多數(shù)情況下都是利用微生物的群體 來研究其屬性；,微生物的物種（菌株）一般也是以群體的 形式進(jìn)行繁衍、保存；,培養(yǎng)技術(shù)在微生物學(xué)中具有重要意義！,3,在研究中所使用的微生物培養(yǎng)群體：,培養(yǎng)物：在一定的條件下培養(yǎng)、繁殖得到的 微生物群體,混合培養(yǎng)物:含有多種微生物的培養(yǎng)物； 純培養(yǎng)物:只有一種微生物的培養(yǎng)物；,通常情況下只有純培養(yǎng)物才能提供可以 重復(fù)的結(jié)果,純培養(yǎng)技術(shù)是進(jìn)行微生物學(xué)研究的基礎(chǔ)！,4,微生物個(gè)體微小的特點(diǎn)也決定了顯微技術(shù)是進(jìn)行微生物研究的另一項(xiàng)重要技術(shù)，因?yàn)榻^大多數(shù)微生物的個(gè)體形態(tài)及其內(nèi)部結(jié)構(gòu)只能通過顯微鏡才能

2、進(jìn)行觀察和研究.,微生物的基本特點(diǎn)：,小,5,第一節(jié) 微生物的分離和純培養(yǎng),從混雜的群體中分離特定的某一種微生物，是研究和利用微生物的第一步。,一、無菌技術(shù),用于分離、培養(yǎng)微生物的器具事先不含任 何微生物； 在轉(zhuǎn)接、培養(yǎng)微生物時(shí)防止其它微生物的 污染；,6,1、微生物培養(yǎng)的常用器具及其滅菌,常用的器具：,試管、瓶子、培養(yǎng)皿等,7,高溫干熱滅菌,高壓蒸汽滅菌,試管、瓶子、培養(yǎng)皿等,常用的滅菌方法：,1、微生物培養(yǎng)的常用器具及其滅菌,常用的器具：,8,2、接種操作,無菌操作：,火焰附近（酒精燈、煤氣燈）進(jìn)行,9,2、接種操作,無菌操作：,在無菌箱或操作室內(nèi)無菌的環(huán)境 下進(jìn)行,10,二、用固體培養(yǎng)基

3、分離純培養(yǎng),培養(yǎng)基：,液體培養(yǎng)基； 固體培養(yǎng)基； 半固體培養(yǎng)基；,11,二、用固體培養(yǎng)基分離純培養(yǎng),培養(yǎng)基,液體培養(yǎng)基； 固體培養(yǎng)基； 半固體培養(yǎng)基；,瓊脂,12,二、用固體培養(yǎng)基分離純培養(yǎng),菌落（colony）：,單個(gè)（或聚集在一起的一團(tuán)）微生物在適 宜的固體培養(yǎng)基表面或內(nèi)部生長、繁殖到一定 程度可以形成肉眼可見的、 有一定形態(tài)結(jié)構(gòu) 的子細(xì)胞生長群體.,眾多菌落連成一片,菌苔（lawn）,13,不同微生物在特定培養(yǎng)基上生長形成的菌落 或菌苔一般都具有穩(wěn)定的特征（形狀、顏色 等），可以成為對該微生物進(jìn)行分類、鑒定 的重要依據(jù)（見P15 圖2-3）。,14,（P15 圖 2-3）,15,同一細(xì)菌

4、在不同的培養(yǎng)平板上形成 不同的特征菌落,16,17,二、用固體培養(yǎng)基分離純培養(yǎng),使微生物在固體培養(yǎng)基平板上形成 單個(gè)菌落的基本方法：,稀釋,18,二、用固體培養(yǎng)基分離純培養(yǎng),2、稀釋倒平板法,1、涂布平板法,操作較麻煩,對好 氧菌、熱敏感菌 效果不好,使用較多的常規(guī)方法，但有時(shí)涂布不均勻,19,20,二、用固體培養(yǎng)基分離純培養(yǎng),3、平板劃線法,21,二、用固體培養(yǎng)基分離純培養(yǎng),4、厭氧微生物的分離,厭氧罐,厭氧手套箱,22,二、用固體培養(yǎng)基分離純培養(yǎng),4、厭氧微生物的分離,稀釋搖管法,23,三、用液體培養(yǎng)基分離純培養(yǎng),0.048,0.048 + 0.0012 + 0.0002,= 0.975,

5、稀釋法進(jìn)行液體分離必須在同一個(gè)稀釋度 的許多平行試管中,大多數(shù)（一般應(yīng)超過95%） 表現(xiàn)為不生長。,例如:若同一稀釋度的試管中有95%表現(xiàn)為不生長， 則生長的試管中僅含一個(gè)細(xì)胞的幾率為: 4.8% 含二個(gè)細(xì)胞的幾率為: 0.12% 含三個(gè)細(xì)胞的幾率為: 0.002%,在有細(xì)菌生長的試管中得到純培養(yǎng)的幾率為97.5%,24,1878年，Lister 分離乳酸鏈球菌時(shí)所使用的 微量注射器和酒杯培養(yǎng)裝置,注射器的最小 吸取量: 0.00062 毫升,25,四、單細(xì)胞（孢子）分離,一般采用顯微操作儀，在顯微鏡下進(jìn)行；,操作難度與細(xì)胞或個(gè)體的大小成反比；,26,五、選擇培養(yǎng)分離,抑制大多數(shù)其它微生物的生

6、長；,使待分離的微生物生長更快；,使待分離的微生物在群落中的數(shù)量 上升,方便用稀釋法對其進(jìn)行純化.,微生物群落中數(shù)量占少數(shù)的微生物的分離純化,沒有一種培養(yǎng)基或一種培養(yǎng)條件能夠滿足自然界中 一切生物生長的要求，在一定程度上所有的培養(yǎng)基 都是選擇性的。,使待分離的微生物生長“突出”；,直接挑取待分離的微生物的菌落獲得純培養(yǎng).,27,五、選擇培養(yǎng)分離,1. 利用選擇平板進(jìn)行直接分離,待分離的微生物生長，其它微生物的生長被抑制,高溫下培養(yǎng):分離嗜熱細(xì)菌,培養(yǎng)基中不含N:分離固氮菌,培養(yǎng)基加抗生素:分離抗性菌,28,五、選擇培養(yǎng)分離,1. 利用選擇平板進(jìn)行直接分離,待分離的微生物的生長特征 明顯不同于其它微生物,顏色反應(yīng):分離特定的菌株,牛奶平板:分離蛋白酶產(chǎn)生菌（大腸桿菌),利用特定細(xì)菌的滑動特點(diǎn) 進(jìn)行分離純化；,29,五、選擇培養(yǎng)分離,2. 富集培養(yǎng),從自然界中分離到所需的特定微生物,特定的環(huán)境條件,僅適應(yīng)于該條件的微生物旺盛生長,待分離微生物在群落中的數(shù)量大大增加,30,2. 富集培養(yǎng),富集培養(yǎng)是微生物學(xué)