微生物的純培養(yǎng)和顯微技術演示課件

1、1,第二章 微生物的純培養(yǎng) 和顯微技術,2,微生物的基本特點：,小,在絕大多數(shù)情況下都是利用微生物的群體 來研究其屬性；,微生物的物種（菌株）一般也是以群體的 形式進行繁衍、保存；,培養(yǎng)技術在微生物學中具有重要意義！,3,在研究中所使用的微生物培養(yǎng)群體：,培養(yǎng)物：在一定的條件下培養(yǎng)、繁殖得到的 微生物群體,混合培養(yǎng)物:含有多種微生物的培養(yǎng)物； 純培養(yǎng)物:只有一種微生物的培養(yǎng)物；,通常情況下只有純培養(yǎng)物才能提供可以 重復的結果,純培養(yǎng)技術是進行微生物學研究的基礎！,4,微生物個體微小的特點也決定了顯微技術是進行微生物研究的另一項重要技術，因為絕大多數(shù)微生物的個體形態(tài)及其內(nèi)部結構只能通過顯微鏡才能

2、進行觀察和研究.,微生物的基本特點：,小,5,第一節(jié) 微生物的分離和純培養(yǎng),從混雜的群體中分離特定的某一種微生物，是研究和利用微生物的第一步。,一、無菌技術,用于分離、培養(yǎng)微生物的器具事先不含任 何微生物； 在轉接、培養(yǎng)微生物時防止其它微生物的 污染；,6,1、微生物培養(yǎng)的常用器具及其滅菌,常用的器具：,試管、瓶子、培養(yǎng)皿等,7,高溫干熱滅菌,高壓蒸汽滅菌,試管、瓶子、培養(yǎng)皿等,常用的滅菌方法：,1、微生物培養(yǎng)的常用器具及其滅菌,常用的器具：,8,2、接種操作,無菌操作：,火焰附近（酒精燈、煤氣燈）進行,9,2、接種操作,無菌操作：,在無菌箱或操作室內(nèi)無菌的環(huán)境 下進行,10,二、用固體培養(yǎng)基

3、分離純培養(yǎng),培養(yǎng)基：,液體培養(yǎng)基； 固體培養(yǎng)基； 半固體培養(yǎng)基；,11,二、用固體培養(yǎng)基分離純培養(yǎng),培養(yǎng)基,液體培養(yǎng)基； 固體培養(yǎng)基； 半固體培養(yǎng)基；,瓊脂,12,二、用固體培養(yǎng)基分離純培養(yǎng),菌落（colony）：,單個（或聚集在一起的一團）微生物在適 宜的固體培養(yǎng)基表面或內(nèi)部生長、繁殖到一定 程度可以形成肉眼可見的、 有一定形態(tài)結構 的子細胞生長群體.,眾多菌落連成一片,菌苔（lawn）,13,不同微生物在特定培養(yǎng)基上生長形成的菌落 或菌苔一般都具有穩(wěn)定的特征（形狀、顏色 等），可以成為對該微生物進行分類、鑒定 的重要依據(jù)（見P15 圖2-3）。,14,（P15 圖 2-3）,15,同一細菌

4、在不同的培養(yǎng)平板上形成 不同的特征菌落,16,17,二、用固體培養(yǎng)基分離純培養(yǎng),使微生物在固體培養(yǎng)基平板上形成 單個菌落的基本方法：,稀釋,18,二、用固體培養(yǎng)基分離純培養(yǎng),2、稀釋倒平板法,1、涂布平板法,操作較麻煩,對好 氧菌、熱敏感菌 效果不好,使用較多的常規(guī)方法，但有時涂布不均勻,19,20,二、用固體培養(yǎng)基分離純培養(yǎng),3、平板劃線法,21,二、用固體培養(yǎng)基分離純培養(yǎng),4、厭氧微生物的分離,厭氧罐,厭氧手套箱,22,二、用固體培養(yǎng)基分離純培養(yǎng),4、厭氧微生物的分離,稀釋搖管法,23,三、用液體培養(yǎng)基分離純培養(yǎng),0.048,0.048 + 0.0012 + 0.0002,= 0.975,

5、稀釋法進行液體分離必須在同一個稀釋度 的許多平行試管中,大多數(shù)（一般應超過95%） 表現(xiàn)為不生長。,例如:若同一稀釋度的試管中有95%表現(xiàn)為不生長， 則生長的試管中僅含一個細胞的幾率為: 4.8% 含二個細胞的幾率為: 0.12% 含三個細胞的幾率為: 0.002%,在有細菌生長的試管中得到純培養(yǎng)的幾率為97.5%,24,1878年，Lister 分離乳酸鏈球菌時所使用的 微量注射器和酒杯培養(yǎng)裝置,注射器的最小 吸取量: 0.00062 毫升,25,四、單細胞（孢子）分離,一般采用顯微操作儀，在顯微鏡下進行；,操作難度與細胞或個體的大小成反比；,26,五、選擇培養(yǎng)分離,抑制大多數(shù)其它微生物的生

6、長；,使待分離的微生物生長更快；,使待分離的微生物在群落中的數(shù)量 上升,方便用稀釋法對其進行純化.,微生物群落中數(shù)量占少數(shù)的微生物的分離純化,沒有一種培養(yǎng)基或一種培養(yǎng)條件能夠滿足自然界中 一切生物生長的要求，在一定程度上所有的培養(yǎng)基 都是選擇性的。,使待分離的微生物生長“突出”；,直接挑取待分離的微生物的菌落獲得純培養(yǎng).,27,五、選擇培養(yǎng)分離,1. 利用選擇平板進行直接分離,待分離的微生物生長，其它微生物的生長被抑制,高溫下培養(yǎng):分離嗜熱細菌,培養(yǎng)基中不含N:分離固氮菌,培養(yǎng)基加抗生素:分離抗性菌,28,五、選擇培養(yǎng)分離,1. 利用選擇平板進行直接分離,待分離的微生物的生長特征 明顯不同于其它微生物,顏色反應:分離特定的菌株,牛奶平板:分離蛋白酶產(chǎn)生菌（大腸桿菌),利用特定細菌的滑動特點 進行分離純化；,29,五、選擇培養(yǎng)分離,2. 富集培養(yǎng),從自然界中分離到所需的特定微生物,特定的環(huán)境條件,僅適應于該條件的微生物旺盛生長,待分離微生物在群落中的數(shù)量大大增加,30,2. 富集培養(yǎng),富集培養(yǎng)是微生物學