艾滋病快速檢測(cè)PPT.ppt

1、艾滋病快速檢測(cè),曲靖市艾滋病確證實(shí)驗(yàn)室 2009年5月,艾滋病檢測(cè)工作管理辦法,實(shí)驗(yàn)室的設(shè)置 國(guó)家艾滋病參比實(shí)驗(yàn)室:中國(guó)CDC 艾滋病確證中心實(shí)驗(yàn)室:省CDC 艾滋病確證實(shí)驗(yàn)室：州（市）級(jí)CDC 艾滋病篩查中心實(shí)驗(yàn)室:地(市)級(jí)CDC 艾滋病篩查實(shí)驗(yàn)室：縣CDC 艾滋病檢測(cè)點(diǎn)：縣級(jí)醫(yī)院、鄉(xiāng)（衛(wèi)生院,艾滋病檢測(cè)工作管理辦法,實(shí)驗(yàn)室必備條件 人員條件 國(guó)家艾滋病參比實(shí)驗(yàn)室:略 艾滋病確證中心和確認(rèn)實(shí)驗(yàn)室 至少由5名醫(yī)技人員組成, 高級(jí)衛(wèi)生技術(shù)人員至少1名、中級(jí)2名或以上,負(fù)責(zé)確認(rèn)實(shí)驗(yàn)的人員需具有3年以上從事HIV抗體初篩工作經(jīng)驗(yàn)、接受過(guò)國(guó)家級(jí)或確證中心實(shí)驗(yàn)室的技術(shù)培訓(xùn),并獲得合格證書(shū). 篩查中心實(shí)

2、驗(yàn)室和篩查實(shí)驗(yàn)室 至少由3名醫(yī)技人員組成，具有中級(jí)衛(wèi)生技術(shù)職稱人員至少1名。負(fù)責(zé)篩查試驗(yàn)的人員需具有2年以上從事血清學(xué)檢測(cè)工作經(jīng)驗(yàn)，接受過(guò)省確認(rèn)中心實(shí)驗(yàn)室的技術(shù)培訓(xùn)，并獲得合格證書(shū)。 艾滋病檢測(cè)點(diǎn) 2名檢測(cè)技術(shù)人員，且經(jīng)過(guò)確認(rèn)中心實(shí)驗(yàn)室培訓(xùn)，并獲得合格證書(shū),艾滋病檢測(cè)工作管理辦法,建筑條件和設(shè)備條件 國(guó)家艾滋病參比實(shí)驗(yàn)室（略） 艾滋病確認(rèn)中心和確證實(shí)驗(yàn)室（略） 艾滋病篩查中心實(shí)驗(yàn)室和篩查實(shí)驗(yàn)室(略) 艾滋病檢測(cè)點(diǎn) 有獨(dú)立實(shí)驗(yàn)用房或?qū)Ｓ脵z測(cè)臺(tái)。 配備快速檢測(cè)試驗(yàn)所需設(shè)備，包括移液器、普通冰箱、離心機(jī)；消毒與污物處理設(shè)備；安全防護(hù)用品,艾滋病檢測(cè)工作管理辦法,實(shí)驗(yàn)室的任務(wù) 國(guó)家艾滋病參比實(shí)驗(yàn)室（略

3、） 艾滋病確認(rèn)中心實(shí)驗(yàn)室和確證實(shí)驗(yàn)室（略） 艾滋病篩查中心實(shí)驗(yàn)室（略） 艾滋病篩查實(shí)驗(yàn)室 (1)承擔(dān)本地區(qū)艾滋病抗體篩查任務(wù)。 (2)負(fù)責(zé)接收各艾滋病檢測(cè)點(diǎn)的陽(yáng)性反應(yīng)標(biāo)本復(fù)檢,仍為陽(yáng)性反應(yīng)的直接送確證實(shí)驗(yàn)室確證。 (3)按規(guī)范要求開(kāi)展檢測(cè)前后咨詢。 艾滋病檢測(cè)點(diǎn) 1、承擔(dān)前來(lái)就診艾滋病快速檢測(cè)任務(wù)。 2、負(fù)責(zé)快速檢測(cè)抗體陽(yáng)性標(biāo)本送縣CDC篩查實(shí)驗(yàn)室。 3、按規(guī)范要求開(kāi)展前后咨詢,艾滋病檢測(cè)工作管理辦法,艾滋病檢測(cè)點(diǎn)的審批 1、在人員條件和實(shí)驗(yàn)室硬件均符合全國(guó)艾滋病檢測(cè)工作規(guī)范要求的前提下，擬申請(qǐng)艾滋病檢測(cè)點(diǎn)的單位，須填寫(xiě)艾滋病檢測(cè)點(diǎn)申請(qǐng)表，一式三份，報(bào)當(dāng)?shù)匦l(wèi)生行政部門簽署意見(jiàn)后，交市疾病預(yù)防控

4、制中心確證實(shí)驗(yàn)室。 2、市CDC組織相關(guān)2人進(jìn)行現(xiàn)場(chǎng)考核與驗(yàn)收，如符合申報(bào)條件則會(huì)形成意見(jiàn)報(bào)市級(jí)衛(wèi)生行政部門。 3、經(jīng)市級(jí)衛(wèi)生行政部門批準(zhǔn)后方可成為艾滋病檢測(cè)點(diǎn),艾滋病檢測(cè)的方法,HIV抗體檢測(cè) HIV快速抗體檢測(cè) HIV抗體篩查檢測(cè) HIV抗體確證檢測(cè)（免疫印跡試驗(yàn)） HIV核酸檢測(cè) 核酸序列依賴性擴(kuò)增（NASBA） HIV定量逆轉(zhuǎn)錄PCR系統(tǒng)（RTPCR） HIVRNA定量檢測(cè)的分支測(cè)定法（bDNA,艾滋病檢測(cè)的方法,嚴(yán)格執(zhí)行中國(guó)疾病預(yù)防控制中心全國(guó)艾滋病檢測(cè)技術(shù)規(guī)范(2004年版) 嚴(yán)格遵照艾滋病快速檢測(cè)操作技術(shù)規(guī)程,艾滋病檢測(cè)的方法及意義,HIV抗體檢測(cè) HIV抗體篩查檢測(cè) 1、快速檢

5、測(cè) 由于方法的局限性，陽(yáng)性反應(yīng)須采標(biāo)本送篩查實(shí)驗(yàn)室復(fù)核，告知結(jié)果“懷疑感染HIV”，出具報(bào)告“HIV抗體待復(fù)查”需要進(jìn)一步檢查 2、復(fù)核 篩查實(shí)驗(yàn)室對(duì)快速檢測(cè)的樣本復(fù)核仍為陽(yáng)性反應(yīng)，只能出具“抗體待復(fù)查”的檢驗(yàn)報(bào)告，并將標(biāo)本送確證實(shí)驗(yàn)室確證 HIV抗體的確證實(shí)驗(yàn)(免疫印跡試驗(yàn)) HIV/AIDS診斷的唯一依據(jù),市CDC確認(rèn)實(shí)驗(yàn)室負(fù)責(zé)全市HIV陽(yáng)性及可疑標(biāo)本的確證,我國(guó)常用的HIV抗體檢測(cè)試劑,HIV抗體篩查試劑 酶聯(lián)免疫：篩查實(shí)驗(yàn)室的常用基本試劑。 明膠顆粒凝集 快速診斷試劑：未建立艾滋病篩查實(shí)驗(yàn)室的縣級(jí)醫(yī)院、婦幼保健院、鄉(xiāng)鎮(zhèn)衛(wèi)生院快速檢測(cè)點(diǎn)或經(jīng)過(guò)培訓(xùn)的技術(shù)人員在規(guī)定的場(chǎng)所使用。 HIV抗體確

6、證試劑 免疫印跡試劑,快速檢測(cè)試劑的優(yōu)缺點(diǎn),硒標(biāo)記法和金標(biāo)記法與ELISA相比 優(yōu)點(diǎn) 所需時(shí)間短。 操作簡(jiǎn)便，不需特殊設(shè)備。 試劑貯存于室溫。 缺點(diǎn) 特異性和敏感性與ELISA有差距。 費(fèi)用較高,國(guó)家對(duì)HIV抗體檢測(cè)試劑的要求,篩查試劑 篩查試劑必須是HIV1+2混合型的、經(jīng)國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局注冊(cè)批準(zhǔn)、批批檢驗(yàn)合格、臨床評(píng)估質(zhì)量?jī)?yōu)良、在有效期內(nèi)的試劑,方法及生物學(xué)原理,本試劑是利用免疫層析法原理定性測(cè)定血樣中HIV-1/2抗體 加樣本入反應(yīng)條,樣品遷移通過(guò)結(jié)合物包被處,與硒膠抗體-抗原結(jié)合物混合重組結(jié)合,此混合物繼續(xù)遷移通過(guò)固相包被的合成肽和重組抗原的病人結(jié)果窗口 如果樣品中含有HIV-1

7、/2抗體,硒膠體-抗原結(jié)合,并在病人窗口被固相包被的合成肽和重組抗原所捕捉固定,形成一條紅線,方法及生物學(xué)原理,如果樣品中不含有HIV-1/2抗體,硒膠體-抗原結(jié)合物將會(huì)通過(guò)病人窗口而不與固相被包被的合成肽和重組抗原結(jié)合,則沒(méi)有一條紅線形成 為了確保結(jié)果有效,在反應(yīng)條中含有質(zhì)控條帶,HIV抗體檢測(cè)程序及流程圖,1、快速檢測(cè) 陰性反應(yīng)出具陰性報(bào)告，陽(yáng)性反應(yīng)采集樣品篩查實(shí)驗(yàn)室復(fù)檢 2、篩查試驗(yàn) 標(biāo)本驗(yàn)收合格后，用篩查試劑進(jìn)行檢測(cè)，如呈陰性反應(yīng)，報(bào)告為HIV抗體陰性；對(duì)呈陽(yáng)性反應(yīng)的標(biāo)本須進(jìn)行重復(fù)檢測(cè)。 2、重復(fù)檢測(cè) 用原有試劑和另外一種不同原理或不同廠家的試劑重復(fù)檢測(cè)，如兩種試劑復(fù)測(cè)均呈陰性反應(yīng)，則

8、報(bào)告HIV抗體陰性；如均呈陽(yáng)性反應(yīng)，或一陰一陽(yáng)，需送艾滋病確證實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行確證,快速試驗(yàn)的流程圖,樣 品,ELISA復(fù)檢,快速檢測(cè),陽(yáng)性反應(yīng),重復(fù)檢測(cè),均陽(yáng)性反應(yīng),一陰一陽(yáng),送確證實(shí)驗(yàn)室 進(jìn)行確證,均陰性反應(yīng),陰性報(bào)告,陰性反應(yīng),原有試劑加 另一種篩查試劑,陽(yáng)性反應(yīng),HIV抗體篩查結(jié)果的報(bào)告和處理,快速檢測(cè)呈陰性反應(yīng)，出具HIV抗體陰性報(bào)告（提示應(yīng)考慮窗品期的可能） 快速檢測(cè)呈陽(yáng)性反應(yīng)，可出具“HIV待復(fù)查”報(bào)告，填寫(xiě)HIV陽(yáng)性標(biāo)本送檢單，送篩查實(shí)驗(yàn)室復(fù)核 篩查試驗(yàn)呈陰性反應(yīng)，出具HIV抗體陰性報(bào)告（提示應(yīng)考慮窗口期的可能）。 篩查試驗(yàn)仍呈陽(yáng)性反應(yīng)，應(yīng)盡快用兩種試劑進(jìn)行復(fù)測(cè)，如結(jié)果均陽(yáng)性或一陰一

9、陽(yáng),同時(shí)盡快進(jìn)行以下處理： 填寫(xiě)HIV陽(yáng)性標(biāo)本送檢單，并隨標(biāo)本送上級(jí)確證驗(yàn)室確證。 可出具“HIV待復(fù)查”報(bào)告，不能出陽(yáng)性報(bào)告。 陽(yáng)性標(biāo)本必須送市確證，篩查實(shí)驗(yàn)室不能隨意處理。 做好檢測(cè)后的咨詢,安全注意事項(xiàng),對(duì)于那些含有感染源和懷疑含有感染源物質(zhì)應(yīng)有合適的生物安全保證程序，下列為有關(guān)注意事項(xiàng)，但不僅限于此： 帶手套處理樣品和試劑 不要用嘴吸樣 不可在處理這些物品時(shí)吸煙、進(jìn)食、喝飲料、美容和處理無(wú)形眼鏡 用消毒劑對(duì)濺出的樣品進(jìn)行消毒，比如用0.5%次氯酸鈉(廢棄物或溢出物)和其它消毒劑效果更好，污染桌面消毒可用0.2%次氯酸鈉、2%戊二醛、75%灑精,安全注意事項(xiàng),按照有關(guān)條例來(lái)消毒和處理所有

10、標(biāo)本、試劑和潛在污染物 試劑和消毒劑在正當(dāng)處理和保存的情況下直至有效期內(nèi)保持穩(wěn)定，不能使用過(guò)期的試劑盒 快速診斷試劑盒及緩沖液在攝氏2-30度以下保存直到有效期,樣品的采集和保存,樣品采集 采集靜脈血清、血漿和全血 靜脈采集人的血清、血漿和全血必須在無(wú)菌條件下，并避免樣品溶血 末梢全血的采集 在采集末梢人血樣品前，在清潔處備有干棉球、吸血管 1、對(duì)成人或一歲以下的兒童可選擇中指、食指或無(wú)名指，用濕熱毛巾或熱水來(lái)溫暖手增加血液循環(huán),樣品的采集和保存,2、用酒精消毒采血手指 3、手掌向上，將穿刺針置于指尖，緊靠手指并刺破皮膚，將穿刺針頭丟棄于尖銳危險(xiǎn)品容器里 4、用無(wú)菌棉花擦棄第一滴血 5、將手指

11、的高度低于肘部，間歇性的擠壓穿刺手指部位數(shù)次，用吸血管吸取血樣約50ul,樣品的采集和保存,樣品保存 1、用一次性注射器或真空采血管抽取一定量的靜脈血（3-5ml)，室溫下自然放置1-2小時(shí)，待血液凝固后、血塊收縮后再用3000r/min離心15min，吸出血清備用 2、需要抗凝的采用有抗凝試劑的真空管，采集方法同上 3、樣本采集后，血清或血漿7天內(nèi)檢測(cè)，放置在攝氏2-8度保存，超過(guò)7天須低于零下20度冷凍保存,艾滋病快速檢測(cè)操作步驟,10條一組的樣品反應(yīng)條帶可折斷分開(kāi)單獨(dú)使用,注意:分使用時(shí)必須從右邊開(kāi)始,左邊有試劑的批號(hào)和有效期 去掉每個(gè)測(cè)試條上的外包裝 對(duì)血清或血漿樣品 用加樣器加50u

12、l樣品于樣品反應(yīng)塹中(箭頭所指處) 15-25分鐘肉眼讀取結(jié)果(最長(zhǎng)60分鐘,艾滋病快速檢測(cè)操作步驟,對(duì)全血樣品(靜脈血) 用加樣器加50ul樣品于樣品反應(yīng)塹中(箭頭所指處) 直至血液吸入樣本塹后加入1滴緩沖液 至少等15-25分鐘讀取結(jié)果(最長(zhǎng)60分鐘) 對(duì)全血樣品(手指血) 用加樣器加50ul樣品于樣品反應(yīng)塹中(箭頭所指處) 直至血液吸入樣本塹后加入1滴緩沖液 至少等15-25分鐘讀取結(jié)果(最長(zhǎng)60分鐘,艾滋病快速檢測(cè)質(zhì)量控制,為確保結(jié)果有效,測(cè)試條帶上有“Control”的控制線，當(dāng)分析結(jié)束后質(zhì)控線沒(méi)有變紅，測(cè)試條帶無(wú)效，必須重測(cè),艾滋病快速檢測(cè)結(jié)果判斷,陽(yáng)性（二條紅線） 病人條帶（標(biāo)有

13、“Patient”）和質(zhì)控線(標(biāo)有“Control”)都呈紅色認(rèn)為是陽(yáng)性，如果有任何可見(jiàn)的紅色在病人條帶上，也解釋為陽(yáng)性 陰性（一條紅線） 病人條帶（標(biāo)有“Patient”）無(wú)色而質(zhì)控線(標(biāo)有“Control”)呈紅色認(rèn)為是陰性,艾滋病快速檢測(cè)結(jié)果判斷,無(wú)效（沒(méi)有紅線） 病人條帶和質(zhì)控線都無(wú)色被認(rèn)為結(jié)果無(wú)效，（即使病人條帶有紅線），需要重試，如果問(wèn)題持續(xù)，請(qǐng)與試劑供應(yīng)商或支持中心聯(lián)系 注意 即使病人條帶線色深過(guò)質(zhì)控線，結(jié)果為陽(yáng)性 如果無(wú)效結(jié)果重復(fù)出現(xiàn)，停止使用,方法的局限性,雅培HIV-1/2的設(shè)計(jì)僅限用于病人血清、血漿和全血檢測(cè)HIV-1和HIV-2抗體，其它體液混合樣品可能得不到準(zhǔn)確結(jié)果 病人條色深淺程度與樣品中的抗體效價(jià)不一定有關(guān) 陰性結(jié)果不排出受HIV病毒感染的可能，造假陰性的情況歸