食品微生物檢驗(yàn)中菌落總數(shù)測(cè)定的注意事項(xiàng)

1、.食品微生物檢驗(yàn)中菌落總數(shù)測(cè)定的注意事項(xiàng)1菌落總數(shù)及測(cè)定菌落是指細(xì)菌在固體培養(yǎng)基上生長(zhǎng)繁殖而形成的能被肉眼識(shí)別的生長(zhǎng)物,它是由數(shù)以萬(wàn)計(jì)相同的細(xì)菌集合而成。當(dāng)樣品被稀釋到一定程度,與培養(yǎng)基混合,在一定培養(yǎng)條件下,每個(gè)能夠生長(zhǎng)繁殖的細(xì)菌細(xì)胞都可以在平板上形成一個(gè)可見(jiàn)的菌落。菌落總數(shù)就是指食品檢樣經(jīng)過(guò)處理,在一定條件下(如需氧性質(zhì)、培養(yǎng)基成分、pH、培養(yǎng)溫度和時(shí)間等) 1 mL ( g)檢樣中所含菌落的總數(shù)。菌落總數(shù)測(cè)定是用來(lái)判定食品被細(xì)菌污染的程度、食品的新鮮度及衛(wèi)生質(zhì)量,它反映食品在生產(chǎn)、加工、銷(xiāo)售過(guò)程中是否符合衛(wèi)生要求,以便對(duì)被檢樣品做出適當(dāng)?shù)男l(wèi)生學(xué)評(píng)價(jià)。也可以應(yīng)用這一方法觀(guān)察食品中細(xì)菌的性質(zhì)

2、以及細(xì)菌在食品中繁殖的動(dòng)態(tài),菌落總數(shù)的多少在一定程度上標(biāo)志著食品衛(wèi)生質(zhì)量的優(yōu)劣 1 。2菌落總數(shù)測(cè)定中的注意事項(xiàng)2. 1所用器皿及稀釋液2. 1. 1檢驗(yàn)中所用玻璃器皿,如培養(yǎng)皿,吸管、試管、移液器的吸頭等必須是完全滅菌的,并在滅菌前徹底洗滌干凈,不得殘留有抑菌物質(zhì)。2. 1. 2用作樣品稀釋的液體,每批都要有空白對(duì)照。如果在瓊脂對(duì)照平板上出現(xiàn)幾個(gè)菌落時(shí),要查找原因,如可通過(guò)追加對(duì)照平板,以判定是空白稀釋液,用于傾注平皿的培養(yǎng)基,還是平皿、吸管或空氣可能存在的污染。2. 1. 3檢樣的稀釋液一般用滅菌鹽水,如果對(duì)含鹽量較高的食品(如醬品等)進(jìn)行稀釋,則宜用蒸餾水。做醋時(shí)用20% 30%碳酸鈉調(diào)

3、pH 至中性。2. 2檢樣的稀釋2. 2. 1檢樣稀釋時(shí),應(yīng)以無(wú)菌操作稱(chēng)取(或量取)有代表性的樣品25 g (或mL ) , 剪碎放于含有225 mL滅菌稀釋液的玻璃瓶?jī)?nèi)(瓶?jī)?nèi)預(yù)置適當(dāng)數(shù)量的玻璃珠) ,經(jīng)充分振搖作成1: 10 的稀釋液。如系肉、魚(yú)等固體樣品,先用自來(lái)水把表面沖洗干凈,取可食部分(即魚(yú)肉)剪細(xì)加入稀釋液后,置均質(zhì)器中以8 000 10 000 r /min 速度處理1 min,使做成均勻的1: 10稀釋液。2. 2. 2根據(jù)食品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)要求或?qū)?biāo)本污染情況的估計(jì),將上述1: 10的檢樣稀釋液再做成幾個(gè)適當(dāng)?shù)?0 倍遞增稀釋液,每遞增稀釋一次,必須另?yè)Q1 支1 mL 滅菌吸管或吸

4、頭,這樣所得檢樣的稀釋倍數(shù)方為準(zhǔn)確。2. 2. 3從吸管筒內(nèi)取出滅菌吸管時(shí),不要將吸管尖端觸及其他仍留在容器內(nèi)的吸管的外露部分;而且吸管在進(jìn)出裝有稀釋液的玻璃瓶和試管時(shí),也不要觸及瓶口及試管口的外側(cè)部分;因?yàn)檫@些部分都可能接觸過(guò)手或其他沾污物。當(dāng)用吸管將檢樣稀釋液加至另一裝有9 mL稀釋液的試管內(nèi)時(shí),應(yīng)小心沿管壁加入,不要觸及管內(nèi)稀釋液,以防吸管尖端外側(cè)部分黏附的檢液也混入其中。2. 2. 4對(duì)吸管體積的要求是取1 mL的樣品勻液使用的吸管的最小刻度應(yīng)該不低于0. 1 mL。2. 3平板接種與培養(yǎng)2. 3. 1在作10倍遞增稀釋的同時(shí),即以吸取該稀釋度的吸管移lmL稀釋液加入皿內(nèi)(從皿側(cè)加入,

5、不要揭去皿蓋) ,最后將吸管直立使液體流畢,并在皿底干燥處再擦一下吸管尖將余液排出,而不要吹出。每個(gè)稀釋度應(yīng)作2 個(gè)平皿。2. 3. 2用于傾注平皿的營(yíng)養(yǎng)瓊脂應(yīng)預(yù)先加熱使其融化,并保溫于( 45 1) 恒溫水浴中待用。溫度太高影響細(xì)菌生長(zhǎng),太低瓊脂易凝固不能與檢液充分混勻, 傾注平皿時(shí), 每皿內(nèi)傾入約15 mL,平板過(guò)厚可影響觀(guān)察,太薄又易干裂,最后將瓊脂底部帶有沉淀的部分棄去。為了防止細(xì)菌增殖及產(chǎn)生片狀菌落,在檢液加入平皿后,應(yīng)盡快傾注培養(yǎng)基并旋轉(zhuǎn)混勻,可正反兩個(gè)方向旋轉(zhuǎn),檢樣從開(kāi)始稀釋到傾注最后一個(gè)平皿所用時(shí)間不宜超過(guò)20 min 2 。瓊脂凝固后,在數(shù)分鐘內(nèi)即應(yīng)將平皿翻轉(zhuǎn)予以培養(yǎng),這樣可

6、避免菌落蔓延生長(zhǎng)。2. 3. 3為了控制污染,需做空白對(duì)照實(shí)驗(yàn),在取樣進(jìn)行檢驗(yàn)的同時(shí),于工作臺(tái)上打開(kāi)一塊瓊脂平板,其暴露的時(shí)間,應(yīng)與該檢樣從制備、稀釋到加入平皿時(shí)所暴露的最長(zhǎng)的時(shí)間相當(dāng),然后與加有檢樣的平皿一并置于溫箱內(nèi)培養(yǎng),以了解檢樣在檢驗(yàn)操作過(guò)程中有無(wú)受到來(lái)自空氣的污染。2. 3. 4培養(yǎng)溫度,應(yīng)根據(jù)食品種類(lèi)而定。一般用36 培養(yǎng),培養(yǎng)溫度和時(shí)間有不同的區(qū)分,是因?yàn)樵谥贫ㄟ@些食品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)中關(guān)于菌落總數(shù)的規(guī)定時(shí),分別采用了不同的溫度和培養(yǎng)時(shí)間所取得的數(shù)據(jù),同時(shí)水產(chǎn)品因來(lái)自淡水或海水,水的溫度較低,因而制定水產(chǎn)品細(xì)菌方面的衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)時(shí),系用30 作為培養(yǎng)的溫度 3 。2. 3. 5加入平皿內(nèi)的檢

7、樣稀釋液(特別是10- 1的稀釋液) ,有時(shí)帶有食品顆粒,在這種情況下,為了避免與細(xì)菌菌落發(fā)生混淆,可作一檢樣稀釋液與瓊脂混和的平皿,不經(jīng)培養(yǎng),而于4 環(huán)境中放置,以便在計(jì)數(shù)檢樣菌落時(shí)用作對(duì)照。2. 4菌落記數(shù)與報(bào)告2. 4. 1到達(dá)規(guī)定培養(yǎng)時(shí)間,應(yīng)立即計(jì)數(shù)。如果不能立即計(jì)數(shù),應(yīng)將平板放置于04 ,但不得超過(guò)24 h。從溫箱內(nèi)取出平皿進(jìn)行菌落計(jì)數(shù)時(shí),應(yīng)先分別觀(guān)察同一稀釋度的兩個(gè)平皿和不同稀釋度的幾個(gè)平皿內(nèi)平板上菌落生長(zhǎng)情況。平行試驗(yàn)的2 個(gè)平板與菌落數(shù)應(yīng)該接近,不同稀釋度的幾個(gè)平板上菌落數(shù)則應(yīng)與檢樣稀釋倍數(shù)成反比,即檢樣稀釋倍數(shù)越大,菌落數(shù)越低,稀釋倍數(shù)越小,菌落數(shù)越高。如果稀釋度大的平板上菌

8、落數(shù)反比稀釋度小的平板上菌落數(shù)高,則系檢驗(yàn)工作中發(fā)生的差錯(cuò),屬實(shí)驗(yàn)室事故 4 。此外,也可能因抑菌劑混入樣品中所致,均不可用作檢樣計(jì)數(shù)報(bào)告的依據(jù)。2. 4. 2如果平板上出現(xiàn)鏈狀菌落,菌落之間沒(méi)有明顯的界限,這是在瓊脂與檢樣混合時(shí),一個(gè)細(xì)菌塊被分散所造成。一條鏈作為一個(gè)菌落計(jì)不要把鏈上生長(zhǎng)的各個(gè)菌落分開(kāi)來(lái)數(shù)。2. 4. 3檢樣如系微生物類(lèi)制劑(如酸牛乳、酵母制酸性飲料) ,則平板計(jì)數(shù)中應(yīng)相應(yīng)地將有關(guān)微生物(乳酸桿菌、酵母菌)排除,不可并入檢樣的菌落總數(shù)內(nèi)作報(bào)告。一般在校正檢樣的pH 7. 6后,再進(jìn)行稀釋和培養(yǎng),此類(lèi)嗜酸性微生物往往即不易生長(zhǎng)。2. 4. 4當(dāng)檢樣的菌落數(shù)為1100 時(shí),按實(shí)有數(shù)報(bào)告;大于100時(shí),只記錄左面頭兩位數(shù)字(用兩位有效數(shù)字作