體細(xì)胞免疫治療

1、腫瘤的體細(xì)胞免疫治療,生物治療概念 應(yīng)用生物大分子（細(xì)胞、核酸、蛋白質(zhì)或多肽）或調(diào)節(jié)生物反應(yīng)的小分子化合物來(lái)治療腫瘤。生物治療的基本特點(diǎn)是腫瘤特異性，其機(jī)理是干擾腫瘤的生長(zhǎng)、分化、凋亡、侵襲、轉(zhuǎn)移和血管生成，調(diào)節(jié)人體的抗腫瘤免疫反應(yīng)等,細(xì)胞因子治療：如干擾素、白細(xì)胞介素、腫瘤壞死因子等； 非細(xì)胞毒性小分子化合物治療：如維甲酸、吉非替尼、索拉非尼等； 免疫效應(yīng)細(xì)胞治療：如CTL細(xì)胞治療、CIK細(xì)胞治療、NK細(xì)胞治療等； 單克隆抗體治療：如曲妥珠單抗、利妥昔單抗、西妥昔單抗、貝伐單抗/等； 免疫刺激劑治療：如腫瘤細(xì)胞疫苗、樹(shù)突狀細(xì)胞疫苗、蛋白質(zhì)疫苗、卡介苗等； 基因治療,常用生物治療手段,體細(xì)胞免

2、疫治療,指向腫瘤患者體內(nèi)輸入具有抗腫瘤活性的免疫細(xì)胞，直接殺傷腫瘤或激發(fā)機(jī)體抗腫瘤免疫效應(yīng)，從而達(dá)到治療腫瘤的目的,免疫效應(yīng)細(xì)胞免疫治療，如腫瘤浸潤(rùn)淋巴細(xì)胞（TIL）、細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞（CTL）、淋巴因子激活的殺傷細(xì)胞（LAK）、細(xì)胞因子誘導(dǎo)的殺傷細(xì)胞（CIK）、自然殺傷細(xì)胞（NK）等 樹(shù)突狀細(xì)胞（DC）免疫治療 自體腫瘤抗原修飾的體細(xì)胞治療,體細(xì)胞免疫治療分類,體細(xì)胞免疫治療適應(yīng)癥,實(shí)體腫瘤：乳腺癌、肺癌、胃癌、肝癌、惡性淋巴瘤、食道癌、腎癌等,血液系統(tǒng)疾?。喊籽　⒍喟l(fā)性骨髓瘤等,自體干細(xì)胞移植或放化療后微小病灶殘留患者,病毒性肝炎,體細(xì)胞免疫治療常作為根治性治療結(jié)束后的鞏固、維持治療；

3、作為腫瘤綜合治療的組成部分，如在化療間隙期或在腫瘤局部放療過(guò)程中同時(shí)聯(lián)合體細(xì)胞免疫治療；亦作可作為晚期腫瘤患者綜合治療的一部分,適應(yīng)癥,患者預(yù)期生存大于6 個(gè)月 重要生命器官功能正常 無(wú)嚴(yán)重病毒、細(xì)菌感染 非妊娠及哺乳期 無(wú)生物制品過(guò)敏史,1. 嚴(yán)重的自身免疫性疾病患者 2. 器官移植者 3. 細(xì)胞因子過(guò)敏 4. T細(xì)胞淋巴瘤,禁忌癥,不良反應(yīng),常見(jiàn)的不良不應(yīng)為輕度發(fā)熱，多在細(xì)胞輸注后46 h內(nèi)出現(xiàn)，體溫多在37.538.5之間，發(fā)熱2 h后多數(shù)自動(dòng)消退，少數(shù)可出現(xiàn)寒戰(zhàn)、高熱，一般經(jīng)過(guò)物理降溫或在細(xì)胞輸注前常規(guī)使吲哚美辛等非甾體類抗炎藥可以緩解，罕見(jiàn)的還有上呼吸道感染樣癥狀，一般可自行緩解，無(wú)

4、需特殊處理,我國(guó)體細(xì)胞免疫治療相關(guān)法規(guī),醫(yī)療技術(shù)臨床應(yīng)用管理辦法 （2009年3月16日） 首批允許臨床應(yīng)用的第三類醫(yī)療技術(shù)目錄（2009年6月11日） 自體免疫細(xì)胞（T細(xì)胞、NK細(xì)胞）治療技術(shù)管理規(guī)范（征求意見(jiàn)稿）（2009年6月11日,腫瘤體細(xì)胞免疫治療的臨床應(yīng)用,大量研究表明，腫瘤患者的外周血中存在癌細(xì)胞，是引發(fā)腫瘤復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移、導(dǎo)致患者死亡的重要原因之一。有效清除血循環(huán)中的癌細(xì)胞,對(duì)預(yù)防腫瘤復(fù)發(fā)、改善腫瘤晚期患者的生存質(zhì)量具有重要的作用,樹(shù)突狀細(xì)胞（DC）源自骨髓中的前體細(xì)胞，是已知機(jī)體內(nèi)抗原呈遞能力最強(qiáng)的細(xì)胞，它能在機(jī)體內(nèi)外捕獲抗原后，將信息傳遞給T、B淋巴細(xì)胞，從而引發(fā)一系列的特異性免

5、疫應(yīng)答反應(yīng)。但該種細(xì)胞在機(jī)體內(nèi)含量極低，占正常人外周血白細(xì)胞的1左右。 近年來(lái)，體外培養(yǎng)DC獲得成功，為其功能及分化狀態(tài)的深入研究和在腫瘤生物治療領(lǐng)域中的應(yīng)用創(chuàng)造了條件。因具有長(zhǎng)長(zhǎng)的樹(shù)突狀突起和星狀多形性而得名,1. 樹(shù)突狀細(xì)胞,Dendritic Cells,Immature Dendritic Cell (Periphery,Mature Dendritic Cell (Lymphoid,人成熟DC的掃描電鏡圖,DC腫瘤疫苗的制備,BMDC,GM-CSF, IL-4, TNF,成熟的DC,培養(yǎng)68 days,TNF, IL-4 GM-CSF,PBDC,加腫瘤抗原,人成熟DC表型的流式細(xì)胞檢

6、測(cè)（可見(jiàn)CD 80, CD 83，CD86高表達(dá),DC腫瘤疫苗制備和臨床應(yīng)用流程,如何獲得高純度的腫瘤抗原,Tumor cell lysates,國(guó)家發(fā)明專利-人腫瘤細(xì)胞的分離純化方法,從術(shù)后腎癌組織中分離純化腎癌細(xì)胞,未純化的人腎癌細(xì)胞,純化后的腎癌細(xì)胞,從術(shù)后卵巢癌組織中分離純化卵巢癌細(xì)胞,未純化的人卵巢癌細(xì)胞,純化的人卵巢癌細(xì)胞,從術(shù)后乳腺癌組織中分離純化乳腺癌細(xì)胞,未純化的人乳腺癌細(xì)胞,純化的人乳腺癌細(xì)胞,從術(shù)后結(jié)腸癌組織中分離純化結(jié)腸癌細(xì)胞,未純化的人結(jié)腸癌細(xì)胞,純化的人結(jié)腸癌細(xì)胞,樹(shù)突狀細(xì)胞疫苗在實(shí)體瘤治療中的策略,抽病人50ml-60ml外周血,分離單核細(xì)胞，體外誘導(dǎo)DC細(xì)胞,D

7、C細(xì)胞負(fù)載自體腫瘤抗原，通過(guò)靜脈回輸給病人或經(jīng)皮下注射,經(jīng)腫瘤抗原負(fù)載DC細(xì)胞能刺激自體T細(xì)胞,產(chǎn)生強(qiáng)烈的抗腫瘤免疫應(yīng)答,2. CIK細(xì)胞,CIK細(xì)胞” 是將人的外周血單個(gè)核細(xì)胞在體外用多種細(xì)胞因子（如抗CD3McAb, IL-2, IFN-, IL-1等）共同培養(yǎng)一段時(shí)間后獲得的一群異質(zhì)細(xì)胞，由于該種細(xì)胞同時(shí)表達(dá)CD3和CD56兩種膜蛋白分子，故又被稱為NK細(xì)胞樣T淋巴細(xì)胞，兼具有T淋巴細(xì)胞強(qiáng)大的抗腫瘤活性和NK細(xì)胞的非MHC限制性殺瘤優(yōu)點(diǎn)。目前，CIK細(xì)胞被認(rèn)為是新一代抗腫瘤過(guò)繼免疫治療的方案之一,CIK（培養(yǎng)第2天,CIK（培養(yǎng)第9天,CIK（培養(yǎng)第12天,自體CIK細(xì)胞的治療策略,抽腫

8、瘤患者外周血(50ml,體外誘導(dǎo)CIK細(xì)胞(1x1010以上,每星期回輸一次CIK細(xì)胞給患者（至少4次,回輸?shù)腃IK細(xì)胞能提高機(jī)體免疫功能,殺傷殘留的腫瘤細(xì)胞，抑制腫瘤的復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移,3. 自然殺傷細(xì)胞（NK cells,NK細(xì)胞來(lái)源于造血細(xì)胞，其發(fā)育成熟依賴骨髓及胸腺微環(huán)境。具有抗細(xì)菌和病毒感染的作用，近來(lái)發(fā)現(xiàn)它們無(wú)需抗原預(yù)先作用，就可以直接殺傷腫瘤細(xì)胞。因此，在機(jī)體免疫監(jiān)視和早期抗感染免疫過(guò)程中起重要作用,NK cells制備流程,PBMNC （30ml 外周血,2個(gè)2L的培養(yǎng)袋,誘導(dǎo)NK培養(yǎng)試劑 IL-2,NK細(xì)胞數(shù)量可達(dá) 26109,培養(yǎng)12-14天,自體NK細(xì)胞的治療策略,抽腫瘤患者外

9、周血(50ml,體外誘導(dǎo)NK細(xì)胞,每星期回輸一次NK細(xì)胞給患者（至少4次,回輸?shù)腘K細(xì)胞能提高機(jī)體免疫功能,殺傷殘留的腫瘤細(xì)胞，抑制腫瘤的復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移,4. 自體DC細(xì)胞激活的CIK細(xì)胞,通過(guò)體外誘導(dǎo)有功能的自體DC細(xì)胞，將這種有功能的自體DC細(xì)胞激活自體CIK細(xì)胞，產(chǎn)生一種更強(qiáng)的抗腫瘤的效應(yīng)細(xì)胞（DC-CIK細(xì)胞），從而發(fā)揮其抗腫瘤作用。實(shí)驗(yàn)表明，DC-CIK細(xì)胞能促進(jìn)IL-12和INF-的分泌，提高細(xì)胞毒性，增強(qiáng)對(duì)腫瘤細(xì)胞的殺傷作用,自體DC-CIK 細(xì)胞的制備,CIK細(xì)胞,成熟DC細(xì)胞,DC細(xì)胞刺激的CIK細(xì)胞（ 11.51010,PBMNC 0.5-3107（50ml,共培養(yǎng),TNF,

10、IL-4 GM-CSF,IFN Il-2 CD3 mAb IL 1,自體DC-CIK在惡性腫瘤治療中的策略,抽腫瘤患者外周血（5060ml,體外誘導(dǎo)DC-CIK細(xì)胞 (1x1010以上,回輸DC-CIK細(xì)胞給患者(至少4次,殺傷殘留的腫瘤細(xì)胞，抑制腫瘤的復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移,5. 自體DC細(xì)胞激活的T淋巴細(xì)胞（DC-T,T淋巴細(xì)胞,成熟DC細(xì)胞,DC細(xì)胞刺激的自體T淋巴細(xì)胞（DC-T,腫瘤抗原,PBMNC （80-100ml,共培養(yǎng),TNF, IL-4 GM-CSF,IL-2,自體DC-T淋巴細(xì)胞在惡性腫瘤治療中的策略,腫瘤患者外周血（80-100ml,體外誘導(dǎo)DC-T淋巴細(xì)胞,回輸DC-T淋巴細(xì)胞給術(shù)

11、后的患者,特異性殺傷腫瘤細(xì)胞,抑制腫瘤的復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移,體細(xì)胞免疫治療在臨床腫瘤治療中的作用,1、體細(xì)胞免疫治療可以作為惡性腫瘤綜合治療的一部分,常 規(guī)治療后的鞏固治療； 2、一些免疫原性較強(qiáng)的惡性腫瘤（如腎癌，惡性黑色素瘤， 惡性神經(jīng)膠質(zhì)瘤）或?qū)熀头暖煵幻舾心[瘤（原發(fā)性肝 癌）在手術(shù)或介入微創(chuàng)治療后可直接接受細(xì)胞免疫治療。 3、通常在進(jìn)行體細(xì)胞免疫治療前，要降低腫瘤負(fù)荷。 4、體細(xì)胞免疫治療聯(lián)合抗腫瘤的細(xì)胞因子，抗腫瘤抗體，生 物靶向藥物能取得更好的療效； 因此，腫瘤患者在綜合治療原則下輔以個(gè)體化的細(xì)胞免疫治療，能取得更好的預(yù)后,39,臨床上如何來(lái)選擇細(xì)胞治療方案,CIKDC-CIK細(xì)胞制備

12、容易，獲得的細(xì)胞數(shù)量多； NK細(xì)胞制備成本高，獲得的細(xì)胞數(shù)量較少； DC-T需要有手術(shù)標(biāo)本獲得自體腫瘤抗原 綜合治療后病情較穩(wěn)定的患者，可以選擇CIK、DC-CIK交替使用，與內(nèi)分泌有關(guān)的腫瘤如乳腺癌、前列腺癌等，可選擇NK細(xì)胞治療； 有手術(shù)標(biāo)本者可以選擇DC-CIK、DC-T或DC； 配合化、放療進(jìn)行CIK、DC-CIK治療，在化（放）療前抽血，間歇期回輸，下一療程化（放）療開(kāi)始前再抽血； 晚期廣泛轉(zhuǎn)移者不用細(xì)胞治療，除非患者堅(jiān)持,40,免疫效應(yīng)細(xì)胞培養(yǎng)注意事項(xiàng) （1）采血時(shí)段： 以血常規(guī)檢測(cè)結(jié)果確定 白細(xì)胞總數(shù)：達(dá)到3109/L以上 淋巴細(xì)胞總數(shù)：達(dá)到0.6109/L以上 凝血功能：凝血酶

13、原活動(dòng)度(PTA) 50%，血小板（PLT） 50109/L 沒(méi)有明顯的貧血：血紅蛋白80g/L 滿足已上基本條件采血可保證患者的安全和培養(yǎng)過(guò)程中細(xì)胞擴(kuò)增的數(shù)量,41,2）采血量,25ml：培養(yǎng)CIK、DC-CIK細(xì)胞平均值為3.2-6.12109 50ml：培養(yǎng)CIK、DC-CIK細(xì)胞平均值為0.81-1.321010 75ml：培養(yǎng)CIK、DC-CIK細(xì)胞平均值為1.21-1.921010,可以看出，隨著采血量的增加，培養(yǎng)細(xì)胞的數(shù)目也增加。當(dāng)抽血量為50ml時(shí)，培養(yǎng)的CIK、DC-CIK的數(shù)量可達(dá)到11010以上。因此，綜合考慮細(xì)胞的數(shù)量以及抽血對(duì)患者的影響，建議以50ml的抽血量為適宜,

14、42,3）培養(yǎng)方法 CIK細(xì)胞培養(yǎng)：參考（SchmidtWolf, et al. J. Exp. Med., 1991, 174: 139-149 ）的方法進(jìn)行培養(yǎng) DC-CIK細(xì)胞培養(yǎng)：參考（Marten A., et al. haematologica, 2001; 86:1029-1037）的方法進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng) （4）細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中培養(yǎng)液的更換次數(shù) 根據(jù)細(xì)胞密度保持在2106/ml，如果培養(yǎng)到11010總數(shù)，總共至少需要3L無(wú)血清培養(yǎng)液。實(shí)際情況根據(jù)細(xì)胞的擴(kuò)增速度以及擴(kuò)增總數(shù)來(lái)確定更換培養(yǎng)液的量，一般情況下每2天就應(yīng)補(bǔ)充一次培養(yǎng)液，但每天要觀察一次細(xì)胞生長(zhǎng)的情況。建議培養(yǎng)細(xì)胞所用的培養(yǎng)液在

15、3L以上,43,5）免疫效應(yīng)細(xì)胞在體外的培養(yǎng)天數(shù),CIK細(xì)胞數(shù)量變化（20名腫瘤患者,DC-CIK細(xì)胞數(shù)量變化（20名腫瘤患者,從上圖可以看出，隨著培養(yǎng)時(shí)間的增加，CIK、DC-CIK的數(shù)量不斷增加，14天增殖速率達(dá)到高峰。但是，超過(guò)14天，從鏡下觀察發(fā)現(xiàn)細(xì)胞開(kāi)始凋亡。超過(guò)21天后，從鏡下觀察可以發(fā)現(xiàn)已經(jīng)有大量細(xì)胞凋亡。因此，CIK、DC-CIK培養(yǎng)時(shí)間以14-21天為宜,44,免疫效應(yīng)細(xì)胞在不同培養(yǎng)天數(shù)CD3表型細(xì)胞數(shù)量變化,CIK細(xì)胞CD3數(shù)量變化（20名腫瘤患者,從上圖可以看出，CIK、DC-CIK培養(yǎng)到第7天，CD3細(xì)胞的數(shù)量就達(dá)到高峰。超過(guò)21天后，細(xì)胞數(shù)量開(kāi)始下降,DC-CIK細(xì)胞

16、CD3數(shù)量變化（20名腫瘤患者,45,CIK、DC-CIK細(xì)胞在不同培養(yǎng)天數(shù)CD3CD4表型細(xì)胞數(shù)量變化,CIK細(xì)胞CD3CD4數(shù)量變化（20名腫瘤患者,DC-CIK細(xì)胞CD3CD4數(shù)量變化（20名腫瘤患者,從上圖可以看出，CIK細(xì)胞培養(yǎng)到第7天，CD3CD4細(xì)胞數(shù)量達(dá)到高峰，隨后開(kāi)始下降。DC-CIK培養(yǎng)到第7天，CD3CD4細(xì)胞的數(shù)量達(dá)到高峰，14天后細(xì)胞數(shù)量開(kāi)始下降,46,CIK、DC-CIK細(xì)胞在不同培養(yǎng)天數(shù)CD3CD8表型細(xì)胞數(shù)量變化,CIK細(xì)胞CD3CD8數(shù)量變化（20名腫瘤患者,DC-CIK細(xì)胞CD3CD8數(shù)量變化（20名腫瘤患者,從上圖可以看出，CIK、DC-CIK培養(yǎng)到第14

17、天，CD3CD8細(xì)胞的數(shù)量達(dá)到高峰，21天后細(xì)胞數(shù)量開(kāi)始下降,47,CIK、DC-CIK細(xì)胞在不同培養(yǎng)天數(shù)CD56表型細(xì)胞數(shù)量變化,CIK細(xì)胞CD56數(shù)量變化（20名腫瘤患者,從上圖可以看出，CIK細(xì)胞培養(yǎng)到21天，CD56細(xì)胞數(shù)量達(dá)到高峰，隨后開(kāi)始下降。DC-CIK培養(yǎng)到第28天，CD56細(xì)胞的數(shù)量達(dá)到高峰,DC-CIK細(xì)胞CD56數(shù)量變化（20名腫瘤患者,48,CIK、DC-CIK細(xì)胞在不同培養(yǎng)天數(shù)CD3CD56表型細(xì)胞數(shù)量變化,CIK細(xì)胞CD3CD56數(shù)量變化（20名腫瘤患者,DC-CIK細(xì)胞CD3CD56數(shù)量變化（20名腫瘤患者,從上圖可以看出，CIK細(xì)胞培養(yǎng)到14-21天，CD3CD

18、56細(xì)胞數(shù)量達(dá)到高峰，隨后開(kāi)始下降。DC-CIK細(xì)胞培養(yǎng)到28天，CD3CD56細(xì)胞數(shù)量達(dá)到高峰,49,CIK、DC-CIK細(xì)胞培養(yǎng)到14-21天時(shí)，細(xì)胞增殖速率達(dá)到高峰； 從表型上，CIK細(xì)胞培養(yǎng)到14-21天，CD3CD8細(xì)胞比例達(dá)到70%，CD56達(dá)到19%，CD3CD56達(dá)到15%；DC-CIK培養(yǎng)到14-21天，CD3CD8細(xì)胞比例達(dá)到56%、CD56達(dá)到30%、CD3CD56比例達(dá)到13%，此時(shí)細(xì)胞組成比較合理； 對(duì)腫瘤細(xì)胞殺傷上，CIK、DC-CIK培養(yǎng)到14天，對(duì)肝癌細(xì)胞系HepG2、肺癌細(xì)胞系A(chǔ)549、腎癌細(xì)胞系A(chǔ)CHN殺傷活性最高，此后開(kāi)始下降。 綜合考慮CIK、DC-CI

19、K細(xì)胞增殖、表型及殺傷不同腫瘤靶細(xì)胞的活性等結(jié)果，建議在14-16天時(shí)收集細(xì)胞進(jìn)行回輸較為合理,CIK、DC-CIK細(xì)胞在不同培養(yǎng)天數(shù)其擴(kuò)增數(shù)量、細(xì)胞表型和殺傷活性的綜合分析,50,CIK細(xì)胞表型（CD3CD4、CD3CD8、CD3-CD56、CD3CD56、CD56,此圖顯示一般患者的外周血淋巴細(xì)胞經(jīng)過(guò)常規(guī)培養(yǎng)擴(kuò)增后CIK細(xì)胞的亞群組成,51,15.3,64.3,31.2,35.2,CD4,CD8,SS Lin,CD3,CD3,CD3,CD56,CD56,CIK細(xì)胞表型（CD3CD4、CD3CD8、CD3-CD56、CD3CD56、CD56,此圖顯示一般患者的外周血淋巴細(xì)胞經(jīng)過(guò)常規(guī)培養(yǎng)擴(kuò)增后

20、CIK細(xì)胞的亞群組成,52,CIK細(xì)胞表達(dá)細(xì)胞因子及細(xì)胞毒產(chǎn)物（IFN、TNF、Granzyme B、Perforin,此圖顯示一般患者的外周血淋巴細(xì)胞經(jīng)過(guò)常規(guī)培養(yǎng)擴(kuò)增后CIK細(xì)胞分泌細(xì)胞因子及細(xì)胞毒產(chǎn)物的情況,53,DC-CIK細(xì)胞表型（CD3CD4、CD3CD8、CD3-CD56、CD3CD56、CD56,此圖顯示一般患者的外周血淋巴細(xì)胞經(jīng)過(guò)常規(guī)培養(yǎng)擴(kuò)增后DC-CIK細(xì)胞的亞群組成,54,DC-CIK細(xì)胞表達(dá)細(xì)胞因子及細(xì)胞毒產(chǎn)物（IFN、TNF、Granzyme B、Perforin,此圖顯示一般患者的外周血淋巴細(xì)胞經(jīng)過(guò)常規(guī)培養(yǎng)擴(kuò)增后DC-CIK細(xì)胞分泌細(xì)胞因子及細(xì)胞毒產(chǎn)物的情況,55,D

21、C-CIK細(xì)胞殺傷功能受相關(guān)指標(biāo)的影響,與CIK細(xì)胞不同，由于DC細(xì)胞的加入，改變了CIK細(xì)胞群的組成，對(duì)于活化的CIK細(xì)胞殺傷腫瘤細(xì)胞的特性也有所改變。 從表型上看，CD56細(xì)胞對(duì)于肺癌細(xì)胞A549比較敏感，而CD3CD8細(xì)胞對(duì)于乳腺癌細(xì)胞MCF7比較敏感。 從細(xì)胞毒產(chǎn)物看，Perforin表達(dá)量對(duì)于兩種腫瘤細(xì)胞的殺傷都具有較大的影響。 因此，對(duì)于DC-CIK細(xì)胞，可以Perforin+細(xì)胞比例作為評(píng)價(jià)DC-CIK細(xì)胞的功能。由于Perforin主要由CD56細(xì)胞及CD3CD8細(xì)胞分泌，因此，對(duì)于DC-CIK細(xì)胞，以CD56和CD3CD8細(xì)胞比例作為評(píng)價(jià)DC-CIK細(xì)胞的功能可能比較便利可靠

22、,56,CIK、DC-CIK細(xì)胞功能評(píng)估環(huán)節(jié)研究小結(jié),在本環(huán)節(jié)中，我們研究了CIK細(xì)胞、DC-CIK細(xì)胞的9個(gè)參數(shù)變化對(duì)于肺癌細(xì)胞A549及乳腺癌細(xì)胞MCF7的殺傷影響。通過(guò)相關(guān)分析，我們認(rèn)為： 對(duì)于CIK細(xì)胞： 可以總CD56+細(xì)胞比例（包括CD3-CD56及CD3CD56）作為評(píng)價(jià)指標(biāo)。由于回輸細(xì)胞量在11010以上，我們認(rèn)為總56+細(xì)胞比例越高，抗腫瘤活性越強(qiáng)。由于腫瘤患者高度的個(gè)體差異，建議總CD56+細(xì)胞比例超過(guò)10%作為評(píng)價(jià)指標(biāo)。 對(duì)于DC-CIK細(xì)胞： 可以CD3CD8和CD56細(xì)胞比例作為評(píng)價(jià)指標(biāo)。由于回輸細(xì)胞量在11010以上，我們認(rèn)為CD56細(xì)胞比例越高，抗腫瘤活性越強(qiáng)。此

23、外，由于DC-CIK細(xì)胞中CD3CD8細(xì)胞也具有一定的抗腫瘤活性。因此，可以考慮CD3CD8細(xì)胞加上CD56細(xì)胞的比例超過(guò)80%作為評(píng)價(jià)指標(biāo),57,三）免疫效應(yīng)細(xì)胞臨床回輸環(huán)節(jié),細(xì)胞質(zhì)控： 細(xì)胞培養(yǎng)14天，回輸前兩天抽樣進(jìn)行細(xì)菌、真菌、支原體以及內(nèi)毒素檢測(cè)，符合無(wú)微生物污染及內(nèi)毒素超標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)。 回輸方案： CIK、DC-CIK細(xì)胞數(shù)量不低于1010 回輸最低次數(shù)為4次，即一個(gè)周期，時(shí)間間隔為1周 長(zhǎng)期方案：4+4+n。進(jìn)行上一周期的治療后，如果疾病穩(wěn)定，則繼續(xù)第二周期治療，時(shí)間間隔為2周一次，4次為一個(gè)周期。此周期完畢后，如果患者病情穩(wěn)定，可根據(jù)患者的需要，長(zhǎng)期進(jìn)行治療，時(shí)間間隔為1次/個(gè)月,5

24、8,生存質(zhì)量： 由于患者均為術(shù)后患者，并已完成放化療。因此患者在進(jìn)行CIK、DC-CIK細(xì)胞治療后均無(wú)不適反應(yīng)，生活質(zhì)量良好。 腫瘤復(fù)發(fā)及生存分析,免疫效應(yīng)細(xì)胞臨床治療評(píng)估環(huán)節(jié),59,單純CIK、DC-CIK細(xì)胞回輸1-2周后患者外周血白細(xì)胞總數(shù),從上圖可以看見(jiàn)，經(jīng)過(guò)CIK、DC-CIK細(xì)胞回輸后，患者外周血白細(xì)胞總數(shù)變化不顯著,CIK回輸后白細(xì)胞總數(shù)變化（23名腫瘤患者,DC-CIK回輸后白細(xì)胞總數(shù)變化（19名腫瘤患者,60,CIK、DC-CIK細(xì)胞治療短期效應(yīng)評(píng)估小結(jié)： 從上述研究結(jié)果看，腫瘤患者經(jīng)過(guò)4次以上的CIK、DC-CIK細(xì)胞治療后，部分機(jī)體免疫學(xué)指標(biāo)有所改善，同時(shí)對(duì)術(shù)后抑制腫瘤的

25、復(fù)發(fā)有一定作用。 由于觀察時(shí)間較短，目前在無(wú)疾病生存期DFS以及總生存期OS上還未能得到有效的評(píng)價(jià)。但目前入組隨訪的患者尚未發(fā)生腫瘤復(fù)發(fā)及疾病進(jìn)展。 從初步的結(jié)果看，腫瘤患者在術(shù)后進(jìn)行4+4+n的模式進(jìn)行CIK、DC-CIK細(xì)胞治療效果比較明確，即開(kāi)始4次強(qiáng)化治療為1次/周，如果疾病穩(wěn)定則進(jìn)行4次加強(qiáng)治療，此時(shí)為1次/2周，如果疾病繼續(xù)穩(wěn)定則進(jìn)行長(zhǎng)期鞏固治療，此時(shí)為1次/月。由于CIK、DC-CIK細(xì)胞治療需要累積效應(yīng)，因此建議如果患者在進(jìn)行前8次的強(qiáng)化治療后疾病穩(wěn)定，可繼續(xù)后期的長(zhǎng)期鞏固治療,61,2、CIK細(xì)胞治療前瞻性研究GC化療聯(lián)合CIK細(xì)胞回輸治療晚期轉(zhuǎn)移性鼻咽癌研究 病例入選標(biāo)準(zhǔn)：

26、 （1）所有患者初治時(shí)原發(fā)病灶均為未分化型非角化癌（WHO,1991標(biāo)準(zhǔn)）且影像學(xué)均無(wú)明確遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移征象； （2）所有患者曾接受標(biāo)準(zhǔn)劑量放療，放療結(jié)束后經(jīng)定期隨訪，影像學(xué)檢查發(fā)現(xiàn)遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移病灶； （3）從放療結(jié)束至發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)移間隔時(shí)間超過(guò)6個(gè)月，其預(yù)計(jì)生存期超過(guò)3個(gè)月； （4）所有病例影像學(xué)可見(jiàn)轉(zhuǎn)移灶數(shù)量均不超過(guò)10個(gè)； （5）體力狀況ECOG- Peformance Status (Eastern Cooperative Oncology Group performance status ) 0-1； （6）骨髓功能基本正常（WBC4.0109/L, Hb120g/L, PLT100109/L）；（

27、7）肝腎功能、心電圖檢查結(jié)果基本正常。 病例排除標(biāo)準(zhǔn)： 伴有中樞神經(jīng)系統(tǒng)轉(zhuǎn)移、不可控制感染、嚴(yán)重威脅生命的基礎(chǔ)疾病、患者處妊娠及哺乳期、PS2,62,實(shí)驗(yàn)方案： 病例數(shù)：60例，隨機(jī)分組 30例：?jiǎn)渭僄C化療（吉西他濱+順鉑），4周方案，共4次。 30例：GC化療聯(lián)合CIK細(xì)胞回輸治療，GC化療方案同上，CIK細(xì)胞回輸在化療兩周后進(jìn)行，總共進(jìn)行4次回輸。 試驗(yàn)示意圖,63,不良反應(yīng)： GC化療： 過(guò)敏（16/60），用地塞米松10mg靜脈推注后癥狀消失 血小板下降（43/60），經(jīng)IL-11治療后好轉(zhuǎn) 白細(xì)胞下降（35/60），經(jīng)營(yíng)養(yǎng)支持及G-CSF治療后恢復(fù)正常 GC化療聯(lián)合CIK細(xì)胞治療：

28、 寒戰(zhàn)、發(fā)熱（6/30），對(duì)癥治療恢復(fù)正常,64,療效評(píng)價(jià)： 近期療效,65,遠(yuǎn)期療效,總生存期（OS,無(wú)疾病進(jìn)展生存期（PFS,GC化療聯(lián)合CIK細(xì)胞治療總生存期高于單純GC化療，但二者差異不顯著，可能是隨訪時(shí)間不足 GC化療聯(lián)合CIK細(xì)胞治療無(wú)疾病進(jìn)展生存期顯著高于單純GC化療,66,CIK細(xì)胞治療可與化療有機(jī)結(jié)合，對(duì)晚期腫瘤患者具有增效作用； 化療聯(lián)合CIK細(xì)胞治療安全性高，沒(méi)有嚴(yán)重的副作用； 化療聯(lián)合CIK細(xì)胞治療具有較好的近期療效，更好的控制疾病進(jìn)展； 化療聯(lián)合CIK細(xì)胞治療能夠顯著延長(zhǎng)晚期腫瘤患者的無(wú)疾病進(jìn)展生存期，同時(shí)也延長(zhǎng)了晚期腫瘤患者的總生存期，具有更好的遠(yuǎn)期療效,研究小結(jié),67,3、回顧性研究手術(shù)聯(lián)合CIK細(xì)胞回輸治療可切除性肝癌的研究 病例入選標(biāo)準(zhǔn)： 所有患者初治時(shí)原發(fā)病灶均為肝細(xì)胞肝癌且影像學(xué)均無(wú)明確遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移征象； 術(shù)前評(píng)估可耐受手術(shù)； 預(yù)計(jì)生存期超過(guò)3個(gè)月； 體力狀況ECOG- Performance Status (Eastern Cooperative Oncology Group performance status ) 0-1； 骨髓功能基本正常（WBC4.0109/L, Hb120g/L, PLT100109/L）； 所有患者均接受手術(shù)切除。 病例排除標(biāo)準(zhǔn)： 術(shù)前確定有遠(yuǎn)端